The Effect of Re-vitrification on Developmental Rate and Bax, Bcl-2, and ErbB4 Gene Expressions in Mouse Embryos

النسخ

1 Original Article The Effect of Re-vitrification on Developmental Rate and Bax, Bcl-2, and ErbB4 Gene Expressions in Mouse Embryos Nasrin Majidi Gharenaz 1, Mansoureh Movahedin 2*, Zohreh Mazaheri 3 1- M.Sc., Department of Anatomical Sciences, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 2- Professor, Department of Anatomical Sciences, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran 3- Assistant Professor, Department of Anatomical Sciences, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran *Corresponding Address: Postal Code: , Department of Anatomical Sciences, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran movahed.m@modares.ac.ir Received: 08/Nov/2015, Accepted: 05/Jan/2016 Abstract Objective: Vitrification is a convenient, effective method for freezing and storing embryos. Under certain situations, such as an unsuitable endometrial environment, extra embryos can be re-vitrified for future use. There is inadequate data on the effects of revitrification on embryos, so we have evaluated the effects of re-vitrification on the development rate and expression of apoptotic and implantation genes. Methods: Female NMRI mice, ages six-eight weeks were super-ovulated with 7.5 IU PMSG and 7.5 IU hcg. Females were mated with males from the same strain and inspected for the presence of vaginal plugs the following morning. Females with the presence of vaginal plugs were considered to be pregnant and killed 62 h post hcg injection. Eight-cell embryos were flushed from their oviducts and subsequently divided into three experimental groups: fresh, vitrified-warmed 8-cell embryos, and re-vitrifiedwarmed blastocyst embryos. RNA was extracted and we used real-time PCR to evaluate expressions of Bax, Bcl-2, and ErbB4. Data was analyzed by the chi-square and ANOVA tests. Results: A significant difference existed in blastocyst formation rate, degeneration rate, and expressions of Bax, Bcl-2, and ErbB4 in re-vitrified embryos compared to fresh embryos. Conclusion: The vitrification and warming process did not affect the developmental rate and expressions of Bax, Bcl-2, and ErbB4 in the eight-cell stage embryos. However, we observed a change in development rate and expression rates of Bax, Bcl-2, and ErbB4 after re-vitrification in the early blastocyst stage. Keywords: Re-vitrification, Apoptosis, Implantation, Blastocyst Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), No. 4, Pages: Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), No. 4 16

2 ت ٥ ؤ و ٥ ؤ ش ٦٦ مقاله اصیل تأثیر اوجماد شیشهای مجدد بر میزان ErbB4 در جىیهه یا تک یه ي بیان م شی ژنه یا 3 *2 1 نسرین مجیدی قره ناز منصوره موحدین زهره مظاهری 1- كبرشنبسي ارشد گزوه علوم تشزيحي دانشكده علوم پزشكي دانشگبه تزبيت مدرس تهزان ايزان 2- استبد گزوه علوم تشزيحي دانشكده علوم پزشكي دانشگبه تزبيت مدرس تهزان ايزان 3- استبديبر گزوه علوم تشزيحي دانشكده علوم پزشكي دانشگبه تزبيت مدرس تهزان ايزان *آدرس نويسنده مسئوڳ: ايزان چكيذ تهزان كدپستي: دريبفت مقبله: 94/81/ دانشگبه تزبيت مدرس دانشكده علوم پزشكي گزوه علوم تشزيحي movahed.m@modares.ac.ir پذيزش مقبله: 94/18/11 Bcl-2 Bax ي ذف: ا د بد ؿ ٦ ا ٣ ث ع ا س ؽ بػت ؤثرش ٣ ثؤشا ٣ فش ٥ ؤض ٠ ؤذاس ٣ خ ؤ ٦ ؤب ؿؤ بته ؿؤذ اػؤ. دس ثشتؤ ٤ اص ؿشا ٥ ظ ب ذ آ بد ج د آ ذ هش ٦ ش ذ ٤ ت ا خ ٦ ب ٣ اضبف ٤ سا دذدا د ذ ؤ د تؤب ثاؤذا ؤ سد اػؤهقبد مؤشاس ٦ ؤشد اعالعبت دس سد آربس ا د بد دذد س ٣ خ ٦ ٦ ب ا ذه اػ. ث بثشا ٥ ا ٥ غب ا آربس ا د ؤبد دؤذد سا س ٣ ث ٦ ب ط ب ٣ شث ط ث ش ػ ٤ ثش ب س ٥ ض ٣ ؿذ ال ض ٤ ٥ خ ٦ ب ٣ ؽ ثشسػ ٤ ٤ ى ذ م اد ي ريش ا: 7/5 خ ٦ ب ٣ ؽ ب ٣ بد ظاد 6-8 NMRI قه ثب اػهقبد اص تضس ٥ ل 7/5 احذ ث ٦ ٦ ؤضا تيؤ ٥ ا ؤ ٤ 48 PMSG ػؤبع. ثاؤذ احذ ث ٦ ا ٤ HCG تحش ٥ و تخ و زاس ٣ ػپغ دس ى بس ؽ ش مؤشاس داد ؿؤذ ذ ؤغ اص ثشسػؤ ٤ ؤاله اط ؤ ٤ 8 ػ ٤ خ عآ س ٣ ث ػ ش ؿب ش ى هش )خ ٦ ب ٣ غ ٦ ش ا د ؤبد ٣ ( ؤش آص ؤ )خ ؤ ٦ ؤب ٣ 8 ػ ٤ و ٥ ثبس د ذ ؿذ ( ش آص د )خ ٦ ب ٣ ثالػه ػ ٦ ؼ. ا ٦ ؤ د ثؤبس د ؤذ ؿؤذ ( تنؼؤ ٦ ؿؤذ ذ دس ب ٥ ؤب غ اص اػهخشاج RNA ث ٦ ب ط ؤب ٣ Bcl-2 ErbB4 Bax ثؤب س ؽ Real time PCR اسص ٥ ؤبث ٤ ؿؤذ داد ؤب ٣ حبصؤ ثؤب آص دز س ىب ٣ آص آ ب ض ٦ اس ٥ ب غ ٥ و عشف اسص ٥ بث ٤ ؿذ وتایج: هب ٥ ح ا ٥ غب ا ب داد ى ٦ ؤضا تؤي ٦ ثالػه ػ ٦ ؼؤ. رب ٥ ؤ تخش ا د بد دذد ؼج. ث ش غ ٦ ش ا د بد ٣ تقب ت ا ٤ داس ٣ داؿ. ث ٦ ؤب ط ؤب ٣ ؤ سد غب اؤ دس ؤش وتيج گيزی: فشآ ٥ ذ ا د بد ش ىشد دس شح. ػ ٤ تأر ٦ ش ٣ ثش ٦ ضا تي ٥ ث ٦ ؤب ط ؤب ٣ ؤ سد غب اؤ ذاؿؤ. ا ب غ اص ا د بد دذد دس شح ثالػه ػ ٦ ؼ. ا ٦ ٦ ضا تي ٥ ث ٦ ب ط ب ٣ ErbB4 Bcl-2 Bax تغ ٥ بف. کليذياصگان: ا د بد ؿ ٦ ا ٣ دذد ش ػ ٤ ثش ب س ٥ ض ٣ ؿذ ث ٦ ب ط ال ض ٤ ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. پصيهشهایآسیبشىاسیزیستی دير 81 شمار 4 زمستان 8924 صفحات مقذم 26 دس س ؽ ى و ثبس س ٣ ا د بد خ ٦ ب هب ؼ ٦ ٥ و چشت نبح آص ب ٥ ب ٤ سا اص حبػ اتالم ٤ ب ٤ ضؿي ٤ افضا ٥ ؾ ٤ د ذ ا د بد ؿ ٦ ا ٣ خ ؤ ٦ ؤب داسا ٣ ضا ٥ ؤب ٣ خه قؤ ٤ اص خ ىب ؾ تغش ب ب تحش ٥ و تخ و زاس ٣ خ ٦ ش ٣ اص چ ؤذ م ؤؤ صا ٤٥ حقؤؤؼ ثؤؤبس س ٣ ثؤؤشا ٣ ث ٦ ؤؤبسا تحؤؤ. پصيهشهای آسیب شىاسیزیستی دير 81 شمار 4 زمستان 8924 ؿ ٤ ٦ دس ب ٤ شت دس ب ٤ اػ. ]1 2[ هب ٥ ح غب ابت ب د ذ ث ٠ ج د ٦ ب ذ ثبسداس ٣ ثاذ اص ا هنب خ ؤ ٦ ؤب ٣ د ؤذ- ر ة ؿذ اػ. ]5-3[ دس ثشت ٤ اص امع تاؤذاد خ ؤ ٦ ؤب ٣ ر ة ؿذ ثشا ٣ ا هنب ث ٦ ؾ اص تاذاد ؤ سد ٦ ؤبص اػؤ. ثؤشا ٣ خ ٦ ش ٣ اص د س س ٥ خه ؿذ خ ٦ ب ٣ اضبف ٤ ٤ ت ا آ ب 62

3 ىشد فشا داد مشاس اػهقبد سد ثاذا د د ذ دذدا سا تاذاد ا هنب ثشا ٣ سا ث ٦ بسا خ ٦ ب دذد ا د بد ثشا ٣ فشص. ٤ ى ذ ت ٥ ل م صا ٤٥ چ ذ اص خ ٦ ش ٣ ث ظ س خ ٦ ب ى هش چ ٦ ثشسػؤ ٤ ثؤشا ٣ سا ؿؤذ د ؤذ خ ؤ ٦ ؤب ٣ ٤ ت ا ]6[ د د ذ دذدا ػپغ د ر ة ط ه ٦ ي ٤ ث ٦ بس ٣ ب ٣ خ ؤ ٦ ؤب ٣ دس آ ؼؤه ا د بد س ؽ ثب ب خ ٦ دذد ا د بد آ ؼه ا د بد ]9-7[ اػ. ؿذ ا دب ا ؼب ٤ ب ٣ ؿ ٤ ث بثشا ٥ اػ. شا م ٦. تد ٦٠ ضات ٦ بص ذ م. ٦ ش س ؽ ٥ و خ ٦ ب اثهذا اص س ؽ ا ٥ دس ؿذ غشح ؿ ٦ ا ٣ ا د بد س ؽ ػؤپغ ٦ ٤ ؤشد مشاس ٥ خ ب ضذ اص ثبال ٤٥ غ ظ. اشض دس ا د ؤبد ث دش ى ٦ ٤ شد مشاس ب ٥ ع ٦ هش ط دس ثالفبص ]11[ ٤ ؿ د ٥ خ ىش ٥ ؼهب تي ٦ ثذ ب ٥ ابت ؿ ٦ ا ٣ س ؽ ب ٣ ىبس ٦ ش ٣ ث ى اػ. داد ب غب ابت هب ٥ ح بثبس س افشاد دس ب دس ا يبس مبث غ ٦ ش نؾ خ د ثب ا د بد ٣ خ ؤ اص ػؤ ٤ فشاػؤبتهبس ثؤش ؤب غ ث ٤ تأر ٦ شات ت ا ذ ٤ ثبؿذ داؿه ٦ ه ى ذس ٣ ب ت ص ٥ ع ٦ يش ت ث ب ػبص ب ذ ٤ ش آثبس ؿذ فاب اػهشػ ٤ بػخ سا ا ذاص ٣ خت حه ٤ ؤش ]13-11[ ؿ د )Apoptosis( ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ىؤ اػ. ػ ٤ ش فش سا ٥ حتش ٥ ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ اوجمادمجدد شندرجىیههای تك یهيبیان بررسیمیسان ٤ ٠ نؾ ا ٥ قب ػ ٤ ش اس ب ٦ ؼ ب ٣ ت ب ٥ ض تي ٥ دس سا ش تئ ٦ ب ٣ ٦ ب دس ى اػ. داد ب غب ابت ]14[ ٤ ى ذ ؿؤذ ثش ب ؤ س ٥ ؤض ٣ ػ ٤ ش دس دس ٦ ش خه ف ب ٣ ط ؤش فشآ ٥ ؤذ ت ظ ٦ دس سا ٤ ٠ نؾ Bcl-2 تب اد اعضب ٣ د دس تب اد ا ٥ اعضب ٣ ٤ ى ذ ا ٥ قب ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ؤ ٤ ؿؤ ذ عجنؤ ث ؤذ ٣ هؤ ص ٣ آ ه ٤ آ ه ص ٣ ش آ ش اص C ػؤ ٦ ه ىش ؿؤذ س ؤب ت ظؤ ٦ ثؤ ػؤ ٦ Bcl-2 ش تئ ٦ خ ؤ ٦ ش ٣ ؿؤذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ش ا نب ٣ اص ٦ ه ى ذ ٣ افضا ٥ ؾ حب ٤ ى دس ]15[ ٤ ؿ د ػ ثنب ٣ خت ٤ ى ذ ؤ ٤ ى ؤذ تؼؤش ٥ ع سا ؿؤذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ش Bax ث ٦ ب Bax ثؤ Bcl-2 ث ٦ ؤب ؼؤج. ى داد ذ ب حننب چ ٦ ؤش ٥ ب ثنب ؼ ٦ ش اص ٥ و ىذا ػ ى ؼ. ا ٥ تا ٦٦ ى ذ ]16[ ٦ شد ٦ ؾ دس سا ػ ٤ ث ٦ بػت ى ؾ ثش ٦ بص ذ ٦ چ ٦ ذ فشآ ٥ ذ ٥ و ال ض ٤ ٥ )Blastocyst trophectoderm( ثالػه ػ ٦ ؼ. تش ف اىه سد اػ. بدس ٣ سح ٤ ت ٦ ا ال ش ٤ ٥ دس دس ٦ ش ط ٥ و ErbB4 Heparin-binding ( HB-EGF ثب ى ؾ ثش ارش دس ى اػ. سا ثالػه ػ ٦ ؼ. آغبص ٥ چؼج ذ ٤ )EGF-like growth factor آربس سد دس اعالعبت ]17[ ٤ ى ذ اػغ ش ٣ سح ٤ ٤ ت ٦ ا ث دس ث بثشا ٥ اػ. ا ذه ط ب ا ٥ ث ٦ ب ثش دذد ؿ ٦ ا ٣ ا د بد Bax ط ب ٣ ث ٦ ب تي ٥ ٦ ضا ثش دذد ا د بد آربس غب ا ا ٥ ؿذ ثشسػ ٤ ؿ ٤ خ ٦ ب ٣ دس Bcl-2 ErbB4 ريش ا ي م اد حي اوات وگ ذاری ػ ثب NMRI ظاد ػق ٦ ذ ؽ اص غب ا ا ٥ دس قه 8-6 ىشج بػه س ثػؼ اص آص ب ٥ ب ٤ ح ٦ ا بت ا ٥ ؿذ اػهقبد دا ؤ ب دس ح ٦ ا ؤبت تب دس س ص 11 ث ذت ؿذ ذ ت ٦٠ تبس ٥ ي ٤ ػبع. 12 س ػبع. )12 ؿشا ٥ ظ دس ذسع تشث ٦. اػ. رىش ث الص ؿذ ذ ٠ ذاس ٣ ػب ه ٤ شاد( دسخ 22±2 تصؤ ٥ ت ثؤ آص ب ٥ ؤ ب ٤ ح ٦ ا بت ثب ىبس اتالم ٤ اص ى اػ. سػ ٦ ذ ذسع تشث ٦. دا ب ضؿي ٤ اتالك ى ٦ ه جىيه جمعآيری ي تخمکگذاری تحزیک PMSG ا ؤ ٤ ثؤ ٦ احؤذ 7/5 صؤقبم ٤ دات تضس ٥ ل ثب IntervetInc( )Pregnant Mar s Serum Gonadotropin( ا ٤ ث ٦ احذ 7/5 تضس ٥ ل ثب ػبع. 48 اص غ آ د جب ث ذ( ذ( Pregnil( )Human Chorionic Gonadotropin( HCG ؤبد ؤ ؽ ؤب ٣ شفؤ. صؤ ست تخ ؤو ؤزاس ٣ تحش ٥ و ٥ و ث ص ست خق. ٦ ش ٣ ثشا ٣ HCG تضس ٥ ل اص غ ثالفبص دس قه 11-8 ػ ثب ظاد ب اص ثب غ ش ؽ ب ٣ ثب ٥ و ث شفه ذ مشاس مقغ ٥ و خقؤ. ٦ ؤش ٣ مؤ اص اع ٦ ب ثشا ٣ اط ؤاله خؤ د ظؤش اس ؤبد ؤب ٣ ؤ ؽ ثاذ س ص صجح ؤ ؽ ع ؤ ا ثؤ اط اله داسا ٣ ب ٣ ؽ ؿذ ذ ثشسػ ٤ 63 Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N

4 وازيهمكاران وسریهمجیدیقر 26 اص ػؤ ٤ 8 خ ؤ ٦ آ سد ث دػ. ثشا ٣ ؿذ ذ ا هخبة ثبسداس تضس ٥ ؤل اص غ ػبع زؿ. ثب ثبسداس بد ؽ ب ٣ شمار 4 زمستان 8924 شىاسیزیستی دير 81 آسیب پصيهشهای 64 آ ؤب سح ؤ ٤ ؤ ؤب ٣ ؿؤذ ذ خب مغع ب ؽ HCG HTF حؤ ٦ ظ مغش ؤب ٣ دس ثالفبص ب ]18[ ؿذ تبسج 4-(2-hydroxyethyl)-( HEPES ثب )Human Tubal Fluid( Geneocellideal( )1-piperazineethanesulfonic acid Human serum ( ا ؼب ٤ آ ج ٦ ػش دسصذ 11 حب ٣ ا ٥ شا ( تضس ٥ ؤل ثب ػپغ ؿذ داد مشاس آ ب ( Biotest( )albumin ٥ ؤو سح ٤ ت ػؤظ ب ٣ دات ث ح ٦ ظ ٦ اص نذاس ٣ خ ٦ ب ٣ خص ف ػش ػش ثب ػ ٤ ػ ٤ 1 ا ؼ ٦ ػش ؿذ ذ تبسج اص ػ ٤. مطالع گزي ای ثؤ تصؤبدف ٤ ث ع س آ ذ ث دػ. ػ ٤. خ ٦ ب ٣ ؿذ ذ تنؼ ٦ د آص ٥ و آص ى هش ش ػ مغؤش ؤب ٣ دس ػؤ ٤ ؤ. خ ٦ ب ٣ ى هش ش دس 3 ث ؤذت ا ؼب ٤ آ ج ٦ ػش دسصذ 11 حب ٣ HTF ى. ؿذ ذ داد ى. رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. شح تب س ص ػؤ ٤ ؤ. شح ؤ دس ب خ ٦ ٥ و آص ش دس شح ؤؤ تؤب س ص 3 ثؤ ؤؤذت ػؤؤپغ ؿؤذ ؤؤش د ؤذ ؿذ ذ داد ى. رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. ػؤ ٤ ؤ. شح ؤ دس ؤب خ ٦ د آص ش دس ى. ػبع ذت ث ذت ػپغ ؿذ ش د ذ ؤش د ذ ا ٦ ثالػه ػ ٦ ؼ. شح دس دذدا ؿذ داد شح ؤ ثؤ تؤب ؿؤذ ذ داد ىؤ. س ص ٥ ؤو ث ذت ؿذ ذ ثشػ ذ رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. ثالػؤه ش ب ٣ تاؤذاد ص ؤذ خ ؤ ٦ ؤب ٣ ا هخؤبة ؤاله اص 51 ث ٦ ؾ ثب خ ٦ ب ٣ ى ث ع س ٣ ث د شد )Blastomere( ؿذ حزف غب ا اص شد ثالػه ش دسصذ جىيه ا شيش ای اوجماد ريش ى ا ٥ ب ؤب اصس ؽ خ ٦ ب ؿ ٦ ا ٣ ا د بد ا دب ث ظ س ىشا ٥ ؤ اله اص اػؤهقبد ثؤب )2115( يبسا )Kuwayama( دس ]19[ ؿؤؤذ اػؤؤهقبد آ ش ٥ يؤؤب( Biotech( )Cryo Lock( ؿؤذ هن تابد ح ث خ ٦ ب ؿ ٦ ا ٣ ا د بد شح دم ٦ نؤ 15 ػؤ ٤ ( ؤ. )خ ؤ ٦ ؤب ٣ دم ٦ نؤ 8 ث ؤذت ب ذ ؤذ ثؤبم ٤ تاؤبد ح ؤ دس ثالػه ػ ٦ ؼؤ.( ب ٣ )خ ٦ Ethylene ( ٦ يؤ اتؤ ٦ دسصذ 7/5 حب ٣ تابد ح ػ ق ىؼؤ ٦ ذ ه ٦ د ٣ دسصذ 7/5 آ ب ( Sigma( )glycol ؿؤذ ح آ ب ( Sigma( )Dimethyl sulfoxide: DMSO( خ ٦ ب ػپغ اػ. ا ؼب ٤ آ ج ٦ دسصذ 11 داسا ٣ HTF دس ثبم ٤ آ دس دم ٦ ن ٥ و ث ذت ؿذ هن ا د بد ٣ ح ث 15 ٦ ي ات ٦ دسصذ 15 حب ٣ ا د بد ٣ ح ب ذ ذ آ ؤب ( Sigma( ػؤبىبسص ٦ هؤش ثش 1/5 DMSO دسصذ دس ثؤ د ا ؼؤب ٤ آ ج ٦ دسصذ 11 داسا ٣ HTF دس ؿذ ح ٦ هش ط اسد ثالفبص هن ىشا ٥ اله س ٣ ب خ ٦ ٠ ب ٥. ؿذ ذ ب ٥ ع جىيه ا گزمکزدن ريش ع ٤ خ ٦ ب ؿ ٦ ا ٣ ا د بد اص ػبع. د زؿ. اص غ ٦ هش ط اص ىشا ٥ اله ىشد تبسج اص غ ؿذ ذ ش شح 3 دسخؤ )37 ؤ ٥ ؤو ػؤبىبسص ح ؤ دس ثالفبصؤ ؤب ٥ ع مغؤش دس دم ٦ ن ٥ و ث ذت خ ٦ ب ؿذ ثشد فش ػب ه ٤ شاد( ػبىبسص ح ث ػپغ ب ذ ثبم ٤ ٥ و ػبىبسص ح ثؤبم ٤ ح ا ٥ دس دم ٦ ن 3 ث ذت ٥ بف. ا هنب الس 1/5 ٥ بفؤ. ا هنؤب ؤ الس 1/25 ػؤبىبسص ح ؤ ث ػپغ ب ذ اص خ ٦ ب ٠ ب ٥. دس ب ذ ثبم ٤ ح ا ٥ دس دم ٦ ن 3 ث ذت اص ى مغش 7 تب 6 دس ؿذ ذ تبسج 1/25 ػبىبسص ح ثؤذ HTF ىؤ. ح ٦ ظ دس ؿؼه ث د ذ ؿذ ا ي ث مج HEPES شفه ذ مشاس ا ي ثبت س دس RT-PCR ريش با جىيه ا م لك لی بزرسی اص ErbB4 Bax Bcl-2 ط ب ٣ ث ٦ ب ٦ ضا ثشسػ ٤ ثشا ٣ ؿؤذ اػهقبد )Real time quantitative PCR( RT-qPCR

5 ؿؤذ خ ؤعآ س ٣ ش ػ ش دس ٥ بفه تي ٥ خ ٦ ب ٣ اثهذا ى ٦ ؤبص اص اػؤهقبد ثؤب خ ؤ ٦ ( )151 خ ٦ ب ى ػپغRNA DNase آ ض ٥ ثب ت ٦ بس اص غ ؿذ اػهخشاج آ ب ( Qiagen( ايؤ ع ىپؤ ٤ ثؤشداس ٣ آ ؤض ٥ اص اػؤهقبد ثب آ ب ( Sigma( ػؤبت. ؿؤذ تجذ ٥ cdna ث )Reverse Transcription( Thermo Scientific( Fermentas ى ٦ ؤؤ. ثشاػؤبع cdna ؿذ ا دب آ ش ٥ يب( ثشسػؤ ٤ تيث ٦ ؤش RT-PCR س ؽ ثب ؿذ ػبته cdna ]18[ ؿذ PCR اصؤ ٤ خ ؤ ط اص اػهقبد ثب PCR اى ؾ ش دس )SYBR Green( ؤؤش ٥ ػؤؤب ٥ جش )PCR master mix( آ ش ٥ يؤب( Applied Biosystems( ABI Step One دػؤه ب شف. ا دب ػبص ذ ؿشى. دػه سا ا عجل صن اوجمادمجدد شندرجىیههای تك یهيبیان بررسیمیسان اتهصبص ٤ اي ع ٦ ش )Primers( آغبص ش ب ٣ ت ا ٤ Oligo7 ؤش افؤضاس اص اػؤهقبد ثؤب ثشسػؤ ٤ سد ب ٣ ط ثشا ٣ ؿؤذ عشاحؤ ٤ Glyceraldehyde-3-Phosphate ( GAPDH آغبص ش ؤب ٣ تؤ ا ٤ شخع ط ث ع ا )Dehydrogenase 41 اػؤ. ؿؤذ اسا ٥ 1 خذ دس غب ا ا ٥ دس اػهقبد سد د ب ب ٣ ؿذ شفه ظش دس RT-PCR چشت ش ثشا ٣ چشت دسخ 61 رب ٦ 15 ثشا ٣ ػب ه ٤ شاد دسخ 94 ؿب چشت ش تيث ٦ ؤش ح ؤ ٤ ش دسػه ٤ ؿذ ت ظ ٦ رب ٦ 31 ثشا ٣ ػب ه ٤ شاد ثؤؤب )Melting( ر ة ح ؤؤ ٤ ت ػؤؤظ )Amplification( ط ؤش حصؤ ثؤشا ٣ ى ر ة اتهصبص ٤ د ب ٣ اص اػهقبد اتهصبص ٤ ثؤ ؼج. ذف ط ش ث ٦ ب ٦ ضا ؿذ تأ ٦٥ ذ اػ. فش اص اػهقبد ثب شخع ط غب ا سد ط ب ٣ ثشا ٣ اتهصبص ٤ اي ع ٦ ش آغبص ش ب ٣ ت ا ٤ 1 جذيل آغاسگز ت الی باس( )جفت ط ل ؿذ حبػج 2 - CT GAPDH 5 -GACTTCAACAGCAACTCCCAC-3 ٦ ش : 5 - TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3 اي ع: 125 دستيابی شمار NM_ ساوتیگزاد( )درج دما 81 83/5 XM_ ٦ ش : CGGCGAATTGGAGATGAACTG-3 5 -GCAAAGTAGAAGAGGGCAA-3 اي ع: Bax Bcl ACCGTCGTGACTTCGCAGAG -3 ٦ ش : 5 - GGTGTGCAGATGCCGGTTCA -3 اي ع: 84 NM_ ErbB4 5 -TACGAGCCTGCCCAAGTTC- 3 ٦ ش : 5 - GTGCCGATTCCATCACATCCT - 3 اي ع: وتایج آماری بزرسی ای ؿؤؤ بسؽ اص حبصؤؤ هؤؤب ٥ ح آ ؤؤبس ٣ تح ٦ ؤؤ تدض ٥ ؤؤ آص آص اص اػهقبد ثب آ ب تي ٥ ٦ ضا ثالػه ػ ٦ ؼ. ب ثنؤؤب ٣ ٦ ؤؤضا اسص ٥ ؤبث ٤ ثؤؤشا ٣ )Chi-square( ىؤؤب ٣ دؤز س آص ب ٥ ؤ ٤ ش ؤب ٣ دس ؿذ ش د ذ ثالػه ػ ٦ ؼ. ب ٣ شف. ا دب خه ف RT- اص حبصؤ داد ؤب ٣ اسص ٥ بث ٤ ثشا ٣ One-way ( عشفؤ ٥ ؤو اس ٥ ؤب غ آ ؤب ٦ ض آص ؤ اص qpcr 74/5 XM_ ت ى ٤ تي ٤ ٦ آص )Analysis of Variance: ANOVA ؿذ اػهقبد )Tukey( SPSS ش افضاس ثب آ بس ٣ تح ٦ تدض ٥ ظش دس 1/15 P ػغح دس ا ٤ داس ٣ شف. ا دب 16( ) ؼخ Mean ( ا ٦ بس ا حشاف ± ٦ ب ٦ ث ص ست داد ب ٣ ؿذ شفه اػ. ؿذ اسا ٥ تيشاس ػ اص حبص ±( SD وتایج ثاو ی بالست سيست ب تك یه ميشان ٥ و آص ش ب ٣ دس رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. ث تي ٥ ٦ ضا ث ؼج. ى ث د دسصذ 88/8 ػ ٤ (. شح دس )ا د بد ا ؤ ٤ داس ٣ تقؤب ت دسصؤذ 92/5 ا د بد ٣ ( )غ ٦ ش ى هش ش ذاؿ. شح دس دذد )ا د بد د آص دس ش ٦ ضا ا ٥ ثبس ٥ و ش ث ؼج. ى ث د دسصذ 81/7 ا ٦ ( ثالػه ػ ٦ ؼ. 65 Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N

6 وازيهمكاران وسریهمجیدیقر غ ٦ ش ش ث ؼج. ا ب ج د ا ٤ داس ؿذ ب ذ تقب ت ا د بد ٣ 2( )خذ )1/15(>P ث د ا ٤ داس ٣ تقب ت ا د بد ٣ هب ٥ ح ا ٥ دس ا ٤ داس ٣ ىب ؾ ثبعث خ ٦ ب دذد ا د بد ى ٤ د ذ ب ٤ ؿ د رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. شح تب خ ٦ ب تي ٥ ٦ ضا جىيه تخزیب ميشان شح دس )ا د بد ٥ و آص ش ب ٣ دس تخش ٥ ت ب ٦ ضا دسصذ 11/2 ث تشت ٦ ت ا د بد ٣ ( )غ ٦ ش ى هش ػ ٤ (. مطالع گزي ای ذ ( د ذ ػ ٤ 8 )خ ٦ ب ٣ ى هش آص ؿذ ( د ذ ػ ٤ 8 )خ ٦ ب ٣ ٥ و ؿذ ( ثبس د ذ د ثالػه ػ ٦ ؼ. )خ ٦ ب ٣ د آص خ ٦ ب تخش ٥ ت ثالػه ػ ٦ ؼ. تي ٦ ى ٤ ٦ ضا 2 جذيل ا ٤ داس آ بس ٣ ظش اص ؿذ ب ذ تقب ت ى ث د دسصذ 7/5 ثالػه ػ ٦ ؼؤ. شح دس د ثبس ثشا ٣ ب خ ٦ ص ب ٤ ى ج د 18/3 ثؤ خ ؤ ٦ ؤب تخش ٥ ؤت ٦ ؤضا ؿذ ذ ش د ذ ا ٦ دذد ا د بد ش دس تخش ٥ ت ٦ ضا ا ٥ ٥ بف. افضا ٥ ؾ دسصذ ا ب ذاؿ. ا ٤ داس ٣ تقب ت ا د بد ٣ ثبس ٥ و ش ث ؼج. ؤب هؤب ٥ ح ا ٥ ؤ ثؤ د ا ٤ داس تقب ت ى هش ش ث ؼج. دس ا ؤ ٤ داس افؤضا ٥ ؾ ثبعؤث خ ٦ ب دذد ا د بد ى ٤ د ذ 2( )خذ ٤ ؿ د خ ٦ ب تخش ٥ ت ٦ ضا ثاو ی )درصذ( بالست سيست تشكيل ميشان 92/5 کلی ميشان )درصذ( تخزیب 7/5 11/2 * 18/3 88/8 * 81/7 <P( )1/15 داسد خ د ى هش ش ثب ا ٤ داس تقب ت *: 211 ثضس ب ٤٥ )ج( دذد ا د بد اص ثاذ ثالػه ػ ٦ ؼ. خ ٦ ب ٣ )ة( ىشد ش ا د بد اص ثاذ ػ ٤ 8 خ ٦ ب ٣ )ا ف( د ذ غ ٦ ش ػ ٤ 8 خ ٦ ب ٣ 1 شكل سول لی موزل بو مزبو صن ای بيان ميشان الو گشیىی ي شذ بزوام ریشی Bax ط ث ٦ ب ٦ ضا ٤ ؿ د د ٥ ذ 1 ؿي دس ى ب تقؤب ت دذد ا د بد ش دس ه ص ٣ ش آ ط ٥ و ث ع ا ؼؤج. حب ٤ ى دس ذاؿ. ا د بد ثبس ٥ و ش ثب ا ٤ داس ٣ P( )1/15> ث د ثبالتش ا ٤ داس ٣ ث ع س ا د بد ٣ غ ٦ ش ش ث ط ث ٦ ب ٦ ضا تقب ت ه ص ٣ آ ه ٤ آ ط ٥ و ث ع ا Bcl-2 ب دذد ا د بد ا د بد ثبس ٥ و خ ٦ ب ٣ ث ٦ سا ا ٤ داس ٣ ث ؼج. دذد ا د بد خ ٦ ب ٣ دس ٦ ضا ا ٥ حب ٤ ى دس ذاد ق. ٤ ت ا ه ٦ د ث ع ا ث د ب ٦٥ تش ا د بد ٣ غ ٦ ش خ ٦ ب ٣ دذد ا د بد ش د ث ٦ Bcl-2 Bax ط ب ٣ ث ٦ ب ٦ ضا ى ث د بث 1( )آص ا د بد ٣ ثبس ٥ و )آص 2 ( 66 شمار 4 زمستان 8924 شىاسیزیستی دير 81 آسیب پصيهشهای 22

7 د ثؤ ٦ ال ض ٤ ٥ ط ٥ و ث ع ا ErbB4 ط ث ٦ ب ٦ ضا ا ٥ حب ٤ ى دس ث د بث ا د بد ثبس ٥ و دذد ا د بد ش اوجمادمجدد شندرجىیههای تك یهيبیان بررسیمیسان ثؤ ا د ؤبد ٣ غ ٦ ش ش ث ؼج. دذد ا د بد ش دس ٦ ضا 2( 1 )ؿي P( )1/15> ث د ب ٦٥ تش ا ٤ داس ٣ ع س 2 شكل شخؤع ط اص اػؤهقبد ثؤب ط ش دس آ ذ ث دػ. هب ٥ ح غب ا سد ش ب ٣ دس ال ض ٤ ٥ ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ش ث شث ط ط ب ٣ ؼج ٤ ث ٦ ب ا ٣ د ؤذ غ ٦ ؤش ػؤ ٤ 8 خ ٦ ؤب ٣ ى هش ( ش اػ. آ ذ ث دػ. تيشاس 3 اص ا ٦ بس ا حشاف ± ٦ ب ٦ ث ص ست اعذاد اػ. ؿذ ىب ٦ جش ى هش ش ثب ش ب ٦ ض ى هؤش ؤش ثؤب ا ؤ ٤ داس تقؤب ت *: ؿذ ش د ذ ثبس د ا ٦ ثالػه ػ ٦ ؼ. خ ٦ ب ٣ 2( آص ش ؿذ ش د ذ ػ ٤ 8 خ ٦ ب ٣ 1( آص ش داسد خ د بحث خ ٦ ؤب ؿ ٦ ا ٣ ا د بد ى داد ب حبضش غب ا ٢ هب ٥ ح ثالػه ػ ٦ ؼ. ث آ ب تي ٥ ٦ ضا دس ا ٤ داس ٣ تغ ٦٦ ش ث دش دش د ثبس ثشا ٣ خ ٦ ب ا د بد حب ٤ ى دس ٤ ؿ د رب ٥ ؤ ٤ ؿؤ د رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. ث آ ب تي ٥ ٦ ضا ىب ؾ ث دؤذد ؿ ٦ ؤ ا ٣ ا د بد ى د ذ ضاسؽ حنن ٦ اص ثشت ٤ ؿؤ ٠٦ ب 21[ ]1 ؤذاسد خ ٦ ب تي ٥ ثنب ٦ ضا ثش تأر ٦ ش ٣ ٥ ؤو شح ؤ دس اثهؤذا سا ؤ ؽ خ ٦ ؤب ٣ )2116( يبسا ػ ٤ 2 شاح دس دذدا ىشد ش اص غ د ذ ػ ٤ آ ب غب ابت هب ٥ ح د ذ د ذ ثالػه ػ ٦ ؼ. ػ ٤ 8 ػؤ س ص دس ػؤ ٤ 8 شح ؤ ثؤ تيؤ ٥ ىؤ داد ؤب مؤشاس دؤذد ا د ؤبد تؤأر ٦ ش تح. د س ص دس ثالػه ػ ٦ ؼ. ش دس )Zona( ص ب اص تش ج ٦ ضا ث ٦ هش ٥ شچ شف. ثب آ ب غب ا تقب ت ]1[ ؿذ ب ذ ا د بد ٣ ( )غ ٦ ش ى هش ثؤ ع ؤ ا )Ascorbate( آػؤي سثبت افؤض د حبضش غب ا ثؤ آ ه ٤ اىؼؤ ٦ ذا افض د اػ. ى. ح ٦ ظ ث ب آ ه ٤ اىؼ ٦ ذا ى. ح ٦ ظ ثضدا ٥ ذ ى. ح ٦ ظ اص آصاد ساد ٥ يب ب ٣ ٤ ت ا ذ ص ٥ ؤشا ثبؿذ داؿه ػ ٤ ت ب ٥ ض تي ٥ ٦ ضا ثش ت ث ٤ تأر ٦ ش فؼؤق ٦ پ ٦ ذ DNA ث آػ ٦ ت هب ؼ ٦ داسا ٣ آصاد ب ٣ ساد ٥ يب خ ٦ غب ٣ ت ػؤظ ىؤ د ٥ ؤش ٣ غب اؤ ٢ دس 22[ ]21 اػ. ؽ ػ ٤ 4 خ ٦ ب ٣ ؿذ ا دب )2114( يبسا فهح ٤ ؤب دس دؤذدا ىؤ. ػؤبع. 2 ؿ ٦ ا ٣ ا د بد اص غ حؤ ٦ ظ دس خ ؤ ٦ ؤب ىؤ. ]21[ ؿذ د ذ تي ٤ ٥ شح ث ٦ هب ٥ ح تقب ت ثش د ٤ ٦ احه بال ثبالتش تي ٤ ٥ شح تب ى. حبضؤش غب اؤ تأ ٦٥ ؤذ دس ث د ت ا ذ فهح ٤ حبضش غب ا خ ٦ ب ٣ ٦ ضا ى داد ذ ب ٦ ض )2114( يبسا ىش خ ٤ 67 Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N

8 وازيهمكاران وسریهمجیدیقر ى هؤش ؤش د دس ص ؤب اص ؿذ تبسج ٥ ب تش ج حب دس ا ؤ ٤ داس تقؤب ت ىؤ. ػبع. 96 اص ثاذ ؿذ د ذ ر ة د ٦ ث د ا ٤ داس تقب ت آغبص ٥ ػبع. 24 چ ا ش ذاؿ. د ذ اعال ى. ع ٤ ا د بد اص بؿ ٤ ق ٤ آربس حزف سا آ ٦ ؤضا ىؤ د ؤذ ؤضاسؽ يبسا )Gayar( ب ٥ ش ]23[ تقؤب ت ؿ ٦ ؤ ا ٣ ا د بد ثبس د ٥ و اص غ خ ٦ ب تي ٥ ا د ؤبد حب ٤ ىؤ دس ذاد ب تبص خ ٦ ب ٣ ثب سا ا ٤ داس ٣ ]24[ ذ تح خ ٦ ب اص ىث ٦ ش ٣ تاذاد ت ػظ ػ ثبس ثشا ٣ ٤ دس ٤ ا د بد ب ٣ ع ٤ خ ٦ ب ى ٤ د ذ ب غ ت ا ٥ شفه مشاس ى ٤ سػذ ث ظش ٤ ؿ ذ هح سا اػهشع ب ٤٥ داسا ٣ ٥ ؤخ ؤب ضؤذ اص ثبالث ٤ غ ظ. اشض دس خ ٦ ب دذد ؤب غب ابت هب ٥ ح اػ. آ ب تي ٥ ٦ ضا ثش ػ تأر ٦ شات ٤ خؤت ؤ ٤ ت ؤذ DMSO ب ؤذ ٥ خ ب ٤٥ ضذ ى اػ. داد ت ص ٥ ؤؤع حؤؤ ١ ٦ يش ت ثؤؤ ؤؤب ػؤؤبص ب ذ ٤ دس اتؤؤهال ا ؼؤب خ ؤ اص خه ؤف ب ٣ خ ٦ دس ب ٦ ه ى ذس ٣ ؤز ٥ ش ٣ ق ر ٦ ه ى ؤذس ٣ ؤب ؿذ خه 26[ ]25 ؿ د ؽ ى ؼ ٦ افضا ٥ ؾ ث دش داد افضا ٥ ؾ ى ؼ ٦ ٥ ث سا ب ػ اتؤهال ٦ ؤذس ٦ ض ٣ آ ض ٥ ؤب ٣ ؿذ فاب ػ ٤ دات ٤ ؿ د ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ش ٠ ب ٥. دس ا شط ٣ ت ٦ ذ ىؤ اػؤ. ؿؤذ ثش ب س ٥ ؤض ٣ ػ ٤ ش ٥ و ه ص آ ]27[ دس ث بثشا ٥ ]14[ ٤ ؿ د ى هش Bcl-2 تب اد ب ٣ ط ت ػظ ثؤ ع ؤ ا Bax ؿؤب تؤب اد ا ٥ اص ط د ث ٦ ب غب ا ا ٥ ؿؤذ ثشسػؤ ٤ هؤ ص ٣ آ ه ٤ آ ث ع ا Bcl-2 ه ص ٣ ش آ ػؤ ٤ ؤش ث شث ط ط ب ٣ ث ٦ ب ٦ ضا ى داد ب هب ٥ ح تقؤب ت ؿ ٦ ؤ ا ٣ ا د ؤبد ثؤبس ٥ ؤو اص ثاؤذ ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ا د ؤبد حؤب ٤ ىؤ دس ؤذاسد تؤبص ؤب ٣ خ ؤ ٦ ثب ا ٤ داس ٣ ثؤب ؤ ٤ ؿؤ د ا ٤ داس ٣ تغ ٦٦ ش ث دش خ ٦ ب دذد ؿ ٦ ا ٣ ث ع س ا د بد اص غ ٦ ض خ ٦ ب تي ٥ ٦ ضا ا ٥ ى ث ت خ ثؤ ٦ مؤ ٣ استجبط ى ق. ٤ ت ا ٥٤ بثذ ىب ؾ ا ٤ داس ٣ ؤش ثؤ شثؤ ط ط ؤب ٣ ث ٦ ؤب تغ ٦٦ ش تي ٥ ٦ ضا ىب ؾ دا ٠ ؤ ٤ ثؤ عؤ س ٣ ىؤ داسد خؤ د ؿؤذ ثش ب س ٥ ؤض ٣ ػ ٤ ثنؤب ٦ ضا ى د ذ ضاسؽ ٦ ض )2117( يبسا )Dalhi( ر ة د ذ ػ ٤ 2 ص ٥ ت خ ٦ ب ٣ ب ٦٥ تي ٥ دس ؿؤذ ثش ب ؤ س ٥ ؤض ٣ ػ ٤ ش خ د ث ٤ ت ا سا ؿذ م ٣ ثؼ ٦ بس استجبط ى داد ب آ ب هب ٥ ح داد ؼج. ب خ ٦ Bcl- p53 Bax س ٥ ؼؤ ٤ فاب ٦ ؤ. تغ ٦٦ ش ثنب هب ؼ ٦ ث ٦ ط ث ٦ ؤب ٦ ؤضا غب اؤ ادا دس چ ٦ ]28[ داسد خ د 2 فشآ ٥ ؤذ دس ؿؤذ ثشسػؤ ٤ ٦ ؤض ال ض ٤ ٥ ط ث ع ا ErbB4 چؼؤج ذ ٤ HB-EGF ErbB4 ٦ ؤب ىؤ ؾ ثش ال ض ٤ ٥ سح ؤؤ ٤ دؤؤشا ٣ ؤؤ ٤ ت ٦ ؤؤ ا ثؤؤ سا ثالػه ػ ٦ ؼؤؤ. آغؤؤبص ٥ ث ٦ ؤب ٦ ضا ى داد ب غب ا هب ٥ ح ]17[ ٤ ى ذ اػغ ش ٣ ىؤب ؾ دذد ا د بد خ ٦ ب ٣ دس ا ٤ داس ٣ ث ع س ط ا ٥ ا ؤب ثبؿؤذ تؤأر ٦ ش ؤزاس ال ض ٤ ٥ ٦ ضا دس ٤ ت ا ذ ى ٥٤ بثذ فشآ ٥ ؤذ ٥ ؤو ال ؤ ض ٥ ؤ ٤ ىؤ ضش س ٥ ؼؤ. يه ا ٥ ث ت خ اػؤ. د ٥ ؤش ع ا ؤ اص ثؼ ٦ بس ٣ ى ؾ ثش ٦ بص ذ ٦ چ ٦ ذ ارؤش دس ال ض ٥ ؤ ٤ دس دت ٦ ع ا ػب ٥ ش تغ ٦٦ ش ثشسػ ٤ ث بثشا ٥ ال ؤ ض ٥ ؤ ٤ ٦ ضا دس آ ارش تا ٦٦ ثشا ٣ دذد ؿ ٦ ا ٣ ا د بد اػ. ضش س ٣ الص خ ٦ ب ؿ ٦ ا ٣ ا د بد ى داد ب حبضش غب ابت هب ٥ ح ػؤ ٤ ؤش ثؤ شثؤ ط ط ؤب ٣ ث ٦ ؤب دس تغ ٦٦ ؤش ثؤ دؤش ErbB4 ال ؤ ض ٥ ؤ ٤ ط Bcl-2 Bax ؿؤذ ثش ب ؤ س ٥ ؤض ٣ رب ٥ ثالػه ػ ٦ ؼ. ث خ ٦ ب تي ٥ ٦ ضا چ ٦ ٤ ؿ د ٦ ٤ شد مشاس دذد ا د بد تأر ٦ ش تح. ٦ ض ط ب ٣ ت ٠ ب غب ا ا ٥ دس اػهقبد سد ط ب ٣ حب ا ٥ ثب ٦ ؼ. ال ض ٤ ٥ ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ش دس دس ٦ ش ش فشآ ٥ ذ ثب شتجظ د ٥ ش ط ب ٣ س ٣ غب ا ى اػ. الص ػؤب ٥ ش ٦ ؤض ؤ ؽ دس ض ٥ ؤ ٤ ال ؿذ ثش ب س ٥ ض ٣ ػ ٤ ٦ شد مشاس غب ا سد ب قذرداوی ي تشكز سؿؤه اسؿؤذ ىبسؿ بػؤ ٤ ب ب ٥ ب اص ؼهخشج نب ا ٥ ؤب ٤ ح ب ٥ ؤ. ثؤب اػ. ضؿي ٤ ع دا يذ تش ٥ ح ع اػ. ؿذ ا دب ذسع تشث ٦. دا ب 68 شمار 4 زمستان 8924 شىاسیزیستی دير 81 آسیب پصيهشهای 26

9 مىابع اوجمادمجدد شندرجىیههای تك یهيبیان بررسیمیسان [1] Sheehan CB, Lane M, Gardner DK. The CryoLoop facilitates re-vitrification of embryos at four successive stages of development without impairing embryo growth. Hum Reprod 2006; 21(11): [2] Elnahas A, Alcolak E, Marar EA, Elnahas T, Elnahas K, Palapelas V, Diedrich K, Al-Hasani S. Vitrification of human oocytes and different development stages of embryos: An overview Middle East Fertility Society Journal 2010; 15(1): 2-9. [3] Aytoz A, Van den Abbeel E, Bonduelle M, Camus M, Joris H, Van Steirteghem A, Devroey P. Obstetric outcome of pregnancies after the transfer of cryopreserved and fresh embryos obtained by conventional in-vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection. Hum Reprod 1999; 14(10): [4] Belva F, Henriet S, Van den Abbeel E, Camus M, Devroey P, Van der Elst J, Liebaers I, Haentjens P, Bonduelle M. Neonatal outcome of 937 children born after transfer of cryopreserved embryos obtained by ICSI and IVF and comparison with outcome data of fresh Sato E. Vitrification of large quantities of immature bovine oocytes using nylon mesh. Cryobiology 2001; 42(2): [7] Vitale NJ, Myers MW, Denniston RS, Leibo SP, Godke RA. In-vitro development of refrozen mouse embryos. Hum Reprod 1997; 12(2): [8] Farhat M, Zentner B, Lossos F, Bdolah Y, Holtzer H, Hurwitz A. Successful pregnancy following replacement of embryos previously refrozen at blastocyst stage: case report. Hum Reprod 2001; 16(2): [9] Smith LK, Roots EH, Dorsett MJ. Live birth of a normal healthy baby after a frozen embryo transfer with blastocysts that were frozen and thawed twice. Fertil Steril 2005; 83(1): [10] Vajta G. Vitrification of the oocytes and embryos of domestic animals. Anim Reprod Sci 2000; 60-61: [11] Wu C, Rui R, Dai J, Zhang C, Ju S, Xie B, Lu X, Zheng X. Effects of cryopreservation on the developmental competence, ultrastructure and cytoskeletal structure of porcine oocytes. Mol Reprod Dev 2006; 73(11): [12] Mozdarani H, Moradi SZ. Effect of ICSI and IVF cycles. Hum Reprod 2008; vitrification on viability and chromosome 23(10): [5] Pelkonen S, Koivunen R, Gissler M, Nuojua- Huttunen S, Suikkari AM, Hydén-Granskog C, Martikainen H, Tiitinen A, Hartikainen AL. Perinatal outcome of children born after frozen and fresh embryo transfer: the Finnish cohort study Hum Reprod 2010; 25(4): [6] Matsumoto H, Jiang JY, Tanaka T, Sasada H, abnormalities in 8-cell mouse embryos at various storage durations. Biol Res 2007; 40(3): [13] Park SY, Kim EY, Cui XS, Tae JC, Lee WD, Kim NH, Park SP, Lim JH. Increase in DNA fragmentation and apoptosis-related gene expression in frozen-thawed bovine blastocysts. Zygote 2006; 14(2): [14] Spanos S, Rice S, Karagiannis P, Taylor D, 69 Pathobiology Research, Vol. 18 ( ), N

10 Becker DL, Winston RM, Hardy K. Caspase activity and expression of cell death genes during development of human preimplantation embryos. Reproduction 2002; 124(3): [15] Yang J, Liu X, Bhalla K, Kim CN, Ibrado AM, Cai J, Peng TI, Jones DP, Wang X. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome c from mitochondria blocked. Science 1997; 275(5303): [16] Oltvai ZN, Milliman CL, Korsmeyer SJ. Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog, Bax, that accelerates programmed cell death. Cell 1993; 74(4): [17] Paria BC, Das SK, Andrews GK, Dey SK. Expression of the epidermal growth factor receptor gene is regulated in mouse blastocysts during delayed implantation. Proc Natl Acad Sci U S A 1993; 90(1): [18] Shin MR, Choi HW, Kim MK, Lee SH, Lee HS, Lim CK. In vitro development and gene expression of frozen-thawed 8-cell stage mouse embryos following slow freezing or vitrification. Clin Exp Reprod Med 2011; 38(4): [19] Kuwayama M, Vajta G, Ieda S, Kato O. وازيهمكاران وسریهمجیدیقر [21] Lane M, Maybach JM, Gardner DK. Addition of ascorbate during cryopreservation stimulates subsequent embryo development. Hum Reprod 2002; 17(10): [22] Meister A. On the antioxidant effects of ascorbic acid and glutathione. Biochem Pharmacol 1992; 44(10): [23] Koruji S M, Movahedin M, Rezazadeh Valojerdi M. Assessment of epidermal growth factor (EGF) effects on development of vitrified mouse morulae to the blastocyst stage. IBJ 2004; 8(2) : [24] El-Gayar M, Gauly M, Holtz W. In vitro and in vivo survival of mouse blastocysts after repeated vitrification with the open pulled straw (OPS) method. Cryo Letters 2010; 31(6): [25] Sathananthan AH, Trounson A, Freemann L, Brady T. The effects of cooling human oocytes. Hum Reprod 1988; 3(8): [26] Vincent C, Pickering SJ, Johnson MH, Quick SJ. Dimethylsulphoxide affects the organisation of microfilaments in the mouse oocyte. Mol Reprod Dev 1990; 26(3): [27] Liu L, Hammar K, Smith PJ, Inoue S, Keefe Comparison of open and closed methods for DL. Mitochondrial modulation of calcium vitrification of human embryos and the elimination of potential contamination. Reprod Biomed Online 2005; 11(5): [20] Fathi R, Valojerdi MR, Yazdi PE, Ebrahimi B, Alipour H, Hassani F. Development of 4-cell mouse embryos after re-vitrification. Cryobiology 2012; 64(1): signaling at the initiation of development. Cell Calcium 2001; 30(6): [28] Dhali A, Anchamparuthy VM, Butler SP, Pearson RE, Mullarky IK, Gwazdauskas FC. Gene expression and development of mouse zygotes following droplet vitrification. Theriogenology 2007; 68(9): شمار 4 زمستان 8924 شىاسیزیستی دير 81 آسیب پصيهشهای 67