Microsoft Word - Maghalat Final V39.doc

النسخ

1 4 Biological Journal of Microorganism, 6 th Year, No. 23, Autumn 2017 Optimization of recombinant laccase production by Yarrowia lipolytica in a medium containing glucose as carbon source with Taguchi method Farshad Darvishi * Associate Professor of Microbiology, University of Maragheh, Iran, f.darvishi@ymail.com Marzie Moradi M.Sc. of Microbial Biotechnology, University of Maragheh, Iran, marzie.moradi88@gmail.com Catherine Madzak Professor of Microbiology, University of Paris, France, catherin.madzak@grignon.inra.fr Claude Jolivalt Professor of Biochemical Engineering, University of Sorbonne, France, claud.jolivalt@upmc.fr Abstract Introduction: Laccases (EC ; benzenediol: oxygen oxidoreductase) are coppercontaining oxidases that use molecular oxygen to oxidize various aromatic and non-aromatic compounds. Laccase is applied in delignification of lignocellulosic compounds for production of bioethanol, bioremediation of industrial wastewaters especially textile, food industries, and making biosensors. Materials and methods: The Taguchi experimental design method was used for optimization of laccase production in recombinant strain Yarrowia lipolytica YL4. A L-16 Taguchi orthogonal array was used to optimize the carbon and nitrogen sources along with vitamin in four levels. Results: The results showed that glucose, ammonium chloride, yeast extract and thiamine have significant effects on the production of laccase, respectively. The laccase activity reached to 1.52 U/mL after optimization of medium which is 7.6-fold higher than un-optimized medium. Discussion and conclusion: According to the analysis of results, the Taguchi experimental design method is a successful approach to increase laccase and recombinant proteins production in Y. lipolytica. Key words: Yarrowia lipolytica, laccase, optimization, Taguchi experimental design method * Corresponding author Received: September 28, 2016 / Accepted: March 8, 2017

2 فصامه عما -پژوهش ست شمهس یکارگهنی هه سه شش ش هر 32 پهتی 6231 ص ع /63/ /70/70 تهرتدپ:تر تهرتدیرتهف بهینهسازیتویدآنزیماکازنوترکیبتوسطمخمریارویایپویتیکادرمحیطکشتحاوی گوکزبهعنوانمنبعکربنباشتاگوچی * فرشاااااااددیشاااااای : یانشیهر یکبیوو یانش ه راغع اترا f.darvishi@ymail.com مرضااااااایهمااااااارادی: کهرشمهس ارشدبیوتکموو یکب یانش ه راغع اترا marzie.moradi88@gmail.com کااااااترینماااااادزا : اس هی یکبیوو یانش ه پهرت فران ع catherin.madzak@grignon.inra.fr claud.jolivalt@upmc.fr کااااااا دجویااااااات: استتتتت مهندستتتتت بیوشتتتتتی ستتتتتو بو انشتتتتت فرانستتتتت چکیده مقدمه:اکهسهه اسج اعآن ت هه اک یداسحهو ه مدکعاک یژ وکو رابرا اک یدکری ترکیبهت خ افآ هتیکوغیرآ هتیکاس هی کممد.اکهسیری می سیات ترکیبهتی موساو برا توید بیواتهنو ست پهات پ هبهه صمع ب عوتژ صمهتع م وجهتوغ:ات وه چمی ست سهخ ح رههبعکهر بری شوی. موادوشها: طراح آس هتشتهگوچ برا بهیمعسهس تویداکهسیرسوتع خ رنوترکی تهروته یپوی یکهYL4 وآراتع عه دشهن ی تهت برا تهگوچ بهیمعکری مهبعکرب ونی ه رابهوت ه ی یرچههر سطحاس هی شد. نتایج:ن هتجنشه یایندکعبعترتی گاوک و مصهر خ تیه ی تویداکهساثرب یهر یارند.فعهی اکهسپ اسبهیمعسهس یطکش بع 63 / 6 واحدیر یا ی ررسیدکعبیش اس 1 / 0 برابر یطکش غیربهیمعاس. بحثونتیجهگیری:براسهستج تعوت این هتج طراح آس هتشتهگوچ تکری وفق برا اف اتش تویداکهسوپتئی نوترکی هه یر خ رتهروتهیپوی یکهاس. واژههایکیدی:تهروتهیپوی یکه اکهس بهیمعسهس طراح آس هتشتهگوچ * نوت مدۀ ئو کهتبهت Copyright 2017, University of Isfahan. This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License ( which permits others to download this work and share it with others as long as they credit it, but they cannot change it in any way or use it commercially.

3 .. و 9 (و 2 و 3 و فصامه عما -پژوهش ست شمهس یکارگهنی هه سه شش ش هر 32 پهتی 6231 مقدمه. اکهس)بم ویتو (اسآن ت هه اس کعاک یژ اک یژ اک یدوریوک هس اک یدوریوک هسحهو وکو رابرا EC اک یدکری ترکیبهتآ هتیکوغیرآ هتیکاس هی کمد ) 6 (.اکهسهه گایکوپتئی کعچههرات بعاسا اکهسیررنگسیات اک یداسیو کهربری) هه یات رتهت را ر هر ونو ریارند) 3 ( رنگهه وح: ترکیبهتفما توانهت یپای رت ) 6 (.بعتهسگ کهربریاکهسبعمموا سم ترکیبهتآ ت آن غ:ات بهیاش توانهت یرخورتوجعب کهربرییاری) 1 (.نخ ی صمع 6112 اکهسرایرشیرابعیرخ ه اک ه مد یرپ هبهه وسنوبیوتیکهه کری ی می رایاری کهتهی ورست یر یهرشداس وات پای رت کری وای یرصمهتع بهرتوشیدایرسه چیم ته اپم کشفکریکعبعوفوریربهف هه گیههه تهف شوی.شمهسهت خه یشواراس وخهصسهس وبمهبرات اکهسهه شمهخ عواس هی شد اند.اکهسهه بهستدتو هت )1 ههوآسکو هت تهروتهبعخهنوای ه کعیرپژوهشهه بمیهی اکهساسمصهر گیهه ههتهف قهرچ گیهه ک ر بیش ریر شوند) آسکو هت ههتعا یاری وست گ:ش عبعآ توجعشد اس ) یپوی یکهاس یپیدته یرتج خهر یطهه یطهه تعپتئی ساو شههد شد اس یرتهت وفعهی بیش راس 23 یرجعسهن هنمد خ ا فمهور وشورجداسهس یهعهه ط 67 (.سوتعتهروته یطهه غم اس وتوانهت آ ههویپیدههبهتویدیپهسهه هه.بیش رسوتعهه گرایرشدن پتئیوی یک بعشم تهروتهیری ههه کممدوبعشدت هواس توکهرتوت اس ه و ه مد) (. خ رتهروتهیپوی یکه ی به ج:اببرا وگمجهتشترش طراح ونوترکی تویدپتئی هه ه و برا ستهی یاری) 69 و 66 ( آس هتشبعتهف آس هتششد وتوید طراح تهگوچ تعهی پتئی ارتبهببی صو ک ک هه موا کمد) 61 ( شه طراح سی طراح مه و فراتمدههس صو م جشوی. اسطراح فراتمدته به رت ت موا اس کعش صو بهت رک سطوحشهخصکی ی کمد. تهگوچ فراتمدههت گونهگو هد نوترکی کرب اس. تهفراتمدبعبه رت م د تهگوچ همدس ش کهراوقو برا کی ی اس هی طراح تعیی موا اس ته رابهحداقخطهاتجهی برا طراح اس کعبعشک داو وبهیمعیرشراتط م کممد) 60 ( پژوهشحهضر بهیمعسهس اکهسیر تویدآن ت یطکش حهو گاوک ) مبع (توسط خ رتهروتهیپوی یکهبه موادوشها. تهگوچ ریزموجوداتاستفادهشدهونگهاداریآنهاا:اکهس 6 قهرچپوسیدگ س یدتر ورسیکهر ( laciiib ) به ه کهر پژوهشهه جویو /ترش بیهن گ پژوهش کشهورس کهترت 2 یریانش ه سوربو 3 هیساک یر رک ا فران ع( INRA )وک ی فران عبهوک ورکه برپهتعپ وتورهیبرتدقو یر خ ر تهروتهیپوی یکهبیه شد اس. ی ا اکهس کع خ رنوترکی کمد حدوی 3 / تهروتهیپوی یکهسوتعYL4 توید واحدیر یا ی رگ ار اس شد

4 . 7. ɛ. 7 بهیمعسهس ت تویدآن اکهسنوترکی یکهیر رتهروتهیپوی خ توسط یطکش حهو به مبعکرب بعمموا گاوک ه ریری خ ) 69 و 61 (.سوتع ی YPD)حهو یطکش گرای 9 یرجعسهن ر 67 گر یری ر(بع یری و وپپ رگاوک ر 37 گر یری خ مصهر هدار ن ه دت 1 سانج شوی) 63 ( هنداریفعهی فعایاتاکااز:سمجشاس 9 یر ABTS ت آن یداسیو اک گیر اکهسبهانداس 67 2/1 = 9 cm -1 M -1 ر) 937 نهنو اک حهو (انجه یدشد یا 6 ت آن شوی) 61 (.برا ر ی یطکش یو رت 6777 یوریریقیقعسهن ت او یا هید ه ی برا تهیع او صو ت دت 6 یقیقعیر بع راس یکی شد. 67 رABTS 6 یکی حهصبع 67 رتکاسید/ واریربهفرسی هتی ف 27 یرجعسهن یکفعهی سیم آن ) 6 / سدت ت ع 2 (به واربهاسیدت بههوااضهفعشد. گرایاشبهعشد ه بهیس ر و ف اسپک 6 ط شد. 6 واحد ربررس 937 نهنو و یقیقعویرطو یا یر اس ه ی ا ی قدار ت آن ر( U/mL )فعهی ی و یک کع 6 27 یرجعسهن سنج اسABTSراط گرایاک ید بررس میازانرشاد:برا قی رههاس خ رشد شد) 37 ( هی اس ت اسآن 6 یقیقعویر کمد) 61 (. گیر وانداس بها نئوبهر هر ش ر خ داسوتع فرایندتخمیرتویداکازدرارن:اب رت یرشراتطاس وبرا سهن کام یا یطکش ی دت 39 سهم شد.سپ گرایقراریای ر ی یا بع یرجعسهن 6 دکش جه YPD ه انکوبهتوربهی 33 یرجع رت تک یرشراتطاس 677 هتعیرار یطYPD ر ی ه انکوبهتورشیکریاربهی قشدوی م گرایویورچرخش 377 یوریریقیقع شد. هی هتعتاقیحآ اس 39 سهم.پ قرارگرف یطکش تویداکهستعم 23 / 37 گر گاوک ی /623 هید هت 23 / ف هسی پ ت می هت گر سو 7 یا قدار 67 ر(بع ی یطکش PPB)حهو 1 ر 23 / خ گر مصهر 7 و 229 / ریرار ی ونعبریار یرصدتاقیحشد.ن 6 سمجشفعهی خ گر 6 ونی گر کارتدآ 6 یا 367 برا اکهسانجه شدوسپ ه -انکوبهتوربهی بعشیکر تاقیحشد سهن ی گر تیه یا ر ی یر ا ی بع هه ساو هر ش ار هه 33 یرجع قشدند م گرایویورچرخش 377 یوریریقیقع ونعبریار ن دت 0 س هر 39 سهم ویر بررس برا سمجشتویداکهسیرشراتط خ رشد ا ی رتانجه شد) 61 ( اس طراحیآزمای طراح باهشتااگوچی:برا Qualitek-(Nutek Inc., ار( MI هتشاسنر اف آس شد.یرات هی 4 اس پیشبیم وسطوح دامه اب اسواریشد شوند.پ ار ووارینر اف ههرابه اریای هتشحهصاسسعتکرار نر اف هتجآس ن ی یهن پیشمههی مه تأتید گاوک نی یا یا قداربهیمعرابرا ایو تعوت تج اصا انجه شوی.مه مبعکرب ) ی ه (ووت ) هتش بهتدآس کمدوبراسهسآ ی تیه مصهر قدار پژوهشحهضر ونی کارتدآ خ مهبع ) قهیتر یرچههرسطحبویکع 6 (وبراسهسآنهه ااریشدند)جدو یرنر اف 3 (. 67 هتشراپیشمههیکری)جدو آس ی ارشهن نر اف راس ی ر ی یطکش طب جدو 3 یرار 367 هه رت 6 وشد.یرشراتطاس عواتوک رتخ یطههاضهفع ع ربعه خ هتعتاقیحاسسوتع یرصد شد.سپ ار 33 یرجعسهن ههبعی گرایوسرم ط قشدندوهر 39 سهم م یقیقع ه انکوبهتورشیکریاربهی چرخش 377 یوریر 0 سیرشراتط

5 و 7/ فصامه عما -پژوهش ست شمهس یکارگهنی هه سه شش ش هر 32 پهتی 6231 اس رتاسار ت تویدآن ی ا ههن ونعبریار شدتهتعدای خ رههو بررس شوی.پ طهب بهآنچعنر اف اربهیرنظرگرف موا یرآس هتشیرنظر هرمه پیشمههی آس هتشههبرا مهبعنی تیه ی جدو شوی. ) اسانجه آس هتشهه سه هرتکاس گیری قدارسطوحبهیمع سطوح خ اف مبعکرب شخصشد یرجدو 6 طراح 6 - موا وسطوح م خ برا مه گاوک مصهر خ ر تیه ی سطوحبرا 3 جدو برا سطحتک )گاوک ) ومصهر خ ر(ووت ه ی سطحیو /2 بهیمعسهس شد اند. سطحسع /1 بع تهگوچ سطحچههر /3 گاوک مصهر خ رگر بری - آس هتشهه ش هر آس هتش آس هتشش هر 6 آس هتشش هر 3 آس هتشش هر 2 آس هتشش هر 9 آس هتشش هر 6 آس هتشش هر 1 آس هتشش هر 0 آس هتشش هر 1 آس هتشش هر 3 آس هتشش هر 67 آس هتشش هر 66 آس هتشش هر 63 آس هتشش هر 62 آس هتشش هر 69 آس هتشش هر 66 آس هتشش هر 61 یا تیه ی طراح مبع کرب گر یری راس شد تهگوچ )آراتعهه عه دM-16 (بع مصهر خ ر تیه ی نتایج. حهو تعیی برا بهیمعسهس گاوک طراح تویداکهسیر سطوح مهس موا اصا آس هتشبع تهگوچ یطکش PPB برا اس هی شد.یر تهگوچ چههرمه گاوک مصهر خ ر وتیه ی یرچههرسطح موا اصا نظرگرف عشدند) 61 (.اثرگاوک بعمموا مه او یر یر مبعکرب و دوی 67 ته 377 گر یری ر)یرچههر سطح و 377 گر یری ر( ومصهر خ ربعمموا یو وسو یر دوی غاظ مهبعنی وبعترتی مه هه 6 ته 9 گر یری ر )یرچههرسطح و 9 گر یری ر(وتیه ی بعمموا وت ه ی ومه چههر یر یا یا دوی 7 ته 3 / گر یری ر)یرچههرسطح 7 7/2 1 / گر یری ر( تویداکهسبررس شد.ات موا وسطوحآنههبعنر اف ارQualiteck-4 واری شدندونر اف ار شهن ی آس هتشراپیشمههیکری.پ اس سهخ او یطکش ههوتاقیحوگ:ش 1 سکعس ه تویداس سمجشاکهسانجه ون هتجبعنر اف ار واریشد. ی ا تویداکهسبرا پیشمههی شوی. شهن ی آس هتش نر اف ارپ اسششسیرشک 6 یتد ن هتجآس هتشههبهنر اف ارتج تعوت ایو طهب شک 3 شخصشدکعسطحیوگاوک ) 677 گر یر ی ر( سطحیومصهر خ ر) 3 گر یری ر( سطحسع /1( یر یا )تعم گر یری ر( برا یطکش 2 گر یری ر(وسطحسعتیه ی سطوح مهس چههرمه ثثر تویداکهسه مد.

6 بهیمعسهس تویدآن ت اکهسنوترکی توسط خ رتهروتهیپوی یکهیر یطکش حهو گاوک بعمموا مبعکرب به شک 6 - ن هتجتویداکهسبرا شهن ی آس هتشطراح شد بع تهگوچ یر یطPPBحهو گاوک پ اس 1 س جدو 2 شک 3 - اثراصا اکهسیرسوتعتهیشد نشه تغییرسطحهرتکاسموا برندبهیمعسهس تأثیرهرسطحاسهرمه رابرتویدبهیمع یهد طهب ات جدو بره کمشگاوک و به 67 یرصداثر بیش رت اثربره تأثیررابرتویداکهسیاش عاس وپ اسآ یرصدیرجهت ه کمش مصهر خ راثر خ تیه ی گاوک وتیه ی ومصهر خ ربه قدار 91 یو قراریاری.بره کمشگاوک و برابر 93 یرصد ب ره کمشمصهر 63 یرصدتأثییرنههت بره کمش به 6 / یرصدک رت تأثیررابرتوید تویداکهستوسط خ رتهروتهیپوی یکهسوتعYL4 اکهسیارند. جدو ش هر 2 ر-ب ه کمشچههرمه گاوک مصهر خ تیه ی موا بره کمشیهمد گاوک مصهر خ ر گاوک مصهر خ ر تیه ی مصهر خ ر تیه ی گاوک تیه ی برتویداکهس س و هه یرصداه ی 67/61 91/66 93/71 36/10 63/03 /62

7 فصامه عما -پژوهش ست شمهس یکارگهنی هه سه شش ش هر 32 پهتی 6231 ت هیوب عآسهن شراتطبهیمعشمهسهت اصا بیش رت گاوک تهگوچ بهیمعسهس پیچید فراتمدهه اثرهرمه رابرپهتعرابطعبی کمد.پ ست را غیرههو اس شخصشد موا وسطوح مهس آنهه نر اف ارآس هتش رابرا تویداکهسپیشمههیکری یرطرحپیشمههی 677 گر یری ر مصهر خ ر 3 گر یری تیه ی یرنظرگرف عشد.بهیمعسهس یکب نر اف ار بیش رت /192 واف اتشتویدآن 1 / یطتخ ت قدارتویدآن ت 7 واحدیریا ی رپ شی قدار 2 گر یری ر یا گر یری ر یربرا انجه رشدبهیمع شوی) 36 (. اکهس وریان ظهررا بیم کریبوی بهانجه آس هتشبر اسهسموا وسطوح کعنر اف ارپیشمههی کری تویداکهسبع 63 / تویدن ب بع بحثونتیجه گیری. سیم هه 6 واحدیر یا یطکش PPBغیربهیمع 1 / وه کهرا اس تهگوچ ی ررسیدکع ی ا برا 0 برابرشد. بهیمعسهس تویداکهسیرقهرچکرتپ وکوکوسآبیدوساس هی کریند. قهیترتعیی نر اف اربرا شد گاوک ) مبعکرب (بع قدار 6 / ( مبعنی و یا (بع قدار 6 / اسیدت عبع ی ا 1 7 یرصد پپ و گوش 7 یرصد سو هت بع قدار بری هتعتاقیحبع قدار 6 یرصدبوی.پ اسبهیمعسهس ی ا تویداکهسبع 3 واحدیر یا ی ر اف اتشتهف. هتعتاقیحبه حدوی 63 یرصد بیش رت تأثیر واسیدت عبه قدار 0 یرصد ک رت یاش مد) 33 (. یر طهععیت ر تأثیررابرتویداکهس شراتطکش غوطعوربرا اتمکع سوتعترتکویر هآسپ اکهستویدکمدبهآراتعهه عه دتهگوچ بهیمعسهس شد.موا اسیدت ع گاوک سبوسگمد سی راتآ ونی ی ا هتعتاقیح مصهر خ ر سو هت و او ن کهه عدن یرسطوح آراتعهه نر اف ارQualitek-4 ه عه دیرطراح آس هتشههان خهبشدند. جد ج ومعآس هتشراطراح کریکعشراتطبهیمعپی شبیم شدنر اف اراسیدت ع 9/6 گاوک 6 یرصدوس برحج سبوسگمد 3 یرصدوس برحج سی راتآ ونی 73 / هت مصهر خ ر 6 یرصد سو او پیشبیم اف اتشتهف ن کهه عدن 7 یرصد هتعتاقیح 6 یرصد 6 / 66 یرصدبوی به ات یا وا شراتطبهیمع شد ی ا تویداکهسبعانداس 61/01 یرصد ) 32 (. پهتوه کهرا اه ی مهبعکرب ونی وتأثیر آنههبرتویداکهستوسطسوتعپاوتوسآس رت وسرا بررس ب کریند.تأثیر مهبعکرب ونی کعقهرچهه تویدکممداکهستوید یهر بر ی ا یاری.پژوهشهه ب یهر یربهراه غاظ مهبعنی تمظی کممد قو توسطبهستدتو هت هه غاظ نشه یهمد س هن بهه تواف یارندوات اکهس کممد اه ی ی نوعو پهرا ر یرتویدآن ت هه تج تعکممدی می هه پوسیدگ چوباس هوتکرب ی ا فعهی اکهس خ ا. را بیش رت فعهی اکهسبع ی ا 2 واحدیر یا گر حهصشدکعگاوک بع ی ا 6 یرصد یر یطوجوییاش یر یط آن ت هه سطحک هه.غاظ تج تعکممد ی می نی تویدآن ت هه اس هیشدن نی راتمظی کممد تج تعکممدی می را ت رتکوسطحستهینی تویدرا دوی کمد. پژوهشهه تأتید کرب تیه ی شهبعیربهر غاظ نی ن هتجگ عشد را کممد) 39 (.یرپژوهشحهضر گاوک ) مبع (ومصهر خ و ) مهبعنی (و )وت ه ی اکهسنوترکی ن هتجبرا بیهن سی وت رتککممد رشد(برا اف اتشتوید بهیمعسهس توسط خ رتهرتهیپوی یکهبهیمعشدندو واف اتشپتئی هه نوترکی به خ رتهرتهیپوی یکهاس هی شوند.

8 بهیمعسهس تویدآن ت اکهسنوترکی توسط خ رتهروتهیپوی یکهیر یطکش حهو گاوک بعمموا مبعکرب به References (1) Hou H., Zhou J., Wang J., Du C., Yan B. Enhancement of laccase production by Pleurotus ostreatus and its use for the decolorization of anthraquinone dye. Process Biochemistry 2004; 39(11): (2) Dwivedi UN., Singh P., Pandey VP., Kumar A. Structure function relationship among bacterial, fungal and plant laccases. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2011; 68(2): (3) Kunamneni A., Plou FJ., Ballesteros A., Alcalde M. Laccases and their applications: A patent review. Recent Patents on Biotechnology 2008; 2(1): (4) Mougin C., Jolivalt C., Briozzo P., Madzak C. Fungal laccases: from structureactivity studies to environmental applications. Environmental Chemistry Letters 2003; 1(2): (5) Pannu JS., Kapoor RK. Microbial laccases: A mini-review on their production, purification and applications. International Journal of Pharmaceutical and Biological Archive 2014; 3(12): (6) Shraddh A., Shekher R., Sehgal S., Kamthania M., Kumar A. Laccase: Microbial sources, production, purification and potential biotechnological applications. Enzyme Research 2011; 2011: (7) Strong PJ., Claus H. Laccase: A review of its past and its future in bioremediation. Critical Reviews in Environmental Science and Technology 2011; 41(4): (8) Madzak C., Otterbein L., Chamkha M., Moukha S., Asther M., Gaillardin C., et al. Heterologous production of a laccase from the basidiomycete Pycnoporus cinnabarinus in the dimorphic yeast Yarrowia lipolytica. FEMS Yeast Research 2005; 5(6-7): (9) Darvishi F., Hosseini B. Effect of olive oil with different purity grades on Yarrowia lipolytica lipase production. Biological Journal of Microorganism 2015; 13: (10) Madzak C. Yarrowia lipolytica: recent achievements in heterologous protein expression and pathway engineering. Applied Microbiology and Biotechnology 2015; 99(11): (11) Flagfeldt DB., Siewers V., Huang L., Nielsen J. Characterization of chromosomal integration sites for heterologous gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Yeast 2009; 26(10): (12) Darvishi Harzevili F. Biotechnological applications of the yeast Yarrowia lipolytica. Springer Berlin Heidelberg 2014; (13) Darvishi F., Hosseini B. Investigation the effect of olive oil feeding strategies on Yarrowia lipolytica lipase production. Biological Journal of Microorganism 2015; 15: 1-8. (14) Theerachat M., Emond S., Cambon E., Bordes F., Marty A., Nicaud JM., et al. Engineering and production of laccase from trametes versicolor in the yeast Yarrowia lipolytica. Bioresource Technology 2012; 125: (15) Madzak C., Gaillardin C., Beckerich JM. Heterologous protein expression and secretion in the non-conventional yeast Yarrowia lipolytica: A review. Journal of Biotechnology 2004; 109(2): (16) Myers WR., Montgomery DC. Response surface methodology. Encyclopedia of Biopharmaceutical Statistics 2003, 1: (17) Semioshkina N., Voigt G. An overview on Taguchi method. Journal of Radiation Research 2006; 47(2): (18) Madzak C., Mimmi MC., Caminade E., Brault A., Baumberger S., Briozzo P., et al. Shifting the optimal ph of activity for a laccase from the fungus Trametes versicolor by structure-based mutagenesis. Protein Engineering, Design and Selection 2005; 19(2):

9 61 فصامه عما -پژوهش ست شمهس یکارگهنی هه سه شش ش هر 32 پهتی 6231 (19) Bergman LW. Growth and maintenance of yeast. Methods in Molecular Biology 2001; 177: (20) Darvishi F., Destain J., Nahvi I., Thonart P., Zarkesh-Esfahani H. High-level production of extracellular lipase by Yarrowia lipolytica mutants from methyl oleate. New Biotechnology 2011, 28(6): (21) Periasamy R., Palvannan T. Optimization of laccase production by Pleurotus ostreatus IMI using the Taguchi DOE methodology. Journal of Basic Microbiology 2010; 50(6): (22) Singhal A., Choudhary G., Thakur IS. Optimization of growth media for enhanced production of laccase by Cryptococcus albidus and its application for bioremediation of chemicals. Journal of Civil Engineering 2009; 36(7): (23) Sabarathinam S., Jayaraman V., Balasubramanian M., Swaminathan K. Optimization of culture parameters for hyper laccase production by Trichoderma asperellum by Taguchi design experiment using L-18 orthogonal array. Malaya Journal of Biosciences 2014; 1(4): (24) Patel H., Gupte A., Gupte S. Effect of different culture conditions and inducers on production of laccase by a basidiomycete fungal isolate pleurotus ostreatus HP-1 under solid state fermentation. BioResources 2009; 4(1): Trametes versicolor 2- Catherine Madzak 3- Claude Jolivalt 4- [2,2 -azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)] or ABTS 5- Yeast extract peptone dextrose (YPD) 6- Protein production broth (PPB)