التصالب المناعي بين جرثومتي الزوائف الزنجاريه وListeria monocytogenesفي الفئران

النسخ

1 د ارسة بكتريولوجية لجرثومة الزوائف الزنجارية Pseudomonasالمعزولة aeroginosa من بعض الحاالت المرضية في مستشفى الديوانية التعليمي و مستشفى النسائية و األطفال واختبار حساسيته لبعض المضادات الحياتية جميلة ارضي اسماعيل بلسم ميري المحنة سجى مهدي كلية الطب البيطري جامعة القادسية 26/11/2008 تأريخ التسليم 1/6/2009 تأريخ القبول الخالصة أ جريت هذه الد ارسة لتسليط الضوء على بكتريا الزوائف الزنجارية Pseudomonas aeroginosa لدورها المهم في التسبب بالعديد من االصابات المرضية و اعتبارها عامل إصابة ثانوي وانتهازي حصوصا للمرضى ال ارقدين في المستشفيات وفي نفس الوقت إختبار مدى حساسية هذه البكتريا لبعض المضادات الحياتية المستخدمة لعالجها تم جمع 90 عينة من حاالت مرضية مختلفة من مستشفى الديوانية التعليمي ومستشفى الوالدة و االطفال بينت النتائج عزل 29 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeroginosa وبنسبة % 322 من مجموع العينات المأخوذة شخصت البكتريا بأستخدام الفحص المجهري والصفات االستنباتية للعزالت المستحصلة على اوساط زرعية انتخابية وتفريقية باالضافة الى د ارسة بعض الصفات الكيموحيوية لهذه البكتريا لدعم عملية التشخيص 0 احتبرت حساسية جميع العزالت تجاه بعض المضادات الحياتية %( فيما كانت مقاومة لمضاد االمبيسلين بنسبة 23 بطريقة االنتشار حول االق ارص أذ أظهرت حساسية عالية لمضاد السيبروفلوكساسين ( % واعطت نسب مختلفة لبقية المضادات المستخدمة في البحث 100 Bacteriological Stydy of pseudomonas aeruginosa Isolate from some pathogenic cases at diwaniya teaching hospital and hospital for obstetrics and pediatrics and its sensitivity to some antibiotics AL-abedey Sjm AL-muhna BMM AL- shwelly JRE College of vetmedicine University of AL-qadisiya Summary The aim of this study was to determine the important role of Pseudomonas aeruginosa in secondary infection of hospitalized patients, and test the sensitivity of this bacteria to some antibiotics were used in treatment of its infection 90 samples were collected from different cases in Diwanya teaching hospital,maternity & children hospital The results show isolation of 29 isolates 0f Pseudomonas aeruginosa (322%) Microscopic examination,cultural characteristic on selective and differential media and biochemical testing were used in the diagnosis of this bacteria 32

2 The sensitivity test of this bacteria to some antibiotics was done by using disc diffusion method All isolates were resistant to ampicillin (100%),while it gave high sensitivity to ciprofloxacin(23%) المقدمة تعد الزوائف الزنجارية العائدة للعائلة Pseudomonaicea من الكائنات المجهرية الواسعة االنتشار في الطبيعة أذ تتواجد في التربة و المياه وعلى بعض النباتات وفي االنسان والحيوانات المختلفة وهي رمية التغذية (Saprophytic) تستطيع التكاثر في البيئات الرطبة دون الحاجة للمواد الغذائية المعقدة فضال عن كونها المسبب لالصابات الثانوية infection) Secondary )في المرضى ال ارقدين في المستشفى كما انها احد االسباب المهمة لالصابة باالسهال في الرضع (14) وتعد بكتريا انتهازية (Opportunistic) بتوافر الظروف المالئمة لحدوث المرض فهي ممرضة جدا عند وجودها في المناطق الخالية من دفاعات الجسم المناعية كالتي تحدث في حاالت الجروح والحروق او االشخاص المصابين بداء السكري (20) جرثومة Pseudomonas aeruginosa المستعم ارت على وسط اكار الدم اثناء نموها عليه (13) سالبة لصبغة ك ارم هوائية اجبارية متحركة وغير مكونة للمحفظة تعطي تحلال كامال حول وتمتلك الزوائف الزنجارية عوامل الض اروة المسببة للمرض في االنسان فهي تتميز بإنتاج األنزيمات والسموم المختلفة مثل (7) اضافة الى انزيم Estrease الذي يضعف Exotoxin A وكذلك Staphylolytic endopeptidase,elastase,las A protase االستجابة المناعية للجسم مما يهيئ الظروف المالئمة إلحداث المرض (8) وتفرز الزوائف الزنجارية العديد من الصبغات التي تسهم في ام ارضيتها مثل (10) pyocyanin,pyomelanin,pyoverdin,pyorubin اضافة الى ذلك فقد اشار الكثير األهداب التي تمتلكها الجرثومة في التصاقها بالخاليا الطالئية المبطنة للقناة التنفسية والهضمية (6) من الباحثين الهمية ونظ ار ألهمية الجرثومة في كونها من الممرضات االنتهازية واسهامها في حدوث اإلصابات الثانوية خصوصا في المستشفيات لذا ارتأينا القيام بهذه الد ارسة التي هدفت الى : - عزل وتشخيص جرثومة Pseudomonas aeroginosa من - تحديد حساسية البكتريا المعزولة لبعض المضادات الحياتية المستخدمة كعالج لها حاالت مرضية مختلفة لمرضى ارقدين في المستشفيات * جمع العينات المواد وط ارئق العمل ج معت 00 عينة من المرضى ال ارقدين في مستشفى الوالدة واالطفال ومستشفى الديوانية التعليمي لحاالت مرضية مختلفة وتم التركيز على عينات االد ارر والجروح ومسحات االذن والدم والب ارز تم نقل العينات مباشرة الى مختبر األحياء المجهرية في كلية الطب البيطري إلختبارها * العزل الجرثومي تم زرع العينات على اوساط االكار المغذي واكار الدم واكار الماكونكي ثم ح ضنت األطباق بدرجة 37 * الفحص المجهري تم اج ارء الفحوص المجهرية إعتمادا على المصادر العلمية المتبعة لتشخيص البكتريا م لمدة 24 ساعة (15) (10) المرضية وصبغها مباشرة بصبغة ك ارم للتعرف على شكل الجرثومة وحجمها وطرق تجمعها وتفاعل الصبغة معها * التشخيص الكيموحيوي إذ تضمنت عمل مسحات من النماذج أ جريت عدد من الفحوصات الكيموحيوية األولية على العزالت إذ تم استخدام عدة فحوصات منها فحص اإلندول األوكسيديز اليوريز الكاتليز تميع الجيالتين واستهالك النت ارت * فحص الحساسية للمضادات الحياتية sensitivity) ) Antibiotic أستخ دمت طريقة االنتشار حول األق ارص diffusion) (Disc لد ارسة حساسية البكتريا لعدد من المضادات الحياتية إذ تم استخدام تسعة مضادات حياتية تم قياس منطقة التثبيط باستعمال مسطرة مدرجة مرو ار بمركز القرص وقورنت مع مناطق التثبيط القياسية (Nccls (2000 وعلى اساسه اعتبرت الج ارثيم حساسة Susceptible او متوسطة الحساسية Intermediate او مقاومة Resistant 33

3 النتائج يبين جدول )1( انواع العينات المأخوذة من الحاالت المرضية واعدادها وعدد العزالت المستحصلة من كل عينة ونسبتها المئوية نوع العينة العدد عدد العزالت النسبة المئوية % 40 % 60 % 20 % Urin Wounds Ear swabs Blood Stool المجموع أظهرت النتائج الحصول على 29 عزلة من جرثومة Pseudomonas aeruginosa أخذت من حاالت مرضية مختلفة من خالل جمع عينات تضمنت االد ارر و الجروح ومسحات االذن والب ارز وبالنسب التالية وعلى التوالي % % %30 20 % فيما لم يتم الحصول على اي عزلة من نماذج الب ارز المأخوذة بينت نتائج الزرع الجرثومي ظهور مستعم ارت مخاطية كبيرة الحجم نسبيا حالة للدم من نوع اكار الدم بعد فترة حضن 42 ساعة بدرجة 73 )تحلل كامل ) بعد زرعها على وسط م وظهرت بعض المستعم ارت النامية على وسط اكار الماكونكي متوسطة الحجم مع تغير في لون الوسط اعطت البكتريا لون ازرق مخضر عند زرعها على وسط االكار المغذي كما ظهرت تحت المجهر بشكل عصوي وسالبة لصبغة ك ارم ومن مالحظة نتائج الفحوصات الكيموحيوية لهذه العزالت فقد اعطت تفاعال موجبا لفحوصات الكاتليز و االوكسيديز وتميع الجيالتين واستهالك الست ارت وتحلل اليوريا واختبار الحركة فيما كانت سالبة لفحص االندول و المثل االحمر اما فيما يخص اختبار حساسية البكتريا للمضادات الحياتية المنتخبة في هذا البحث )9 (مضادات حياتية فقد تبين من النتائج ان جميع العزالت أظهرت مقاومة تامة بنسبة 100 % لمضاد االمبيسيلين و بنسبة 93 % لمضادي التت ارسايكلين والنالدسك اسد و 89 % لالموكسسلين و 812 % للكلو ارمفينيكول و 614 % للريفامبين و 622 % للسيفوتاكسيم و 142 % لالميكاسين و 23 % للسبروفلوكساسين المناقشة عندمقارنةة نتةائج العةزل الجرثةومي للعةزالت التةي تةم الحصةول عليهةا فةي هةده الد ارسةة مةع بعةض البحةوث والد ارسةات فقةد وجةد )1( ان جرثومةة Psaeruginosa %11 من خمج االذن الوسطى سةجلت اعلةى معةدل لهةا فةي خمةج المسةالك البوليةة وبنسةبة %29 فيمةا كانةت نسةبة مةا حصةل عليةه مةن الجةروح %24 و اما )4( فقد وجد ان جرثومة Psaeruginosa سجلت اعلى معدل لها من خمج المسالك البولية %483 و 183 %من الجروح و 10 % من اصابات اخرى حصل (18) في د ارسة على 139 عزلة لهذه الجرثومة وان نسبة االصابة في الجهاز البولي قد بلغت % 403 فيما وجدت) 3 (ان بكتريا Psaeruginosa هي المسبب االول اللتهاب االذن الوسطى بنسبة % 39 ووجد )2( ان اعلى معدل لهذه البكتريا في العينات التي تم جمعها من المرضى ال ارقدين في المستشفى والمصابين بخمج الحروق بلغت 14 عزلة وبنسبة % 29 وقد يعود السبب الى ان هذه البكتريا تعد من الممرضات الثانوية االنتهازية حيث انها تنتهز فرصة حدوث اختالل عام او موضعي في احد دفاعات الجسم الميكانيكية او المناعية او كليهما معا (12) ومن خالل استع ارض بعض البحوث والد ارسات التي تناولت هذه البكتريا وجدنا ان بعضها يتفق تقريبا مع نتائج هذه الد ارسة والبعض اآلخر يختلف معها وربما يعود هذا االختالف الى تباين في وقت جمع العينات واعدادها او نوع الحالة المرضية كذلك قد يعود الى تباين في موقع اج ارء البحوث وكانت نتائج اختبار الحساسية مقاربة لما حصلت عليه ( 5 ) وتشير نسبة المقاومة المتدنية لمضاد السيبروفلوكساسين ( وهو من الجيل الثاني من مركبات الكوينولونات ) الى فعالية هذه المضادات ضد العزالت البكتيرية قيد البحث وقد يعزى هذا الى الطبيعة الكيمياوية لهذه 34

4 المضادات إذ تقوم بتثبيط تصنيع الحامض النووي DNA في الخاليا البكتيرية ) 11 )و( 19 )وقد قاربت نسبة حساسية العزالت لمضاد السيبروفلوكساسين في هذا البحث تلك التي وجدها )2( و) 9 ( في د ارسته عن هذا العقار ضد االصابات المتسببة عن Psaeruginos وجاءت النتائج مقاربة لما تم الحصول عليه من قبل )16( فيما يخص كفاءة مضاد السيبروفلوكساسين في عالج االصابات المتسببة عن بكتريا Psaeruginos وتعد مقاومة البكتريا لمضادات البيتاالكتام من المشاكل الطبية المعقدة في العديد من البلدان (17) وقد تعزى هذه المقاومة الى تناول هذه المضادات بجرعات كبيرة استخدامها بدون الرجوع الى الطبيب تك ارر االصابة بنفس المسبب المرضي طول فترة االقامة في المستشفى فضال عن عدم اللجوء الى استخدام فحص الحساسية لتحديد المضاد المناسب في عالج الحاالت المرضية المختلفة المصادر العربية واالجنبية 1 -الدليمي عباس عبود فرحان ) 1999 (دراسة مناعية وكيميائية حياتية على الجين المنقى من Pseudomonasaeruginos المعزولة من المرضى رسالة دكتوراهكلية العلوم -الجامعة المستنصرية 2 -الربيعي علي جعفر سليم )2006( دراسة كيموحيوية النزيم البروتيز القاعدي المنتج من بكتريا Pseudomonasaeruginos المعزولة من المرضى رسالة ماجستير كلية التربية جامعة ديالى 3 -الرماحي سيوف خومان علوان )2006( دراسة بكتيرية ومناعية على مرضى خمج االذن الوسطى في محافظة القادسية رسالة دكتوراه كلية التربية جامعة القادسية 4- السامرائي بيداء حسين علوان) 2001 ( دراسة بعض العوامل المؤثرة على عملية التصاق بكتريا Pseudomonas aeruginosa رسالة ماجستير كلية العلوم الجامعة المستنصرية 5 -الشيباني انتصار ناظم خلخال )2004( دراسة بكتريولوجية لالنواع التابعة لمجموعة Pseudomonas المعزولة من المستشفيات في بغداد وتأثير بعض العوامل عليها رسالة دكتوراه كلية العلوم الجامعة المستنصرية 6- Amitani,R;Wilson,R(1991)Effects of neutrophil elastase and Psaeruginos protease on respiratory epithelium,am- RevResoirCall MolBiol,4, Barequet,IS;Bensimon,GI;Safrin,M;Ohman,DEand Kessler,E(2004)Pseudomonas aeruginosa las A protease in treatment of experimental Staphylococcal keratitisantimicrob Agents Chemother;48(5): Brooks,GF;Butel,JSand Mose,SA(1998)Pathogensis of bacterial Infection :In Jawetz,Merick and Adelbergs medical microbiology, 21 th edappelton and Lange, Stamford,Connecticntpp: Dronova,OM(1990)Ciprofloxacin in the treatment of infections in oncology patientsantibiot- Khimioter 35(11): Holt,JG;Krieg,NR;Sneath,PH;Staley,JTand Williams,ST(1994)Bergeys manual of determinative bacteriology 9 th edwilliams & WilkingUSA 11- Hopper,DC(1999)Mode of action of FuorgluinolonesDrugs58 Supp 12: Jawetz,E;Melnick,JL;Adelberg,EA;Brooks,GE;Butel,JS and Ornston, LM(1987)Review of medical microbiology7 th edmiddle East EditionAppleton and Large Norwak,Connection 13-Kiska,DLand Gilligan,PH(2003):Pseudomonase In:Manual of clinical microbiology 8 th edmurray,pr(ed)asm press 14- Lennette,EH;Balows,A;Hausler,WJand Shadamy,HJ(1985)Manual of clinical microbiology4 th ed American Society for microbiologywashington DCUSA 15- Macfaddin,JF(2000)Biochemical test for identification of medical bacteria 3 rd edthe Williams & Wilkins Co,London 16- Margariti,PA;Astorri,ALand Mastromarino,c(1997)Urinary tract infections:risk factor and therapeutic trends RecentiProgMed88(2): Neu,H(1985)Contribution of lactamase to bacterial resistance and mechanisms of inhibit lactamases AmJMed 79(Suppl 58): Puri,J;Revathi,G;Kundra,Pand Talawar,V(1996)Activation of third generation cephalosprins against Psaeruginosa in high risk hospitals unitsindian Jof MedSci50(7): Reese,RE;Betts,RFand Gumustop,B(2000)Handbook of antibiotics 3 rd edlippincott Williams and Wilkins 22- Ryan,JJ(2000)Diseases of skin In:Concise Oxford textbook of medicineledingham,jgand Warrell,DAeds4 th edoxford University Press,USA 35

5 36