المقدمة

النسخ

1 آن ح Mechanism of bacterial biofilm formation in milk containers ذك األغش ح انح ح انثكر ش ح ف حا اخ انحه ة ح ساء اب ػض ض لغى ػه و انح اج/كه ح انؼه و نهث اخ/خايؼح تاتم حغ فاػم اخ لغى ػه و انح اج/كه ح انؼه و/خايؼح تاتم الخالصة: ػضند ػضنح تكر ش ح يخرهفح ي األغش ح انح ح ان رك ح ػه خذسا حا اخ حه ة األتماس انخاو. شكهد انؼضالخ انثكر ش ح انغانثح نظثغح كشاو ان غثح ان ؤ ح األػه )%8.8( ف األغش ح ي انؼضالخ ان خثح نهظثغح )%8.( تهغ يؼذل انؼذد انثكر ش انكه انح ف األغش ح X6 خه ح/يم/ عى ي خذاس انحا ح. نذ يراتؼح آن ح ذك األغش ح انح ح ترم ح انششائح انضخاخ ح انغاؽغح ذث أ انؼضالخ انغانثح نظثغح كشاو انغائذج ت غثح %7.3 ف ح كا د انؼضالخ ان خثح نهظثغح ت غثح %.7 لذ افغد انؼضالخ ان رحشكح ذهك غ ش ان رحشكح ف ػ ه ح انرك. ذؤكذ رائح ز انذساعح ػه أ انثكرش ا انغانثح نظثغح كشاو ػه خ انخظ ص ان رحشكح ي ا ن ا د س ي ى ف ذك األغش ح انشل مح انح ح ذهف انحه ة. Abstract Different bacterial isolates were isolated from biofilms of raw cow milk. The results were elicited that the Gram-negative isolates showed maximum percentage(8.8%) of total bacteria, whereas the minimum(8.%) was found in the Gram-positive isolates. However, the average number of total bacteria count in biofilms of milk containers was 6 cell/ ml/ cm. When the mechanism of biofilm formation was followed, using submerged slides technique, it was found that differences in the percentage of Gram-negative isolates (7.3%) from Gram-positive isolates (.7%), however, the motile bacteria showed more competence than non motile in formation process. These findings suggest that the Gram-negative bacteria, with respect to motile bacteria have significant role in formation of biofilms and spoilage of milk. * Present address: Department of Biology, college of science, university of Babylon, Iraq. For correspondence, phone: (3)96; Fax: fhnaji 3@ yahoo.com المقذمة ذك انثكرش ا ائ رجه يد ش ػه ش كم غش اء سل ك ؼ شه تانغش اء انح ح ا ي انرغ شاخ انث ح ان ؤاشاخ انخاسخ ح (998.(ICMSF, ط ف انغش اء انح تن ي ذ يد ش ح ذمم ا ذد ؼ اخ ي األح اء ان د ش ح يهرظمح ػه أعمح طهثح سؽثح ذ نرك يغرؼ شاخ راخ ع احذ أ أكثش ي األح اء ان د ش ح. (Baillie&Douglas, 999) ؼذ زا انغشاء يشحهح ذم س ح ف ػهى انثكرش ا رك ي ػذج يشاحم ذثذأ تا دزاب ان اد انؼؼ ح غ ش انؼؼ ح ح انغمح اى انرظاق انثكرش ا ػه ت اء ان غرؼ شاخ ان د ش ح إ راخ ا ن اد يرؼذدج خاسخ ح (.(Costerton et al., 999 ; Chmielewski&Frank, 3) اى ؼح انغشاء Exopolysubstances ) ي ذغ مش ػه يشاحم ذك انغشاء انح ع م ي اند اخ ذغاػذ ل االذضا انك شتائ األ اطش انك ائ ح ف سطا ح ت اء زا انغشاء(.(Wimpenny, غثة ذك انغشاء انح ػه األعمح انظهثح ان جيغح نهحه ة يشاكم ذه ز خذ ح إر ذ فش تما ا ان رش كح ػه أعمح األد اخ انحا اخ ان غز اخ انؼش س ح ن ذكااش انثكرش ا ذغاػذ انشؽ تح انحشاسج ان اعثح ػه ذك ر دح العرؼ ال ز األد اخ انحا اخ حذز ذه ز نهحه ة انماصج ( Chen,.(Yoo & ؤد ذه ز انحه ة زا إن ذغ ش ف طفاذ ان ػ ح نزا كا ذه ز انذساعح ػضل ذشخ ض انثكرش ا ان ك ح نألغش ح انح ح دساعح آن ح ذك ا.

2 المواد وطرائق العمل. انؼ اخ ذى خ غ 7 ػ ح حه ة تمش خاو ) نرش/ػ ح( ي يشكض خ غ ذثش ذ انحه ة ف يحافظح تاتم ف حا اخ يؼذ ح يؼم ح عؼح نرش خجل يذج انذساعح انثانغح ع ح. مهد ز انؼ اخ ف حافظح يثشدج إن ان خرثش إلخشاء انرداسب انجحمح.. ػضل ذشخ ض انثكرش ا ي انغشاء انح حؼ د انؼ اخ ػ ذ دسخح حشاسج 3 و ن ذج 8 عاػح تؼذ ا عكة انحه ة غغهد انحا ح ت ذ ء تان اء ان ممش ان ؼمى اجز يشاخ إلصانح تما ا انحه ة. دسعد األغش ح انح ح ت عاؽح ان غحاخ تاعرؼ ال ػ ح إر يغح ي لؼ ت غاحح عى ي ػه عمح انحا ح ي ان الغ ان حذدج عهفا أخز نكم ي لغ اجز يغحاخ. مهد كم يغحح ػه حذج إن أ ث ب اخرثاس حا ػه يم ي %. ياء انثثر تؼذ ا ػ هد عهغهح ذخاف ف تان حه ل ان هح انفغ ن خ )%.8( ان ؼمى صسػد انرخاف ف ترم ح طة األؽثاق تاعرخذاو عؾ (Oxoid).Standard plate agar حؼ د األؽثاق تظ سج يمه تح ػ ذ دسخح حشاسج 3 و ن ذج 8 عاػح تؼذ ا ػذخ ان غرؼ شاخ شخظد انثكرش ا.(Flint et al., 997; Macfaddin, ; Jessen& Lammert, ) 3. آن ح ذك انغشاء انح اعرؼ هد عثغ ػ اخ نذساعح آن ح ذك األغش ح انح ح إر خؼؼد نظش ه ذدش ث ح ااترح ذ ثهد ترثث د ا ا ششائح صخاخ ح ف حايم صخاخ ػغ تذ س ف كم حا ح يؼذ ح ) نرش(. ػم د اى أػ ف ن ا انحه ة انخاو حؼ د ػ ذ دسخح حشاسج 3 و ن ذج 8 عاػح. سفؼد انشش حح األ ن ف لد انظفش ي يذج انحؼ ت عاؽح يهمؾ يؼمى غ شخ ف ان اء ان ممش ان ؼمى اى ػؼد ف د سق حا ػه يم ي ان حه ل ان هح انفغ ن خ )%.8( ان ؼمى اى سج خ ذا إلصانح انثكرش ا ان هرظمح ػه ػ م ي عهغهح ذخاف ف صسػد ترم ح طة األؽثاق تاعرخذاو عؾ Standard plate agar حؼ د ػ ذ دسخح حشاسج 3 و ن ذج 8 عاػح. عحثد انششائح انضخاخ ح ان رثم ح ف األ لاخ انضي ح عاػح نؼذ انثكرش ا ان هرظمح ػه ا ت فظ انخم اخ انغاتمح. اعرؼ هد تؼغ انششائح نغشع فحض انغشاء يثاششج ذحد ان د ش انؼ ئ تؼذ طثغ ا تظثغح كشاو al., (Flint et.997) النتائج والمناقشة ػضند ػضنح تكر ش ح ي األغش ح انح ح ان رك ػه انغمح انذاخه نحا اخ انحه ة ذث أ انثكرش ا انغانثح نظثغح كشاو انغائذج ت غثح %8.8 )شكم (. شكهد تكرش ا Escherichia coli أػه ان غة إر تهغد %. ف ح كا د انثكرش ا انراتؼح ألخ اط,Salmonella,Pseudomonas, Klebsiella, Enterobacter Shigella Proteus,Citrobacter, Neisseria ت غة %.3.,.,6.8,6.8,.,.,3.6 ػه انر ان )شكم (. أيا انثكرش ا ان خثح نظثغح كشاو فؼضند ت غثح %8. كا د اال اع انؼائذج ألخ اط آخش ( a&b ) oo e ت غثح %. %6.8 ػه انر ان )شكم 3 (. ركش Bacillus Staphylococcus إ تكرش ا P.aeruginosa E.coli انشائؼح ف ذك انغشاء انح ا انثكرش ا انغانثح نظثغح كشاو انغائذج ف ػه انثكرش ا ان خثح نظثغح كشاو يغ زا خذ إ تؼغ اال اع انؼائذج نهؼ م د اخ ن ا انمذسج ػه ذك. أكذ Flint صيجء )997) ػه إ زا انغشاء

3 K.pneumoniae K.terrigena E.coli E.aerogenes E.gergoviae E.agglomerans P.aeruginosa P.alcaligenes S.choleraesuis C.amalonaticus P.vulgaris S.sonnei N.canis N.flavescens

4 S.aureus S.epidermidis B.cereus

5 يرؼ ذد األ اع انثكر ش ح أش اس )(Zottola إن إيكا ح ذك ي لث م انثكرش ا ان شػ ح أ ؼ ا. كا د انثكرش ا ان رحشكح راخ لذسج ػه ذك انغشاء انح ت غثح %68. أيا غ ش ان رحشك ح فكا د ت غ ثح %3.8 )ش كم (. خ ذ إ يؼذل انؼذد انثكر ش انكه انح ان غرحظم ػه ي ػ ه ح ان غح X6 خه ح/يم/ ع ى خ اء زا يماست ا ن ا خذ )( Lammert Jessen إر تهغ انؼذد انثكر ش انح X3.7 خه ح/يم/ عى. أظ شخ رائح ز انذساعح أ % ي انؼ اخ ذماسب ف ا انؼذد انكه انح نه غحاخ انثجز إر ش ذخ ص ادج ف إػذاد انثكرش ا تشكم يرذسج ي ان غحح األ ن إن انثانثح نكم ي لغ ف كج ان لؼ, ف ح أظ شخ % ي انؼ اخ ذ الض ف أػذاد انثكرش ا. ش ذخ % ي انؼ اخ ص ادج ف أػذاد انثكرش ا ف ي لغ مظا ا ف ي لغ أخش )خذ ل (. ذؼذ انض ادج انحاطهح تشكم يرذسج ف أػذاد انثكرش ا ي ان غحح األ ن إن انثانثح نه لغ ان احذ إن آن ح ذك انغشاء انح ف رنك ان لغ ا اال خفاع انمف ف ؼذ يمث ال إن حذ يا زا يا ركش Lammert Jessen )( لذ ؼ د ذغ ش األػذاد ي ي لغ إن آخش إن ذغ ش غدح انغمح انز لذ ك أيهظ ؼ ك ػ ه ح االنرظاق لذ ك خش غا ى ف ذؼض ض االسذثاؽ إر ح انثكرش ا ي ل انؼغؾ حشكح انغ ائم ذغاػذ كثش يغاحر انغمح ح ػه أػذاد كث شج ي انثكرش ا( (Donlan,. ظ ش شكم ان شاحم األستؼح ن ح ذك انغشاء انح ػه انششائح انضخاخ ح انغاؽغح إر ث A انرظاق أػذاد له هح ي انثكرش ا ف ح ظ ش B ذضا ذ أػذاد انثكرش ا ان هرظمح زا ؼ د إن ذكااش انخج ا ان هرظمح أيا ف C ف ظ ش تذء ذك ان غرؼ شاخ ان د ش ح انر ذك ػه شكم تمغ أ يداي غ أخ شا ث D ذك انغشاء انح ظ ش ف ا ذياج ان غرؼ شاخ ان د ش ح يغ تؼؼ ا نرك غشاء يغر ش. نمذ ركش ف دساعاخ عاتمح أ انغشاء انح رك ي ػذج يشاحم 3). Espinosa-Urgal, oo e et al., a; Donlan, ; إ ان غة ان ؤ ح نهؼضالخ انثكر ش ح ان هرظمح ػه انش شائح انضخاخ ح انغاؽغ ح ي ػ حح ف ش كم إر ػضن د ػضن ح كا د غ ة األ اع انثكر ش ح انؼائ ذج ألخ اط Klebsiella, Staphylococcus, Escherichia Citrobacter Proteus, Salmonella, Streptococcus,Bacillus,Enterobacter, Pseudomonas, %ػه.67.67,,,,.3,.67,.67,6.67,.3 انر ان.

6 خذ ل. ذمذ ش ذك األغش ح انح ح ػه خذاس حا اخ انحه ة تمش مح ان غحح اندذاس ح سلى انؼ ح سلى ان لغ انؼذد انثكر ش انكه انح خه ح /يم/عى ان غحح انثانثح ان غحح انثا ح ان غحح األ ن

7 7

8 ذث إ انثكرش ا انغانثح نظثغح كشاو انغائذج ت غثح %7.3 ف انغشاء انح ان رك ػه انششائح انضخاخ ح ف ح كا د انثكرش ا ان خثح ت غثح %.7 لذ افغد انثكرش ا ان رحشكح )%66.7( انثكرش ا غ ش ان رحشكح )%33.3( ف ػ ه ح ذك انغشاء انح )شكم 6 (. نمذ أشاس oo e صيجء (a) إن إ عائم انحشكح )االع اؽ األ ذاب( ذض ذ ي شاؽ انثكرش ا ذغاسع ي ػ ه ح ذك انغشاء انح. تهغ يؼذل انؼذد انه غاسذ نهثكرش ا ان هرظمح ػه انششائح انضخاخ ح انغاؽغح ف األ لاخ انضي ح األ فح انزكش) ان اد ؽشائك انؼ م انفمشج )3,. 6.6,.6,.3,.,3.9,3.36,3. خه ح/يم ػه انر ان )شكم.)7 إ انض ادج انرذس د ح ف أػذاد انثكرش ا تض ادج لد انحؼا ح ذش ش إن ذكااش انثكرش ا ان هرظمح ي خ ح اصد اد أػذاد انثكرش ا ان ؼافح نغمح االنرظاق ي خ ح أخش انر ذؤد إن إ ؼاج انغشاء. أ انحه ة عؾ غزائ يثان ن ذكااش انثكرش ا إ راج ع ي ا ف ا ذك األغش ح انح ح ع ه ض ذ ي د ير ا فش ن ا انح ا ح نزا ذخهض ز انذساعح إن انغ مشج ػه ػ ه اخ ذذا ل انحه ة حا اذ إصانح األغش ح انح ح ي ا, ذ ط تنخشاء انذساعاخ ان ساا ح ن ؼشفح ان ض ذ ػ األعظ ان ساا ح انر رك ف ا انغشاء انح. شكر وتقذير مذو تاحث ا ز انذساعح انشكش االير ا إن كم ي يذ ذ انؼ ان غاػذج إل داص زا اند ذ ان ر اػغ هللا ن انر ف ك. 8

9 E.coli E.aerogenes S.aureus K.pneumoniae B.cereus P.aeruginosa S.chleraesuis P.vulgaris C.amalonaticus E.gergoviae S.epidermidis

10

11 References Baillie, G.S. and Douglas, L.J Role of dimorphism in the development of Candida albicans biofilms. J. Med. Microbiol. 8(7): Chmielewski, R.A. and Frank, J.F. 3. Biofilm formation and control in food processing facilities. J.CRFSFS. : -3. Costerton, J.W.; Stewart, P.S. and Greenberg, E.P Bacterial biofilm: a common cause of persistent infections. Sci. J. 8(8): Donlan, R.M.. Biofilm: microbial life on surfaces. J. Emer. Infect. Dis. 8(9): Espinosa-Urgel, M. 3.Resident parking only: rhamnolipids maintain fluid channels in biofilms. J. Bacteriol. 8(3): Flint, S.H.; Brooks, J.D. and Bremer, P.J Use of the malthus conductance growth analyser to determine number of thermophilic Streptococci on stainless steel. J. Appl. Microbiol. 83: ICMSF Microorganisms in Foods 6: Microbial Ecology of Food Commodities. st ed. Blackie Academic and Professional. London, UK. pp: -3. Jessen, A.B. and Lammert, O.L.. Biofilm and Disinfection in Meat Processing Plants. nd International Symposium on Disinfection and Hygine. Wageningen, Holland. Macfaddin, J.F.. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3 rd ed. Lippin Cott Williams and Wilkins. Philadelphia, USA. O oo e, G.; Kap an, H.B. and Ko ter, R. a. Biofi ms formation as microbia development. Annu. Rev. Microbiol. : O oo e, G.A; Gibbs, K.A.; Hager, P.W.; Phibbs, P.V. and Kolter, R. b. The global carbon metabolism regulator CrcIs, a component of signal transduction pathway required for biofilm development by Pseudomonas aeruginosa. J. Bacteriol. 8(): -3. Wimpenny, J..An overview of Biofilms as Functional Communities. In: Community Structure and Cooperation in Biofilms. Allison, D.G.; Gilbert, P.; Lappin Scott, H.M. and Wilson, M. (eds). The Society for General Microbiol. London, UK. pp: -9. Yoo, J.A. and Chen, X.D.. An emission pattern of thermophilic bacteria attached to or imbedded in porous supports. Int. J. Food Microbiol. 73(): -. (Abs). Zottola, E.A.. Reflections on Salmonella and other wee beasties in foods. J. Food Tech. (9):