/ ( ) ( ) / :

النسخ

1

2 / ( ) ( ) al.utroha.magazin@gmail.com rju@alutroha.com / :

3 اهليئة االستشارية العلمية ا.د. موسى جاسم حممد احلميش / رئيس جامعة سامراء ا.م.د. علي عبد العزيز الشاوي / رئيس جامعة ميسان ا.د. حممد جعفر جواد / عميد الكلية الرتبوية املفتوحة ا.د. جاسم حممد علي خلف التميمي / عميد كلية الرتبية للبنات/ جامعة دياىل ا.د. سيد علي فضل املوىل /رئيس جامعة غرب كردفان السودانية ا.د.املربوك مفتاح أبو شينة / رئيس جامعة أفريقيا للعلوم اإلنسانية والتطبيقية الليبية ا.د. عبد السالم عصمان بيت املال / رئيس اجلامعة الليبية الكندية للعلوم احلديثة ا.د. أنيسة خزعلي / رئيسة جامعة الزهراء )ع( اإليرانية ا.د. وائل ابو صاحل / عميد البحث العلمي والدراسات العليا / جامعة االستقالل الفلسطينية ا.د. صاحل سعيد دقيبينة / عميد كلية الرتبية العجيالت / جامعة الزاوية الليبية 2

4 ISSN

5 تستعد اجمللة إلصدار طبعات متخصصة حمكمةيف اجملاالت العلمية التالية : العلوم الطبية والصيدالنية العلوم الزراعية والبيطرية العلوم السياسية االعالم والعالقات العامة العلوم االدارية واالقتصادية العلوم السياحية واآلثار والرتاث علوم اللغات وآدابها الدراسات التارخيية العلوم اجلغرافية الدراسات القانونية تكنولوجيا االتصاالت واملعلوماتية العلوم االجتماعية الدراسات الفلسفية العلوم اجلغرافية العلوم البيئية الدراسات الدينية وعلوم القرآن اهداف اجمللة : تسعى اىل خدمة البحث العلمي وتنميته لدى اعضاء اهليئات التدريسية وطالب الدراسات العليا من دون متييز يف اجلنسية او العرق او الدين او الطائفة او القومية. تسعى اىل حفظ احلقوق العلمية والفكرية والثقافية للباحثني من خالل نشرها وتوثيقها. 4

6 Word2007 Arial

7 Western Union (IBRAHIM ZAIDAN KHALAF)

8

9 8

10 Brassica oleracea Myrtaceae iobrotrajapanica 3,1 7,4

11 Lactobacillus acidophilus Cryptosporidium parvam Zeamays L). Finger printing L.Vigna Radiata

12 Effect of water extract of broccoli plant (Brassica oleracea) on some hormones of female white rats exposed to oxidative stress with hydrogen peroxide تأثري املستخلص املائي لنبات الربوكلي ( Brassica )oleracea على بعض اهلرمونات إلناث اجلرذان البيض املعرضة لإلجهاد التأكسدي ببريوكسيد اهليدروجني Sura Samir Abdul Hamid AlMarza Asst.Prof. Dr: Ali Abdul wahab Jasim Prof.Dr: Mousa Jassim Mohammed AlHumaish University of Samarra / Colleg of education Department of Biology سرى سمير عبد الحميد المرزة أ.م.د. علي عبد الوهاب جاسم أ. د. موسى جاسم محمد الحميش جامعة سامراء / كلية التربية/ قسم علوم الحياة Abstract The effect of the water extract of broccoli Brassica oleracea on some adult female rats hormones was studied to reduce the oxidativestress developed by hydrogen peroxide.the rats age from (34 months) and weights from ( g),the experimeat period was from 2016/12 / 18 until 18/18/2017.Twenty five rats was divided in tofive groups 11

13 (Five rats in each group)as jellous: The negative group (C) was given water and food only group was the positive group (C +) was givenfoodandh2o2( 0.5%) in drinking water (group 3 to group 5) were givenfoodandh2o2( 0.5%) in drinking water as well as of the broccoliextract (600,500,400 mg / kg)daily and for 30 days, respectively, results showed that the crude extractcontainedclicosides, flavonoids, phenolic compounds, carbohydrates, and tannins, as well as resins. When the alkaloids were detected when the Mayer and Marx detectors were found, broccoli contained alkaloids, while the extract did not contain the serotonin, sterols and triterphenoid. The incidence of elevated progesterone concentration, prolactin, and follicle stimulating hormone (P 0.05), female white rats subjected to oxidative stress induced by hydrogen peroxide compared to the control group sound,(p 0.05), while the results of the current study and statistical data showed no significant differences (P>0.05) for estrogen comparedto the controlgroup. Keywords: Broccoli, hydrogen peroxide, female hormones 12 الخالصة د رس تأثير المستخلص المائي لنبات البروكلي Brassica oleracea على بعض الهرمونات من خالل التقليل من االجهاد التأكسدي والمستحدث بوساطة بيروكسيد الهيدروجين في إناث الجرذان البيض البالغة التي تراوحت اعمارها 43 أشهر واوزانها) غم(, للمدة من 2016/12/18 لغاية 2017/1/18 إذ قسمت إلى ) 25 جرذ( إلى 5 مجاميع, تضمنت كل مجموعة 5 جرذان وكاالتي: المجموعة االولى وهي مجموعة السيطرة السالبة ) C) أعطيت الماء والغذاء فقط, المجموعة الثانية هي مجموعة السيطرة الموجبة ) + C) اعطيت %H2O20.5 في ماء الشرب االعتيادي والغذاء, )المجموعة الثالثة ولغاية المجموعة الخامسة( اعطيت الغذاء وH2O20.5 % في ماء الشرب االعتيادي فضال عن إعطاءها المستخلص المائي لنبات البروكلي وبالتراكيز )600,500,400 ملغم/كغم( على التوالي, يوميا ولمدة 30 يوم, اظهرت النتائج مايأتي:

14 احتواء المستخلص الخام على الكاليكوسيدات, والفالفونيدات, ومركبات فينولية, والكاربوهيدرات, و التانينات,فضال عن الراتنجات, حين تم الكشف عن القلويدات عند اجراء كشف ماير وماركس تبين أن البروكلي يحتوي على القلويدات, بينما ال يحتوي هذا المستخلص على الصابونيات والستيروالت والترايتيربينويد, وأظهرت نتائج الدراسة الحالية حدوث ارتفاع في تركيز هرمون البروجستيرون, والبروالكتين, و الهرمون المحفز للجريبات وبمعنوية) 0.05 P (إلناث الجرذان البيض المعرضة لإلجهاد التأكسدي المستحث بوساطة بيروكسيد الهيدروجين مقارنة بمجموعة السيطرة السليمة, وحدوث انخفاضا بتركيز الهرمون اللوتيني مقارنة مع مجموعة السيطرة السليمة وبمعنوية( 0.05 P(, بينما أظهرت نتائج الدراسة الحالية ومن خالل البيانات اإلحصائية عدم وجود فروق معنوية (0.05<P) لهرمون االستروجين مقارنة مع مجموعة السيطرة السليمة. Introduction الكلمات المفتاحية: البروكلي, بيروكسيد الهيدروجين, الهرمونات االنثوية. The broccoli is a dark, dark green plant with a white carnation, but it has soft flowers and hardboiled vegetables. It is a winter vegetable belonging to the crusader or cabbage family and is spread throughout the Mediterranean basin. (Boras etal., 2004). Broccoli is one of the top 20 foods in terms of the (INDI) index, which measures vitamins, minerals, calories, and broccoli. The broccoli is a source of vitamin C, vitamin K and minerals, including selenium, Potassium, Magnesium, Manganese Giniz, iron, zinc, thiamine, niacin, riboflavin, carotene, folic acid according to(usda, 2015).Broccoli is a bioactive plant. Studies show that a diet rich in cruciferous vegetables, such as broccoli, cauliflower, cabbage, Brussels sprouts, cauliflower, Can significantly reduce the risk of certain forms of cancer (Kohlmeier& Su, 1997). Studies have shown that broccoli works as an antioxidant and a freeradical crusher and can be used as a dietary supplement to reduce oxidative stress because it contains flavonoids and phenolic compounds in the methanolic extract of the plant (Bhagat et al., 2012).Le etal. (2003) noted that broccoli possessed a DIM 13

15 compound. This compound has antiandrogen properties that can be used as a testosterone for human androgen androgen antagonist when treating prostate cancer. Broccoli has an important role in the body as it regulates Estrogene because it contains DIM and I3C, which have an effect on the concentrations of estrogen metabolites. They reduce the metabolite of 16Dihydroxyestrone (16DHE) and have a detrimental effect on breast cancer. (DIM and I3C) increases the concentration of the body's nonharmful estrogen (DH2) (Rajoriaetal., 2011). And between (Jeffery and Keck 2008) that eating five or more servings of broccoli every week has a protective effect on bladder cancer. Materials and methods The plant used in the research and the method of preparing the broccoli extract:the water extract of the plant samples is prepared by taking 100 g of dried powder mixed with 1000 ml distilled water using the electric mixer and left for 24 hours at room temperature. The mixture is then filtered using layers of medical gauze and then centrifuged at 3000 cycles per minute for 10 minutes after that the extract was filtered using filtration papers to obtain a clear solution. The extract is dried using the incubator at 38 C and then kept in the refrigerator until use (AlBadri, 2013) Experminet Design:First group: (G1) First control group (negative): given water and food only. Second group (G2): Second control group infected (positive): Hydrogen peroxide was given at 0.5% concentration with normal drinking water and prepared daily (G3, G4, and G5). Hydrogen peroxide was given 0.5% with normal drinking water and 0.2 ml of broccoli extract was extracted at a concentration of 400, 500 and 600 mg / kg of body weight) 14

16 respectively orally via tubular feeding and fed daily for 30 days. Estimate the level of sex hormones:determination of the level of sex hormones Following the steps accompanying the preset analysis of the ELISA manufacturer's instructions, Hormonal concentration (LH, FSH) was assessed in the serum following the method attached to their prepared analysis kit and based on ELISA (Lenton et al., 1982), and progesterone and estrogen by (Tietz,1994)and milk hormone (Maddox et al., 1991) Results and discussion Specific data for active compounds in broccoli: An empirical study was conducted to detect the active compounds in the raw extract of the broccoli plant. The results showed a clear variation in the ingredients of the extract as in Table (1).The results of the study showed that the raw extract contains clicosides, flavonoids and phenolic compounds. These substances have many biological functions and act as antioxidants against free radicals. These results are consistent with (VillarrealGarcia &JacoboVelazquez 2016) and contain carbohydrates. (Abdel Magiedetal., 2016). Tannins, which are of great importance, are a source of energy consumed by plants in the process of biometabolism and protect plants from fungi and harmful insects. This study is compatible with Delimontetal., 2017), as well as resins These findings are consistent with (Thongsook& Barrett 2005),While the alkaloids were detected with three reagents when conducting the Drankdrov test, it was found that broccoli did not contain alkaloids. This was not consistent with (Talreja& Moon (2014). When the Mayer and Marx tests revealed that broccoli contained alkaloids, (Talreja Moon, 2014), while this study does not contain soap and sterols. This study is 15

17 consistent with(talreja& Moon 2014) and triterphenoid. This study was consistent with (Martelancetal., 2007).Prolactin hormone: The results of the present study showed a significant increase in the hormone prolactin (P 0.05) for female white rats exposed to oxidative stress induced by hydrogen peroxide compared with the control group sound as in Figure (1). The reason for the rise of milk hormone (prolactin) to low levels of progesterone Which inhibits the production of a hormone inhibitor of milk from the hypothalamus leading to the production of milk hormone from the pituitary gland (Akidi, 2009(.The presence of effective oxygen, which is produced by the oxidative stress caused by hydrogen peroxide as it inhibits the effectiveness of the neurotransmitter dopamine due to a defect in the pituitary gland and lead to the production of milk hormone in large quantities, and in a study conducted on female infertility, Important causes of infertility are due to high levels of prolactin (Ajibola et al., 2012).This inhibits the ovarian cycle and then prevents the secretion of follicle stimulating hormone (FSH) and gonadotropin hormones. The results of the treatment with the water extract of the broccoli produces a rise in the levels of prolactin compared to the control group, and also in comparison to the control group exposed to oxidative stress Induced by hydrogen peroxide in the group that was injected with 600mg / kg of the water extract. These results were consistent with Eniola et al., 2012).The study was conducted on a group of nonpregnant women found that the high milk hormone may lead to infertility and the reason for the rise to lower levels of progesterone and then not the occurrence of ovarian cycle, as the hormone progesterone a major role in regular menstruation and the occurrence of changes during pregnancy (Berkson, 2016), while significantly decreased in the group of 400mg / kg and 500, due to the flavonoids 16

18 contained in the broccoli (Feucht et al., 2016), which activates the neurotransmitter dopamine, which in turn inhibits the production of milk hormone (YE et al., 2010 where both Fitzgerald and Dinan (2008) reported a N The neurotransmitter Dopamine is of great importance as being a major inhibitor of secretion of the milk hormone. LH hormone:the results of the present study showed that there was a decrease in the concentration of LH compared with the control group and (P 0.05) as in Fig. (2). This study was consistent with Eniola et al., 2012, due to the low levels of LH In the levels of the milk hormone or as a result of damage to the functions of the pituitary due to some diseases (Mancini et al., 2008) as well as a shortage of antioxidants that remove the free radicals caused by hydrogen peroxide (Goud et al., 2008).As for the treatment with the water extract of broccoli, we note a rise in comparison with the control group exposed to oxidative stress by hydrogen peroxide. This is due to the fact that broccoli contains substances such as vitamin E, which plays an important role in the process of pituitary changes. These changes lead to increased concentration of lutein ( Hamad, 2013). Follicle stimulating hormone FSH:The results of the present study showed an increase in the concentration of follicle stimulating hormone in female rats exposed to oxidative stress by hydrogen peroxide compared with the control group and (P 0.05) as in Figure 3. This study is consistent with (Mieroetal.,2004) The reason for the increase in follicle stimulating hormone is that the free radicals affect the ovary and produce the hormone. It is responsible for the weak egg and it affects the reproductive system because it acts as signaling molecules for a number of diseases and infections that affect the body (Raietal., 2015). As for the treatment with the water extract of 17

19 broccoli, we note a decrease in the levels of follicle stimulating hormone in the concentration of 500mg / kg in the water extract compared with the control group of female rats exposed to oxidative stress with hydrogen peroxide. This study agreed with( Meissner et a., 2005) Maca, which is one of the types of broccoli for men, and there was a decrease in levels of hormone stimulating follicles and this is because the broccoli contains flavonoids contained in broccoli and works to reduce sex hormones also contain antioxidants and some vitamins such as vitamin E (Kootietal., 2015). In the other concentrations (600,400mg/kg), the statistical results showed no significant differences. This study was consistent with Brooks etal (2008). The study was conducted on women by giving Maca, which is a broccoli. Significant differences. Estrogen hormone: The results of the current study and statistical data showed no significant differences (P>0.05) in estrogen between the group of rats exposed to oxidative stress induced by hydrogen peroxide and the control group sound as in Figure (6). As for treatment with water extract, we note that there was an increase in comparison with the negative and positive control groups of rats exposed to oxidative stress in the group of rats, which was 400mg /kg. This result coincided with (Krishnamoorthyetal.,2013). The broccoli contains vitamin E and C (Porter, 2012) or may be due to the flavonoids contained in broccoli that have been detected in the specific qualitative data that activate genes responsible for estrogen production (Jarryetal., 2003) In the group of rats with a concentration of 600mg / kg, there was no significant difference in statistical results, while estrogen concentration decreased in the group of rats with a concentration of 500mg / kg. This result was consistent with(gavaler,1998) The hormone to the hormonal imbalance of these groups 18

20 due to the hypothalamus affected the oxidative stress caused by hydrogen peroxide and thus adversely affect the production of estrogen. Progesterone:As shown in Figure 5, the results of the study showed that the progesterone concentration of (P<0.05), for females of white rats exposed to oxidative stress induced by hydrogen peroxide compared to the control group was good. This study agreed with (AlAzemi,2012) Progesterone is due to lower levels of estrogen and thus reduces the risk of pregnancy, which reduces fertility as well as the role played by free radicals on the ovary in reducing the number of follicles in the ovary (Shkolnik et al., 2011( The results of the treated groups of broccoli broccoli showed a decrease in progesterone concentration. The group with 600 mg / kg of alcohol extract was the lowest and the results were consistent with the researcher (Saleh, 2015).The study was conducted on the female white rats through the dosage of broccoli juice, which led to the effects of positive reduced the number of objects or zero effectiveness or both and there was a significant decrease in the rate of body weight and ovaries and fatty pillows as well as a significant increase in weight of the uterus, Studies on the use of water and alcohol extract of broccoli in this area, may be attributed to the antioxidants contained in the broccoli plant, which works to fight free radicals and prevent their formation, such as active compounds, such as flavonoids, which is a group of polyphenols and Some vitamins, including vitamin E, which have a sweeping effect of free radicals as well as their ability to inhibit the damage induced by the process of oxidation, including hydrogen peroxide. 19

21 Table (1) Specific data for active compounds in broccoli Result of detection of raw extract of broccoli plant Detection Name General Statements Molch revealed Detection of sodium hydroxide Drankdorff revealed Meyer revealed Marx revealed Foam detection Detection of resins Skalkowski revealed Detection of flavonoids and flavonols Detection of iron chloride Detection of triterphenoid Carbohydrate detection Detection of clicosides Detection of alkaloids Detection of sapphones Detection of resins Detecting sterols Detection of flavonoids Detection of phenols and phenolic compounds Detection of triterphenoid 21

22 progestron ng/ml esrogen ng/ml FSH(mlU/ml) LH{mlU/ml) prolactin ng/ml AB A A B A g5 g4 g3 g2 g1 LH Treatment A B CD C D g5 g4 g3 g2 g1 prolactin progestron Treatment FIG(2) Effect of aqueous extract of Broccli for (30 days) on LH levels in female rats exposed to hydrogen peroxide (0.5%) in drinking water FIG(1) Effect of aqueous extract of Broccli for (30 days) on prolactin levels in female rats exposed to hydrogen Peroxide (0.5%)in drinking water 2 2 A A A A B g5g4g3g2g1 ESTROGEN Treatment 0 A A A B B g5 g4 g3 g2 g1 FSH Treatment 1 0 FIG(4) Effect of aqueous extract of Broccli for (30 days) on estrogen levels in female rats exposed to hydrogenperoxide (0,5%) in drinking water FIG(3) Effect of aqueous extract of Broccli for (30 days) on FSH levels in female rats exposed to hydrogen peroxide (0.05%0 ) in drinking water A A B A AB g5 g4 g3 g2 g1 progestron Treatment FIG(5) Effect of aqueous extract of Broccli for (30 days) on progestron levels in female rats exposed to hydrogen peroxide (0.05%0 ) in drinking water 21

23 Estrogen Progesteron PRL LH FSH standar Mean ± s.d Mean ± s.d Mean ± s.d Mean ± s.d Mean ± s.d aggregates A A D A B G ± 0.23A 28.56±4.14 A B B A G ±1.38 A AB C A A G ±0.24 B A CD A B G ± 0.24 A B A AB A G5 Table (2) The rate of female hormones measured in different treatments _Values represent the mean ± standard deviation. _The vertically different letters mean a significant difference at a significant level (p <0.05). References المصادر البدري, نور عصام عبد االرزاق )2013(. دراسة كيموحيوية لرايزومات الكركم كمضاد لألكسدة في االرانب المعرضة لإلجهاد التأكسدي. رسالة ماجستير, كلية التربية جامعة سامراء. بوراس, متيادي بسام, أبوترابي ابراهيم, البسيط.) 2004 (. انتاج محاصيل الخضار. دمشق.ص 465. جامعة حمد, هدى ساجر ناصر( 2013 ). تأثير المستخلص المائي لنبات الميرامية في عدد من المعايير الفسلجية والكيموحيوية والهرمونية في دم الجرذان البيض السليمة والمعرضة لالجهاد ألتأكسدي. رسالة ماجستير, كلية التربيةجامعة تكريت. صالح, رقية احمد )2015(. تأثير عصارة نبات البروكلي في متالزمة تعدد االكياس المبيضية المستحثة في الجرذ األبيض. رسالة ماجستير, كلية التربية للعلوم الصرفة, ابن الهيثم جامعة بغداد. 22

24 العكيدي, رنا ابراهيم خليل )2009(. دراسة التغيرات الحاصلة في مستوى الهرمونات الجنسية وهرمون البروالكتين وعالقتهما بمكونات الحليب لدى النساء المرضعات. رسالة ماجستير, كلية العلوم جامعة تكريت. Abdel Magied, M.M.; Allan, A.M.; Mohamed, N.E. (2016). Evaluation of the bioactive compounds of fresh as well as processed broccoli and cauliflower as hypoglycemic and hypocholestrolemic agent. IOSRJPBS. 11: Ajibola, M.; Oloruntoba, A.C.; Valeria, O.N.(2012). A study on prolactin hormone and female infertility in national hospital Abuja, Nigeria. IOSR Journal of Dental and Medical Sciences.2(2).:3841. AlAzemi, M.; Kyrou, D.; Kolibianakis, E.M. (2012). Elevated progesterone during ovarian stimulation for IVF. J.rbmo.24: Berkson, D.L. (2016). Hormone deception. 3rd ed.published by Wakened medicine Albuquerue, NM Austin, TX. Bhagat, S.V.; Varma, M.E. &Patil, R.N.(2012). Study of free radical scavenging activity and phytochemicals of the methanol extract of broccoli (Brassica oleracea).rjpbcs.3(4): Brooks, N.A.;Wilcox, G.; Walker, K.Z. (2008). Beneficial effects of lepidiummeyenii (Maca) on physiological symptoms and measures of sexual dysfunction in postmenopausal women are not related to estrogen or androgen content. Menopause 15(6): Delimont, N.M.; Haub M.D.; Lindshield, B.L. (2017). The impact of tannin consumption on Iron Bio availability and status: a narrative review. Current development in nutrition no Eniola, W.O.; Olufemi, A.A.; Adetola, A.A.; Oladipupo, M.A. (2012). Pattern of reproductive hormones (follicle stimulating hormone, luteinizing hormone, estradiol, progesterone and prolactin ) levels in infertile women in sagamu south western Nigeria. Derpharmacia letter 4(2): Feucht, W; Schmid, M.; Treutter, D. (2016). Acclimation changes of flavonoids in Needls of conifers during heat and drought stress. Climate,4,

25 Fitzgerald, P. &Dinan, TG.(2008). Prolactin and dopamine: What is the connection? A review articale. J Psychopharmacol.22: Gavaler, J.S.(1998).Alcoholic beverages as a source of estrogens. J Alcohol health& research world. 22: 3. Goud, A.P.; Goud, P.T.; Diamond, M.P.; Gonik, B.; AduSoud, H.M.(2008). "Reactive oxygen species and oocyte aging : role of superoxide, hydrogen peroxide, and hydrochlorous acid", Free radic. Biol. Med.44. pp: Jarry, H.; Spengler, B.; Porzel, A.; Schmidt, J.; Wuttlue, W.; Christoffel, V.(2003).Evidence for estrogen receptor BSelective activity of Vitexagnuscastus and isolated flavones. Plant Medica, 69K: Jeffery,E.H. & Keck, A.S.(2008).Translating knowledge generated by epidemiological and in vitro studies into dietary cancer prevention. MolNutr Food Res, 52(1):S17. Kohlmeier, L.& Sum L.(1997). Cruciferous vegetable consumption and colorectal cancer risk: Metaanalysis of the epidemiological evidence. The J. of the Federation of Amer. Socie. For Expe.Bio., 11: Kooti, w.;ghasemiboroon, M.; Ghaffourian, M. (2015) The effect of celery leave extract on male hormones in rats. J. Herb. Med pharmacol, 4(2): Krishnamoorthy, P &Sivaranjanik. (2013). Effect of Andrographispaniculata Wall. Ex Nees root extract fractions on estrogen, FSH, LH, Progesterone and ovary of female albino rats, Rattusnovegicus. Indian J. of Nutural products and Resource. Vol. 4(1). Pp Le,H.T.; Schaldach, C.M.; Firreston, G.L. &Bjedanes, L.F.(2003). Plantderived 3,3Diindolymethane is a Strong Androgen Antagonist in Human Prostate Cancer Cells.J.Boil.Chem.U.S.A. 278(23).pp Lenton, E.; Neal, L.; Sulaiman, R. (1982). "Plasma Concentrations of Human Gonadotropin from the time of implantation until the second week of Pregnancy", Fertility and Sterility. 37:

26 Maddox, P.R.; Jones, D.L.; Mansel, R.E.(1991). ActaEndocrinol. 125(6) : Mancini, T.; Casanueva, FF.; Giustina, A. (2008). Hyper prolactinemia and Prolactinomas. EndocrinolMetabClin North America.37(1) : Matelanc, M.; Vovk, I.; Simonovska, B. (2007). Determination of three major triterpenoids in epicuticular wax of cabbage (Brassica oleracea L.) by high performance liquid chromatograpy with UV. And mass spectrometric detection. J. of chromatographya Meissner, H.O.; Kapcyznski, W. (2005). Use gelatinized Maca (Lepidiumperuvianum ) in early postmenopausal women. Int J. Biomed Sci 1: Miro, F.; Parkerb S.W.; Aspinall, L.J. (2004). Relationship between follicle stimulating hormone levels at the beginning of the humane menstrual cycle length of the follicular phase and excreted estrogens the freedom study. The Journal of clinical endocrinology & metabolism. 89(7): Porter, Y. (2012). Antioxidant properties of green broccoli and purple sprouting broccoli under different cooking conditions. J. Bioscience Horizons V Rai, S.; Basheer, M.; Ghosh, H. (2015). Melatonin attenuates free radical load and reverses histologic architect and hormone profile alteration in female rat: an In vivo study of pathogenesis of letrozole induced poly cystic ovary. J. Clin Cell Immunol. Vol. 6. Rajoria, S.; Suriano, R. &Parmar, S.P.(2011). Pilot study:3,3ʾ diindolymethane (DIM) modulates estrogen metabolism in patients with thyroid proliferative diseas.thyroid.21(3): Shkolnik, K.; Tadmor, A.; BenDor, Sh. (2011) Reactive oxygen species are indispensable in ovulation. PNAS. vol 108, no. 4/

27 Talreja, K. & Moon A. (2014). Brassica oleracea : phytochemical profiling in search for anticancer compounds. Int. J. of life science&pharma research. Vol.4. Thongsook, T. & Barrett D.M.(2005). Purification and partial characterization of broccoli (Brassica oleracea Var. Italica ) peroxidases. J. Agric. Food chem. 53, Tietz, N.W.(1994).Text book of clinical chemistry. 2nd ed. Philadelphia: W.B. Saunders. USDA National Nutrient Database for Standard Reference.(2015). raw broccoli. Rport Villarreal Garcia D.&Jacobo Velazquez, D. (2016). Glucosinolates from broccoli: nutraceulical properties and their purification. Current trends in nutraeuticals. Vol. 1, no. 1:5. YE, Q.; Zhang, QY.; Zhang, CJ.;Wang, Y.;Qin, LP.(2010). Casticin, a flavonoid isolated from Vitexrotundifolia, inhibits prolactin release in vivo and vitro. Act Pharmacol Sin.31(12):

28 Anatomy study for leaves Epidermal for two Genera from Myrtaceae family(eucalyptus and Myrtus).in the middle region of Iraq. Myrtaceae Evan Abdul rahman Hamza Prof. Dr.Yaseen Mohammad Ahmed Department of Biology/ College of Science/ University of Tikrit /.. / Abstract The research included anatomical study for two genera from Myrtaceae family (Eucalyptus and Myrtus coomunis).the research covered the anatomical characteristic of the Epidermis.This research also showed differences in stomatal complex espattern,and the characteristic that related to the shapes of the Epidermal cells have also important taxonomic and diagnostic value in two genera under study.

29 Introduction Myrtaceae is an angiosperm family of trees and shrubs that belongs to the order Myrtales containing on most from 5650 species organisation in 130 to 150 genera[1]. The family is divided in to two subfamilies,17 tribes and 142 genera[2]. The family is mainly distributed in the southern hemisphere[3], and is especially diverse in south and central America[4] and Australia[5] and tropical Asia as well as Africa and Europe[6][7]. Eucalyptus is one of the most important genus in the Myrtaceaefamily,which includes about species of trees and shrubs,whichre present the majority of trees that dominate the forests and most species of genus Eucalyptus origin in Australia[8], Eucalyptus is one of the largest species in this family[9]. The Eucalyptus genus is the source valuable wood and cultivated of the most in the world[10],with 18 million hectares in 90 tropical and sub tropical contries,africa,south America, Asia and Australia[11]. Myrtus communis are also known as Myrtle true or simple myrtle,which is an evergreen shrub that has been cultivated in the mediterranean region and the middle east where it sowing overland and cultivated including Iraq, Turkey, Iran and Jordan also grows wild in Syria in the mountains of the country s WesternSham and other countries[12]. 28

30 Material & Method Preparation of epidermis sample Epidermal samples were prepared based on what was stated in the [13]. Models of leaves of each species were selected,the removal of the upper and lower epidermal was performed using forceps of two sharp ends.the extracted epidermal was then transferred to a petri dish containing safranin by concentration 0.05% and dissolved in ethyl alcohol concentration of 50% and the epidermal was then transferred to a Petri dish containing an ethyl alcohol 70% concentration and several times, and the epidermal is then transferred to glass slide and put a drop of glycerin on it and then covered with the cover slide and then it was ready for examination and the shapes and dimensions of the cells were studied,as for the stomata, the slides were prepared to study the stomata in the studied species according to the[14]method,in this way, the transparent nail polish was used so that the entire layer of the epidermal was completely painted and then left to dry the coating layer was then carefully cut from the epidermal surface and placed on a clean glass slide.the anatomical study included the following: Stomatal complexes(length of the stomata device,width of the stomata device,length of aperture stomata,width of aperture stomata),calculation of the stomatal index by equation: Stomatal index=number of stomata/number of stomata +number of ordinary epidermal cells

31 I took 25 readings for each species and then I took the averages for them. Results and Discussion Lamina : Epidermis and stomata Measurements of epidermal cells and stomata are summarized in table 1.There are usually differences in cell form and dimensions between the upper epidermal and lower epidermal surfaces of the leaf as well as between two genera studied. Where epidermal cells showed a clear difference in their dimensions, where it was observed that the highest extent of the dimensions of epidermal cells in the Eucalyptus genus was recorded in the E.torwood species( )um of lower epidermal and (22 38)um of upper epidermal in same species,while the lowest extent of the dimensions epidermal cells was recorded in the E.torquata species ( )um of the lower epidermal and in both species E.torquata and E.salmanophloia ( )um for the upper epidermal as for rest of the species they were intertwined between these two extrnts,when comparing the two genus it was observed that Myrtus communis recorded a higher limit than the minimum in the species of genus species for the lower epidermal and less than the upper limit in the species of Eucalyptus genus, which reached( ) um, as for upper epidermal was recorded Myrtus communis is a minimum of all species of Eucalyptus genus which reached ( )um,as for the midrib cells, it was characterized by rectangular shape with straight walls and both genus. 31

32 Anticlinal walls of epidermal cells exhibit a little difference between species they are normally straight curved sometimes Stomata are the narrow elliptical shape of the elongated or Wide elliptical shape on either sides then often more numerous on the abaxial epidermis in the remaining species. Although ranuncul aceous stomata are present in all species of genus Eucalyptus but Murtus showed another types in addition to the ranuncul aceous type (table 2).Guard cell are kidney shape.[15] supported this truth when they pointed that stomata in Myrtaceae are usually ranuncul aceous except in a few species. Both[16] and [17] found nearly similar types when they observed three types of stomata :anomocytic and anisocytic. As for the dimensions of the stomata, the highest rate of removal of the stomata in the top surface of the epidemal of the leaf in the Eucalyptus genus was recorded in the E.woodwordii species ( )um and the lowest rate of recorded in the species E. torwood( ) um,as for the lowest rate for the removal of the stomata in the lower surface of the epidermal of the leaf in the species E.torwood( )um and the highest rate for the removal of stomata in the species E.torquata( )um,When comparing the two genus, it was found that the species of Eucalyptus genus were higher than the Myrtus communis for the holes in the lower surface where it reached the Myrtus communis( )um,as for the stomata in the upper surface, it was in Myrtus communis 31

33 with a rate similar to the minimum Eucalyptus genus, which reached ( )um.Stomatal complexes can be believed as a significant character in the identification of species. Table 1.Epidermal cells and stomata dimensions in leaves of two genus(eucalyptus andmyrtuscommunis)in micrometer. Rate length*rate width for ordinary cells Stomat al index on Stomata in Upper Surface Stomat al index on Stomata in Lower Surface Species Upper Surface Lower Surfac e Upper Surfac e Width Lingth Lower Surfac e Width Lingth ,3 b 16,4( ) 18 17,3 c 24( ) 28,5 26,3 b 2115 c ) 2619,2( 22,5 b ) 3827,8( 32,4 c E.camaldulens issubsp.camal dulensis 21,2 16 ) 19,5) 22 ) 27,5) 2312 ) 32,525) ) 36,329) E.camaldulens issubsp.obtusa ,3 25, ,17 a c b b a c 21 28,6 24, ,1 17,5( ) 21 19,3 28( ) 33,3 31, ) 2521,1( 23,2 ) ( 37,4 E.woodwordii c b a a b a 32

34 ةحورطلاا ةفرصلا مولعلل ددعلا 1028 / نماثلا 33 E.torwood 2522,7( ) 23,6 f 14,8( 16,6 ) 15,4 e 22 bc 21( 23,5 ) 21,6 c 15( 17,2 ) 15,8 d 21,7 a 39,2 21, E.torquata 31,5( 38,5 ) 33 b 21,319( ) 21,8 c 1511 de 28,6( 31 ) 29,6 a 21( 24,1 ) 21,7 a 12,7 d 22, ,5 E.salmanophlo ia 34,328( ) 31,5 d 18,415( ) 16,6 de 1411 ef 25,3( 33,2 ) 31,6 a 16( 21,1 ) 18,2 bc 13,3 cd ,3 17,5 E.microthica 27,1( 31,5 ) 29,4 e 22,519( ) 21,6 c d 25,3( 28,5 ) 26,4 b 16,6( 19,5 ) 17,7 c 14,7 c 27, ,1 18,5 Myrtuscommu nis 2116( ) 18,2 g 19,315( ) 17,4 d 1316 f 2521( ) 21,6 c 1511( ) 13,2 e 12,5 d 27, ,8 13,5 Note:The numbers out brackets represent average. Species Upper epidermal Lower epidermal Stoma tal compl ex type Shape of the guard cells Number of surround ing epiderma l cells Stoma tal compl ex type Shape of the guard cells Number of surround ing epiderma l cells

35 5 Elongat ed kidney A 4 Elongat ed kidney A E.camaldulensis subsp. camaldulensis A A 5 A Elongat ed kidney A 4 A Elongat ed kidney A E.camaldulensissubsp. obtusa 3 Kidney A 4 Kidney A E.woodwordii A A 4 A Elongat ed kidney A 5 A Short kidney A E.torwood 4 A Elongat ed kidney A 4 A Kidney A E.torquata 5 A Short kidney A 4 A Kidney A E.salmanophlia 3 A Kidney A 4 A Short kidney A E.microthica 3 Kidney A+An 3 Kidney A+An Myrtuscommunis A a Table 2. qualitatively of the guard cells in the leaves of two genus (Eucalyptus and Myrtuscommunis) in micrometer. A=Anomocytic type typean=anisocytic 34

36 ABAB 35

37 Figures 1.Surface view of epidermal cells in leaves of (Eucalyptus and Myrtuscommunis). B.Lower epidermis two genus A.Upper epidermis, 1E.camaldulensis subsp.camaldulensis,2 E.camaldulensissubsp.obtusa, 3E.woodwordii 4 E.tarwood,5E.terquata, 6 E.salmanophlia, 7E.microthica,8 Myrtuscommunis

38 7 8 ABABFigures 2.Surface view of stomata in leaves of two genus (Eucalyptus and Myrtuscommunis). A.Upper epidermis, B.Lower epidermis 1E.camaldulensis subsp.camaldulensis, 2 E.camaldulensissubsp.obtusa, 3E.woodwordii 4 E.tarwood,5E.terquata, 6 E.salmanophlia,7E.microthica,8 Myrtuscommunis References 1Govaerts,R.,Sobral,M.Ashton,P.Barrie,F.,Holst,B.K., Landrum,L.R., Matsumoto, K.Mazine, F.F.,NicLughadha,E.Proenca,C.Soares Silva,L.H.,Wilson,P.G.,Lucas,E.J.(2008).World checklist of Myrtaceae. Kew Publishing,Royal Botanic Gardens,Kew. 2Wilson, P. G.; O Brien, M. M.; Heslewood, M. M. and Quinn, C. J. (2005). Relationships within Myrtaceaesensulato based on a matk phylogeny. PlantSystematics and Evolution, 251, Ladiges, P., Udovicic, F., Nelson, G.( 2003). Australian biogeographical connections and the phylogeny of large genera in the plant family Myrtaceae. Journal of Biogeography 30: McVaugh, R.( 1968). The genera of American Myrtaceae An interim report. Taxon 17:

39 5Landrum, L. (1988). The Myrtle family (Myrtaceae) in Chile. Proceedings of the California Academy of Sciences45: Thornhill, A., Popple, L., Carter, L., Ho, S., Crisp, M. (2012a). Are pollen fossils useful for calibrating relaxed molecular clock datingof phylogenies? A comparative study using Myrtaceae. Molecular Phylogenetics and Evolution 63: Watson,L. and Dallwitz, M.J.(1992). The families of flowering plants. 8Boland,D.J.,Brooker,M.I.H., Chippendale,G.M.,Hall,N.,Hyland,B.P.M., Johnston,R.D.,Kleinig,D.A.,Mcdonald,M.W.;Turner,J.D.(1992). )."Forest Trees of Australia Over 200 of Ausrtalia's Most Important Native Trees Described &illustrated Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization(CSIRO),Australia. 9 داؤود, محمود داؤود,) 9191 (.تصنيف اشجار الغابات,دار الكتب للطباعة والنشر,جامعة الموصل. 10 Rockwood,L.D.,Rudie,W.A.,Ralph,S.A.,Zhu,Y.J.,Winandy,E.J.,(2008). Energy product options for Eucalyptus species grown as short Rotation woody crops. Int.J.Mol.Sci.9(8), Alice,M.(1992).Coats,Garden shrubs and Their Histories,s.v."Myrtuscommunis". 12Townsend,C.C.,andGuest,E.(1980)."Flora of Iraq"Ministry of Agriculture of Iraq,Vol العالق, سناريا عباس جعفر) 6002 (. دراسة مظهرية وتشريحية ألنواع برية مختارة من العائلة الباذنجانية )Solanaceae( في العراق. رسالة ماجستير. جامعة بغداد كلية العلوم. 14North,C.(1979).Plant and genetics in Hortics Un win ornamental,rosacous plants.horticulture.science.17(2): MetCalfe, C.R. and Chalk,L.(1950) Anatomy of Dicotyledons. Vol. 2 Clarendon Press.Oxford.1500pp. 16Kantachot,C.,Chantaranothai,P.,andThammathaworn,(2007).Contributio to the Leaf Anatomy and Taxonomy of Myrtaceae,The Natural History Journal of Chulalongkorn University,Vol.7,No.1,pp Hussin,K.H.,Cutter,D.F.,andMoore,D.M.(1992). "Leaf Anatomical Studies in Eugenia L.(Myrtaceae) Species from Malay Peninsula,"Botanical Journal of the Linnean Society,Vol.110,No.2,pp

40 Environmental and diagnostic study of algae in irrigation AlAlam project دراسة بيئية وتشخيصية للطحالب يف مشروع ري العلم Prof. Dr. Riadh Abas Abdul Jabar Department of Biology/College of Science/U.O.Tikrit Asst. Prof. Tawoos mohammed kamel Kirkuk universitycollege of education for pure sciences Sabine khader saleh Department of Biology/College of Science/U.O. Tikrit أ.د. رياض عباس عبد الجبار قسم علوم الحياة / كلية العلوم / جامعه تكريت أ.م.د. طاووس محمد كامل جامعة كركوك / كلية التربية للعلوم الصرفة سابين خضر صالح قسم علوم الحياة / كلية العلوم / جامعه تكريت Abstract The current study was conducted to identify the algae present in the project of irrigation ALAlam within the province of Salah aldin and diagnosis.and knowledge of the extent and the impact on environmental factors surrounding at four station. The first was Arab region of China within the perimeter of the project area while the last station was Awejelah area. The other stations lie in between the previous two stations. The ecological characteristics ( physical, chemical and biological factors ) where included during the study period started from November 2016 till June The study included measurements of some 39

41 physical factors as air and water temperature, Turbidity and electrical conductivity, as well as some chemical factors as ph, dissolved oxygen, biological oxygen demand, total alkalinity, salinity, and chloride. Plant nutrition as silicate, nitrite and phosphates were also included and the study covered the types of algae in the study area Diatoms formed the majority types of phytoplankton available at the station followed by green algae and bluegreen algae and euglena and Chrysophyta finally comes the peridianalgae. And The results of the algae diagnosis showed 119 species of algae, which were divided into 6 populations divided into 7 species, 12 cultivars and 22 families comprising 54 species. الخالصة Keywords: aquatic environment, algae diagnosis, physical and chemical properties, djlah river تم إجراء الدراسة الحالية لمعرفه الطحالب المتواجدة في مشروع ري العلم ضمن محافظه صالح الدين وتشخيصها ومعرفه مدى تأثرها بالعوامل البيئية المحيطة بها.تم اختيار أربع محطات إلجراء الدراسة كانت أول محطة من منطقه عرب الصين ضمن محيط منطقه المشروع وانتهاء بمنطقه عويجيلة وتقع باقي المحطات بينها. تم دراسة العوامل البيئية اآلتية )الفيزيائية والكيميائية والبيولوجية(خالل مدة الدراسة من شهر تشرين الثاني لعام) 2116 ( انتهاء بشهر حزيران لعام) 2117 ( شملت الدراسة قياس العوامل اآلتية متمثلة بالعوامل الفيزيائية والكيميائية والمغذيات النباتية وهي درجه الحرارة للهواء والماء والكدرة وقابلية التوصيل الكهربائي واالس الهيدروجيني والملوحة والكلوريد والقاعدية والسليكا والنتريت والفوسفات. كما تم إجراء دراسة نوعيه للطحالب في منطقه الدراسة حيث وجد ان الدايتومات هي النوع الشائع للطحالب المشخصة تلتها الطحالب الخضراء ومن ثم الطحالب الخضراء المزرقة وثم الطحالب اليوغلينية وتليها الطحالب الذهبية وأخيرا الطحالب البيرية وبينت النتائج 41

42 إيجاد 119 نوعا من الطحالب في هذه الدراسة لجميع المحطات المنتخبة للدراسة حيث وجد أنها تعود إلى 6 شعب من الطحالب موزعة على 7 أصناف و 12 رتبة و 22 عائلة تضم 54 جنسا. Introduction : The term benthic algae refers to all types of algae that are adherent to or in association with surface layers such as sediments and rocks. [1] A term used to distinguish these benthic organisms that coexist in a diverse aquatic environment refers to organisms that are common or common to the substrates. The majority of the organisms that share the substrates in the aquatic environment (bacteria, invertebrates, fish, and subterranean organisms) (2) were also studied in River Avon(3) in Britain. This study indicated that the Bacillariophyceae is the common species also there was environmental factors that has an important impact in the presence of algae such as intensity and duration of light, temperature, levels of nutrients present, grazing (4).And Naharetal. (5) indicates that the variables present in the aquatic environment, such as sediment quality and salinity in the water column, affect the distribution of diatomate communities, and through a comparison with basal invertebrates found that diatoms are very sensitive to water chemistry, besidetheir short life circle. Kadhimetal.(6)refers that it is possible to use benthic algae as biological indicators for the purpose of assessing the quality of water for use in agriculture and others, and noted the absence of diatoms in some months of the study may be due to the fact that it became obsolete because of wind or water movement. The current study aims to 41

43 diagnose algae present In the project of irrigation AlAlam of the impact of water pollution and change its physical and chemical properties during the 8 months of the study. Materials and methods of work: Samples of sediments and water were collected monthly from four sites in the irrigation AlAlam project starting from November 2016 until June 2017 (Figure 1). The algae samples were collected using a tool with a sharp edge and depth ranging from 0.1 to 0.5 cm from the surface and placed in polyethylene bottles and added to the water a small quantity and closed and ordered the bottle well and placed in a dark place until return to the laboratory. The samples were examined within 48 hours. In the laboratory, the bottles were opened and placed in a welllit place to be ready for examination] 7 [. The nondiatomial algae were identified using a normal microscope. Water samples were used in the study of some properties such as temperature, ph, acid, dissolved oxygen, nitrates, phosphates and silica. ]8[. While diatomaceous algae was taken from the samples and placed in the middle of the glass slide and dried on a plate of temperature reached 70 degrees Celsius, and work was added by adding adiameter of concentrated nitric acid to clarify Diatomate structures and when dried, put a diameter of Canada balsam material on the lid of the glass slide and left for the next day. knew the studied algae species based on the following sources ]9,10,11,12,13,14,15[. 42

44 Study Area: The samples was taken from ALAlam project with in the province of Salah aldin.the project was established in And it s one of the irrigation projects that uses its water for the purpose of irrigating agricultural lands from Samra village in the north to the village of Aujaila in the south ]16[. The study stations were selected for several reasons, including the few studies and the data related to this project. Four main stations were selected Arab alseen,alahdaljadeed,alwaeealthoryand Aujailah area Figure(1). DjlahriverAlAlamproject figure(1):alalam irrigation project map Results and discussion: In this study we found that bacillus algae is the most common among the algae that have been diagnosed. This may be due to its ability to reproduce and grow in different environmental conditions. As for the difference in numbers 43

45 and percentages of algae studied, this is due to the difference in the aquatic environmentin which it is located or infected with different]17[, in addition to having a solid silica husk]18[. This is one of the important species that plays an important role as an initial product in the aquatic ecosystem and is used as an indicator of environmental variables such as salinity, acidity and food richness ]19[.The results of the algae diagnosis showed 119 species of algae, which were divided into 6 populations divided into 7 species, 12 cultivars and 22 families comprising 54 species as showed intable(2). The dominate diatoms species were Cyclotella,Triceratium, Actinocyclus, Bacillaria, Gyrosigma,, Surirella, Diatoma,Syndra, Tabellaria, Nitizchia. And the dominate green algae species were Chlamydomonas, Eudorina, Pandorina, Oedogonium, Closterium,, spirogyra, and the bluegreen algae species were Rhabdonema,Microcystis, Oscillatoria. Spirulina and euglena species Anisonema,Euglena, Trachelomonas, phacus The Chrysophyta species diagnosed inthe stations were Dinobryon, Ophiocytium, and the peridian algae have onespecies:peridinium. Asshowed in table(1)bellow which showed thediagnosed algae in the study area. the percentage of Bacillus algae was 56.29% of the total percentages of the studied algae, followed by the green algae by 25.96% and the Euglena algae by 6.4% followed by the blue green algae by 6.74% and the golden algae by 3.66% and the peridian algae by 0.92 While the species of blue green algae 9.19 and the euglena species accounted for 8.06% of the total,the bacillus algae species were 52.22% of the total number of studied species. The total 44

46 number of cultured species was 54, while the green algae reached 22.06% and accounted for 5.83% of the golden algae species. Finally, the peridian algae which reached 2.61% as showed in table(2). Kingdom: Monera Table(1) Diagnosed algae St.1 St.2 St.3 St.4 Division : Cyanophycophyta Class: Order: Family: Cyanophycophycae Chroococales Chroococaceae Genus: Merismopediatenuissma * * * Genus: Rhabdonemaadriaticum * * * Genus: Microcystisaerugenosa * * * Order: Oscillatoriales Family: Oscillatoriaceae Genus: Oscillatorialimosa * * * Genus: Oscillatoria Formosa * * * Genus: Oscillatoriasubbrevis * * * Genus: Spirulinalaxa * * * Kingdom: Protista Division: Class : Chlorophycophyta Chlorophycophycae 45

47 Order: Family: Volvocales Chlamydomonaceae Genus: Chlamydomonas sp. * * * Family: Volvocaceae Genus: Eudorina sp. * * * Genus: Pandorina sp. * * * Order: Family: Chlorococcales Scenedesmiaceae Genus: Scenedesmusquadricandavarmaximus * * * Genus: Scenedesmusacuminatus * * Genus: Scenedesmus sp. * * Family: Dictosphaeriaceae Genus: Pediastrumgranulatum * * Genus: Pediastrumpertusum * * * * Genus: Pediastrum simplex * * Genus: Pediastrum simplex varduodenarium * * Genus: Pediastrumboryanum * * * Genus: Pediastrumangulostan * * Order: Family: Ulotrichales Ulothricaceae 46

48 Genus: Ulothrixsubtilissima * * * Genus: Ulothrixvaribilis * * * Genus: Ulothrixspp. * * * Family: Microsporaceae Genus: Microspora sp. * * * Order: Family: Oedogoniales Oedogoniaceae Genus: Oedogonium sp. * * * * Order: Family: Zygnematales Desmidiaceae Genus : Closteriumacerosum * * Genus : Closteriumlittorale * * * * Genus : Cosmariumocthodes * * * Genus : Cosmariumformulosum * * * Genus : Cosmariumportianum * Genus : Cosmarium spp. * * * * Family: Zygnemiataceae Genus: Mougota sp. * * * * Genus: spirogyra dubia * * * 47

49 Genus: spirogyra neglecata * * * Genus: spirogyra nitida * * Genus: spirogyra sp. * * * Division: Class: Order: Family: Chrysophycophyta Chrysophycophyceae Chrysomonadales Ochromonadaceae Genus: Dinobryonsertularia * Genus: Dinobryondivergens * * Class: Xanthophycophyceae Order: Heterococcalies Family: Characiopsidaceae Genus: Ophiocytiummaius * * * Division: Euglenophycophyta Class: Order: Family: Euglenophycophyceae Euglenales Euglenaceae Genus: Anisonema sp. * * Genus: Euglena gracilis * * * 48

50 Genus: Euglenasanguinea * * * Genus: Euglena sp. * * * * Genus: Phacus sp. * * Genus: Trachelomonashispida * * Genus: Trachelomonaseuchlora * Genus: Trachelomonasvolvocina * * Genus : Trachelomonas sp. * * * Division: Bacillariophycophyta Class: Bacillariophycophyceae Order: Centrales Family: Thallassiosiraceae Genus: Cyclotellacomensis * * * Genus: Cyclotellamenghinian * * * * Genus: Cyclotellaocellata * * Genus: Cyclotella sp. * * Genus: Coscinodiscusovalis * * * Genus: Coscinodiscus ssp. * * * Genus: Triceratiumamoenum * * 49

51 Genus: Actinocyclusoctonarius * * * Genus: Actinocyclus sp. * * * Genus : Actinoptychus sp. * * * Family: Melosiraceae Genus: Melosira undulate * * * Genus: Melosiravarians * * * Genus: Melosiraspp. * * Family: Cymbellaceae Genus: Amphora marina * * Genus: Amphora bioculata * Genus: Amphora sp. * Genus: Amphicapa sp. * Genus: Aulacoseirasubarctica * * Genus: Aulacoseirainslandica * Genus: Cymbellasturii * * * * * * * * * * * * * 51

52 Genus: Cymbellatumidula * * Genus: Cymbellacistula * * Genus: Cymbellaaffinis * Genus: Cymbellaventricosa * Genus: Cymbella sp. * * Genus: Gomphonemaventricosm * * Genus: Gomphonema sp. * Genus: Bacillariapaxillifer * * * * * * * * Family: Navicullaceae Genus: Caloneis amphisbaena var. subsalina * Genus: Diploniespulla * Genus: Gyrosigma hippocampus * Genus: Gyrosigmaacuminatum * * Genus: Gyrosigma spp. * * * * * * * * Genus: Mastogloia ovum * 51

53 * * Genus: Naviculahallophila * * Genus: Naviculacryptocephala * * * Genus: Navicularhyncocephala * * Genus: Naviculatripunctata * * Genus: Naviculaelginesis * * Genus: Naviculalaceolat * * Genus: Naviculacapitat * * * Genus: Navicula spp. * * Genus: Pinnulariaviridis * * * * Genus: Pinnularia sp. * Genus: Rhoicospheniacurvata * * Family: Surirellaceae Genus: Cymatopleuraelliptica * * Genus: Cymatopleurasolea * Genus: Surirellalineaeis * * * * Genus: Surirellarobusta * * * Genus: Surirella spp. * * 52

54 Family: Fragilariaceae Genus: Diatomavulgare * * * * Genus: Fragilariacrotonesis * * Genus: Fragilariacapucina * * * Genus: Fragilaria sp. * * * * Genus: Fragilariaopsis sp. * * Genus: Meridioncircularevar. constrium * * Genus: Asterionellaformosa * * * Genus: Asterionella sp. * Genus: Syndracapitata * * * Genus: Syndra ulna * * * * Genus: Syndra ulna var. contracta * * * Genus: Syndrabacillaris * * Genus: Syndra spp. * * * Genus: Neosynedra sp. * * * Genus: Tabellariafenestrata * Genus: Tabellariaflocculosa * * Genus: Tabellaria sp. * * * Family: Nitizchiaceae Genus: Nitizchiavermicularia * * * 53

55 Genus: Nitizchiasigmoidea * * * Genus: Nitizchia sp. * * Genus: Rhopalodiagibba * * * * Division: Pyrophycophyta Class: Order: Family: Dinophycophyceae Peridiniales Peridiniaceae Genus: Peridinium spp. * * Sections of algae Clas s The ratio % Or der The ratio % Famil y The ratio % Genu s The ratio % Kin d The ratio% Cyanophycophyt a Chlorophycophy ta Chrysophycophy ta Euglenophycoph yta Bacillariophyco phyta Pyrophycophyta Totall Table (2) Sections of the registered algae and the number of varieties, grades, families, species and species and their percentages during the study 54

56 Reference: 1. BjörkRamberg, S Species composition and biomass of an epipelic algal community in a subarctic lake before and during lake fertilization 7(2): Kara, H. and Sahin, B Epipelic and epilithic algae of Degirmendere river (TrabzonTurkey). Turk. J. Bot., 25: Aykulu,. G The epipelic algal flora of the River Avon. British Phycological Journal, 17(1): LiLi,B. Z. and Lusan, L Biomonitoring and Bioindicators Used for River Ecosystems: Definitions, Approaches and Trends. Proc. Environ. Sci. 2: Nahar,K., Khondker, M., and Sultana,M.2010.Seasonality and Diatoms in Two Wetlands of Bangladesh. Bangladesh J. Bot. 39(1): Kadhim, N.F.; AlAmari, M.J.Y.and Hassan, F.M The spatial and temporal distribution of Epipelic algae and related environmental factors in Neel stream, Babil province, Iraq. Int. J. Aqu. Sci; 4(2): Lianso, R. J. (2002). Methods of calculating. The Cheaspeake Bay benthic Index of Biotic integrity. Old Dominion University, Columbia.. 8. Kasim, M. and Mukai, H. (2006). Contribution of benthic and epiphytic diatoms to Clam and Oyster production in the Akkeshi Ko estuary. J. Oceanogr., 62: Desikachary, T.V Cyanophyta, Indian Council of Agricultural Research. New Delhi, 686 pp. 10. Prescott, G. W Algae of the western Great Lakes Area. William, C. Brown Co., Publ. Dubuque, Iowa, 977 pp. 11. Hustedt, F Bacillariophyta (Diatomeae). Dr.A. Pascher: Die süsswasserflora Mitteleuropas Heft 10:

57 12. Hustedt, F The Pennate Diatoms. A Translation of Hustedt S, Die Kieslalgen. with Supplement by Norman G. Jensen. Printed in Germany By Strauss & Cramer Gmbh, 918pp. 13. Hadi, R.A.; AlSaboonchi, A.A. and Haroon, A.K.Y Diatoms of the Shatt AllArab river, Iraq. Nova HedWigia, 39: NuralIslam, A.K.M Some of new and rare freshwater algae from Iraq. Int. Rev. Ges. Hydrobiologia, 70(5): Hassan, F. M., Hadi1, R. A., Thaer I. Kassim,T. I., and Al Hassany1,J.S Systematic study of epiphytic algal after restoration of AlHawizah marshes, southern of Iraq. IJAS, 3(1): العزاوي, عامل ماهر خباز فرحان )2009(. تغير استعماالت االرض الزراعية في قضاء تكريت,رسالة ماجستير/آدابجغرافية,كلية التربية, جامعة تكريت. 17. Muylaert, K. ; Sanches Perez, M.J.; Teissier, S.S. ; Dauta, A. and Rervier, p.(2009). Eutrophication and effect on dissolved Si concentration in the Garonne river (France ). J. Limnol. 68(2) : Leghari, M.K.; Shah, M. &Leghari, M.Y. (2002). Ecological study of algal flora of Jhelum riverazad Kashmir. Journal of Drainage and water management, 6 (2). 19. Polge, N.; Sukatar, A.; Neyran, E. and Gönülol, A. (2010). Epipelic algal flora in the Kücükcekmece lagoon. Turkish Journal of fisheries and aquatic sciences, 10:

58 The study of saturated and unsaturated fatty acids of 9 secies of olives دراسة االمحاض الدهنية املشبعة وغري املشبعة ل )9( اصناف من الزيتون Hussam Nafea Shakir Mahmood AL_ahbaby Department of Biology Yaseen Mohammad Ahmed College of Science / University of Tikrit Rana Hashim Aloush Department of Field Crops / College of Agriculture University of Tikrit حسام نافع شاكر محمود االحبابي ا.م.د. ياسين محمد احمد قسم علوم الحياة / كلية العلوم / جامعة تكريت ا.م.د. رنا هاشم علوش قسم المحاصيل الحقلية / كلية الزراعة / جامعة تكريت Abstract The current study aims at diagnosing 8 saturated and unsaturated fatty acids of olives extracted out of 9 fruits of olives species related to olive family (Oleaceae) and the species are (Manzanilla, Ascolana, Sorani, Baashiki, NabaliMuhasan, Frantoio, Jlot, Kaissy, Picual). This study showed a difference in the concentration of saturated and unsaturated fatty acids among the studied species. The 57

59 highest concentration of unsaturated fatty acid: Liolenic c18 omega 3 in the species (manzanilla) reached (816.5), regarding the unsaturated fatty acid :liolenic c 18:2 omega 6 in the species (picaul). in terms of the total number of saturated and unsaturated, the species no. (6) (manzanilla) recorded varieties and the species (Baashaki, Jiot, Picaul) recorded (7) varieties where the rest of species showed 8 varieties of fatty acids, where the proportion of saturated fatty acids also differed and the fatty acid (palmetric) reached the highest concentration in the species (frantoio) with (233.9). The lowest concentration was recorded in the species (picaul) and reached (3,9). As for the two saturated acids (stearic and myristic), the highest concentration was showed in the two species (Frantoio and Ascolano). Introduction OleaEuropea olive belongs to the olive family Oleaceae which includes 3035 species and it is a subtropical permanent vegetative plant and it is the only plant that provides edible fruits[1]. Olive fruit is a good nutrition source, and very rich in fats where it reaches to 50 75% and contains proteins, sugars, bacterium, salts, vitamins A, B, C. olive have a beautiful scene so it is used in decorating gardens and parks[2]. It is also known in the Islamic Arab Medicine and used by the Arab Doctors, including IbnSina, in treating diseases. The vital and useful benefits of olives and olive fat are proved recently that they contain unsaturated fatty acids and the small compounds which are the most important Sterols and Tocopherol and triterpenoids and phenolic compounds[3] 58

60 The name of olive oil comes as a result of its containment of the Oleic acid c18:1 with high rate and it is a monounsaturated fatty acid[4] and its general formula (C18 H36 O2 ) and it is a kind of Omega9 fatty acids. This important fatty acid in composing oil olive [4] and [5] and provides it with the status of save and storage for a long time in compare with the other oils reserving its features, and it is desirable acid which increases the nutritive value of olive oil and raises its importance in the treatment nutrition [6] and it reduces the concentration of saturated oils in the body and reduces the level of fats (Peroxidase) and its results like Malondialdehyde [ 7]. In addition to Oleic acid, olive oil contains acids ( Liolenic acid c18:2 and Liolenic c18:3 ) which are poly unsaturated fatty acids. It also contains saturated fatty acids which arepalmitic acid(c16:0), Myristic acid(c14:0), Stearic acid (C18:0), Lauric acid (C12:0), Arachidic acid (C20:0)[8]. Research materials and methods Preparing samples: (9) species of olives were used which are(manzanilla, Ascolana, Sorani, Baashiki, NabaliMuhasan, Frantoio, Jlot, Kaissy, Picual (planted in some areas of Salahaldin and some northern areas of Iraq. Fruits were accumulated in the complete ripeness stage from different positions of the tree and 5 trees were selected from each specie. Extracting olive oil by cold Method 59

61 1 isolating the fruits before grinding them from the leaves, small branches and all the impurities existed, then washed by water to get rid of dust and chemicals precipitations. 2At the beginning, grinding the bulb and then move the grinded olive bulb for an hour to reduce the overlap of oil from the water. 3(100) ml. of warm water were added to each (1) kilo from the olive with 40 degrees Celsius and continuing moving for an hour. 4 the process of straining is carried out by using a piece of cloth to separate the solution that contains mixed oil and the vegetable water from the solid materials. 5stable for four hours to separate the oily layer from the water. 6Centrifuge processis carried out for the oily layer to separate oil from other compounds. 7 pulling the oily layer using a microabsorbent and the storing it in plastic containers coated with Celifon with modulation. Isolating the mixture of fatty acids using a HPLC pillar ( cromotokrafia, a highperformance liquid) the size of minutes is 3micrometer, internal diameter (4.6O 50 ml.), the pillar is C18DB, the moved phase is Asetonitral: Hidrophuran :1.0%, phosphoric acid in the(50.4:21.6:28v/v)uv detector at a wavelength of 250 nm. 61

62 The flow velocity is 1.5 ml. /min. Tempretaure 40 C. The separation occurs in (Chromatographic) liquid using a Ahimdazu 10AVLC associated with Shimdazu LC10A pump, parcels were identified using Shimdazu SPD 10 A vp detector, the concentration of saturated and unsaturated fatty acids were measured in each specie depending on the comparison with the standard curve using the following equation: Calculation Concentration of sample mg/ml = dilution Factor [10]. Results and Discussion area of sample area of standard conc. of standard The study showed a difference in the concentration of saturated and unsaturated fatty acids among the studied species. The highest concentration of unsaturated fatty acid: Liolenic c18 omega 3 in the species (manzanilla) reached (816.5), regarding the unsaturated fatty acid :liolenic c 18:2 omega 6 in the species (picaul). the fatty acid Oleic C 18:1 Omega 9 wasn t showed in the in Manzanilla specie and also the existence of saturated Archiidie wasn t recorded in for species which are (Basashiki, Jiot, Picaul, Manzanilla), while the (Sorani) specie exceeded in giving the highest rate which reached (1512.1), The increase of unsaturated fatty acids rate 61

63 indicates the importance of the therapeutic and nutritional oil, where having these oils reduces the concentration of saturated oils in the body [11]. In terms of the total number of the saturated and unsaturated fatty oils, the Manzanilla (6) recorded varieties and the species (Bashaki, Jiot and Picaul) recorded (7) varieties. While the other species, (8) varieties of the fatty acids were showed, the rate of saturated fatty oils differed and the fatty acid Palmetic reached its highest concentration I (Frontoio) specie by (233.9). the lowest concentration was recorded in the (Picual) specie which reached (3.9), while the two saturated acids, Stearic and Mystric acids, the highest concentration has been showed in the (Ascolano and Frantoio ) species. It should be noted that Frantoio specie recorded the highest concentration for the acids, palmetric and mystric with (233.9 and 215.2) respectively. The difference in the number of fatty acids generally and the difference of the concentration of unsaturated and saturated fatty acids has a great systematic indication through which we can infer the species in addition to identifying the features of good oil for each one. The rate of some species were approximatefor what is mentioned in [12] and [13]. 62

64 Table (1): Determination of the percentage and concentration of saturated and unsaturated fatty acids in the studied olive varieties. NabaliMuhasan Baashiki Sorani Ascolana Manzanilla Perce ntage Conce ntratio n of acid Perce ntage Conce ntratio n of acid Perce ntage Conce ntratio n of acid Perce ntage Conce ntratio n of acid Per cent age Conc entrat ion of acid Acids N Lignoce ric acid C: Palmeti c C16: Stearic acid C18: Myristic acid C14: a liolenic C18:3 omega Linoleic acid C18:2 omega Nan Nan Oleic C18:1 omega Nan Nan Nan Nan Arachid ic acid C20:3 8 63

65 Table (2): Determination of the percentage and concentration of saturated and unsaturated fatty acids in the studied olive varieties. Picual Kaissy Jlot Frantoio Percen tage Conce ntratio n of acid Perc enta ge Conce ntratio n of acid Percen tage Conce ntratio n of acid Percen tage Conce ntratio n of acid Acids N Lignoceric acid C: Palmetic C16: Stearic acid C18: Myristic acid C14: aliolenic C18:3 omega Linoleic acid C18:2 omega Oleic C18:1 omega 9 7 Nan Nan Nans Nan Arachidic acid C20:3 8 64

66 The References 9 أبراهيم,عاطف محمد و حجاج, محمد نظيف )2007(, وانتاجها, منشأة المعارف, االسكندرية, 337 ص. شجرة الزيتون, زراعتها ورعايتها 6 جمال, محمد حسني و السوسو, مواهب )2009(,الفاكهة مستديمة الخضرة, الجزء النظري والعملي, كلية الهندسة الزراعية, جامعة دمشق. 3 SuntarI,P; Akkol, E.K, and Baykal T, (2010),Assessment of antiinflamatory and antinociceptive activities of Oleaeuropeae L, J,Med,Food, 13(2): Ocakglu, D;Tokatli, F;Ozen,and B.andKorel, F, (2009),Distribution of simple phenols,phenolic acids and flavonoids in Turkish mono varietal extra virgin olive oil for two harvest years.foodchem, 113: Eromocele, C,(2002), Fatty acid composition of seed oil of haematatap his barteri and ximeniaamericana,tech, 82(3): Mailer, R,(2006),Testing olive oil quality, Chemical and sensory meth ods, NSW Department of primary industries, Assy, N; Nassar, F; Nasser, G, and Grosovski, M, (2009),Olive oil consumption and nonalcoholic fatty liver disease, World,Gastroenterol, 15(15): Priora, R;Summa,D;Frosali, S;Margaritis, A,andDiGiuseppe, D, (2008), Administration of minor polar compoundenriched ex tra virgin olive oil decreases platelet aggregation and the plas ma concentration of reduced homocysteine in rats,j,nutr, 138: الجبوري, نور أبراهيم عجيل )2013), دراسة كيميائية وتغذوية للزيت المستخلص بطرق متعددة من صنفي الزيتون بعشيقي ومنزنيلو المحليان, رسالة ماجستير, كلية الزراعة, جامعة تكريت. 10 Chouinard, Y; Corneau, L,and Barbano, D,M, (1999), Conjugated linoleic acids alter milk fatty acids composition and 65

67 inhibit milk fat secretion in dairy cows, The Journal of Nutrition, v, 129, n, 8,P, Assy, N; Nassar, F; Nasser, G and Grosovski, M, (2009),Olive oil consumption and nonalcoholic fatty liver disease, World,J,Gastroenterol, 15(15): Ohbogge, J,B, and Jaworski, J,G, (1997), Regulation of fatty acid synthesis, Annual Review of Plant Biology 48, درويش, منعم عبد )2015(, شجرة الزيتون تقنيات زراعتها وتصنيع ثمارها, مشروع جمهورية العراق, تطوير ونشر زراعة الزيتون في العراق, دائرة البستنة وزارة الزراعة ص

68 أول تسجيل ملرض ذبول األفرع اهلندرسونيولي على أشجار االنكيدنيا EriobrotraJapanica يف العراق ومكافحتها احيائيا FIRST RECORD OF HENDERSONULA BRANCH WILT DISEASE IN ERIOBROTRA JAPANICA AND ITS IN IRAQ BIOLOGICAL CONTROL فاضل حسن ياسين الخالصة: 67 كلية العلوم التطبيقيةجامعة سامراء Fadhil Hasan Yaseen College of applied science University of samarra بينت نتائج العزل والتشخيص من عينات نبات انكيدنيا والمأخوذة من ثالث مناطق في محافظة صالح الدين هي)سامراء البدعية وبلد الضلوعية وتكريت دجلة ) وتبين إن المرض تسبب عن الفطر HendersonulatorulideaNattrass الذي عزل من جميع العينات بنسبة %100, وبذلك يعد التسجيل األول للمرض على نبات االنكيدنيا في العراق. لم تتباين عزالت الفطر في معدل النمو اليومي وأبعادها التي كونتها على الوسط. PDA بينت اختبارات القدرة اإلمراضية إن عزالت الفطر من المناطق الثالثة أدت الى زيادة معنوية في شدة المرض تراوحت في معامالت العزالت %80 %75 %90 على التعاقب, في حين كانت في معاملة المقارنة %0. كما أظهر عامال المكافحة اإلحيائية Tricodermaharzianum و Bacillus subtilis كفاءة عالية في حماية النبات من اإلصابة, إذ خفضتا شدة المرض الى

69 %25 و %40 على التتابع مقارنة بمعاملة الفطر الممرض بمفرده والتي كانت شدة المرض %95. كما أحدثتا زيادة في الوزن الجاف للمجموع الخضري لمعاملتي العوامل االحيائيةharzianum Tricoderma. وsubtilis Bacillus وبوجود الفطر الممرض 5.6 و 3.03 غم / نبات بالتتابع في حين كان وزن المجموع الخضري الجاف في معاملة المقارنة الملوثة بعزلة الفطر الممرض بمفردها 1.40 غم / نبات. Abstract: The result of isolation and indentification of samples of Eriobrotra japonica. plants revealed wilt and death symptom taken from three Zones of salah AL DeenTikrit (Deglia), samarra (Badia). and Balaid (Doloiaey) showed that the disease caused by the fungus HendersonulatorulideaNattrass which isolated in 100% from all samples. This is regarded as the first record of the disease in loq out plants in Iraq. The isolates of the fungus not showed variation in daily growth rat in the dimentions in PDA. The pathogenicily tests showed that the there isolates SB, BD and TD caused significant increase in disease severaty. The percentage of disease severaty in the treatrmant of fungus isolates 80%, 75% and 90% frequently. While it was 0% in contrel treatment after 45 deys of artificiat in green house. The tow biological contralagewtstricodermaharzianum and Bacillus subtilis showed efticieney in protection of loqout plants from the disease severity to 25% and 40% respectively compared with the 10% in the treatment of pathogenic fungus only. They also caused inerease in shoot dry weight. The shoot dry weight in treatment of the two bio contrnlagant (Tricoderma. harzianumand Bacillus. subtilis) in the presence of pathogenic fungus reached 5.6 and 3.03 g / plant. The shot dry weights in the control treat ment in 68

70 oculoted with pathogenic fungusonly were 1.4. g / plant respectively. المقدمة يعد نبات األكيدنيا من األشجار المستديمة الخضرة Eriobotryajapanical Nattrass ينتمي الى العائلة الوردية. Rosaceae ويختلف عن باقي نباتات هذه العائلة كونها مستديمة الخضرة وال تمر بطور سكون وتزهر في الشتاء وتنضج في الربيع, وتعتبر هذه الفاكهة مهمة اقتصاديا وغذائيا وطبيا, من الناحية االقتصادية فهي فاكهة عالية المردود ويكمن ذلك لوقت نضجها والذي يكون فيه ثمار الفاكهة الشتوية قد انتهت وقبل بدأ الثمار الصيفية بالنضج, باالضافة الى ذلك فإن انتاجها عالي كغم / شجرة بعمر 11 سنوات وقد يصل معدل انتاج الشجرة الواحدة 511 كغم بعمر عشرون عاما إذا كانت تربية النبات علمية )طريقة تربية الملك المحور( بحيث تصبح شجرة كأسية الشكل, ومتوسط سعر الكغم الواحد حوالي 115 دوالر, وذلك لقلة الثمار المنافسة لها, أما قيمتها الغذائية فتشبه الى حد ما قيمة التفاح الغذائية ووجد أن كل 111 غم تحتوي على 72 غم ماء و 111 غم بروتين 115 غم دهون و 117 رماد و 2115 غم كربوهدرات ( سكر مختزل %1218 وسكروز ) % غم ألياف وتحتوي على نسب من حامض الماليك والسيتريكواالوكزاليك وفيتامين 1][C.أما أهميتها الطبية فهي فاكهة منظمة لضعف الدم وخفض الكولسترول وزيادة مفعول الجهاز المناعي في الجسم. زراعته في العراق كانت محدودة على مستوى الحدائق ولكن بعد انهيار أشجار الفواكه المهمة مثل الحمضيات واللوزيات وموت البساتين وقلعها على مستوى محافظة صالح الدين مثال بدأ المزارعون يتجهون الى زراعة أشجار فاكهة اقتصادية وذات قيمة تسويقية مثل الرمان الفنزولي والعنب بأصنافه وطرق تربيته والتفاح المهجن وفاكهة األنكيدنيا, حيث توسعت زراعتها وعملت لها مشاتل متخصصة وتمت تربية أصول للتطعيم وأصبحت المسألة اقتصادية ألن المردود االقتصادي لكل شجرة انكيدنيا بعمر 11 سنوات يساوي مردود 5 8 شتالت برتقال, ناهيك عن تحملها للبرد عكس الحمضيات. وتصاب أشجار هذه الفاكهة بعدة آفات منها حشرية وعناكسية وفطرية وبكتيرية, ومن مالحظاتي الشخصية والزيارات الميدانية لبعض البساتين شاهدت أعراض موت األفرع وتيبس األوراق وحتى موت األشجار بالكامل, وتبين إن المسبب لهذه األعراض وعن طريق عالمات المرض والفحص المجهري تبين أنه الفطر. Hendersonul atoruloidea Nattrss 69

71 71 فمرض ذبول األفرع الهندرسنيولي لم يلق اهتماما كبيرا على المستوى العالمي عند مراجعة المصادر ومن الجدير بالذكر أن األضرار بشجرة أو عدد محدود من األشجار يكون ذو اعتبار معنوي خالفا لما هو عليه في المحاصيل الحقلية. كذلك وجد أن زيادة الممرض في مجتمعات األشجار قد يسبب زيادة في حدوث المرض بدرجة وبائية [2], والظروف المناخية ألشجار البساتين والغابات دائمة الخضرة قد تؤثر على التغيرات البيئية وبمساحات واسعة ولفترات طويلة [3]. سجل المرض ألول مرة عالميا في مصر 1933 على األشجار النفظية,Nattrass(. )1933 أما في العراق, فجرت عدة دراسات تناولت تسجيل المرض على عوائل مختلفة كالعنب [4], والتفاح [5], [6], نبات الجنار في نينوى. وللمرة األولى تم الكشف عن قابلية الفطر على انتاج مركبات سامة في األوساط الزراعية [7]. وقد تم عزل السموم وتشخيصها وآلية تأثيرها[ 8 ]. وهما نوعان من السموم األول يؤثر على الكلوروفيل بمسك أيون المغنيسيوم, والثاني يعمل على غلق األوعية الناقلة. هذا ولعدم وجود أبحاث حول هذا الفطر ومقاومته فقد هدفت الدراسة الى أمثل الطرق لمقامته باستخدام بعض عوامل المكافحة االحيائية حفاظا على البيئة األهم هو تجنيب متبقيات المبيد على الثمار ألنها سريعة النضج وفي توقيت قد يكون فيه تحلل مبيدات الرش بطيء التالشي ألنها تزهر بالشتاء وتنضج في فصل الربيع. المواد وطرائق العمل مسح المرض : تم المسح في عدد من البساتين في صالح الدين ( سامراء البدعية, بلد الضلوعية, تكريت دجلة ) شملت البساتين المزروع فيها أشجار االكيدنيا وتمت مالحظة األعراض المرضية [9] جمعت العينات في األشجار المصابة أما األشجار اليابسة تماما أو شدة االصابة فيها مرتفعة فقد أخذت منها نماذج ووضعت في أكياس نايلون وثبتت عليها بيانات تاريخ الجمع والنسبة المئوية لإلصابة ونقلت الى المختبر, وأعطيت رموز هي. TD, BD, SB العزل والتشخيص : جمعت ثالث عينات من نبات االكيدنيا للفحص المباشر, فقطعت األجزاء النباتية الى قطع صغيرة بطول سم وغسلت بالماء الجاري لمدة نصف ساعة وعقمت سطحيا بغمرها لمدة دقيقتين في محلول هايبوكلورات الصوديوم )%1( ثم

72 غسلت بالماء المقطر المعقم جففت بورق نشاف. وزرعت 3 قطع في كل طبق يتري من الوسط الزعياكرديكستروزالبطاطات )PDA( بقطر 9 سم حاوي كل 21 سم 3 Potato Dextrde Agar والمدعم بمعدل 50 ملغم/لتر بمادة المضاد الحيوي سلفات ستريتولمايسين وبواقع 25 طبق/عينة. حضنت االطباق على ) o لمدة خمس أيام بعدها نفيت العزالت وأجرى التشخيص باستخدام ( م المفتاح التصنيفي المعد من قبل Sutton[10].Dyko, اختبار القدرة االمراضية للفطر تم االختبار تبعا لطريقة Lewis[11] Vanarsdd, وذلك باختيار أفرع من أشجار االكيدنيا غير المصاب بطول 15 سم وقطر 3 5 سم وتم تجريحها بطول 1 سم وبعمق 2 ملم ولوثت بلقاح من مستعمرة الفطر بعمر 5 أيام وبواقع 3 أفرع 3 مكرر, وغطيت مواقع التلقيح وربطت برباط طبي, وأخذت النتائج بحساب متوسط الزيادة في طول التقرح الحاصل في الغصن وتيبس األوراق بعد 72 ساعة من التلويث. صممت التجربة وفق تصميم تام التعشية وجرت مراقبة تطور المرض لمدة 31 يوم من التلقيح. مدة تقويم كفاءة بعض العوامل االحيائية في خفض اصابة اشجار االكيدنيا Eriobotrya japonica المصابة بالفطر Hendersonulatoruloidea تحت ظروف البيت البالستيكي : وأخذت النتائج بحساب متوسط الزيادة في طول التفرع. أجريت التجربة في أحد البيوت البالستيكية المكيف في مشتل في مدينة سامراء بأخذ شتالت بعمر سنتين مزروعة في سنادين فخارية بقطر 25 سم وسعة 4 كغم تربة مزروعة في تربة معقمة باألوتوكليف وشملت التجربة على المعامالت اآلتية وبأربعة مكررات لكل منها وكما يلي : عزلة Hendersonulatoruloideaمنفردة. عزلة +Hendersonulatoruloidea الفطر االحيائي Trichodermaharzianum ( تم الحصول على عزلة الفطر االحيائي من مختبرات وزارة العلوم والتكنولوجيا(. وتم اختبار القدرة التضادية ضد الفطر المرض باستخدام طريقة الزرع المزدوج وقد أعطانا أعلى تضاد [12].

73 3. عزلة الففطرHendersonulatoruloidea + بكتريا.Bacillus subtilis ( كذلك تم الحصول على عزلة البكتريا من مختبرات وزارة العلوم ومشخصة كما بينه Buchran و [13]. Gibbons والتكنولوجيا ) وحدد أعلى تخفيف مثبط للفطر وفقا لما ذكره Montealegre[14]. 4. معاملة المقارنة غير معاملة بأي كائن حي. أضيفت اللقاحات الفطرية كاآلتي : أضيف لقاح الفطر toruloideah. بعمل معلق من ثالث أطباق مملوئة بالغزل الفطري وتم خلطها جيدا بعد إضافة ماء مقطر معقم ليصبح الحجم 2 لتر وخلطت بجهاز خلط ولقحت فيه النباتات وسقيت وحسب طريقة Wilson[15] وغلفت الشجيرات بعد المعاملة بأكياس من الروكلين وبعد أسبوع من إضافة الفطر الممرض تمت اضافة الفطر.T harzianum على شكل معلق بوغ / مل عومل به المجموع الخضري وسقي فيه النباتات [16] وأضيف لقاح.B subtilis بمعدل 7.5 )وحدة مل من عالق البكتريا أخذ من مزرعة عمرها 3 يوم [17] بتركيز تكوين المستعمرة/مل(. استخدم التصميم تام التحشية بواقع ثالثة ومعاملة المقارنة. مكررات لكل عامل أحيائي والعامل الممرض النتائج والمناقشة النسبة المئوية لمرض ذبول األفرع على األشجار : بينت نتائج تسجيل أول للمرض في جميع المناطق المشمولة بالمسح ( جدول ) 1 وسجلت النسبة المئوية لإلصابة استنادا لألعراض المميزة للمرض إن أشجار االنكيدنيا المزروعة لوحدها تختلف عن المزروعة مختلطة مع أشجار عمالقة مثل النخيل والبرتقال والتفاحيات والتين. إذ بلغت نسبة اإلصابة %65 على األشجار المزروعة لوحدها في حين انخفضت الى %25 في أشجار الزراعة المختلطة. وقد يعود هذا االنخفاض الى الخدمة والتسميد والري وكذلك يجنبها التعرض المباشر 72

74 ألشعة الشمس وعوامل االجهاد البيئية لذلك نشاهد قلة التشققات في األفرع فيزيد من مقاومتها لإلصابة بالفطر. العزل والتشخيص بينت نتائج العزل من أفرع وأغصان العائل )انكيدنيا( بالطريقة المباشرة من تحت البشرة وجود مؤشرات استنادا لنمو وشكلtorulodea. Hحيث ظهرت تحت المجهر بشكل سالسل متفرعة من أبواغ مفصلية بلون بني. أما المستعمرات فتظهر بلون رمادي أبيض ثم يغمق إلى األخضر الداكن وبمرور الوقت يتحول اللون الى األسود نتيجة تحولها الى األبواغ ويظهر النمو بشكل منفرد وهذا يشبه ومطابق لمواصفات الفطر troulodea..h المثبتة من قبل [19] [18]. وأظهر الفطر المعزول قدرة إمراضية ألفرع وأوراق أشجار االنكيدنيا المصابة بذبول األفرع السخامي عند تنميتها على وسق PDA بشكلها الصوفي والقطني الخفيف ولونها الشفاف والتي سرعان ما يتحول الى اللون الزيتوني ثم األسود الداكن. بلغ قطر المستعمرة 9 سم بعد 5 أيام من التحضين على درجة حرارة 1+29 م وبالفحص المجهري وضح أن أبواغ الفطر الكونيدية تتكون من تجرؤ العزل الفطري الى خاليا متعددة الحواجز. Arthrospore وبعد العدوى الصناعية ألفرع النبات السليم ب 60 يوم أظهر الفطر المعزول قدرة إمراضية لألفرع الملقحة بالفطر وظهرت أعراض بهيئة ذبول أفرع وتقرح يصحبه لون داكن للنسيج المصاب مع جفاف القلف وسهولة انسالخه وهذه األعراض تطابق أعراض االصابة بالفطر..H troulodea وهذا يؤكد ما جاء به الساعدي [20]. وأظهرت نتائج العزل من عينات المناطق الثالثة بلد )B( وسامراء )S( وتكريت )T( وجود فطر واحد به ظهر في جميع القطع بنسبة %100 وقد نمت جميعها على الوسط الزرعي بصورة متساوية في السرعة تقريبا ونوع وتكون الخيط الفطري وكذلك وتكون االبواغ الكونيديةconidia وكذلك التجزؤ الى خاليا متعددة الحواجز. arthrospore اختبارات القدرة اإلمراضية وتأثير عزالت الفطر االنكيدنيا بعد )45( يوم من العدوى. H.troulodeaفي شتالت 73

75 أظهرت الدراسة )جدول 2( عدم وجود فروقات معنوية مهمة على مستوى خطأ 0.05 في القدرة المرضية للعزالت المختبرة وكانت شدة االصابة للعزالت الثالثة هي, SB %81 و, B.D %75 وTD, %90 على التعاقب في حين كانت شدة اإلصابة في معاملة المقارنة %0.0. واستنادا لطول وتلون القرح ونسيج الخشب نستطيع القول إلى عدم وجود تخصص لإلصابة بالفطر وهذا يعود المتالك الفطر مدى عائلي واسع وقد جاءت بيانات هذه الدراسة متفقة مع ما أشار إليه كل من.[21][22] تقويم كفاءة عاملي المكافحة االحيائية B.suوT.h بالفطر.H.t في خفض إصابة نبات انكيدنيا بينت نتائج هذه الدراسة جدول )3( أن معاملتي المقاومة البايولوجية قد وفرت حماية جيدة لشتالت انكيدنيا من الفطر. H.t وأحدثا خفضا معنويا )0.05=p( في شدة االصابة بمسبب مرض األفرع الهندرسينيولي قياسا بمعاملة المقارنة تحت ظروف البيت البالستيكي قياسا بمعاملة المقارنة الملوثة بعزلة الفطر الممرض )العزلة )DT بمفردها. أدى استخدام الفطر T.h وبوجود الفطر الممرض H.tإلى خفض شدة االصابة الى %25 في حين كانت شدة االصابة بمعاملة الفطر الممرض %90 إن هذه النتيجة جاءت مطابقة وأثبتت فعالية الفطر ضد فطريات كثيرة كما جاء به [23]. [24] [25] 26] حيث أن الفطر T.Hيكون مستعمرات حول الجذور والتي يعمل على زيادة حجم المجموع الجذري وزيادة صالبتها ومن آليات عمل الفطر هو التطفل والتضاد الحيوي [27], كذلك أحدثت البكتريا.B subtilis خفضا معنويا في شدة االصابة وبوجود الفطر الممرض الى %10 وهذه النتيجة تتفق مع ما وجده [28] و [29] من فعالية هذه على الفطريات الممرضة وعلى محاصيل مختلفة. إن فعالية هذه البكتريا ربما جاءت عن قدرتها على منافسة الفطر الممرض على الغذاء واالفرازات الجذرية وبذلك تكون البيئة غير مالئمة للمرض من خالل افراز المضادات الحياتية مثل Bacilin و Bacilomycin التي تعمل على تحلل سايتوبالزم الخيوط الفطرية وتحدد نحوها. كما بينت نتائج )جدول 3( إن معاملتي المكافحة االحيائية قد أدتا الى زيادة الوزن الجاف للمجموع الخضري في المعاملتين االحيائية مع الفطر الممرض %5161 غم 74

76 / نبات في حين كافة الوزن الجاف للمجموع الخضري في معاملة المقارنة الملوثة يعزله الفطر الممرض يمددهها 1.4 غم / نبات. هذه النتائج تؤكد ما جاء به [7] و[ 1 ] من حقدر عوامل المكافحة البايولوجية على تحسين معايير نمو النبات. جدول )9( النسبة المئوية لإلصابة بمرض ذبول األفرع للمناطق المشمولة بالمسح : نسبة اإلصابة )%( المنطقة أشجار االنكيدينا زراعة مختلفة أشجار االنكيدينا زراعة منفردة سامراء البدعية بلد الضلوعية تكريت دجلة جدول )2( تأثير الفطر H.t على نمو نبات االكيدنيا بعد 45 يوم من االصابة % شدة االصابة نوع المعاملة العزلة / S سامراء / البدعية العزلةB / بلد / الضلوعية العزلة / T تكريت / دجلة المقارنة )%5( LSD 75

77 جدول ) 3 (تقويم كفاءة فطر المكافحة االحيائية T.H والبكتريا.B S في خفض إصابة نبات انكيدنيا بالفطر H.t تحت ظروف البيت البالستيكي لعزلة منطقة. SB % شدة االصابة نوع المعاملة للمجموع الجاف الوزن )غم( الخضري 1.40 عزلة الفطر الممرض H.t بمفرده عزلة الفطر االحيائي + الفطر الممرض H.t +T.h 3.03 عزلة البكتريا االحيائية S.b بمفردها عزلة البكترية االحيائية + الفطر الممرض المقارنة % (5) LSD المصادر: 9 الديري, نزال أشجار الفاكهة المستديمة الخضرة, منشورات جامعة حلب. 2 Van der Plank J.E Analysis os epidemics. In plant Pathology Vol. 3, ed. J.G. Hhorsfall and A.E Dimond. Pp New York / Academic. 3 Smith, W. H Tree pathology : A short introduction. New York / Academic 309 pp. 4 Natour, R.M. &H.AlHaidery1967.Occurrence of branch wilt diseases caused by Hendersonulatoruloideain Iraq. Pl.Dis.Rept. 51: AlHassan,K.K.,A.A.Sadic&H.Fahill 1970 Baranch wilt of apple.faoplpro. Bull,18:

78 2 المراد, نضال يونس تسجيل أول لمرض ذبول األفرع الهندرسونيولي على أشجار الجنار في العراق, مجلة الرافدين )11( 4 : كريم, خالد أحمد ذبول افرع اليوكالبتوس وسمية راشح مزرعة الفطر المسبب للمرض. رسالة ماجستير. جامعة صالح الدين. 9 القصاب, عبد المطلب رضا حيدر )9192(. تنقية وتشخيص السموم التي يفرزها الفطر, HendersonulatoruloideaNattrass رسالة ما جستير, كلية العلوم. جامعة صالح الدين أربيل. 9 Wilson, E.E The branch wilt of Persian walnut trees and its cause. Hilgardia 17: Sutton, B.C.&B.J.Dyko Revision of Hendersonula.Mycol. Research, 93: Lewis,R.J.&E.P.Vanarsdel 1978 Development of Botryodiplodiacankers in Sycamore at controlled temperatures. Plant Dis.Reptr.62: Bell, D. D.; H. D. Well, and G. R. Markham In vitro antagonism of Trichodermaspp. Against six fungi, Plant pathogens. Phytopathology. 72: Buchnan, R.E. and N.E.Gibbons Bergey s Manual of Determinative Bacteriology,8 th edn. The Williams & Wilkins Co., Baltimore, pp Montealegre, J.R., R. Rodrigo, P. M. Luz, H. Rodrigo, S. Polyana, and B. Ximena Selection of bioantagonistic bacteria to be used in biological control ofrhizoctoctoniasolaniin tomato. J. Biotec. 6 : Wilson, E.E The branch wilt of Persian walnut tree and its cause Hilgardia. 17: المالكي, بشرى تأثير المخلفات الحيوية والمقاومة االحيائية للفطريات المسببة لموت بادرات الخيار. رسالة ماجستير قسم وقاية النبات كلية الزراعة جامعة بغداد 17 Larkin, R. P Development of integrated biological and cultural approaches for control of powdery scab and other soil borne diseases. USDA, ARS, New England, Plant Soil, and Water Lab, Univer. of Maine, Orone, ME www. Maine potatos. Com / pdf / potresgrant

79 18 Barnett,H.L&B.B.Hunter 1972 Illustrated Genera of Imperfect Fungi. Burgess publishing Co.241 pp. 19 Sutton, B.C.&B.J.Dyko Revision of Hendersonula.Mycol. Research, 93: الساعدي, باسم محمد عجيل, 9111, دراسة حيوية ومقاومة الفطر Hendersonulatoruloidea المسبب لمرض ذبول األفرع على أشجار الفاكهة. رسالة ماجستير. كلية الزراعة/ جامعة بغداد. 21 Shawkat, A. L. B. Tarabeih A. M., Attrackchi, A. A. and Ahmed, J. M species of populus and pinussa new host of HandersonulatoruloideaNattrass in Ninevah, Iraq Mesopotamia J. Agric. 14: Ahmed,J.M New host of HendersonulatoruloideaNattrass FAO plant protection Bull إبراهيم, بسام يحيى ونضال يونس المراد )6002(. سمية وامراضية الفطر H.toruloidea على أشجار الحمضيات. مجلة زراعة الرافدين )11( 6 : المراد, نضال يونس تسجيل أول لمرض ذبول األفرع الهندرسونيولي على أشجار الجنار في العراق, مجلة الرافدين )11( 4 : Van der Plank J.E Analysis os epidemics. In plant Pathology Vol. 3, ed. J.G. Hhorsfall and A.E Dimond. Pp New York / Academic. 26 Wilson, E.E The branch wilt of Persian walnut trees and its cause. Hilgardia 17: Harman, G. E The myths and dogmas of biocontrol changes in perceptions derived from research on Trichodermaharzianum strain T 22. Plant. Dis. 84 : Johannes, S., and M. Tschen Control of plant pathogen fungus Rhizoctoniasolaniby microorganisms. www. Kclc.or. jp / hubold / ostasien / tschen. htm. 29 Muhammad, S. and A. Amusa Invitro inhibition of growth of some seeding blight inducing Pathogens by compost inhabiting microbs. J. Biotech. 2 :

80 حتضري وتشخيص بعض املشتقات اجلديدة لألوكسادايازول والثايادايازول من حامضي البيوتارك والستيارك Synthesis, identification some derivatives of new oxadiazole, thiadiazole of Butaric acid and Stearic acid غسان خليفة غريب نبيل جمال عائد األصلي قسم الكيمياء/ كلية التربية للعلوم الصرفة/ جامعة تكريت االلكتروني البريد: Ghassan Khalifeh Ghareeb Nabil Jamal Alasli Department of Chemistry, College of Education for Pure Sciences, Tikrit University الخالصة: تم في هذا البحث تحضير مشتقات األوكسادايازول والثايادايازول باستخدام أحماض دهنية مشبعة هما حامض البيوتاريك وحامض الستياريك كمادة اولية.وتحويلها إلى مشتقات األوكسادايازول ومشتقات الثايادايازول بالطريقة غير المباشرة وذلك بتفاعل الحامض الدهني مع مسحوق السيميكاربازايد ليعطي مشتقات السيميكاربازايد وبتفاعل الحامض الدهني مع الثايوسيميكاربازايد ليعطي مشتق الثايوسيميكاربازايد ومن ثم تم تحويلها الى مشتقات 2 أمينو 4,3,1 أوكسادايازول ومشتقات 2 أمينو 4,3,1 ثايادايازول على التوالي بطريقة الغلق الحلقي بأستخدام أوكسي كلوريد الفسفور) POCl3 ( كعامل ساحب لجزيئة ماء, ومن ثم تشخيصها بأستخدام تقنيات.C 13 NMR, H 1 NMR, IR, الكلمات المفتاحية: الستيارك. األوكسادايازول, الثايادايازول, حامض البيوتاريك حامض 79

81 Abstract: Was in this search preparederivative oxadiazole and thiadiazole using acids fatty saturated are Butaric acid and Stearic acid as aprimary and turn it into derivatives oxadiazole, derivatives thiadiazole the manner of indirect by interact acid fatty with powder Semicarbazid to give derivative of Semicarbazid and by interact acid fatty with powder Thiosemicarbazide to give derivative of Thiosemicarbazide and then converted to derivatives 2 amino1,3,4 oxadiazole and derivatives 2 amino1,3,4thiadiazole respectively by cyclic closure using Oxy phosphoric chloride (POCl3) as his of molecule the water, and then diagnosed using techniques IR, H 1 NMR, C 13 NMR. Keywords: oxadiazole, thiadiazole, Butaric acid, Stearic acid المقدمة: اهتم الباحثون في دراسة تركيب وطرائق تحضير المركبات الحلقية غير المتجانسة بما في ذلك المركبات الحلقية الخماسية لما لها من أهمية صناعية كصناعة االدوية والبوليمرات المشتركة واألصباغ والمطاط وعوامل المعالجات الكيمياوية. )1( كما يعد البعض من المركبات الحلقية غير المتجانسة مصدرا أساسيا للحياة حيث ان اغلب المركبات الحياتية مثل البروتينات وكذلك األحماض النووية تحتوي في تركيبها على حلقات غير متجانسة وكذلك الفيتامينات اذ انها مكونة من حلقات غير متجانسة حاوية على النتروجين كما في فيتامين (B6) )بيريدوكسين( والذي يعد أحد مشتقات البيريدين والمهم في عملية التمثيل الغذائي لألحماض األمينية. )2( 81

82 2. الجزء العملي: 1.2 األجهزة والمواد الكيميائية المستخدمة: المواد الكيميائية جميع المواد المستخدمة في تحضير مشتقات األوكسادايازول والثايادايازول هي مواد نقية تتراوح نقاوتها )99,5( الى )99,9(% وهي من انتاج الشركات:),.Fluka, Aldrich, Merck(Ferak األجهزة المستخدمة: أ مطياف األشعة تحت الحمراء نوع 500Buck mode ب NMRBruker ultra shield 300 MHz was used for recording the H 1 NMR and C 13 NMR spectra using DMSOd6 as solvents. That mesured in "Alalbait universityjordan". 22 طرق التحضير: 122 تحضير مشتقات السيميكاربازايد )3( :اذيب ) 0.01 مول( من احد االحماض من مسحوق السيميكاربازايد في ) 20 مل( داي مثيل ) 0.01 مول( مع الدهنية وصعد المزيج على) 90 م ) 0 لمدة ) 3 ساعات(, ثم برد المحلول ورشح فورمومايد البلورة له بمذيب مناسب, والجدول )3( التالي يبين وإعادة الراسب وتم غسله الخواص الفيزياوية : Comp No جدول ) 2 (:الخواص الفيزياوية لمعوضات السيميكاربازايد Comp Molecular formula Color m.p C 1 C5H11N3O2 Yellow C19H39N3O 2 Light yellow

83 222. تحضير معوضات الثايوسيميكاربازايد )4( : اذيب ) 1111 مول( من احد األحماض الدهنية مع ) 1,11 مول( من مسحوق الثايوسيميكاربازايد في ) 25 مل( داي مثيل فورمومايد وصعد المزيج على) c 90( 0 لمدة ) 3 ساعات(, ثم برد المحلول ورشح الراسب وتم غسله وإعادة البلورة له بمذيب مناسب. جدول )3(: الخواص الفيزياوية لمعوضات الثايوسيميكاربازايد Comp No Comp Molecular formula Color m.p C 1 C5H11N3OS White C19H39N3O S Dark brown تحضير مشتقات 6 أمينو 4,1,9 أوكسادايازول (5) : جدول ) 4 (:الخواص الفيزياوية لمشتقات 2 امينو,1,3,4 اوكسادايازول: Comp No Comp Molecular formula Color m.p C 1A 2A C5H9N3O White C19H37N3O White أذيب ) 1,11 مول( من احد المركبات ) 1,2 (في الجدول) 2 ( في ) 25 مل( دايوكسان, ومن ثم إضافة ) 1111 مول( من POCl3 تدريجيا وعلى درجة حرارة ) 90 م ) 0 لمدة 82

84 للعلوم الصرفة االطروحة 42 ساعة, ثم يسكب المزيج على جريش الثلج وباالحض تكون راسب يغسل وإعادة بلورته بمذيب مناسب. (6) تحضير مشتقات 6 أمينو 4,1,9 ثايادايازول: أذيب ) 1,11 مول( من احد المركبات )1,2( الجدول )3( في ) 25 مل( دايوكسان, تدريجيا وعلى درجة حرارة ) 91 م ) 0 POCl3 ) 1111 مول( من إضافة ومن ثم تكون راسب يغسل ويالحظ لمدة 64 ساعة, ثم يسكب المزيج على جريش الثلج وإعادة بلورته بمذيب مناسب. جدول ) 6 (:الخواص الفيزياوية لمشتقات 6 امينو,1,3,4 ثايادايازول: Comp No Comp Molecular formula Color m.p C 3A 4A C5H9N3S Yellow C19H37N3S Orange النتائج والمناقشة: تحضير وتشخيص األوكسادايازول والثايادايازول: تم تحضير مركبات األوكسادايازول والثايادايازول لحامض الستيارك عن طريق تفاعل اوكسي كلوريد الفسفور (POCl3( مع كل من مشتقات السيميكاربازيد ومشتقات الثايوسيميكاربازايد إذ تتحولق هذه المركبات ضمنيا مع حذف جزيئة ماء لتعطي حلقة األوكسادايازول والثايادايازول على التوالي. ويمكن توضيح ميكانيكية باالتي: التفاعل المقترحة )7( 83

85 وباستخدام طيف األشعة تحت الحمراء تم التأكد من صحة تركيب مركبات األوكسادايازول الذي تميز بظهور حزمة عند cm1) ) تعود إلى المط المتناظر لمجموعة (COC) وظهور حزمة ) ( تعود للمط غير التناظر, وكذلك ظهور حزمة مط عند المنطقة ( 1 cm ( تعود إلى اهتزاز المط لمجموعة )C=N( فضال عن حزمة مط لمجموعة )NH( في المدى ( 1 cm (. مع اختفاء حزمة امتصاص المط لمجموعي الكاربونيل ) C=O (.والشكلين) 2,1 ( يبين طيف األشعة تحت الحمرا للمركبين.)1A,2A( )5,6( يوضح طيف الرنين المغناطيسي للمركبين ) 1A,2A (.والشكلين الجدول األتي يوضح الخصائص الطيفية لألشعة تحت الحمراء للمركبات )1A,2A( 84

86 Comp:No R NH2 (C=N) COC 1A A )78( وأيضا باستخدام طيف األشعة تحت الحمراء تم التأكد من صحة تركيب مركبات الثايادايازول الذي تميز بظهورحزمتي امتصاص أساسيتين األولى عند مدى )1166 حزمة حزمة المط المتناظر والثانية عند مدى ) ( سم 1 )1144 سم 1 المط غير المتناظر لمجموعة )CSC( والتي تؤكد تكوين حلقة الثايادايازول. وحزمة عند ( 1 cm ( تعود إلى اهتزاز المط لمجموعة )C=N( فضال عن حزمة مط لمجموعة )NH( في المدى ( 1 cm (. مع اختفاء حزمة امتصاص المط لمجموعة الكاربونيل )C=O( ومجموعة الثايون )C=S( وظهور حزمة عند المدى ). والشكل )3,4( يوضح طيف األشعة تحت الحمراء للمركب) 4A,3A (, والشكلين )7,8( يوضح طيف الرنين النووي المغناطيسي للمركبين.)4A,3A( الجدول األتي يوضح الخصائص الطيفية لألشعة تحت الحمراء للمركبات :)4A,3A( Comp. No. R NH2 (C=N) CSC 3A A

87 مناقشة اطياف الرنين النووي المغناطيسي للبروتون) NMR H( 1 : discussion of nuclear magnetic resoanance of spectra تم دراسة أطياف الرنين النووي المغناطيسي للبروتون NMR( H( 1 والتي تمت باستخدام )DMSOd6( كمذيب وباستخدام رباعي مثيل سيالن δ كمرجع داخلي, وقد تم القياس بالوحدات )Tetramethylsilane:TMS( القياسية المعتمدة والتي يعبر عنها بالجزء بالمليون) ppm (. وقد تم إجراء التحاليل لبعض المركبات المختارة على أساس دعم المسارات التحضيرية للدراسة, وقد توافقت نتائج تحليل الرنين النووي المغناطيسي للبروتون مع تلك التي في األشعة تحت الحمراء وكانت النتائج المبينة في الجدول ( ) وكالتالي: )1 المركب )3A( : اظهر المركب حزمة منفردة عريضة عند جزء بالمليون تعزى لبروتون مجموعة األمين,)NH( مع ظهور حزم متعددة عند المدى جزء بالمليون تعزى لبروتون مجموعة السلسلة األلفاتية,)CH2( كما ظهرت حزم عند المدى جزء بالمليون تعزى لبروتون مجموعة,)CH3( يالحظ الشكل.)26( Comp.No. 1HNMR Spectrum,δ,ppm,400MHz 3A 6.56(s,1H,NH), (dd9H,CH), (dd,3H,CH) مناقشة أطياف الرنين النووي المغناطيسي للكاربون NMR( C(: 13 Discussion of nuclear magnetic resonance of carbon spectra تم دراسة أطياف الرنين النووي المغناطيسي للكاربون NMR( C( 13 والتي تمت باستخدام المذيب ) DMSOd6 باستخدام رباعي مثيل سيالن δ كمرجع داخلي, وقد تم القياس بالوحدات )Tetramethylsilane:TMS( القياسية المعتمدة والتي يعبر عنها بالجزء بالمليون) PPm (. 86

88 لقد تم إجراء التحاليل لبعض المركبات المختارة على أساس دعم المسارات التحضيرية للدراسة, وقد توافقت نتائج تحليل الرنين النووي المغناطيسي للكاربون مع تلك التي في األشعة تحت الحمراء. )1 المركب) 1A ( : اظهر المركب إشارة عند تود إلى ذرة الكاربون )CNH2( الحلقة الخماسية المتصلة بمجموعة )NH2( وإشارة واحدة عند تعود لذرة الكاربون )CCH2( الحلقية المتصلة بالسلسلة األلفاتية, وكذلك ظهور حزم اقل من 111 تعود لذرات الكاربون األليفاتية وكما في الشكل )30(. )1 المركب )2A( : اظهر المركب إشارة عند تعود إلى ذرة الكاربون )CNH2( الحلقة الخماسية وإشارة عند تعود لذرة الكاربون )CCH2( الحلقة الخماسية المتصلة بالسلسلة االلفاتية, وظهور إشارات من تعود إلى ذرات الكاربون االليفاتية وكما في الشكل )31(. )1 المركب) 4A ( : اظهر المركب إشارة عند تعزى إلى ذرة الكاربون )CCH2( الحلقة الخماسية المتصلة بالسلسلة االلفاتية وإشارة واحدة عند تعود لذرة الكاربون )CNH2( الحلقية المتصلة بمجموعة )NH2( وكذلك ظهور إشارات من تعود لذرات الكاربون االليفاتية وكما في الشكل )30(. 87

89 الشكل )1( طيف األشعة تحت الحمراء للمركب )1( الشكل )2( طيف األشعة تحت الحمراء للمركب )2( 88

90 الشكل )3( طيف األشعة تحت الحمراء للمركب )3( الشكل )4( طيف األشعة تحت الحمراء للمركب )4( 89

91 الشكل )5( طيف الرنين النووي المغناطيسي NMR( C( 13 للمركب )1A(. الشكل )6( طيف الرنين النووي المغناطيسي NMR( H( 1 للمركب )2A( 91

92 الشكل )7( طيف الرنين النووي المغناطيسي NMR( H( 1 للمركب )3A( الشكل )8( طيف الرنين النووي المغناطيسي NMR( C( 13 للمركب )4A(. 91

93 REFERENCES 1. Lafta S.J. Ph.D. Thesis, University of AlMusatansiriya, Baghdad, Iraq (1999). 2. Katritzky A. R. and Reez C.W., Pergamon Press Ltd., England, 1, 247(1984). 3. Elderfield R.C. "Heterocyclic Compounds" Acadim Press; London(1962). 4. Molina P; Arques A. and Valcarcel M.V; Synthesis P.944, (1982). 5. Gehlen H; and Moeekel K; Ann. Chem; 685, 176, (1995). 6. Richard, C; Gilmore, J.R; Horton W. J. Am. Chem. Soc.73, 1411(1951). 7. R.C. Elderfield, Heterocyclic Compound, John Wiley and Sons, New York, Vol. 7, p. 526, 469, 599(1976). 92

94 حتضري وتشخيص بعض مشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون بالطريقة التقليدية وطريقة املايكروويف وتقييم الفعالية البايولوجية Synthesis, Characterization of some 1,3 Oxazepane 4,7Dione by Traditional and Microwave routes method and evaluation of their biological activity ا.م.د. فوزي حميد جمعة العبيدي عادل حسين دلف المجمعي قسم الكيمياء/ كلية التربية للبنات/ جامعة تكريت Fawzi Hameed Jumaa ALObaidy Adil Hussein Dalaf Al Majma'i Department of Chemistry, College of Education for Women, Tikrit University, Tikrit Iraq الخالصة: تم تحضير قواعد شيف [A5A1] من تفاعل معوضات األمينات األروماتية مع مشتق األلديهايد ثم تحضير حلقات سباعية لمشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون [A10A6] من مفاعلة قواعد شيف المحضرة مع إنهيدريد السكسنيك الالمائي في البنزين الجاف, ثم شخصت المركبات المحضرة بالطرائق الطيفية مثل طيف األشعة فوق البنفسجية [UV] وطيف األشعة تحت الحمراء [IR] وأطياف الرنين النووي المغناطيسي NMR] [ 1 H والتحليل الكمي للعناصر (C.H.N.) فضال عن تعيين درجات االنصهار والنقاوة للمركبات المحضرة, ومتابعة سير التفاعالت بكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة,TLC كما تم تقييم الفعالية البايولوجية لبعض 93

95 المركبات المحضرة على نمو أربعة أنواع من العزالت البكتيرية وهي أشريشيا القولون وكلبسيال الرئوية والمكورات العنقودية الذهبية والع نقودية الب ش ر وية. الكلمات المفتاحية: قواعد شيف, 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون. Abstract: This work included synthesis of schiff base through reaction substituted aromatic amin with aldehyde derivative in ethanol compounds [A1A5] and 1,3Oxazepines 4,7 Dione derivatives prepared by reaction schiff base with succinic anhydride in dry benzene compounds [A6A10], and characterization by using spectroscopic techniques Uv/Vis, FTIR and H 1 NMR of some the prepared compounds using DMSOd 6 a solvent, in addition melting point and determination a purity of TLC, and this thesis consists a study of biological activity for the some prepared compounds against four types of pathogenic bacteria and know to be resistant to anti biotic. Key words: Schiff's base, 1,3Oxazepines4,7Dione. 9. المقدمة: قواعد شيف مركبات عضوية تحتوي على مجموعة األزوميثين,)CH=N( سميت بهذا االسم نسبة إلى العالم شيف (1(, وتعرف قواعد شيف بأسماء مختلفة مثل اإليمينات واألزوميثينات واألنيالت (2(, وبصورة عامة تعرف قواعد شيف المشتقة من تكاثف األلديهايدات مع األمينات باأللديمينات, في حين المركبات المشتقة من تكاثف الكيتونات مع األمينات األولية تعرف بالكيتيمينات وفي حالة تكاثف الهيدرازيدات مع األلديهايدات فإن الناتج يدعى بالهيدرازونات (3(. مركبات 3,1 أوكسازبين هي مركبات غير مشعبة سباعية الحلقة غير متجانسة تحتوي على خمس ذرات كاربون وذرة أوكسجين وذرة نتروجين واحدة, وان زيادة حجم الحلقة يجعلها غير مستوية إذا ما قورنت بحلقة البنزين األروماتية السداسية, وهي بذلك غير, ونتيجة لزيادة حجم الحلقة نجد أن معدل تكوين هذه المركبات يزداد ويتم أروماتية (4) تحضيرها بسهولة بسبب االختالف في األعداد واألنواع ومواقع الذرات ونجد أن هناك, وقد عددا هائال للمركبات غير المتجانسة يتم تحضيرها وإنتاجها في هذا المجال (5) أثبتت الدراسات بأن األوكسازبين يستخدم في عالج األمراض واالضطرابات النفسية مما دفع العديد من الباحثين إليجاد طرق جديدة لتحضير األوكسازبين (6). 94

96 .6 الجزء العملي: 96: األجهزة المستخدمة: (UV) Pc Shimadzu (UVVis) Spectrophotometer UV1800 )811511( 53( (IR) FTIR600 Fourier Transform infrared (FTIR) (KBr) Spectrophotometer MHz ( 1 HNMR) Varian (C.H.N.) (DMSO d 6 ) 0.01 mol, 4.5 (7) : أذيب ).EuroEA 3000/Italy : 22 تحضير قواعد شيف بالطريقة التقليدية )gm من مشتق األلديهايد في ml) 50) من اإليثانول المطلق وبعد تمام اإلذابة أضيف الى المزيج mol) 0.02) من األمينات األروماتية المختلفة وبعد إضافة (4) ساعات وتم التأكد من قطرات من حامض الخليك الثلجي صعد عكسيا لمدة (53) انتهاء التفاعل باستخدام تقنية TLC وبعد انتهاء التفاعل برد المزيج الناتج ببطء ومن ثم رشح وجمع الراسب وجفف حتى ثبوت الوزن وأعيدت بلورته باإليثانول وجفف مرة أخرى. 95

97 Comp No. A 1 A 2 A 3 A 4 الجدول )9(: بعض الخصائص الفيزيائية لمشتقات قواعد شيف.[A5A1] Ar Molecular Formula/ M.Wt g/mol C 38 H 28 N 6 O C 38 H 26 N 8 O C 34 H 24 N 10 O C 38 H 28 N 6 O Color Dark green Light green Brown Red M.P ( 0 C) Time (h.) Yield (%) R f A 5 C 46 H 36 N 10 O 8 S Brown : 32 تحضير قواعد شيف بطريقة المايكروويف (8) : أذيب ) mol, 0.01 ) 4.5 gm من مشتق األلديهايد في ml) 15) من اإليثانول ثم أضيف الى المزيج mol) 0.02) من األمينات األروماتية ثم صعد عكسيا لمدة (126) دقيقة في جهاز المايكروويف عند درجة حرارة ) 0 78) C وقدرة (W 400) وبعد انتهاء التفاعل برد المزيج الناتج ببطء ومن ثم رشح وجمع الراسب. 96

98 Comp No. A 1 A 2 الجدول )2(: بعض الخصائص الفيزيائية لمشتقات قواعد شيف.[A5A1] Ar Color Dark green Green M.P ( 0 C) Time (min.) 10 6 Yield (%) A 3 Dark brown A 4 Light red A 5 Brown : تحضير مشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون بالطريقة التقليدية مزج mol) 0.001( من قواعد شيف المحضرة [A5A1] في ml) 40( من البنزين الجاف مع 0.2gm) 0.002( mol, من إنهيدريد السكسنيك الالمائي, ووضع في دورق دائري ذو فتحتين األولى يوضع فيها المكثف للتصعيد والثانية يوضع فيها كلوريد الكالسيوم CaCl2 ثم صعد المزيج لمدة (84) ساعة في حمام مائي, وتم التأكد من انتهاء التفاعل باستخدام تقنية, TLC ثم برد المزيج في حمام ثلجي, ورشح الراسب وجفف وأعيدت بلورته في. DMF : )9( 97

99 Comp No. A 6 A 7 A 8 A 9 جدول )1(: الخصائص الفيزيائية لمشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون.[A10A6] Ar Molecular Formula/ M.Wt g/mol C 46 H 36 N 6 O C 46 H 34 N 8 O C 42 H 32 N 10 O C 46 H 36 N 6 O Color Brown Dark orange Yellow Dark orange M.P ( 0 C) Time (h) Yield (%) R f A 10 C54H44N10O14S Brown : تحضير مشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون بطريقة المايكروويف )90( : مزج mol) 0.001( من قواعد شيف المحضرة [A6A2] في ml) 10( من البنزين الجاف مع gm) 0.002( mol 0.2 من إنهيدريد السكسنيك الالمائي في دورق دائري, ووضع في جهاز المايكروويف وصعد المزيج لمدة )136( دقيقة عند درجة حرارة ( 0 80C( وقدرة (400W), وتم التأكد من انتهاء التفاعل باستخدام تقنية,TLC برد المزيج في حمام ثلجي, ورشح الراسب وجفف. [A10A6] 7,4 3,1 :)4( Comp. No. A 6 Ar Color Dark brown M.P ( 0 C) Time (min) 8 Yield (%) 90 A 7 Red A 8 Dark yellow

100 A 9 A 10 Dark orange Dark brown النتائج والمناقشة: 91: تشخيص قواعد شيف: تم التحضير من تفاعل مولين من مشتقات االمين االروماتي مع مول واحد من مشتق األلديهايد بوجود االيثانول كمذيب )11( وكما مبين في المعادلة اآلتية: إذ تتلخص ميكانيكية اإلضافة بخطوتين: األولى هي مهاجمة المزدوج االلكتروني غير المشترك لمجموعة األمين على ذرة كاربون مجموعة الكاربونيل في األلديهايد, أما الخطوة الثانية فتحذف منها جزيئة ماء لتكوين آصرة اآلزوميثين,(C=N) وكما في )12( المخطط اآلتي الذي يوضح الميكانيكية المعروفة لتحضير مشتقات قواعد شيف: مخطط )9(: ميكانيكية تحضير قواعد شف.[A5A1] 99

101 وتم التأكد من حصول التفاعل من خالل مالحظة التغيرات التي حصلت على الصفات الفيزيائية من درجة االنصهار الحادة والتغير الكبير في اللون فضال عن التأكد من نقاوة الناتج وأجراء اختبار قياس معدل سرعة الجريان Rate of ( Rf )flow على النتائج والذي أظهر بقعة مفردة واضحة على صفيحة كروموتوغرافيا الطبقة الراقية,)TLC( وعند دراسة طيف األشعة فوق البنفسجيةالمرئية Vis( )UV للمركبات المحضرة [A5A1] باستخدام االيثانول ( %95( كمذيب وبتركيز تراوح بين موالري للمركبات المحضرة, حيث أظهرت أطوال موجية قصيرة ( λmax ) عند ) ( نانوميتر تعود إلى انتقاالت ) ( مع أطوال موجية طويلة ( λmax ) عند المدى ) ( نانوميتر تعود لالنتقاالت االلكترونية من نوع ) n( وكانت الحزم مقاربة لما موجود باألدبيات )13(. وعند دراسة طيف األشعة تحت الحمراء )IR( لوحظ ظهور حزمة متوسطة عند )1622 تعود لمجموعة )C=N( وظهور حزمة قوية عند ) ( سم )1672 سم 1 1 تعود لمجموعة )N=N( وظهور حزمتي امتصاص عند المدى تعود لمط آصرة )C=C( االروماتية و ) ( سم ( )1555 سم 1 تعود لمط آصرة )CH( إضافة لحزم امتصاص عند المدى ) ( سم 1 1 االروماتية وظهور حزم امتصاص عند المدى ) ( سم تعود لمط آصرة تعود )CH( األليفاتية مع ظهور حزم امتصاص عند المدى ) ( سم 1 لمط آصرة )OH( وكما في الجدول )5(, كانت هذه الحزم مقاربة لما موجود باألدبيات )14(. الجدول )2( نتائج امتصاص األشعة تحت الحمراء )سم 9 ) وقيم االمتصاصات في طيف األشعة فوق البنفسجية لمشتقات قواعد شف.[A5A1] Comp No. Ar max λ1 max λ2 EtOH C=N) (CH) Arom. (CH) Aliph. IR (KBr) cm 1 (C=C) (N=N) (OH) Others A 1 A 2 A 3 (NO2). asy.(1565) sym.(1367) (CN) 111

102 A 4 A 5 (SO2). asy.(1360) sym.(1172) (NH) 61: تشخيص مشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون: تم تحضير مشتقات 3,1 أوكسازبان 7,4 دايون [A10A6] من خالل تفاعل مول واحد من قواعد شيف المحضرة [A5A1] مع مولين من إنهيدريد السكسنيك الالمائي وكما في المعادلة التالية: (CH3) asy.(2974) sym.(2870) إذ تتلخص ميكانيكية التحضير بخطوتين: األولى هي مهاجمة المزدوج اإللكتروني في آصرة اآلزوميثين (C=N) العائدة لقاعدة شيف إلى مجموعة الكاربونيل في اإلنهيدريد ثم ارتباط النتروجين من مجموعة اآلزوميثين مع ذرة الكاربون العائدة لمجموعة الكاربونيل وإرتباط ذرة الكاربون العائدة إلى مجموعة اآلزوميثين مع ذرة األوكسجين في اإلنهيدريد وحدوث حالة انتقالية غير مستقرة, بعد ذلك تحدث الخطوة الثانية وهي كسرة أصرة اآلزوميثين وتكوين األوكسازبان من الحالة االنتقالية مكونة حلقة سباعية غير متجانسة مكونة من ذرة نيتروجين واحدة وذرة أوكسجين واحدة وخمس ذرات كاربون وكما في المخطط اآلتي الذي يوضح )15( الميكانيكية المعروفة للتحضير: 111

103 مخطط )6(: ميكانيكية تحضير مشتقات 3,1 أوكسازبان 9,4 دايون.[A10A6] وتم التأكد من حصول التفاعل من خالل التغير الكبير في الصفات الفيزيائية من درجة االنصهار الحادة والتغير الكبير في اللون فضال عن أجراء اختبار قياس معدل سرعة الجريان )Rate of flow( Rf على النتائج والذي أظهر بقعة مفردة واضحة على صفيحة كروموتوغرافيا الطبقة الراقية,)TLC( وعند دراسة طيف األشعة فوق البنفسجيةالمرئية )UVVis( باستخدام االيثانول ( %95( كمذيب وبتركيز تراوح موالري للمركبات, حيث أظهرت أطوال موجية قصيرة ( )λmax بين عند ) ( نانوميتر تعود إلى انتقاالت ) ( مع أطوال موجية طويلة λmax( ) عند المدى ) ( نانوميتر تعود لالنتقاالت االلكترونية من نوع,) n( أما عند دراسة طيف األشعة تحت الحمراء لوحظ اختفاء الحزمة التي تعود لمجموعة,)C=N( وظهور المتوسطة عند ) ( سم 1 تعودان و ) ( سم 1 حزمتين قويتين عند التردد ) ( سم 1 إلى مط أصرة الكاربونيل (C=O) الالكتون والالكتام على التوالي, وظهور حزمة تعزى إلى مط اآلصرة,(CO) وظهور متوسطة عند المدى ) ( سم 1 تعزى إلى مط اآلصرة,(CN) إذ حزم أخرى عند المدى ) ( سم 1 1 لوحظ ظهور حزمة امتصاص عريضة عند المدى ) ( سم تعود لمط تعود لمط آصرة,)OH( وظهور حزم امتصاص عند المدى ) ( سم 1 112

104 آصرة )CH( االروماتية فضال عن ظهور حزم امتصاص عند المدى )2916 تعود لمط آصرة )CH( األليفاتية, وظهور حزمتين عند المدى )2954 سم 1 تعود إلى اهتزاز اآلصرة )C=C( و ) ( سم 1 ) ( سم 1 تعود لمجموعة األروماتية, وظهور حزمة متوسطة عند المدى ) ( سم 1,)N=N( وكانت هذه الحزم مقاربة لما موجود باألدبيات )16(, أما عند دراسة طيف الرنين النووي المغناطيسي للبروتون للمركب [A10] لوحظ ظهور اشارة مفردة في الموقع )11163( جزء من المليون تعزى إلى بروتون ذرتي النتروجين وظهور اشارة مفردة في الموقع )11111( جزء من المليون تعزى إلى بروتون مجموعتي الهيدروكسيل (OH) وظهور إشارة مفردة في الموقع )8174( جزء من المليون تعزى إلى بروتون )CH( للحلقتين السباعيتين كما ظهرت اشارة متعددة عند ) ( جزء من المليون تعود إلى بروتونات الحلقات األروماتية وظهور إشارة مفردة عند )6163( جزء من المليون تعود إلى بروتوني الحلقتين الخماسيتين وكذلك لوحظ ظهور إشارة مفردة عند )3131( جزء من المليون تعود إلى بروتوني )CH2( للحلقتين السباعيتين وكذلك ظهور إشارة قوية ومفردة عند )2151( جزء من المليون تعود إلى بروتونات مجموعتي المثيل.)CH3( Comp No. A32 A33 A34 الجدول )2( نتائج امتصاص األشعة تحت الحمراء )سم 9 ) وقيم االمتصاصات في طيف األشعة فوق البنفسجية لمشتقات 3,1 أوكسازبان 9,4 دايون.[A41A32] Ar λ max1 λ max2 EtOH (OH) (CH) Arom. Aliph. (C=O) Lactone Lactam IR (KBr) cm 1 (C=C) (N=N) (CO) (CN) Others (NO2). asy.(1510) sym.(1350) A

105 A (SO2). asy.(1336) sym.(1091) (CH3) asy.(2950) sym.(2860) جدول )9(: نتائج التحليل الدقيق للعناصر )C.H.N.( للمركبات ]A1,A10[.,A4 Found Calculated Comp No. Molecular Formula C% H% N% O% C% H% N% O% A 2 A 5 A 10 C 38H 28N 6O 2 C 38H 28N 6O 4 C 54H 44N 10O 14S الشكل )9(: طيف األشعة فوق البنفسجية للمركب [A1]. 114

106 الشكل )6(: طيف األشعة فوق البنفسجية للمركب [A4]. [A36] [A1] 115

107 [A4] [A10] 116

108 [A10] Staphylococcus [A5, A6] aureus مخطط )1(: مخطط عام للمركبات المحضرة 117

109 المصادر: 1. J. A. Joule and K. Mills "Hetercyclic Chemisrey at Glance", 1 st edu. (2007). 2. C. S. Sell, "Chemistry and the Sense of Smell", John Wiley & Sons, (2014). 3. Y. Ali, M. J. A. Habib and K. W. AlJanabi," Iraqi J. Chem.", 21, 104 (1996). 4. E. Vogel, W. A. Bou, and Gunther, "Tetra hedron Lett", 609, (1965). 5. N. Latif, N. Mishriky and F. M. Assad, "Aust. J. Chem.", 35, 1037, (1982). 6. R. Griem, G. Cantos Liport, M. Amat, J. Bosch and J. Huguaet, "Bio organic and Medicinal Chemistry letter", , (2005). 7. F. L. Faraj, W. B. Ali, S. A. Jassim and T. R. Ali, "Diyala Journal for Pure Science", Vol. 13, No. 2, part. 1, pp , (2017). 8. B. Chenjie, "Current Organic Synthesis", Vol.14,No.4,pp ,(2017). 9. E. K. Obaid, "Journal of Babylon University", Vol.25, No.2, pp , (2017). 10. S. Arshadi, "Beilstein Journal of Organic Chemistry", Vol.13, 625, (2017). 11. I. Vogle, Textbook for practical organic chemistry Third addition Longman, (1972). 12. Bruce, P, Y. "Organic Chemistry" 4 th Edition Prinitic hall lnc. Uppe Sadale River New Jersey (2008). 13. C. N. R. Roa, '' Ultra Violet and Visible Spectroscopy Chemical Application" Butter Woths Ltd., 52, (1961). 14. B. Stuart, " Infrared Spectroscopy", John Wiely and Sons, Ltd, 4, 80, (2004). 15. P. Sykes ''Aguide book to mechanism in organic chemistry" John Wiely and Sons, Inc., New York, (1986). 16. R. M. Silverstein, "Spectrometric Identification of Organic Compounds" 7 th ed., John Wiley and Sons, New York, (1998). 118

110 تقييم التأثريات اجلزيئية للسماق على الكبد والكلى لذكور الفئران البيض السويسرية Assessment of molecular effects of on Rhuscoriaria on the liver and kidney of Male Swiss Albino Mice (MusMusculus) سلمى زهير عبد اهلل أ.د.عزيز حميد رشيد أ.م.عدنان فاضل نصيف العزاوي جامعة تكريت كلية العلوم قسم علوم الحياة Salma zher Abdulla Pro.Dr. Aziz Khalid Hamid Asst.Prof. : Adnan Fadhil Al_Azaawie Aziz k. Hameed Department of Biology / College of Science University of Tikrit الخالصة هدف هذه الدراسة تقييم تأثير المستخلص المائي للسماق على الحمض النووي منقوص األوكسجين ال )DNA( للكبد والكلية لذكور الفئران البيض السويسرية باستخدام تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال لسلسلة الدنا ال.)RAPD( استخدمت ثالثون فأرة, قسمت الى ستة مجاميع لكل مجموعة خمس فئران, المجموعة االولى مجموعة السيطرة وقد جرعت بالماء, أما المجموعة الثانية, الثالثة, الرابعة, الخامسة, والسادسة فجرعت بالسماق بتراكيز )6125,21,31,51,111 ملغم /كغم ) على التوالي لمدة أحدى عشر يوما. خدرت الحيوانات ثم شرحت للحصول على عينات الكبد والكلى 119

111 الستخالص ال )DNA( منها, والذي ضخم باستعمال تقنية ال RAPD مع اثنا عشر بادئ عشرية القواعد عشوائيةالتعاقب. اظهرت النتائج ان التعرض للسماق بتراكيز مختلفة قد اثر على الحمض النووي منقوص االوكسجين )DNA( لخاليا الكبد والكلية للفئران وسبب تغيرات كبيرة في انماط تقنية ال RAPD بالمقارنة مع مجموعة السيطرة من ناحية االختالف في عدد الحزم واحجامها وشدتها. لذلك يمكن القول ان استعمال السماق بتراكيز عالية يمكن ان يؤثر على الحمض النووي منقوص االوكسجين ال )DNA( وقد يؤدي الى حصول طفرات مضرة كما ان تقنية ال RAPDمفيدة جدا في الكشف عن تأثير المواد الكيميائية على المستوى الجزيئي. Abstract The aim of this study was to evaluate the effect of the water extract on the DNA of the liver and kidney of male Swiss white rats by using the polymorphic randomization technique of the RAPD. Thirty groups of mice were divided into six groups for each group of five mice. The first group was the control group and was injected with water. The second group, the third, fourth, fifth, and sixth groups were activated with concentrations of 6.25,20,30,50,100 mg / kg respectively Eleven days. The animals were anesthetized and then explained to obtain liver and kidney samples to extract DNA from them, which was amplified using the RAPD technique with twelve decimal bases. The results showed that exposure to the sumac at different concentrations affected the DNA of the liver and kidney cells of the mice and caused significant changes in the patterns of RAPD technique compared with the control group in terms of the difference in the number, size and intensity of the beams. Therefore, it can be said that the use of high concentrations of sumac can affect DNA, which may lead to 111

112 111 harmful mutations, and RAPD is very useful in detecting the effect of chemicals at the molecular level. المقدمة ما أخذ االهتمام بالنباتات الطبية يزداد تدريجيا في اآلونة األخيرة في الدول الصناعية وكذلك في البلدان النامية }1{,, ومنها نبات السماق الذي عرف منذ زمن طويل ووجد يقارب ) 120 ( الكلسية ومصدره نسبة الفلقتين يكون المناطق في واليه التركيب ترجع تتغير نوعا" منه الحارة, سميته ألجزاء تبعا منتشرة يختلف والصمغية النبات تلقائيا التركيب األراضي في الكيميائي ورائحته الراتنجية }2{ نفسه (Dicotyledonea) أو أشجار بشكل إلى يعود شجيرات صمغية الكلسية للسماق الخاصة.نبات السماق الفصيلة البطمية راتنجية الفعالة في فقد أجريت عليه العديد من البحوث والدراسات} 3 {. لقد زاد االهتمام في اآلونة األخيرة الجافة نوع حسب به,هذا من النباتات أو الطينية السماق أن علما ذوات (Terebinthaceae) ونظرا لوجود العديد من المركبات بالبحوث التي تحاول الكشف عن عوامل السمية الوراثية الموجودة في البيئة. ونتيجة القلق المتزايد لدى عامة الناس والحكومات من تأثير تلك المواد من ناحية ولكون القياسات الكيميائية المباشرة لتلك العوامل وتفسير مثل هذه القياسات صعبة نوعا" ما من ناحية طرائق حساسة وفعالة للكشف عن }4{. االعتيادية أضرار أصبح أخرى من الضروري استخدام تلك المواد التي يصعب قياسها بالطرق فعندما تتعرض الكائنات الحية باستمرار الى المواد ذات القدرة التطفيرية )المواد المطفرة( فان ذلك قد يؤدي إلى تلف الحمض النووي,لقد استخدمت بعض الطرق المختبرية على نطاق واسع للكشف عن تأثير تلك المواد اال ان التقنيات الجزيئية تعتبر أفضل تلك الطرق ألنها تعطي صورة على مستوى الدنا }5{. ومن تلك التقنيات مباشرة عن تأثير تلك المواد تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال لسلسلة الدنا ال (RAPD( Randomالتي Amplified Polymorphic DNA

113 تعد احدى مؤشرات ال DNA المعتمدة على تقنية ال تضاعف البلمرة المتسلسل (PCR) Polymeraseوالتي Chain Reaction ساعدت في تحديد تغيرات الدنا بعد التعرض لعوامل السمية الوراثية } 6 {.حيث ادى استعمال تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال لسلسلة الدن اكمؤشرات وراثية إلى تحسين الكشف عن تعديالت الحمض النووي بعد تأثير العديد من العوامل } 7 {اذ تم الكشف عن أنواع مختلفة من أضرار الحمض النووي عن طريق تلك التقنية, فهي من الناحية العملية بسيطة, رخيصة نسبيا, سريعة وتعطي معلومات عن عدد كبير من المواضع }8{. تمثل التغييرات التي تحدث في نمط تقنية الدنا المتعدد بعد المعاملة او التعرض للمواد المطفرة التغير في كثافة الحزمة باإلضافة الى فقدان او ظهور حزم جديدة وذلك من خالل مقارنة نمط تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال لسلسلة الدنابين العينات المعاملة او المتعرضة للمطفرات ومجموعة السيطرة او غير المتعرضة للمطفرات }9{ لذلك اجريت هذه الدراسة لتقييم تأثير تراكيز مختلفة من المستخلص المائي للسماق على الحمض النووي منقوص األوكسجين ال )DNA( للكبد والكلية لذكور الفئران البيض السويسرية باستخدام تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال لسلسلة الدنا ال.)RAPD( المواد وطرق العمل استخدمت في هذه الدراسة ثالثين فارا من الذكور البيض السويسرية تبلغ أوزانهم )2723( غم وعمرها تراوح بين )118( أسابيع تم الحصول عليها من المركز الوطني للبحوث/ بغداد.وتم حفظ كل خمسة فئران في قفص بالستيكي في البيت الحيواني في كلية الطب البيطري/جامعة تكريت,فرشت األقفاص بنشارة الخشب مع تبديل نشارة الخشب كل أسبوع مع ضبط درجة حرارة الغرفة بمقدار ±25 2 درجة مئوية,استخدمت لتغذية الحيوانات العليقة المتكونة من % 35 حنطة, 33 % ذرة صفراء, 21 % فول الصويا, 11 % بروتين حيواني, 1 % حليب مجفف مضافا 112

114 إليها % 1 من كل من الفيتامينات واألمالح المعدنية,وتم االحتفاظ بالفئران لمدة أسبوع واحد قبل التجربة للتكيف. تحضير المستخلص المائي للسماق: تم تحضير المستخلص المائي للسماق حسب ما ذكره }11{ وذلك بأخذ 51 غم من المسحوق الجاف من النبات بعد طحنه ووضعه في دورق زجاجي سعته 1111 مل يحتوي على 511 مل من الماء المقطر المعقم ثم وضع الدورق على سخان معدني مغناطيسي بدرجة 51 م وترك ليمتزج جيدا لمدة 24 ساعة بعدها رشح المحلول باستخدام طبقات عدة من الشاش الطبي اوال ثم باستخدام أوراق الترشيح, ترك الراشح في فرن كهربائي بدرجة 51 م الى ان جف ثم حفظ المسحوق الناتج بعد وزنه في الثالجة. تحديد الجرعة الفعالة: لغرض تحديد الجرعة األكثر تأثيرا للمستخلص المائي للسماق المستخدم في هذه الدراسة قسمت الحيوانات السليمة عشوائيا الى ست مجاميع ضمت كل مجموعه خمسة حيوانات ورتبت كاآلتي: المجموعة األولى:اعتبرت كمجموعة سيطرة Controlتم تجريعها بالماء المقطر والعليقة فمويا لمدة احد عشر يوما. المجموعة الثانية: أعطيت المستخلص المائي للسماق بتركيز 6125 ملغم /كغم من وزن الجسم فمويا لمدة احد عشر يوما ومثلت الجرعة تحت العالجية. المجموعة الثالثة: أعطيت المستخلص المائي للسماق بتركيز 21 ملغم /كغم من وزن الجسم فمويا لمدة احد عشر يوما ومثلت الجرعة العالجية. المجموعة الرابعة: أعطيت المستخلص المائي للسماق بتركيز 31 ملغم /كغم من وزن الجسم فمويا لمدة احد عشر يوما ومثلت الجرعة فوق العالجية

115 2. المجموعة الخامسة: أعطيت المستخلص المائي للسماق بتركيز 51 ملغم /كغم من وزن فمويا لمدة احد عشر يوما الجسم ومثلت الجرعة السامة. 2. المجموعة السادسة: اعطيت المستخلص المائي للسماق بتركيز 111 ملغم /كغم من وزن الجسم فمويا لمدة احد عشر يوما ومثلت الجرعة القاتلة. تشريح الحيوانات وعزل الDNA : نقلت الحيوانات الى عبوة مغلقة تحتوي على الكلوروفورم, بعد تخديرها بشكل تام شرحت للحصول على الكبد والكلى ثم غسلت هذه األنسجة بالمحلول الفسلجي Normal saline ونقلت الى المختبر لعزل ال DNA منها. استخلص الDNA من عينات الكبد والكلى باستخدام النتروجين السائل وحسب الطريقة التي ذكرها }11{, قدرت كمية الدنا ال DNA ونقاوته باالعتماد على قراءة االمتصاص لطيف األشعة فوق البنفسجية عند الطول الموجي 261 و 271 نانوميتر باستخدام جهاز,)Nanodrop( خففت العينات للحصول على تركيز )25 نانوغرام( لكل مايكروليتر وهو التركيز المناسب إلجراء تفاعالت تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال.(RAPD) تحضير تفاعالت الRAPD : أجريت تفاعالت تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال (RAPD) وفقآ لما ذكره }12{ استعمال بادئات عشوائية )جدول رقم 1( باستخدام العدة ( Master GoTaq )Green المجهزة من شركة USA(.)Promega, أجريت بعض التجارب األولية للوصول الى التركيز األمثل للبادئات المستخدمة والدنا القالب الذي يعطي أفضل نتيجة للتضاعف. لكل عينة من عينات الدراسة استخدمت انبوبة اختبار بحجم ml( 0.2( ووضع فيها ) 11 مايكرولتر( من خليط التفاعل األساسي الذي يحتوي على المكونات األساسية لتفاعل البلمرة المتسلسل ثم أضيف إليها الدنا القالب بتركيز ) 111 نانوغرام( 114

116 والبادئ بتركيز 11 بيكومول/ مايكرولتر ثم أكمل حجم التفاعل بالماء المقطر المعقم الى 21 مايكرولترومزجت مكونات التفاعل جيدا ثم وضعت األنابيب في جهاز ال Thermocycler بعناية إلنجاز التفاعل التضاعفي بعد أن تمت برمجته حسب البرنامج: دورة واحدة لمدة 5 دقائق على درجة حرارة 94 م للمسخ األولي لشريط الدنا تليها 41 دورة تضاعف تتضمن كل دورة دقيقة على درجة 94 م لمسخ القالب ودقيقة واحدة على درجة 36 م لربط البادئات بألدنا القالب ودقيقة واحدة على درجة حرارة 72 م لالستطالة مع دورة أخيرة لمدة 11 دقائق على درجة 72 م لالستطالة النهائية. حضر هالم األكاروز بتركيز %2 ثم أضيف )5 مايكروليتر من صبغة Red )Save قبل صب الهالم في حوض الترحيل, رحلت نواتج التضخيم على مع الدليل الحجمي Ladder( )DNA لمدة 91 دقيقة بمقدار )3 فولت/ سم( ثم فحص الهالم تحت األشعة فوق البنفسجية )UVLight( وصور باستخدام ( Gel.}13{ )Documentation System تسجيل نتائج الRAPD : سجلت نتائج تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال (RAPD) بفحص صور أنماط الترحيل الكهربائي لكل بادئ وتسجيل الحزم ( Bands )ثم مقارنة نتائج العينات المعاملة بالسماك مع مجموعة السيطرة باالعتماد على ظهور حزم جديدة او اختفاء حزم كانت موجودة باإلضافة الى االختالف في شدة تألق الحزم )Intensity( التي تنتج من ظهور بعض الحزم المتضاعفة معا" بنفس الوزن الجزيئي مما يؤدي الى ظهورها بشكل حزمة واحدة سميكة والتي قد تنتج من حالة homozygotsity اذ يتم فيها تضاعف نفس الموقع على االليل اآلخر وكونها بنفس الوزن الجزيئي تتجمع القطع المتضاعفة معا }14{ ثم حسب العدد الكلي لحزم ال RAPD التي اظهرها كل بادئ للعينات المدروسة وتحديد الحزم المتباينة (Polymorphic) والمتطابقة ( Monomorphic )كما تم حساب النسبة المئوية للحزم المتباينة, كفاءة البادئ والقوة التمييزية حسب ما ذكره }15{ لكل بادئ كما في الجدول )24(. 115

117 النتائج والمناقشة أجريت هذه الدراسة للكشف عن تأثير السماق على المادة الوراثية الدنا (DNA( للعينات المأخوذة من كبد وكلية لذكور الفئران البيض السويسرية باستخدام تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال ( RAPD ),اذ تم أعطاؤها السماق بتراكيز )6125,21,31,51,111 ملغم(ومقارنة نتائج تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال ( RAPD )للعينات المأخوذة من الحيوانات المعاملة بالسماق مع غير المعاملة )السيطرة(. تم الحصول على نتائج جيدة بعد إجراء بعض المحاوالت للوصول إلى الظروف المثلى وحللت نتائج تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال (RAPD) باالعتماد على ظهور حزم جديدة او اختفاء حزم كانت موجودة والناتجة من تضاعف قطع معينة من جينوم الحيوانات المستخدمة وعلى االختالف في شدة تألق الحزم.)Intensity( استخدم في هذه الدراسة اثنا عشر بادئا " عشوائيا " إلنجاز تقنية التضاعف العشوائي المتعدد االشكال (RAPD) والمبينة أسماؤها وتسلسالتها في الجدول رقم )1(, سبع منها أعطت نتائج تضاعف مختلفة بينما لم تعطي الخمسة األخرى اي نتيجة. جدول رقم ) 9 (:يبين التسلسل النكليوتيدي للبادئات : المستخدمة في تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال (RAPD) التسلسل النكليوتيدي 3 5 CTGAGACGGA ACCAGGTTGG GTTGGTGGCT ت اسم البادئ OP G05 OP H14 OP M01 116

118 GACAGGAGGT GTGTCTCAGG TCTGTCGGTC CCATTCCCCA CAGCATGGTC TCACCAGCCA GTCCTGGGTT AGAGCCGTCA GGGTGGGTAA OP O11 OP P04 OP Q02 OP R10 OP V20 OP U12 OP W17 OP Y07 OP Z بعض البادئات التي استخدمت لم ي عط أية نتيجة بالرغم من إعادتها أكثر من مرة وهذا قد يعود الى غياب المواقع المكملة لتسلسالت تلك البادئات ضمن جينوم الحيوان المستخدم, اما البادئات التي اعطت نتائج تضاعف مختلفة فتم تفسير نتيجة كل بادئ على حدة اعتمادا" على وجود او غياب حزم الدنا ( DNA )المتضاعفة, االختالف في الكثافة بين الحزم واالختالف في عددها وأوزانها الجزيئية باختالف البادئ المستخدم والناتجة من االختالف في عدد المواقع المكملة لذلك البادئ في جينوم كل عينة من العينات المعرضة لمعامالت السماق في هذه الدراسة وهذا يتفق مع أغلب الدراسات التي استخدمت تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPD لتقييم تأثير المواد على الدنا للكائن الحي المستخدم سواء اكان حيوانا ام نباتا وحتى البكتريا والفقارية.}18{,}17{,}16{ أظهرت صور الترحيل الكهربائي لنتائج تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال ( RAPD )اختالفا" واضحا" في عدد حزم الدنا )DNA) المتضاعفة وتباينا" واضحا" 117

119 في اوزانها الجزيئية حسب البادئ المستخدم حيث أعطت البادئات التي أظهرت نتائج 234 حزمة كعدد كلي كما في األشكال )7,6,5,4,3,2,1(. الشكل )9(: الترحيل الكهربائي لناتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR للبادئ 05G OP المرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي DNA Ladder bp) 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت( الشكل )6(: الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR للبادئ 14H OP المرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي DNA Ladder bp) 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت( 118

120 الشكل )1(: الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR للبادئM01 OP المرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي DNA Ladder bp) 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت(. الشكل )4(: الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR للبادئ 07Y OPالمرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي DNA Ladder bp) 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت(. الشكل )2(: الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR للبادئ 08Z OPالمرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي DNA Ladder 119

121 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, bp) 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت(. الشكل )2(: الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR للبادئ 01J OP المرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي DNA Ladder bp) 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت(. الشكل )9(: الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPD DNA المرحلة على هالم االكاروز %9.2 مع الدليل الحجمي OP 04P PCRللبادئ bp) Ladder 100) لعينات الكبد )9 سيطرة, 2,2,4,1,6 المعامالت(, الكلية )9 سيطرة, 96,99,90,1,9 المعامالت(. بينت نتائج تقنية التضاعف العشوائي لسلسة الدنا RAPDPCR اختالفات في عدد الحزم المتضاعفة اعتمدت طريقة تحليل نتائج الدراسة على وجود أو غياب الحزم الناتجة من تضاعف قطع معينة من جينوم العينات المستخدمة وعلى األوزان الجزيئية لتلك الحزم التي تعتمد على العدد والمواقع المكملة لتسلسالت البادئات على شريط DNAالقالب كما في الجدول رقم )2(. يعزى ظهور الحزم الجديدة إلى وجود مواقع oligonucleotide التي تصبح في متناول البادئ بعد التغيير الهيكلي أو ألن بعض 121

122 التغيرات في تسلسل الحمض النووي قد حدثت بسبب الطفرات )مما أدى إلى أحداث الصلب الجديدة( أو الحذف أو إعادة التركيب} 19 {. جدول) 6 (: يبين الحزم الجديدة والغائبة لنتائج لتقنية التعدد العشوائي لسلسة الدنا )RAPD( للبادئات التي أعطت نتائج: 121

123 كما اعتمدت طريقة تحليل نتائج الدراسة على التباين المعتمد على االختالفات في شدة ) (Intensity تألق الحزم التي تكون ناتجة عادة من ظهور بعض الحزم المتضاعفة معا في الوزن الجزيئي نفسه فتظهر على شكل حزمة سميكة واحدة ( في الحقيقة أكثر من حزمة bands) ( Comigrating قد تكون ناتجة من حالة homozygote حيث يتم فيها تضاعف نفس الموقع على االليل اآلخر, وبما أنها بالوزن الجزيئي نفسه لذلك تتجمع القطع المتضاعفة في تلك المواقع معا وأحيانا زيادة تركيز الدنا (DNA) القالب يؤدي إلى تكرار عدد نسخ DNA الهدف مما يؤدي الى تضاعف الموقع نفسه أكثر من مرة }14{ ان التغيرات في كثافة الحزم واختفائها قد يكون راجعا إلى التغيرات في مواقع oligonucleotide ويرجع ذلك أساسا إلى إعادة ترتيب الجينوم وقلة عرضة للطفرات أو تلف الحمض النووي في المواقع االرتباط }21{ بعد تسجيل نتائج تقنية التضاعف العشوائي المتعدد األشكال (RAPD) للبادئات التي أعطت نتائج تم تحديد العدد الكلي للحزم الناتجة والحزم المتباينة كما تم حساب النسبة المئوية للحزم المتباينة, كفاءة البادئ والقوة التمييزية حسب ما ذكره} 15 { لكل بادئ كما في الجدول )3(. ت جدول) 1 (: يبين البادئات التي أظهرت نتائج لتقنية التعدد العشوائي لسلسة الدنا متباينة مع عدد الحزم الكلية والمتباينة, كفاءة البادئ والقوة التمييزية )%( لكل بادئ: اسم البادئ عدد الحزم الكلية عدد الحزم المتباينة النسبة المئوية للحزم المتباينة كفاءة البادئ (%) القوة التمييزية للبادئ(%) OPG OP H OP M OP Y

124 OP Z OP J OP P المجموع الكلي 234 المصادر:. 1) Abere, T. A., Okoto, P. E., Agoreyo, F. O. (2010). Antidiarrhoea and toxicological evaluation of the leaf extract of DissotisrotundifoliaTriana (Melastomataceae). BMC Complement Altern. Med. 10: 71. 2) Lauk, L.; Caccamo, F.; Speciale, A. M.; Tempera, G.; Ragusa, S. and Pantle, G. (1998). Antibacterial activity of Rhuscoriaria L. leaf extract. Microbial Intst. Catania. Italy. 81: ) Duke, J. A.; Jobogenschutz, G. M.; Ducellier, J. and Duke, K. (2003). Handbook of Medical Plant. CRC press, Boca Raton : ecotoxicology. Toxicol. Ecotoxicol. News Rev., 3: ) Lowry LK (1995). Role of biomarkers of exposure in the assessment of health risks. Toxicol. Lett. 77: ) Abdelmigid, Hala M.(2009). Risk Assessment of Food Coloring Agents on DNA Damage Using RAPD Markers. The Open Biotechnology Journal,3, ) Atienzar FA, Cheung VV, Jha AN, Depledge MH (2001). Fitness parameters and DNA effects are sensitive indicators of copper induced toxicity in Daphnia magna. Toxicol. Sci. 59: ) Atienzar FA, Billinghurst Z, Depledge MH (2002c). 4nNonylphenol and 17β estradiol may induce common DNA effects in developing barnacle larvae. Env. Pollut. 120: ) Fontaine, C., Lovett, P.N., Sanou, H., Maley, J., Bouvet, J.M Genetic diversity of the shea tree (VitellariaparadoxaC.F. Gaertn), detected by RAPD and chloroplast microsatellite markers. Heredity, 93:

125 9) Dongre A.B. (2009). Optimization of RAPDPCR for discrimination of different strains of Bacillus thuringiensis. Romanian Biotechnological Letters Vol. 14, No. 2,pp ) Harborne, J.B., (1984). Phytochemical methods. London chapman and Hall ltd., pp ) Pearson, H. and Stirling, D.(2003). PCR protocols: method in molecular biology. 2nd edi. Vol 226. Human Press. 12) Williams, J. G., Kubelic, A. R., Livak, K. J., Rafalski, J. A. and Tingey, S. V. (1990). DNA polymorphisms amplified by aribitary primers are useful as genetic markers. nucleic acids Res. 18 : : ) Sambrook, J., and Russel, D.W., (2001). Molecular cloning, a laboratory manual (3ed). Cold spring Harbor laboratory press, New York. 94 (الحسني, خلود إبراهيم حسن استخدام المؤشرات الجزيئية المعتمدة على التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا في دراسة التنوع الوراثي للبطاطا.L Solanumtuberosum أطروحة دكتوراه. كلية العلوم. قسم علوم الحياة. جامعة بغداد.ع ص ) Megha. Y. J., Alagawadi, A. R. and Krishnaraj, P. U. (2007). Diversity of fluorescent pseudomonas isolated from the forest soils of the western Ghats of Uttara Kannada. CURRENT SCINCE, Vol 93: No: ) Atienzar FA, Cordi B, Donkin MB, Evenden AJ, Jha AN, Depledge MH(2000). Comparison of ultravioletinduced genotoxicity detected by random amplified polymorphic DNA with chlorophyll fluorescence and growth in a marine macroalgae, Palmaria palmate. Aquatic Toxicol. 50: ) Savva, D Use of DNA fingerprinting to detect genotoxic effects. Exotoxicol. Environ. Safety, 41: ) Savva D, DNA fingerprinting as a biomarker assay in ecotoxicology[jl. ToxicolEcotoxicol News Rev, 3: ) Atienzar F, Conradi M, Evenden A, Jha A, Depledge M (1999). Qualitative assessment of genotoxicity using RAPD: comparison of genomic template stability with key fitness parameters in Daphnia magna exposed to benzo(a)pyrene. Environ. Toxicol. Chem. 18: ) Nelson, J.R., C.W. Lawrence and D.C. Hinkle ThyminethymineNewton, C. R., and Graham, G. A. (1997). PCR. 2nd. Edition Introduction to biotechniques. Information press, Eynsham, Oxon, UK. 124

126 دراسة كيموحيوية عن قابلية اللنب احملضر بواسطة بكرتيا Lactobacillus acidophilus في الوقاية من االسهال احملدث بطفيلي البويغات اخلبيئة Cryptosporidium parvam يف ذكور األرانب A biochemical study on capability of milk that prepared by lactobacillus acidophilus to the prevention of diarrhea induced by Cryptosporidium parvam in male rabbits م.م. ميسون مصطفى جاسم كلية التربية للعلوم الصرفة / جامعة تكريت ا.د. توفيق ابراهيم االلوسي كلية الطب البيطري / جامعة تكريت أ. د. عبدهللا حسين عبدهللا كلية التربية للعلوم الصرفة / جامعة تكريت Assit. lec. Maysoon Mustapha Jasim Education collage for pure science Proff. Dr Abdullah Hussain Abdulla Proff. Dr. Tawfeeq Ibraheem AlAlusii Education collage for pure science Veterinary collage الخالصة اجريت الدراسة للمدة من شهر نيسان 2116 لغايه اذار, 2117 وقد تضمنت دراسة قابلية اللبن الالكتيكي المحضر بواسطة Lactobacilli acidophillus 125

127 )البروبايوتك( في الوقاية من طفيلي البويغات الخبيئة Cryptosporidium parvam المسبب لإلسهال, وذلك باالعتماد على عدة معايير شملت الكفاءة العالجية وبعض المعايير الكيموحيوية شملت البروتين الكلي, االلبومين, الكلوبيولين, الكالسيوم,الحديد وانزيمات الكبد GPT وGOT, وقد اظهرت الدراسة قدرة البروبايوتك في منع االصابة بطفيلي الكربتوسبورديوم اذ وصل عدد اكياس البيض في اليوم الخامس بعد التجريع في مجموعة السيطرة الى 7411 كيس/بيض, في حين كان العدد في المجموعة الممنعة بالمعزز الحيوي لمده اربعة عشر يوم 1 كيس /بيض, وفيما يخص االختبارات الكيموحيوية نرى ارتفاع مستوى البروتين الكلي وااللبومين والكلوبيولين في االرانب الممنعة بالمعزز الحيوي مقارنة بالسيطرة, فقد بلغوا 31316, و ملغم/ديسلتر,وعدم تأثر النسب بالتخميج بالطفيلي بعد التمنيع.فضال عن انخفاض مستوى انزيمي الكبد GPTوGOT في االرانب الممنعة بالمعزز الحيوي مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة والموجبة اذ بلغا و وحدة / لتر على التوالي, وعدم اختالف هذين المستويين معنويا عن مجموعة االرانب التي خمجت بعد التمنيع. اما فيما يخص الكالسيوم والحديد فنرى ارتفاع واضح في مستواهما في مجموعة االرانب الممنعة بالمعزز الحيوي مقارنة بالسيطرة السالبة والموجبة ليصل الى و ملغم/ ديسلتر على التوالي. كلمات المفتاح : parvam,cryptosporidium المعزز الحيوي. البروبايوتك. Abstract: A study was done from April 2016 to March 2017, it was included the study of lactic milk capability that prepared by lactobacillus acidophilus to prevention from Cryptosporidium parvam which causing a diarrhea, based on several parameters including, therapeutic efficiency and some biochemical parameters such as, the total protein, albumin, globulin, calcium, iron, and hepatic enzymes ( GOT, GPT). The study showed the capability of probiotic to prevent the infection by Cryptosporidium parvam, so the number of egg sacs at the fifth day after the dosage in the control group was reached to 7400 sac/egg, while in immunized group with biopromoted for 14 days was 0 sac/egg. As regarding to biochemical parameters, we noticed that the total protein, albumin, and globulin levels in immunized rabbits was high compared with control 126

128 group, it were reached to 5.820, 3.316, mg/dl respectively, and the proportions were not affected with parasite infections after immunize.as well as, There was a decrease in levels of hepatic enzymes (GOT,GPT) in immunized rabbits, 29.04, unit/ L respectively,compared to negative or positive control group. These two levels didn t different significantly from rabbits group that infected after immunized.as for calcium and iron, we noticed a clear increasing in their levels in immunized rabbits group, it reached to , mg/dl respectively, compared to negative and positive control. Key words : Cryptosporidium parvam, biopromoted, probiotic المقدمة داء البويغات الخبيئة cryptosporidiasis هو الم رض الحيواني الم صدر الم سبب لإلسهال البشري األكثر شيوعا ]1[ اذ يعد هذا الداء الثاني ب عد فيروس الروتا rotavirus في أسباب الوفاة عالميا بين األطفال دون سن الثانية حيث يسبب إ سهال من معتدل إ لى ش ديد ]2[ ويتسبب في 115 مليون حالة وفاه سنويا ]3[. على الر غم من إ كتشاف ط فيلي األ بواغ عام 1917 من قبل العالم Tyzzer إال أنه لم ي كتشف كم سبب للعدوى للبشر إال في عام 1976 وفي عام 2114 تمت إ ضافه هذا الطفيل )كربتوسبوريديوم ) لمنظمه الصحة العالمية "لمبادرة األمراض المهملة" neglected diseases Initiative والتي تشمل األ مراض التي تؤثر على الناس ب شكل رئيسي في الدول النامية ]4[. ي مر الطفيلي بدورة حياة معقدة وبإمكان اإل نسان أو الحيوان الم خمج ط رح الماليين من أكياس البيض في البراز وعلى الرغم من أن أكياس البيض غير قادرة على التكاثر خارج الم ضيف إال أنها قادرة على البقاء على ق يد الحياة في البيئة لعدة شهور ومقاومة أشكال التطهير ب ما في ذلك الكلور] 5 [ كما أن انتقال وانتشار الخ مج يرتبط باألخص مع األشخاص الذين لديهم اتصال م تكرر مع الحيوانات واستخدام ر وث الح يوانات وغائط اإلنسان كأسمدة عضوية ]6[. إذ يحتوي كيس البيض الخ مج infective oocyst أربع بويغات sporozoites ت طرح مع البراز لتنشر الخ مج وع ند تناولها من ق بل 127

129 الم ضيف فأن كيس البيض ي حرر 4 من البويغات التي تتماسك مع الخاليا الظهارية الس طحية للمعدة, األمعاء الدقيقة والقولون] 7 [. ث بت علميا إن االستخدام الم فرط والمستمر للم ضادات الج رثومية يؤدي إ لى ظ هور عتر جرثومية مقاومة لها لذلك تم االتجاه ن حو ايجاد طرائق أخرى بديلة عن الم ضادات الح يوية والتي ت ستخدم بصورة عالجية أو وقائية أو م حفزات للنمو وخاصة بالنسبة للمرضى الذين يرغبون في استخدام طرق طبيعية وآمنة في الع الج ]8[. لذا ش هدت الس نوات األخيرة توجها واسعا الستعمال أنواع من بكتريا حامض اللبنيك المعزولة من مصادر ب شرية وحيوانية كم عززات حيوية,(probiotic) وظ هور جيل ج ديد من هذه الم عززات الحيوية س واء باألشكال الص يدالنية المعروفة أو على شكل م نتجات غذائية عالجية في بلدان كثيرة في أوروبا وأمريكا الشمالية والش رق األقصى ومحاولة استعمالها في حل الكثير من المشاكل ذات العالقة بالغ ذاء وصحة المستهلك ]9[ من هنا جاءت أهداف هذه الدراسة والتي تتضمن : ع زل وتشخيص طفيلي Cryptosporidum Parvum من العجول المصابة باإلسهال. عزل وتشخيص بكتريا حامض اللبنيك Lactobacillus acidophilus من اللبن ومن ثم تحضير اللبن الالكتيكي من هذه البكتريا كمعزز حيوي)بروبايوتك(. د راسة تأثير الطفيلي وتأثير اللبن المحضر من L.acidophilus على طفيلي C.parvam بعض المعايير الكيموحيوية : البروتين الكلي, االلبومين, الكلوبيولين, الكالسيوم,الحديد وإنزيمات الكبد GPT وGOT. طرائق العمل تحضير المحاليل والدواريء والصبغات ص بغة الكاربول فوكسين القاعديه وجضرت حسب ]11[, ص بغة الم الكيت الخضراء, المحلول السكروز المشبع وحضر حسب ]11[,ومحلول داريء الفوسفات PBS حسب ]12[, م حلول ماكفرالند ح سب ما ورد في ]13[, محلول ثابت العكورة القياسي ]13[, و سط تخمر السكريات ]14[,وسط ]15[. MRSCaCO3 عينة الطفيلي تم جمع عينات الطفيل Cryptosporidium parvam من روث العجول الم صابة باإل سهال م ن )قرية س مره وق ضاء العلم ) بتاريخ 1/4/2116, وقد تم تشخيص الطفيلي حسب طريقه ]16[, وكذلك بطريقه التطويف بالمحلول السكري حسب ]17[,وتم ع زل الطفيلي وج مع أ كياس البيض حسب ]18[, وتم تحديد جرعه الحقن عن طريق حساب عدد االكياس وتحديد جرعة الحقن عن طريق حساب عدد االكياس في كمية 115 مل وحدد الجرعة بمقدار كيس لكل ارنب يتم تجريعه 128

130 فمويا, وتم التحري عن اكياس الطفيلي في براز االرانب المصابة يوميا بعد التخميج للتأكد من حدوث االصابة بالطفيلي عن طريق تحضير عدة مسحات من براز االرانب المصابة على شريحة زجاجية وفحصها تحت المجهر ومشاهدة االكياس وحسابها باستخدام طريقة التطويف بالمحلول السكري. وزرعها على وسط Lactobacillus acidophilus عينة البكتريا تم عزل بكتريا MRS( ) حسب طريقة ]19[ ء, وتم دراسة الصفات المظهرية للمستعمرات وإجراء االختبارات المزرعية والبايوكيميائية للبكتريا للتأكد من الصفات التي تمكنها من استخدامها كمعزز حيوي )بروبايوتك(. الصفات الزرعية Cultural Characters استخدمت طريقة التخطيط Striking لتلقيح النماذج البكتيرية على االوساط االنتقائية لها ثم حضنت األطباق عند درجة 37 م لمدة )18 24( ساعة. فحص الكاتليز نميت العزالت في وسط MRS السائل ثم نقلل 1 ملل منهلا إللى أنبوبلة اختبلار معقملة )%11 H2O2 ح/ح( وللوحظ ظهلور ملل ملن بيروكسليد الهيلدروجين وأضليف 1 الفقاعات. فحص تكوين األمونيا من اآلرجنين أضيف %113 من Argenine monohydrochloride إلى وسط MRS السائل وعقم بالموصدة في درجة حرارة 121 م لمدة 21 دقيقة ثم لقح بالعزالت وحضن لمدة 7 أيام في درجة حرارة 37 م ثم اخذ 1 مل من الوسط الملقح ووضع في أنبوبة اختبار وأضيف إليه 1 مل من كاشف نسلر ولوحظ تغير اللون. اختباار ت خمار الكاربوهيادرات Sugars fermentation :test ت م ز رع العزلة وتنميتها ب عد أ ن تم إ ستبدال المصدر الكاربوني م ن وسط تخمر السكريات بإحدى السكريات األتية :,Glucose,Galactose, Fructose Maltose,, Lactose Ribose, Raffinose و Saccharose وبنسبة %1 وكانت اإلضافة للسكريات ب عد ت عقيم الو سط األساسي بالمؤصدة إذ ت م ت عقيم السكريات باستخدام أوراق الترشيح Millipor حجم 0.22 ملم ث م ح ضنت العزالت المزروعة لم دة 4824 ساعة. وكان االستدالل على ايجابية التخمر م ن خ الل تغير 129

131 اللون إلى األصفر, ب عد الحصول على العزالت ت م تعليمها للتعرف عليها أثناء استخدامها في االختبارات الالحقة. اختبار قابلية االلتصاق لعزالت ج راثيم Lactobacillus أ جري هذا االختبار حسب ]21[ كاألتي: أخ ذ جزء م ن أمعاء الحيوان وفي الدراسة الحالية استخدمت األرانب المختبرية وتحت ظروف معقمة فتحت األمعاء وغسلت مرتين بواسطة 111 مل م ن محلول الداريء الفوسفاتي (PBS) ذي األس الهايدروجيني, 712 قشطت بطانة األمعاء بواسطة شريحة زجاجية نظيفة ومعقمة ثم علق ب 11 مل م ن محلول الداريء الفوسفاتي. تحضير 11 مل من مستزرع جراثيم Lactobacillu sacidophilus على وسط MRSالسائل ثم رسبت الخاليا الجرثومية بوساطة جهاز المنبذة وبسرعة 2511 دورة/دقيقة ولمدة 11 دقائق, فصل السائل الطافي عن راسب الخاليا الجرثومية وأ كمل الحجم نفسه بمحلول الداريء الفوسفاتي. أ خذ 114 مل من عالق الخاليا الطالئية ويضاف الى 111 مل من العالق الجرثومي ثم وضع في حمام مائي هزاز لمدة 31 دقيقة وبدرجة حرارة 35 م وبسرعة 21 دورة/دقيقة, بعد فترة الحضن أخذت قطرات وتوضع على شريحة زجاجية وتصبغ باستعمال صبغة كرام او صبغة كمزا وتفحص لتحديد االلتصاقية, تأخذ الخاليا الجرثومية اللون البنفسجي بينما تبدو الخاليا الطالئية باألحمر. بعد اجراء الفحوصات المزرعية تم عد البكتريا من خالل استعمال طريقة أنابيب ماكفيرالند وكما مشار في ]13[ وحفظت البكتريا المعزولة بوسط (MRS) بالتجميد كما جاء في ]21[, ومن ثم تحضير اللبن الالكتيكي من البكتريا المعزولة وحسب طريقة ]22[ وقد اعطي اللبن الالكتيكي عن طريق زرقه في الفم مباشره بواسطه محقنه خاصه اعدت لهذا الغرض بواقع مللتر منه مرتان يوميا. الحيوانات المختبرية استعملت في هذه الدراسة ذكور األ رانب النيوزلندية البيضاء البال غة والتي ت م الحصول عليها م ن )مركز البحوث/ اربيل(, تتراوح اعمارها بين )1811( شهرا وذات اوزان ) (غم, حيث وضعت الحيوانات في أ قفاص حديدية وفرشت األ رضية بنشارة الخ شب, مع مراعاة النظافة اليومية لألقفاص وتبديل نشارة الخشب باإلضافة إ لى ت عقيم األ قفاص بالمطهرات كل يومين, كما غ ذيت الحيوانات بالعليقة الجاهزة باإلضافة إلى تزويدها بالماء طوال ف ترة الدراسة. 131

132 للعلوم الصرفة االطروحة تصميم التجربة أستعمل فيها 21 ارنبا, قسمت الى المجاميع التالية : تركت هذه المجموعة المجموعة االولى السيطرة ) Cve Control group ( دون معاملة. هذه استخدمت Infection group الخمج (C+ve) الثانية _ المجموعة طفيلي بأكياس اإلسهال وتطور حالة اإلصابة المجموعة لمالحظة تأثيرات.Cryptosporidium أستخدم المعزز الحيوي المحضر لتجريع حيوانات هذه المجموعة. المجموعة الثالثة أستمر اإلعطاء الفموي للحيوانات لفترة 14 يوما وبمقدار 1 مللتر كل 12 ساعه, تم مل Cryptosporidium. بجرعة مقدارها 115 بعدها إعطاء اكياس طفيلي وبأعداد خليه / مل ثم المراقبة وتحليل البراز لفترة 5 أيام لمتابعة حدوث المرض أو عدمه. و تم متابعة ومراقبة مجاميع الحيوانات خالل فترة المعاملة وذلك, بالفحص او المعاينة للتغييرات في كل من: الحالة العامة للحيوان, طبيعة الشهية طبيعة البراز, معدل الحرارة, ومقارنة ذلك مع المعدالت الطبيعية المشار اليها في ]23[.وحساب عدد اكياس البيض المطروحة كل 24 ساعة ع دد أ كياس البيوض في الحجرتين 211 عدد أكياس الب يض في الغرام = و زن نموذج الب راز وبما أن و زن النموذج هو 1,2 غم فأن ع دد أ كياس البيض 111, طريقة الحيوانات بوساطة خدرت ]24[ الم حورة. وبعد انتهاء المدة المحددة للتجربة الكلوروفورم, ثم سحبت عينات الدم من القلب مباشرة بطريقة الطعنة القلبية ألجراء الفحوصات الدموية والمناعية. المعايير المستخدمة في الدراسة : تم تقدير تركيز البروتين الكلي واأللبومين في مصل الدم باستعمال عدة التحليل BIOLABO SA,France الخاصة بكل منهما, و تم Kit الخاصة بشركة احتساب تركيز الكلوبيولين في مصل الدم من خالل الفرق بين البروتين الكلي وااللبومين, وكما جاء في] 25 [.و تم تقدير تركيز الكالسيوم في مصل الدم باستعمال عدة التحليل Kit الخاصة بشركة.Specam Ispanian كما تم تقدير مستوى الحديد في مصل الدم باستعمال الطريقة اللونية Colorimetric method with ferene وباستعمال Kit مجهز من قبل شركة Giesse االيطالية, كذلك و تم قياس 131

133 األنزيمات GPTو GOT باستخدام العدة الجاهزة.(Tietz,2005) وكما جاء في Randox,Randox الم نتجة م ن شركة اجراء التحليل االحصائي النتائج والمناقشة : تشخيص الطفيلي ت م تشخيص الط فيل بصبغة الزيل نلسن المحورة ح يث ظهرت أكياس البيض كروية الشكل حمراء وبراقة متميزة ع ن الخلفية الخضراء ذات السايتوبالزم الحبيبي ويضم 64 م ن البويغات. تشخيص البكتريا وق د بدت م ستعمرات جراثيم Lactobacilli م حدبة دائرية بلون أ خضر ب سبب وجود الص بغة Bromo Cresol Green في محتويات الو سط المحور وحواف م نتظمة وكان ذلك ما أشارت ]26[ أن Lactobacillus من أ هم األ حياء المجهرية الم ستعملة في البروبايتك حيث تساهم ب شكل فعال في التوازن المثالي لأل حياء المجهرية المكونة للفلورا الم عوية في القناة اله ضمية وهي أ حد أ نواع بكتريا الع صيات اللبنية وتلتصق الع صيات بالطبقة الطالئية المبطنة للقناة اله ضمية ول هذا فهي تستوطن القناة اله ضمية ]27[, أ بدت بكتريا L.acidophillus ن تيجة سالبة لهذا الف حص والتي ت تفق م ع دراسة ]28[ في كون الن وع Lactobacillus سالبة ل هذا االختبار بسبب عدم قابليتها على إنتاج أنزيم البيروكسيديز Peroxidase الذي ي عمل على ت حليل جزيئة بيروكسيد لهيدروجين H2O2 مكونا الماء H2O وغاز األوكسجين O2 الذي ي ظهر على شكل ف قاعات م عطيا نتيجة موجبة للف حص. ول م يعط اختبار إنتاج األمونيا م ن األرجنين ن تيجة موجبة ع ند تعريض Lactobacillus. على تحليل األرجنين وجاءت نتائجنا م طابقة لنتائج ]29[. اما اختبار الكاربوهيدرات فقد اعطت جميع السكريات المستعملة نتيجة موجبة ماعدا سكر الرافينوز والرايبوز أعطت نتيجة سالبة. وقد أبدت العزلة قابلية عالية لاللتصاق م ن خ الل الزيادة الك بيرة في أعداد الج راثيم الم لتصقة بالخاليا الطالئية. إن الم ركب الم سؤول ع ن التصاق جراثيم L.acidophilus هو بروتين الطبقة Slayer S protein المتداخل في ج دار الخلية الجرثومية والذي يشترك م عها في االلتصاق بالمستقبالت الموجودة على جدران الخ لية الطالئية التي تتألف أساسا م ن سكر المانوز.]31[ إن وجود هذه الطبقة البروتينية واحتوائها ع لى البروتينات السكرية glycoproteins والتي تتألف م ن 119 %114 كاربوهيدرات و %3 م ن األحماض األمينية الكارهة للماء ي جعلها تقوم بدور اساسي في ع ملية االلتصاق ]31[. 132

134 133 الدراسة التجريبية: الع المات الس ريرية Clinical Signs ظ هرت اإلصابة التجريبية في الم جاميع الح يوانية ( م جموعة الخ مج( ب بدء ظ هور العالمات الس ريرية التي تالحظ م ن خ الل التغيرات في ش هية الحيوان وحالته العامة وط بيعة الب راز وقد كانت ن تائج العالمات السريرية واضحة جدا ع ند مجموعة الخ مج المعطاة جرعة م ن أ كياس طفيلي الكربتوسبوريديوم ف قد لوحظ ت دهورا في حالتها الصحية وخمولها وبطئ حركتها ولم ت ظهر عالمة سريرية م ميزة في الم جاميع الم منعة مسبقا بالم عزز الحيوي وكذلك الحال في ح يوانات مجاميع الس يطرة. لوحظ انخفاض في ش هية ح يوانات الخ مج تدريجيا, ب ينما زادت الش هية لم جاميع الو قاية وق د أكد ]32[ إن استخدام الم عززات الح يوية في تصنيع العلف ي عمل على زيادة شهية الحيوانات الح قلية, كما الحظ الباحث ]33[ زيادة في شهية األرانب الم منعة بجراثيم العصيات اللبنية الم حبة للحموضة. أظهرت نتائج فحص ط بيعة البراز بالعين الم جردة لمجموعة الخ مج في األيام األولى ت غيير حالته م ن الصلبة إ لى أكثر ليونة ث م ع ند تطور اإل صابة كان يبدو البراز سائال دليال على حدوث اإل سهال بشكل قاسي م ما يشير إ لى شدة ضراوة الطفيلي. ولوح ظ في أحد الحيوانات تدهور حالتها الصحية ونفوقها. ع ند قياس الدرجات الحرارية لحيوانات التجربة لوحظ ارتفاع واضح منذ اليوم الثالث م ن التجربة في م جموعة الخ مج إذ بلغ 3914 مº مقارنة باليوم األول الذي كانت فيه ج ميع المجاميع ذات د رجات حرارية تتراوح ب ين م, واستمر االرتفاع في حيوانات مجموعة الخ مج.ولوح ظ خمول وهدوء وبطئ في ح ركة حيوانات مجموعة الخ مج وي عد ذل ك عالمة مرضية ]34[. نتائج دراسة الت منيع بواسطة المعزز الحيوي على م عدل طرح أ كياس بيض طفيل الكربتوسبوريديوم في األرانب: ول م يالحظ ظهور العالمات الس ريرية لإلصابة بالمرض في مجموعة الوقاية جدول )1( على الرغم م ن تجريعها فمويا الجرعة الخمجية م ن أ كياس طفيلي الكربتوسبوريديوم ويدل ذل ك على إن استخدام الم عزز الحيوي الم حضر بواس طة بكتريا L.acidophilus للو قاية م ن اإلصابة كان ذا أثر فعال في منع أ كياس الطفيلي م ن إحداث المرض حيث نالحظ ع دد األ كياس المطروحة في اليوم األ ول ب عد التجريع يصل إ لى 681 كيس/ بيض ويبدأ الع دد باإلخفاض والتالشي وإن هذا الفعل الوقائي قد يكون سببه منع هذه الجراثيم م ن االلتصاق بالخاليا الطالئية المبطنة لألمعاء ]35[ م ن خ الل غ لق مناطق المستقبالت الموجودة في بطانة األمعاء وهذا الفعل ي عود للخاليا الحية م ن جراثيم LBA وهي إحدى آليات االستبعاد التنافسي ]36[. أو نتيجة فعل حامضي اللبنيك والخليك اللذين يع دان المنت ج الرئيس لهذه البكتريا,وأيضا قد ي عود الفعل الوقائي إ لى قدرة جراثيم LBA على تقوية النبيت المعوي مما

135 يؤدي إ لى زيادة المقاومة لألمراض ]37[, وإ لى قابليتها على توفير بيئة داخلية غير م الئمة لنمو الم سببات المرضية م ن خال ل تقليلها لألس الهايدروجيني فتجعل الوسط حامضيا وغير مالئم لنمو األ حياء الم رضية ]38[ أو ل مجموع العوامل أعاله متآزرة.وأن هذه الدراسة مشابهة لدراسة ]39[ وقد أ ثبت م ن خ الل دراسة تأثير الل بن الالكتيكي الم حضر ب واسطة بكتريا.L casei والم نتجة للبكتريوسين على اإلصابة بطفيلي األميبا الحالة للنسيج في الفئران الب يضاء, أن ل هذا اللبن تأثير إيجابي في جعل البيئة الم عوية قادرة على مقاومة اإلصابة ب هذا الطفيلي. جدول )9( أثر الت منيع بالم عزز الحيوي على معدل طرح أ كياس البيض في األرانب الكفاءة % الكفاءة % الكفاءة % الكفاءة % الكفاءة % عدد أكياس البيض بعد التجريع في اليوم االول للعالج عدد أكياس البيض بعد التجريع في اليوم الثاني للعالج عدد أكياس البيض بعد التجريع في اليوم الثالث للعالج عدد أكياس البيض بعد التجريع في اليوم الرابع للعالج عدد أكياس البيض بعد التجريع في اليوم الخامس للعالج 111 % 11 b 7411 a 111 % 41 b 7121 a 9711 % 141 b 4821 a % 361 b 8861 a 9111 % 681 b 8621 a المعزز الحيوي السيطرة الموجبة االحرف المختلفة في العمود الواحد تعني وجود فروقات معنوية عند مستوى االحتمالية 0.02 كما ي جب أ ن نذكر أن أ كياس طفيلي c.parvum تتحفز بالبيئة القاعدية لتجويف األمعاء الد قيقة ليتحلل جدارها بفعل انزيم التربسين Trypsin وت حدث عملية اإلفالت م ن الكيس Excystation كأول خطوة إلمكانيتها إ حداث اإلصابة والتي ت نتهي بالتضاعف في خبايا الطبقة المخاطية لألمعاء الغليظة وحدوث التفاعل األيضي مع البكتريا المعوية ]41[, وباإل ضافة لهذه الحقيقة وكما هو معلوم أن بكتريا Lactobacilli تنتج أنواع م تعدد م ن األ حماض العضوية التي ترفع م ن مستوى حموضة األمعاء.]41[ Intestinal ph والذي يمكن أن يفسر عدم ت حقق اإلصابة بالطفيلي ل عدم توفر البيئة المالئمة إلفالت األكياس الرباعية, كما أن لبكتريا Lactobacilli والم نتجة للبكتريوسين خاصة دورا في ت عزيز الجانب المناعي للم ضيف, فقد أشار ]42[ إ لى قدرة بكتريا الم عززات

136 135 الحيوية Probiotic bacteria وخصوصا الجنس Lactobaclli على أستحثاث إ نتاج السايتوكينات Cytokines والكيموكينات Chemokines م ن الخاليا الطالئية لألمعاء في الفئران وبما أن هذه السايتوكينات والكيموكينات مرتبطة باالستجابة المناعية للم ضيف فبالتالي ستؤدي إ لى تحسنها وزيادتها م ما يعني زيادة مقاومة األ نسجة المعوية أل غلب الم مرضات التي تهاجمها. 9 اثر التمنيع في تقدير تركيز البروتين الكلي يبدو م ن قياس نسبة البروتين الكلي جدول )2( في مجاميع الحيوانات ق يد الدراسة إرتفاعا معنويا في مجموعة األرانب الممنعه بالم عزز الحيوي إذ بلغ المستوى في هذه الم جموعة ملغم/ دسيلتر مقارنة م ع قيمته في مجموعة السيطرة ملغم/ دسيلتر, ب ينما لم يكن هناك تغيرا معنويا في مستوى البروتين الكلي للمجموعة الممنعة مقارنة بالمجموعة الم خمجة ب عد التمنيع وبلغت ملغم/ ديسلتر, وكانت نتائج الدراسة الحالية مقاربة ل دراسة ]43[ إذ إرتفع مستوى البروتين الكلي في د م ذكور الجرذان الم جرعة فمويا بجراثيم,L.acidophilus ومع دراسة كل م ن ]31,44[ الذين أشارا إ لى إن إ عطاء جراثيم حامض اللبنيك ونواتجها يؤ دي إ لى ارتفاع معدل البروتين الكلي في م صل الدم. وقد ي عود السبب في ارتفاع معدل البروتين إلى إنتاج البروتين أحادي الخلية م ن الخاليا الجرثومية الذي يؤ دي إ لى زيادة البروتين الك لي فضال ع ن تأثير الفيتامينات التي تنتجها جراثيم حامض اللبنيك السيما حامض الفوليك Folic acid و مجموعة فيتامينات B التي يمكن أن ت سبب زيادة في هالفعاليات األيضية لتخليق األحماض األمينية ]25[. وقد أشارت بعض الدراسات الى ان بروتين اللبن الرائب اسهل هضما من مثيله في الحليب الطازج, وذلك بسبب عملية الهضم االولي للبروتين التي تقوم بها بكتريا حمض اللكتيك,ومما يؤكد صحة هذا االمر زيادة محتوى اللبن الرائب من االحماض االمينية الحرة, Free amino acids وخاصة البرولين والكاليسين, اذ وجد ان محتوى اللبن الرائب من هذه االحماض االمينية يتضاعف تباعا مع زيادة مدة التخزين المبرد, مما يعني ان االنزيمات الهاضمة للبروتين والببتيدات يتم افرازها من الخاليا البكتيرية ]45[. 1 أثر الت منيع في تقدير تركيز األلبومين وع ند استعراض نتائج قياس م عدل األلبومين في الجدول ( 2 ) لم يالحظ إرتفاع معنوي لقيمه في الم جموعة الم منعة بجرعة الم عزز الحيوي مقارنة ب مجموعة

137 السيطرة إذ بلغت قيم األلبومين ملغم/دسيلتر, مما شكل فرقا معنويا عن المجموعة المخمجة التي انخفض فيها مستوى االلبومين إ لى ملغم / ديسلتر, ولك ن نرى أن قيمه االلبومين لم تختلف معنويا في حاله إ عطاء جرعه م ن أ كياس طفيل الكربتوسبوريديوم ب عد التمنيع عن مجموعه األ رانب الممنعه اذ بلغت القيمة ملغم / ديسلتر وكما مبين إنها تختلف معنويا عن مجموعة األرانب المخمجة )السيطرة الموجبة(. وجاءت الدراسة الحالية مطابقة ل دراسة ]46[ التي تنص على عدم تغير قيم االلبومين معنويا في جميع م جاميع الحيوانات المعطاة فمويا م عززا حيويا فيه بكتريا حامض اللكتيك م قارنة مع حيوانات م جموعة السيطرة. وجاءت دراسة اخرى ]47[ تنص بانخفاض قيم األلبومين في مصول الفئران الم جرعة بالم عززات كألية تعويضية مع ارتفاع تركيز الكلوبيولين للمحافظة على الضغط األزموزي. جدول )6( أثر التمنيع بواسطة الم عزز الحيوي على مستوى البروتين الكلي واأللبومين والكلوبيولين في األرانب SD الكلوبيولين mg/dl ± ± ± ± ± mean b b a a SD االلبومين mg/dl ± ± ± ± ± mea n 3124 a b a a المتغيرات الكيموحيوية نوع المعاملة البروتين الكلي SD mg/dl ± ± ± ± ± mea n b c a a سيطرة مجموعة الخمج الوقاية بالمعزز التخميج بعد الوقاية االحرف المختلفة في العمود الواحد تعني وجود فروقات معنوية عند مستوى االحتمالية

138 2 اثر التمنيع في تقدير تركيز الكلوبيولين ويبين الجدول نفسه )2( ارتفاع في قيمه الكلوبيولين في مجموعة األ رانب الممنعة بالم عزز الحيوي وبلغت ملغم/ ديسلتر, مقارنه مع الحيوانات السيطرة السالبة والمخمجة التي بلغت و ملغم / ديسلتر على التوالي, ونرى ع دم اختالف النتيجه ب عد تخميج األرانب الممنعة مقارنة باألرانب الممنعة وكانت النتيجة ملغم/ ديسلتر.وهذه النتيجة اتفقت مع ]48[ الذي أ شار إ لى ارتفاع قيم الكلوبيولين في دم الكالب الممنعة ب, L.acidophilus إن الزيادة المعنوية في تركيز كل من البروتين الكلي والكلوبيولين في دم الحيوانات المختبرية المجرعة بخاليا حامض اللبنيك قد اتفقت معOyetayo ]49[ إذ وجدا في دراستهما ع ند إستخدام fermentum في الجرذان يؤ دي إ لى زيادة في مستوى البروتين الك لي والكلوبيولين وانخفاض األلبومين وربما ي عود سبب ارتفاع الكلوبيولين إ لى زيادة إنتاج األجسام الم ضادة بسبب تحفيز جهاز المناعة م ن ق بل جراثيم حامض اللبنيك وهذا ما أ شار إليهNwanze ]51[ م ن إن زيادة البروتين الكلي ي سبب زيادة نوعية في الكلوبيولين مع زيادة راشح الخاليا السيما الكلوبيلينات الم ناعية. كما س جلت الرفاعي ]47[ زيادة الكلوبيولين في الجرذان المعاملة بالم عزز الحيوي وقد ي عزى سبب الزيادة في تركيز الكلوبيولين إ لى التحفيز في الج هاز المناعي وإ نتاج األجسام الم ضادة إ ذ تعمل المعززات الحيوية على زيادة كاماكلوبيولين. 1 تأثير الت منيع على تركيز الكالسيوم يظهر م ن خ الل النظر إ لى الجدول )4( تركيز الكالسيوم والحديد, نالحظ وجود فروقات إحصائية على مستوى 1111 في قيم تراكيز الكالسيوم إذ انخفض تركيز الكالسيوم في مجموعة األ رانب المخمجة ليصل إ لى ملغم / ديسلتر مقارنه بمجموعة السيطرة التي بلغت ملغم / ديسلتر, أ ما تركيز الكالسيوم في مجموعة الحيوانات الم منعه والتي خ مجت ب عد التمنيع فإن تركيز الكالسيوم أرتفع معنويا مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة إذ بلغا و ملغم / ديسلتر على التوالي, وهذا مطابق تقريبا ل دراسة ]51[ والذي بين فيها ان البروبايوتك ( المعزز الحيوي ) ي عمل على تحسين بسيط ل سمك ق شرة الب يض المنتج م ن الطيور المعاملة بالبروبايوتك. وقد يكون سبب ذل ك إ لى قدرة بكتريا L.acidophilus على إ نتاج حامض اللبنيك وبالتالي ت حسين معامل امتصاص كل م ن الفسفور والكالسيوم والحديد في القناة الهضمية للطيور الم عاملة. ي عد اللبن الرائب م صدرا مميزا للكالسيوم, ونتيجة 137

139 النخفاض قيمة د رجة الحموضة ph في اللبن الرائب, ت تميز عناصر الكالسيوم والمغنيسيوم ب وجودها على الشكل األيوني الحر و غير المرتبط, م ما يحسن م ن امتصاصها واالستفادة م نها. كما تسهم زيادة الحموضة في م نع حمض الفايتيك م ن تثبيط أو تقليل امتصاص الكالسيوم, الذي يرتبط في الظروف العادية بالكالسيوم ويقلل م ن وفرته الحيوية وامتصاصه. كما أشارت ب عض الدراسات التي أجريت على الحيوانات إلى ت حسن الوفرة الحيوية للكالسيوم الم وجود في اللبن الرائب وزيادة امتصاصه واستعماله في بناء العظام بشكل أكبر مقارنة بالكالسيوم الموجود في الحليب غير الم خمر] 45 [. 4 تأثير الت منيع على تركيز الحديد ي بين الجدول )4( نتائج قيم الحديد في مصول مجاميع األ رانب حيث نالحظ وجود ارتفاع معنوي في قيمه الحديد في األ رانب التي جرعت فمويا بالمعزز الحيوي ل مدة أسبوعين إ ذ بلغت ملغم / ديسلتر مقارنة بمجموعة السيطرة التي تبلغ ملغم / ديسلتر, ونرى أن القيمة لم ت تغير في مجموعة األ رانب التي جرعت بالطفيلي ب عد الت منيع وبلغت ملغم / ديسلتر مقارنه لألرانب التي م نعت بالمعزز الحيوي, ولك نها ارتفعت مقارنة بالسيطرة السالبة, أ ما المجموعة المخمجة فإن قيمة الحديد انخفضت انخفاضا معنويا كبيرا بلغ ملغم / ديسلتر مشكلة ب ذلك فارقا احصائيا واضحا عن بقية المجاميع ب سبب وجود الطفيلي في األ معاء الذي يمنع امتصاص الحديد بصورة جيدة. جدول )4( أ ثر التمنيع بواسطة الم عزز الحيوي على تركيز الكالسيوم والحديد في مصول األ رانب المتغيرات الكيموحيوية الكالسيوم (mg/dl) الحديد (mg/dl) نوع المعاملة سيطرة مجموعة الخمج الوقاية بالمعزز التخميج بعد الوقاية SD ± ± ± ± ± mean b c a a SD ± ± ± ± ± mean b c a a االحرف المختلفة في العمود الواحد تعني وجود فروقات معنوية عند مستوى االحتمالية

140 139 إن الم عززات الحيوية الم حضرة ببكتريا Lactobacilli تساعد على تأ سيس أمعاء مسكونه باألحياء المفيدة والمضادة لألحياء المؤذية, إ ضافة إ لى ذل ك فإ ن بعض الجراثيم المستخدمة في الم عزز الحيوي تعمل على تحلل المادة الغذائية إ لى وحدات ص غيرة سهلة االمتصاص في الجسم وتفرز بعض األنزيمات والمواد المفيدة األخرى مثل البروتينات واألحماض األمينية. كما أن له األ ثر الفاعل في زيادة هضم وامتصاص العناصر الغذائية والم عدنية ]52[. 5 تأثير الت منيع على بعض أنزيمات الك بد : 9 قياس مستوى األنزيم Glutamic Oxaloacetic Transminase (GOT) يوضح الجدول ( 3 ) مستويات أنزيمات الكبد حيث لوحظ تأثير الت منيع بالم عزز الحيوي الم حظر بجراثيم حامض اللبنيك في وظائف الكبد م ن خ الل قياس مستوى هذه األنزيمات المتحررة إ لى دم الحيوانات الم منعة. حيث نالحظ أن أعلى مستوى وصل في هذه الم جاميع هو مجموعه الخ مج )السيطرة الموجبة( وصل إ لى وحدة/لتر, وهذا يدل على ف عالية الطفيلي وحدوث اإل لتهاب, في حين نرى إ نخفاضا ملحوظا وكبيرا في م جموعتي األ رانب الم منعة والمخمجة ب عد التمنيع وصل الى و وحدة / لتر م شكلة انخفاضا إحصائيا عن م جموعة الخ مج ومجموعة السيطرة السالبة التي تبلغ وحدة/ لتر, أن عدم ارتفاع المستوى ب عد تجريع الطفيلي لألرانب فمويا داللة على ع دم إ صابة األرانب بالخ مج, وهذه النتائج اتفقت مع السعدي ]26[ إ ذ الحظت انخفاضا في قيم أنزيمات الك بد GOT في الجرذان الممنعه ببكتريا حامض الالكتيك, ق د ي عود سبب انخفاض مستوى اإلنزيمات في الم جموعة المعاملة بالم عزز الحيوي إلى إن هذه الجرع تحتوي على نسبة ال بأس ب ها م ن البروتينات والسكريات الم تعددة إضافة إ لى الفيتامينات التي ت متلك تأثيرا م نشطا للكبد ودورا مهما في خفض قيم ف عالية هذه اإلنزيمات] 53 [. 6 قياس مستوى أنزيم Glutamic Pairophec Transminase(GPT) وحصلنا على نتائج مستوى انزيم الكبد GPT م شابهة إحصائيا لنتائج مستوى األنزيم, GOT إذ انخفض االنزيم GPT على مستوى إحصائي 1115 في مجموعتي األرانب الم منعة واأل رانب التي خ مجت ب عد التمنيع وصل المستوى إ لى و

141 18132 وحدة/ لتر على التوالي مقارنة ب مجموعة السيطرة السالبة التي وصل مستواه إ لى وحدة / لتر, أما مجموعة الخ مج ف شكلت أعلى مستوى ي صل إ ليه األنزيم في هذه المجاميع وكان وحدة / لتر, جدول )3(. جدول )1( أثر التمنيع بواسطة الم عزز الحيوي على مستوى انزيمات الكبد GOT و GPT في األرانب المتغيرات الكيموحيوية نوع المعاملة سيطرة مجموعة الخمج الوقاية بالمعزز التخميج بعد الوقاية GOTانزيم الكبد U / L SD ± mean SD GPTانزيم الكبد U / L ± ± ± ± ± mean b a c c ± ± ± ± b a c c االحرف المختلفة في العمود الواحد تعني وجود فروقات معنوية عند مستوى االحتمالية 0.02 وانطبقت نتائج الدراسة الحالية مع دراسة داود و ثلج ]46[ حيث سجال انخفاضا م عنويا واضحا في مستويات أنزيمي الكبد GOT و GPT في الجرذان الم عطاة فمويا نوعا م ن بكتريا حامض الالكتيك م ع ماء الشرب, ويمكن أن ي عزى س بب ذل ك إ لى دور أ نواع بكتريا حامض الالكتيك في ت حسين المؤشرات األ يضية في الكبد وم ن ثم ت حسين وظائفه م ن خ الل تحسين العمليات األ يضية, وهذه النتائج توافقت م ع ]54[ ت عد أنزيمات GOT وGPT م ن الدالئل الحساسة ل معظم األمراض الم تعلقة ب حالة الكبد الصحية كتلف أ و التهاب الكبد إذ إن زيادة إ فرازها في الدم ي عد مؤ شرا على حصول الخلل في خاليا الكبد. 141

142 المصادر : (1) Checkley W, White AC, Jaganath D, Arrowood MJ, Chalmers RM, Chen X,et al.(2015). A review of the global burden, novel diagnostics, therapeutics, and vaccine targets for cryptosporidium. Lancet Infect Dis;15: (2) Shirley,D.A.; Moonah, S.N.; Kotloff, K.L. (2012). Burden of disease from cryptosporidiosis. Curr Opin Infect Dis 25(5): (3) Nemes,Z.(2009). Diarrhea from the infectologist s point of view. Orv Hetil 150(8): (4) Speich B, Croll D, Furst T, Utzinger J, Keiser J.( 2016) Effect of sanitation and water treatment on intestinal protozoa infection: a systematic review and metaanalysis. Lancet Infect Dis;16: (5) Ehsan AM, Geurden T, Casaert S, Parvin SM, Islam TM,Ahmed UM, Levecke B, Vercruysse J, Claerebout E. (2015).Assessment of zoonotic transmission of Giardia and Cryptosporidium between cattle and humans in rural villagesin Bangladesh. PLoS One, 10(2), (6) Ya Yang, YiBiao Zhou*, PengLei Xiao, Yan Shi,( 2017) Prevalence of and risk factors associated with Cryptosporidium infection in an underdeveloped rural community of southwest China, Yang et al. Infectious Diseases of Poverty, DOI /s (7) Bowman, D.D., Lynn, R.C. and Eberhard, M.L. (2003). Georgis parasitology for veterinarians. 8 th. ed. Saunders, St. Louis, pp: (8) Maria Jose SaezLara; Carolina GomezLlorente; Julio Plaza Diaz; Angel Gil (2015). "The Role of Probiotic lactic acid bacteria and Bifidobacteria in the Prevention and Treatment of Inflammatory Bowel Disease and Other Related Diseases: A Systematic Review of Randomized Human Clinical Trials". Biomed Res Int (Systematic review). : 15. doi: /2015/ PMC PMID (9) Singhi SC, Kumar S (2016). "Probiotics in critically ill children.". F1000Res (Review). 5:407. doi: /f1000research PMC PMID (10) Baxby, D.; Blundell, N. and Hart, C.A. (1984): The development and performance of simple sensitive method for the detection of Cryptosporidium occysts infaces. J. Hyg. Camb., 192: (11) John, D. T. & Petri, J. W. A. ( 2006).Markell and Voge s Medical Parasitology.9ed. Chapter 14: examination of stool specimens. Saunders Elsevier

143 (12) Myers, R. L. (1995). Immunology A Laborotry Manual,2 nd Edition. Wm.C.Brown publishers. p 83. (13) Baron, E.J.; Peterson, L.R. and Finegold, S. M. (1994): Bailey and Scotts diagnostic Microbiology. 8 th ed. Mosby Year book. Inc. America (14) Harrigan, W.F. and McCance, M.F. (1979). Laporatory method in food and dairy microbiology. Academic press. London. )92( القصاب. عبدالجبار عمر قوجة. ( 9199(. التأثير المضاد لبكتريا حامض اللبنيك العضوية على بعض البكتريا المرضية, رسالة ماجستير, قسم الصناعات الغذائية, كلية الزراعة, جامعة بغداد. (16) Henriksen, S.A. and Pohlenz, J.F.J. (1981). Staining of Cryptosporidia by a modified ZiehlNeelsen Technique. Acta Vet. Scand. 22: (17) Anderson, B.C.(1981).Petterns of shedding of cryptosporidial oocyst in Indah calves.j.am.vet.med. Assoc.,178 (9): (18) Arrowood, M.J. and sterling, C.R.(1987). Isolation of Cryptosporidium oocyst and Sporozoite using discontinuous sucrose and isopoycnic percoll gradients.j.parasitol.,73: (19) Savage, D.C. (1984). Adherence of the normal flora in: attachment of organism to the gut mucosa.voll.boedeker, E.C.; Bocaraton crc press.pp (20) Fuller, R. (1975). Nature of the determenat responsible for adhesion of Lactobacillus to chicken crop epithelial cell Journal of general microbiology; 87(2): (21) Contreras, B.G.L.; Vuyst, L.; Devreese,B.; Busanyova,K.; Raymaeckers,J.; Bosman,F.; Sablon,E. and Vandamme,E.J. (1997). Isolation purification and aminoacids sequence of lactocin A, One of two bacteriocins produced by Lactobacillus amylovorus L, MG P Appl.environ.microbiol. 63(1):1320. )22( جندل, جاسم محمد )6009(. مبادئ االلبان. المكتبة الوطنية (23) Mohammed, F.K. (2000). Laboratory Guide in Toxicology, 1 st Ed, College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Mosul, Iraq. (24) Ghazal, A.M.(1974).Experimental epidemiology of dwarf tapeworm Hymenolepis nan var. fraterna fection in the mouse.ph.d. Thesis,Univ.Bristol. (25) Tietz, N. ed., (2005). Fundamentals of clinical chemistry. W.B. Saunders, Philadelphia. pp Lactobacillusنشأت acidophilus 2111( ), دراسة قابلية بكتريا زينب, ) السعدي 26 ) في الوقاية والعالج من إلتهاب األمعاء المحدث بال Bifidobacteriumو bifidum 142

144 في الجرذان, اطروحة دكتوراه, كلية التربية, جامعة تكريت Salmonella typhimurium,العراق. (27) Miles, R.D. and S.M. Bootwala. (2006). Directfeed Microbials in animal production "avian". PP., In: Direct fed Microbials in animal production A review of Literature. National feed ingredients Association. West Des Moines, IA. ) Bifidobacterium. تشخيص وانتقاء بكتريا )69( 002 نظام الدين, بهاء نظام عيسى العالجية الستخدامها في تصنيع مثلج قشدي. أطروحة دكتوراه. كلية الزراعة. جامعة بغداد. (21) Nawaf, M.G. (2005). The use of Lactobacillus acidophilus as a probiotic for the prevention and treatment of experimental rat enteritis.msc.th. College of medicine, Tikrit University. (30) Bernet, M.F.; Brassart, D.; Nooser, J.R. and sevin, A (2009). Cultured human intestinal cell lines and inhibits enterovirulent bacteria. Downloaded forom gut. Bmj. Com; 35: (31) Bezkorovainy, A. (2001). Probiotics: determinats of Survival and growth in the gut. J.C lin. Nut. 73(2): (32) Abas, I.; Kutwy, H.C.; Kagraman, R.; Toker, N.Y.; OZcelik, D.; Ates, F. and Kacalci,A. (2007).Effect of organic acids and bacterial directfed microbial on fatting performance of kivircik male yearling lambs.pakistan journal of nutrition ;6(2): ( ) محمد, محمد مجباس. )6009(. إستخدام العصيات اللبنية المحبة للحموضة 3 Lactobacillus acidophilus كمعزز حيوي للوقاية من الخمج بجرثومة Salmonella في األرانب. رسالة ماجستير, كلية الطب البيطري, جامعة القادسية. typhimurium (34) Apanavicius,C.J.;Powell,B.M.; Vester,B.M.; Lilienthal,L.K.; Po pe,l.l. ; Fastinger, N.D.; Walling,M.A.; Tappenden,K.A. and Swanson,K.S. (2007). Fructose supplemention and infection after food intake, fever and epithelial sloughing from salmonella challenge in weaning puppies. AJ.Nutr. 137: (35) Mack, D.R.; Ahrne, S.; Hyde, L.; Wei, S. and Holling_ Swarth, M.A. (2003). Exteacellular MVC3 nucin secretion follows adherence of lactobacillus strain to intestinal epithelial cell in vitro.gut. 52: (36) Pretzer,G.; Snel,J. ; Molenaar,D.; Wiersma,A. ; Bron,P.A. ; Lambert,J.; Devos,W.M.; Vandermeer,R.; Smits,M.A. and Kleerebezem,M. (2005). Biodiversitybased identification and functional characterization of the mannosespecific adhesion of Lactobacillus plantarum. Joumal of bacteriology. 187(17): (37) Stanton, C.; Gardiner, G.; Meehan, H.; Collins, K.; Fitzgerald, G.; Lyncg, P.B. and Ross, R.P. (2001). Market potential for probiotics. American Journal of clinical nutrition. 73(2):

145 (38) DeVuyst, L. and Leroy, K. (2007). Bacteriocins from lactic acid bacteria: Production, Purification, and food applications. J. Mol. Microbiol Biothehnon; 13: )11( نجرس, اسامة ناظم : محمود,اسماء عيسى : محمد,مروة جاسم )6099(, دراسة تأثير على اإلصابة Lactobacillusاللبن casei الالكتيكي المحضر بواسطة بكتريا في الفئران البيضاء, كلية العلوم التطبيقية. جامعة سامراء. Entamoebaبطفيلي histolytica العراق. (40) Kenner, B. M. and Rosen, T. A. (2006). Contaneous ameiasis in a child and review of the literature. Pediaty. J. Dermatol., 23(3): (41) Jens Walter (2015). Ecological Role of Lactobacilli in the Gastrointestinal Tract: Implications for Fundamental and Biomedical Research. Applied and Enviromental Microbiology.Vol(81), Issue(23). (42) Yujun Jianga,b.; Xuena Lüa; Chaoxin Manb; Linlin Hana; Yi Shanb; Xingguang Qua; Ying Liua; Shiqin Yanga; Yuqing Xuea and Yinghua Zhang.(2012).Lactobacillus acidophilus Induces Cytokine and Chemokine Production via NFκB and p38 Mitogen Activated Protein Kinase Signaling Pathways in Intestinal Epithelial Cells. Clin. Vaccine Immunol. vol. 19 (4): (43) Tsai, C.C.; Chen, M.; Liu, T.; Chau, C.G. and Tsen, H.Y. (2004). Evaluation of the toxicity of L.acidophilus LAP 5 in a 28day feeding study in Wistar rats. J. of food safety. 24: )44( العمري, أسعد جاسم عبد.) 6009 (. دراسة تأثير إستخدام المعزز الحيوي (Probiotic) كمحفز مناعي مع لقاح البروسيال Rev1 في الحمالن. رسالة ماجستير. كلية الطب البيطري. جامعة بغداد. )45( فارس,عزت )6094(. اللبن الرائب مستودع البكتريا النافعة.قسم التغذية.كلية الصيدلة والعلوم الطبية. جامعة البترا. االردن. )46( ثلج,كركز محمد و داود,فالح سلوم )6092( فعالية بعض انواع بكتيريا حامض الالكتيك في بعض المؤشرات الحيوية والسمنة في الجرذان, مجلة جامعة تكريت للعلوم الزراعية المجلد )16( العدد )1(. )47( الرفاعي,عهود مزاحم شاكر محمود (2009( مقارنة تشخيص طفيلي داء االبواغ الخبيئة بأستخدام اختبار االليزا وصبغة كاربول فوكسين مع محاولة الكشف عن تأثير بعض المستخلصات النباتية على الطفيلي.رسالة ماجستير. كلية التربية للبنات. جامعة تكريت. (48) Muhsen, R.K. (2007). The use of Lactobacillus acidophilus as a probiotic in the prevention and treatment of Salmonella 144

146 typhimurium infection in puppies'.ph.d. Thesis. College of Veterinary Medicine. University of Baghdad. (49) Oyetayo, V.O. and Oyetayo, F.L. (2005). Potential of probiotics as biotherabiotic agent targeting the innat immune system. African Journal of Biotechnology, 4(2): (50) Nwanze, P. I.; Khan, A. U.; Ameh, J. B. and Umoh. J. V. (2006). Nutritional studies with Lentinus squarrosulus (Mont) Singer and Psathyrella atroumbonata Pegler: I. Animal assay. Afri. J. Biotechnology.5 (5): (51) Haddadin, M.S.Y. ; Abdulrahim, S.; EHashlamoun and Robinson, R. (1996).The effect of Lactobacillus acidophilus on the production and chemical compostion of hens eggs. Poultry Sci.,75: (52) Semaskaite, A. and Gruzauskas,R. (2006) Effects of lactic acid bacteria,produced from strain Pediococcus acidil actic and prepiotic fructo oligo saccharides on growth performance and digestive processes of broiler chickens (53) Jia, Lin and Zhang, MeiHua. (2005). Comparison of Probiotics and lactulose in the treatment of minimal hepatic encephalopathy in rats. World J. Gastroenterol. 11(6): (54) Minellia, E.B. ; Beninia, A. ; Marzottob, M. ; Sbarbatic, A. ; Ruzzenented, O. ; Ferrarioe, R. ; Hendriksf, H. & Dellaglio, F. (2004). Assessment of novel probiotic Lactobacillus casei strains for the production of functional dairy foods. Inter. Dairy J. 14:

147 146

148 دراسة تأثري التلوث بعنصر الرصاص على البيئة الصحية يف قضائي بلد والدجيل Study of the effect of lead contamination on the healthy environment in the courts of Balad and Dujail الخالصة إياد إسماعيل كاظم أ.د. رياض عباس عبد الجبار جامعة تكريت \ كلية العلوم \ قسم علوم الحياة Ayad Ismail Kazem Prof. Riad Abbas Abed Al Jabbar University of Tikrit \ Faculty of Science \ Department of Life Sciences أجريت هذه الدراسة في قضائي بلد والدجيل التابعين لمحافظة صالح الدين لدراسة مستويات عنصر الرصاص في مصل الدم ألربعة فئات مختلفة من المجتمع هي )الفئة األولى العاملون في الصناعة لفترة التقل عن سبع سنوات, الفئة الثانية الفالحون الذين يعملون بتماس مع المبيدات واألسمدة الكيمياوية أكثر من عشر سنين, الفئة الثالثة الموظفون في المستشفيات بمختلف المهن الصحية ولديهم خدمة بالعمل أكثر من خمسة عشر سنة, الفئة الرابعة )المجموعة الضابطة(: طالب المدارس الذين تتراوح أعمارهم من )18_21( سنة(, حيث وجد اختالفات معنوية بين معدالت تركيز عنصر الرصاص في مصل الدم للفئات األربعة قيد الدراسة بحسب نتائج اختبار المتوسطات بطريقة دنكن المتعدد المدى, حيث بلغ متوسط تركيز الرصاص بين( µg\l ) 147

149 ( \µl ) ( \µl) Summary: This study was conducted in the district of Balad and Dujail in Saladin Governorate to study serum levels of serum lead in four different categories of the society (category I workers in the industry for at least seven years, the second category the peasants who work in contact with pesticides and chemical fertilizers more than ten Years, category III staff in hospitals with different health professions and who have a service for more than fifteen years, category 4 (control group): school students aged 1820 years. Significant differences were found between the concentration of serum lead in the four groups under study according to the results of the multimodal Duncan method. The mean lead concentration was between g /( L) A number of blood tests showed significant differences between the mean of the four groups under study. They were the number of white blood cells with an average number of ( \ L) and red blood cells with an average number between Introduction :

150 149 األ خرى, والبشرية المنشأ كالحروب والتفجيرات النووية وحوادث غرق الناقالت الضخمة المحملة بالوقود) 1 ( و) 2 ( 2 الرصاص الرصاص عنصر لي ن رصاصي او فضي اللون يذوب بدرجة ) (درجة مئوية شديد المقاومة للتآكل لكن ه يذوب في حامض النتريك والكبريتيك الحار حالة التكافؤ لمركبات الرصاص الغير عضوية هي)+ 2 ( ذوبانيته في الماء مختلفة إذ إن كبريتيد الرصاص وأكاسيد الرصاص قليلة الذوبان بالماء في حين النترات والكلورات وأمالح الكلوريد لها قابلية الذوبان في الماء البارد ) 3 (.وان الرصاص عنصر سام له استعماالت واسعة االنتشار وسميته تراكمية تؤثر في أجزاء عديدة في الجسم منها الجهاز العصبي, وأمراض الدم, والجهاز الهضمي, والقلب واألوعية الدموية, والجهاز الكلوي, ويمكن للرصاص أن يوجد بهيئة الرصاص المعدني واأليونات غير العضوية واألمالح )4(, وليس له أي وظيفة أساسية في حياة اإلنسان. ونتيجة للنشاط البشري الهائل أصبح للرصاص انتشار واسع في االستعمال وتمثل النشاط البشري بالتعدين وصهر الرصاص وتكريره وإعادة تدويره فضال عن استعمال البنزين المحتوي على الرصاص)الكازولين( وإنتاج بطاريات الرصاص الحامضية ومواد الطالءوصناعة المجوهرات واللحام والسيراميك والمخلفات اإللكترونية واستعمالها في أنابيب المياه واللحام ) 5 (.ويعد الرصاص من أكثر العناصر الثقيلة استخداما في الصناعة اذ يتصف بقابليته على الطرق وبسبب درجة انصهاره الواطئة زاد من استخدامه المبكر والواسع في العديد من المنتجات المعدنية وهو عنصر غير قابل للحرق وذو كثافة عالية ومقاوم للصدأ لذلك استخدم في تغليف األسالك الكهربائية وله قابلية امتصاص الصوت واالهتزازات فاستخدم كعازل للصوت ومادة لتخميد الهزات األرضية )6(. ومن االستعماالت األخرى لمركبات الرصاص استخدام أمالح الرصاص في األصباغ لتميزه ببريق اللون وثباته مثل كرومات الرصاص PbCrO4 )الرصاص األصفر( الذي يضاف الى األصباغ التي تستخدم لطالء أرصفة الشوارع وحافالت نقل الركاب وأوكسيد الرصاص الثالثيPb3O4 )الرصاص األحمر( الذي يدخل في صناعة األصباغ المقاومة للصدأ) 7 (.وقد استخدمت كربونات الرصاص االبيض )PbCO3( بشكل واسع حتى منتصف القرن العشرين كمادة اساسية في طالء األبواب الخارجية ولكون ها مادة شديدة السمية استبدلت بمادة ثاني أوكسيد التيتانيوم ) TiO2 (,فضال عن استخدام خالت الرصاص Lead acetate

151 كمادة تدخل في صناعة أصباغ الشعر وبعض مساحيق التجميل ) 8 (.وتشمل المصادر األخرى من الرصاص في البيئة األنشطة الطبيعية مثل: النشاط البركاني, والتجوية الجيوكيميائية, وانبعاثات رذاذ البحر والرصاص الموجود في التربة والرواسب والمياه من مناطق التعدين ويميل الرصاص إلى االستقرار لمجرد إطالقه في البيئة وبسبب هذه الصفة وقدرته على االنتقال في الغالف الجوي العالمي فإن انبعاثات الغالف الجوي يمكن أن تؤثر في معظم المناطق البعيدة من العالم )9(. التأثيرات الصحية لعنصر الرصاص على اإلنسان يعد الرصاص من العناصر غير الضرورية للكائنات الحية حيث يمكن أن يوصف بأن ه عنصر سام بمختلف مستوياته وأشكاله أي ليس هناك مستوى تعرض آمن ( Safety )level يظهر فوائد وظيفية لجسم الكائن الحي الذي يدعى بمستوى العتبة )Thereshold( وهو الحد األدنى من التعرض أو الجرعة التي تسبب تغيرا بيولوجيا ال يضر بقدرة الجسم على االستتباب ) 10 (.وفي دراسة تأثير الرصاص في عدد من المتغيرات الكيموحيوية ل )151( عامال من العمال الذكور غير المدخنين المعرضين مهنيا للتلوث بالرصاص أثناء عملهم اليومي في محافظة نينوى وجد ان الرصاص متراكم في دم الصباغين ولمدة تعرض أكثر من 21 سنة بينما وجد تراكم للرصاص أقل في دم مصلحي التلفزيونات وعمال المطابع والمصورين الشعاعين وبنسب متباينة فضال عن وجود زيادة معنوية في نسب اليوريا والكوليسترول والكليسريد الثالثي وفع الية انزيم الفوسفاتيز الحامضي واألستيل كولين أستريز للعاملين أثناء مدة التعرض ) 11 (.و أوضحت نتائج دراسة )12( عن تقدير تركيز الرصاص وتأثيره في بعض معايير دم العاملين المعرضين له في الشركة العامة للبطاريات في الوزيرية في بغداد إذ بينت النتائج وجود عالقة عكسية بين تراكيز الرصاص و معايير الدم األخرى مثل مستويات الهيموغلوبين Hb والنسبة المئوية لحجم الدم المضغوط PCV وعدد كريات الدم الحمر RBCs ومتوسط تركيز هيموغلوبين الخاليا MCHCومتوسط حجم الخاليا MCV وأوضحت النتائج تقارب في نتائج مستوى الرصاص في دم المدخنين وغير المدخنين فضال عن تأثير الرصاص في جهاز الخصوبة لدى الذكور والجهاز البولي و ظهور عدد من حاالت فقر الدم و حاالت من السعال والصداع و اإلجهاض لدى السيدات و ألم في المفاصل. 151

152 ومن التأثيرات السلبية للرصاص: تأثير الرصاص على الدماغ والجهاز العصبي يعد الجهاز العصبي المركزي من أكثر األجهزة تأثرا بالرصاص ومن الحاالت المرضية التي تصيب اإلنسان نتيجة التعرض للرصاص هي حدوث االعتالل الدماغي )Encephalopathy( وهو حدوث تلف في األنسجة الدماغية كذلك يسبب الرصاص العجز الحسي deficits( )Sensory عن طريق قطع وسائل االنتقال الحسي عبر الجهاز العصبي المحيطي وتناقص سرعة االتصال العصبي أي سرعة نقل المعلومات مما يؤدي إلى بطأ في الفهم واالستيعاب )13(. تأثير الرصاص على جهاز الدوران إن مركبات الرصاص يمكن أن تسبب تأثيرات ضارة بمختلف أنواع خاليا الدم حيث يؤدي التسمم بالرصاص إلى تكسر كريات الدم الحمر وكذلك حدوث اضطرابات في جهاز تخليق (Heme( نتيجة تأثير الرصاص بصورة مباشرة على أنزيمين مهمين في مسار تخليق )Heme( وبالتالي حدوث النقص في إنتاجه والذي قد يؤدي إلى اإلصابة بمرض فقر الدم وتراكم المواد الوسطية والنواتج الثانوية لمسار تخليق Heme وحدوث تسمم في الجسم, فضال عن زيادة عدد الكريات الحمر غير الطبيعية )المشوهة( ) 14 (.كما وجد )15( في دراسته تأثير السلينيوم والرصاص في عدد من معايير الدم منها RBCوWBC وHb وPCV على ذكور الفئران وتوص ل الباحث إلى أن حقن الفئران بتراكيز )115 و 1 و 2 ( mg/kg بأكاسيد الرصاص أظهرت انخفاضا معنويا في جميع معايير الدم. تأثيرات الرصاص على الكلية يؤثر الرصاص في عمل الكلية إذ لوحظ أن التعرض الحاد للرصاص يؤثر على األنسجة الحية والسيما األنابيب الملتوية الدانية للكلية وإن التعرض للرصاص يحفز حالة مرضية تدعى )Hyperuricemia) حيث يحدث تناقص في إفراز اليوريا مما يؤدي إلى تراكم األمالح وحامض اليوريك في المفاصل واإلصابة بما يشبه بداء المفاصل )Gout( الذي يؤدي إلى تضخم األطراف والفشل الكلوي وبالتالي حدوث الوفاة )16(. 151

153 تأثير الرصاص على العظام للرصاص خواص مشابهة لخواص الكالسيوم من حيث الحجم لذا فإن الرصاص يترسب في المادة المغذية الموجودة في العظم كما هو الحال بالنسبة للكالسيوم) 17 (. أشار( 14 ) الى تأثير الرصاص على العظام إذ الحظ ظهور حالة مرضية مع زيادة تراكم الرصاص في العظم تدعى تنخر العظام )Osteoporosis) وهو انخفاض في كثافة المواد المغذية للعظم مما يؤدي إلى تنخر العظم وسهولة تكسره في فترات متقدمة من عمر الشخص وقد الحظ هذه الحالة لدى األطفال والمراهقين المتعرضين لجرعات متكررة من الرصاص دون إجراء المعالجة الطبية وزيادة تراكم الرصاص في العظم حيث يؤدي الرصاص إلى تسارع في نضوج العظم) (Bon Maturation لدى األطفال وأظهرت نتائج الدراسة أن أعلى انخفاض في كثافة المواد المعدنية المغذية للعظام في عظام الرأس وعظام العمود الفقري. يتحرك الرصاص المتراكم في العظام نحو الدم وبقية األعضاء تحت ظروف خاصة مثل حدوث كسر في العظم والحمل وأوقات الرضاعة واإلصابات الحادة والمزمنة )18(. المواد وطرائق العمل: 1 العد الكامل للدم count(cbc) Complete blood حسبت الصورة الدموية الكاملة )CBC( والتي تضمنت قياس كريات الدم الحمر( )RBCs 10 6\µL وهيموغلوبين الدم gm/dl( )Hb وحجم كريات الدم الحمر المضغوطة )PCV%( وأعداد الصفائح الدموية( 3\µL 10 ( ومتوسط حجم الصفائح الدموية FL) MPV )وكريات الدم البيض ) 3\µL 10 ( واألعداد التفريقية لها وعرض كريات الدم الحمر )RDW%( ومعدل الحجم الكريي FL) )MCV ومعدل خضاب الدم الكريي picogram( )MCH ومعدل تركيز خضاب الدم الكريي g\dl( )MCHC بواسطة جهاز العد الكامل للدم ABX) (HORIBA وباستخدام المحاليل المجهزة من قبل الشركة,إذ أ دخلت نماذج الدم الموجودة في أ نبوبة )EDTA( المانعة لتخثر الدم بالجهاز الذي يقوم بسحب )115 سم ) 3 من الدم بوساطة إبرة خاصة في الجهاز. 152

154 4 طريقة قياس عنصر الرصاص استخدمت الطريقة المحورة التي استخدمت من قبل )19( وطريقة )20(. إذ تم اخذ )1( مل من مصل الدم ووضع في دورق زجاجي حجم )51 مل( ويضاف له ) 2 (مل من H2SO4 إلى حد التفحيم وبعدها إضافة )2( مل من HNO3 ليتحول المحلول إلى رائق ووضعه على سطح ساخن ويترك إلى أن يصل إلى أقل حجم ممكن بعدها يبرد ثم يضاف )1( مل من HCl ويوضع على سطح ساخن للوصول الى اقل حجم ثم يبرد ويخفف الى )51( مل من الماء المقطر ويقاس بجهاز المطياف الذري ( Atomic )absorption موديل )AA202( المجهز من قبل شركة Spectrolab وبحسب الطول الموجي لقياس كل عنصر حيث يقاس الرصاص على الطول الموجي 217 نانومتر. وتقاس هذه العناصر تحت ظروف الجهاز التالية: Lamp current = 7.5 ma 2 Air press = 1.6 kg\cm 2 3 Fuel press of C2H2 = 0.25 kg\cm 2 وتم حساب النتائج بالرجوع إلى المنحنى القياسي لكل عنصر محضر بالطريقة نفسها وتحت الظروف نفسها. تم تحويل قياس االمتصاص الذري إلى وحدات تركيز وذلك باستخدام معادالت االنحدار المسجلة من تحليل االنحدار الخطي لتراكيز مختلفة من المعادن القياسية المستخدمة. 2 النتائج والمناقشة: 92 الرصاص يصل الرصاص إلى جسم اإلنسان من الجو من خالل الهواء الجوي الحاوي على هذا العنصر من مصادر التلوث الصناعي ومنها ماتنفثه عوادم المركبات واآلليات األخرى )21( وقد قدر محللو البيئة بان وجود 1 مايكروغرام/م ³ سيسهم بمقدار 113 مايكروغرام/ 111 غم دم ) 22 (,يالحظ من الفئات األربع المدروسة أن أعلى نسبة لعنصر الرصاص بلغت )241664( مايكرو غرام / لتر في دم األشخاص العاملين في الصناعة وبفارق معنوي عن الفئات األخرى بحسب نتائج اختبار المتوسطات بطريقة دنكن المتعدد المدى, يليه األشخاص العاملين في المجال الزراعي ثم العاملين في المستشفيات ثم المجموعة الضابطة وهي فئة الطالب, إذ سجلت التركيز األدنى لهذا 153

155 العنصر والذي بلغ )11172( مايكرو غرام /لتر, وبفارق معنوي إحصائيا عن الفئات األخرى. وإن سبب ارتفاع تركيز عنصر الرصاص في دم العاملين في الصناعة هو بسبب قربهم الكبير من مصادر التلوث بهذا العنصر, كما في محالت تصليح بطاريات الرصاص الحامضية واللحام وتواجدهم في المناطق المزدحمة بالمركبات التي تستعمل البنزين او غيره من الوقود الحاوي على رابع أثيل الرصاص أو رابع مثيل الرصاص بنسبة تتراوح بين ) (غم/لتر وذلك لتجنب فرقعة االحتراق الذي يتحول بعد االحتراق إلى رصاص يمثل وحده %94 من الرصاص الملوث للهواء الجوي (23(. آم ا ارتفاع تركيز عنصر الرصاص في دم العاملين في الزراعة فيعزى إلى التعرض المباشر لألسمدة الفوسفاتية ومبيدات الحشرات واألدغال غير العضوية والتي تحتوي على نسب متفاوتة من عنصر الرصاص( 24 (. ونالحظ بشكل عام ارتفاع تركيز عنصر الرصاص في دم الفئات األربع المدروسة وهذا يؤكد أن المصدر الرئيس هو ماتنفثه عوادم المركبات, والذي يعد مصدرا لزيادة التلوث في البيئة من جهة وتراكمه في دم المتعرضين من جهة أخرى كلما طالت مدة التعرض )25(. 62 تأثير العناصر الثقيلة في بعض مكونات الدم 962 عدد كريات الدم البيضاء ان أعداد كريات الدم البيض للفئات األربع قيد الدراسة يالحظ وجود اختالفات معنوية بينهم بحسب اختبار المتوسطات بطريقة دنكن المتعدد المدى, إذ سجلت الفئة الثانية )العاملين في الزراعة( المتوسط األعلى لكريات الدم البيضاء والذي بلغ \µl( ) وبفارق معنوي عن فئتي العاملين في المستشفيات والطالب و ) 3 µlلكل منهما على اللتين سجلتا متوسطات بلغت ( التوالي, وبدون فارق معنوي عن فئة العاملين في الصناعة التي سجلت المتوسط الثاني والذي يبلغ ) (µL11 ويمكن تفسير هذا االرتفاع على أن ه نوع من الحساسية تولدت لدى المتعرضين نتيجة لتماسهم المباشر مع الملوثات عامة والكيميائية خاصة إذ أشارت معظم المصادر إلى ان كريات الدم البيض ترتفع في حالة الحساسية للملوثات )26(, وبالنظر إلى عالقة االرتباط بين عدد كريات الدم البيضاء وعنصر الرصاص نجد أن هذه العالقة غير ثابتة, إذ سلكت سلوكا موجبا وغير معنوي مع عنصر الرصاص لجميع الفئات باستثناء فئة الطالب التي كانت العالقة سالبة غير معنوية, وتتفق هذه النتائج مع ما حصل عليه )25(. 154

156 662 كريات الدم الحمراء يالحظ وجود اختالف بسيط في عدد كريات الدم الحمراء ولكن ه وصل إلى الحد المعنوي بحسب اختيار دنكن المتعدد المدى, إذ تراوحت أعداد هذه الكريات بين 6\µL 10( 4191 و 5166 ( لكال من فئتي الطالب )المجموعة الضابطة( والعاملين في الصناعة على التوالي, وقد يعود هذا االزدياد في االرتفاع ألعداد كريات الدم الحمر كما في فئة العاملين في الصناعة إلى استمرار التعرض للغازات الملوثة المنبعثة من عوادم المركبات, ويالحظ من نتائج تحليل االرتباط بين هذه الصفة وعنصر الرصاص هذه االرتباطات تراوحت بين السالب والموجب لعنصر الرصاص ولجميع الفئات ولم تبلغ حدود المعنوية اإلحصائية, ماعدا االرتباط مع عنصر الرصاص لفئة العاملين في الزراعة والذي كان معنويا عند مستوى احتمال %5 وبلغت قيمته )11418(. وتتفق هذه الدراسة مع )26( و) 24 ( و) 25 ( 6 المصادر 1. Albrito, b. (2012). Making cities resilient: Increasing resilience to disasters at the local level. J. Bus. Contain. Emer. Plan. 5: Laumbach R. J. and H. M. Kipen (2012) Respiratory health effects of air pollution: Update on biomass smoke and traffic pollution. J. Allergy. Clin. Immunol. 129: Divix, A., (2001). The Olympic Boo of sport Meolicin.Black We, Scientific Publication.P Harrison, R. M. (2001). Pollution: Causes, Effects and Control. 4th Ed. The Royal Society of Chemistry, Cambridge. pp UNEP,United Nations Environment Program. (2008). Draft final review of scientific information on lead.geneva, Chemicals Branch. Availableat:( aft_final_reviews/pb_review/final_unep_lead_review_ Nov_2008.pdf). 155

157 6. Wallce, H.A. (2001). Principles and Methods of Txicoigy. (2): Harrison, R. M. (2001). Pollution: Causes, Effects and Control. 4th Ed. The Royal Society of Chemistry, Cambridge. pp IPCS (1995) Carbon Monoxide. Geneva, World Health organization, International Programme on Safety.Environ.Health Criteria: WHO,World Health Organization. (2007). Health risks of heavy metals from longrange trans boundary air pollution. Copenhagen, World Health Organization Regional Office for Europe Available at: Agency for Toxic Substances and Disease Registry (ATSDR). (2012). a. Toxicological profile for cadmium. Georgia, USA. 99. يعقوب, نضال ياس )6002(. تقدير تركيز الرصاص وتأثيره في بعض معايير الدم للعاملين المعرضين له في مدينة بغداد. رسالة ماجستير, قسم علوم الحياة, كلية العلوم للبنات, جامعة بغداد, 63 صفحة. 12. Cherian, GM; and Goyer (1978) Metallothinosis and Their rolein the Metabolism and Toxicity of metals. Life Sci. 23: Gosselin, R. E.;Smith, R. P. and Hodge, H. C. (1994) Clinical Toxology of Commercial products.5 th edition Baltimore. 14. ALFartosi, K. G. (2008). Effect of Selenium and Lead on some blood parameters of male mice. J. Dohouk Univ., 11(1): Ferrante, M.; M. Fiore; C. Ledda; F. Cicciu; E. Alonzo; R. Fallico;; F.Platania, R. Di. Mourow, L. Lavalnti, and S. Seciacca (2013). Monitoring of heavy metals and trace 156

158 elements in the air, fruits and vegatables and soil in the province of Catania (Italy). Iq. Sanita. Pubb. 69: Nielsen, F, ; Davis, C. ; and Milne, D. (2003) Lowdietary Zinc and Copper negatively affect plasma and Urine indicators of bone health, USDA, ARS, Grand forks Human Nutrition Research center Grand Forks, N.D. 17. Eisler, R. (2000). Chemical Risk Assessment. Lewis. Publ., USA. (1): احمد, حنان شهاب )2011 (, دراسة عدد من المتغيرات الفسلجية والكيموحيوية لدى المرضى المصابين بداء النقرس في محافظة صالح الدين, رسالة ماجستير, كلية التربية, جامعة تكريت. الفهادي, نبيل حمد اهلل عزيز )6006(. مقارنة لتأثير أول اوكسيد الكاربون والرصاص والكادميوم في دم العاملين بتماس مع هذه الملوثات. أطروحة دكتوراه,كلية العلوم,جامعة الموصل /العراق. 19. Leman, R.A. (1976). Cancer mortality among cadmium production workers. Ann. New York Sci., 271: Kunnath S.S and Jean C.M (1981) Arapid Electro thermal atomic absorption spectropho tometrik method for cadmum and lead in human whole blood. Clin. Che. 27(11), بودقجي, عامر و كمال, محمود )9196(. التلوث و االمن الصناعي. مديرية الكتب و المطبوعات الجامعية, حلب / سورية. 22. Harrison R.N. and Laxen D.P. (1978). Natural source of tetraalkyl lead in air. Nature, 275: Rapaport, S. I. (1998) Introduction to hematology. 2ed Philadelphia, J B. Lippincott. Raub J.A. (1999) Health Effects of exposure to ambient Carbon Monoxide.Environ. Health criteria.213: الشمري, آصال غازي حسين )6096( دراسة بعض المؤشرات البيوكيميائية والدموية لدى العاملين في بيئة معامل طابوق النهروان.رسالة ماجستير,كلية العلوم, الجامعة المستنصرية\العراق 62. الحميش, موسى جاسم محمد ) 6004 (.تأثير بعض الملوثات المطلقة من صناعة األسمدة في الخصائص الكيموحيوية ووظائف الدم لدى العاملين فيها.أطروحة دكتوراه,كلية التربية, جامعة تكريت/العراق. 157

159 62. الجنابي, منيف صعب احمد ساجت, )2008 ),دراسة فسلجية كيموحيوية و خلوية لتأثير عدد من الملوثات المنبعثة من محطة كهرباء بيجي الحرارية على العاملين فيها, اطروحة دكتوراه, كلية التربية, جامعة تكريت. 158

160 دراسة وبائية عن انتشار الطفيليات املعوية يف مدينة سامراء Epidemiological Study for the Spread of Intestinal Parasites in Samarra الخالصة د.عهود مزاحم شاكر م.م نبراس عبد العزيز المبشع م.م.مروه مالك الحيالي كلية العلوم التطبيقية,قسم التحليالت المرضية, جامعة سامراء Dr. Ouhood mozahim Shakir Assist instructor: Nibras A. almbashaa Assist instructor: Marwa Malik alhayli College of Applied Science University of Samarra أجريت هذه الدراسة للمدة من 2016/2/1 ولغاية, 2016/12/30 وتضمن الجلزء األول من الدراسة فحص 580 عينة من غائط المرضى المراجعين لمستشفى سلامراء العللام فللي سللامراء وبعللض المختبللرات الخارجيللة وتللم إجللراء الفحوصللات المختبريللة بالطريقللللللة المباشللللللرة, Direct method وطريقللللللة التركيللللللز بللللللالتطويف Concentrationmethod بكبريتللللات الخارصللللين والمحلللللول السللللكري المشللللبع للتحللري عللن وجللود االخمللاج بللاالوالي المعويللة الممرضللة وسللجلت المعلومللات التللي تضمنت العمر والجنس ومنطقة السكن ومصدر المياه المستخدم للشرب وتاريخ الجملع لكل عينة وأظهرت الفحوصات المختبريلة ان النسلبة الكليلة للخملج بلاالوالي المعويلة كانلت 31%, منهللا % 2618 اميبلا النسلليج Entamoebahistolytica و %212 الجيارديلا المبليلاlambila Giardiaوالشلريطية القزمللة hymenolips nana 159

161 , %118 وكانت نسبة الذكور المخمجين باميبا النسليج %2815 فلي حلين كانلت نسلبة االنلاث %2114, امللا نسللبة الللذكور المخمجللين بالجيارديللا المبليللا فقللد كانللت %211 واإلناث 2.3.% وأعلى نسبة خمج باميبا النسيج كانت للفئة العمرية )3021( سنة وبنسبة %29.3, وأما أعلى نسبة خمج بالجيارديا المبليا فقد كانت للفئة العمريلة )6 11( سنة وبنسبة %512, وأما أعلى نسبة خملج باللدودة الشلريطية القزملة فقلد كانلت للفئللة العمريللة العمريللة )51( سللنة وبنسللبة %216 وكانللت نسللبة الخمللج فللي المدينللة %2419 في حين كانت في الريف %4418 ولوحظ ارتفاع في نسلبة الخملج بلاالوالي المعوية للدى المرضلى اللذين تعلد ميلاه األنهلار المصلدر الملائي المتلاح لهلم, اذ بلغلت, %3919 وكانلت نسلبة الخملج منخفضلة لللذين كانلت ميلاه اإلسلالة المصلدر الملائي المتاح لهم %2215, وقد سجلت اعلى نسبة باميبا النسيج في شهر ايار %5611 واقل نسبة %319 في شهر شباط, وأما بالنسبة للجيارديا المبليا فقد كانت أعلى نسبة خمج سجلت في شهر حزيران %6 واقلها %115 في شهر اذارفي حين لم تسلجل إصلابات في االشهر شباط وتشرين األول والثاني وكلانون األول املا الشلريطية القزملة سلجلت أعلى نسبة إصابة في شهر حزيران %3 واقل نسبة %2 فلي شلهر آب فلي حلين للم تسجل إصابة في الكثير من األشهر. Summary This study is done for the duration from 1/2/2016 to 30/12/2016. The first part of the study deals with checking up 580 samples of hospital auditors stool of infected persons in Samarra hospital and other laboratories outside it The checking up was done using both the direct method and concentration method with sulfate of zinc and saturated diabetic solution to investigate the existence of infections in the intenstinalpathgens and the information was documented that contains: the age, sex, the accommodation area, source of water the he/she used, and the date of taking the sample. The laboratory checking up showed that the percentage of gastrointestinal infections 161

162 was 30%, 26.8% of it was Entamoebahistolytica and 2.2% Giardia lambilaand 0.8 nana The percentage of males that were infectious with Amiba Textile was 28.5% and 21.4% for females. As for the males that were infected with Giardia Lambila was 2.1% and females 2.3% and the highest percentage of infection with Giardia lambila was for the rats aged (610) years in 5.2% and the highest percentage in infection of tapeworm was for the rats aged (15) year in 2.6% and the percentage of infection in the city was 24.9 while in the countryside was 44.8% It was observed that the percentage of infection with intestinal prophylaxis for the patients who used the water of the rivers and reached 39.9% and theinfection percentage was low for those who used the pure water for 22%The highest percentage for the infections of Amiba Textile was recorded in May 56.1% and the lowest one was 3.9% in February and as for the Giardia lambila was recorded as a highest infection in June 6% and the lowest was 1.5% in March and no infections were recorded in February, October, November and December. As for H. nana, the highest infections was recorded in June by 3% and the lowest one in August in 2% and no infections were recorded in many months 161

163 المقدمة تنتشر أنواع الطفيليات المعوية واالوالي في المجتمعات البشرية على نطاق واسع وفي معظم أنحاء العالم, وتعد من المسببات الرئيسية لإلسهال وتكون المسبب الثالث للوفيات في العالم اذ يبلغ عدد المتوفين 1.8 مليون شخص سنويا )1( ويعتمد انتشار اإلصابات الطفيلية في العالم على عوامل عدة منها النظافة الشخصية والعامة والمستوى االجتماعي واالقتصادي وعوامل بيئية اخرىوهي من المشاكل الصحية الشائعة في البلدان النامية, اذ أشارت العديد من الدراسات في تلك البلدان الى مدى تاثير البيئة غير صحية والموقع الجغرافي وقلة الوعي الصحي على انتشار الخمج باالوالي المعوية (2( ويعد Giardia lamblia و Entamoebahistolytica هما الطفيليان االكثر انتشارا في العالم, ويسهمان في خمج عدد كبير من األشخاص, لعدم السيطرة عليها بشكل فعال وتعد الكثافة السكانية من العوامل المهمة التي تساهم في تضاعف احتماالت الخمج بالطفيليات اذ بلغ معدل الخمج السنوي في العالم بطفيلي.E histolytica ب 511 مليون حالة خمج, وبطفيلي.G Lamblia ب 211 مليون حالة خمج (3( تنتقل االوالي المعوية عن طريق االيدي الملوثة بالبراز ( oral Fecal ) وتميل الى إظهار تشابه في دورة الحياة التي تتألف من طور الناشطة,)Trophozoilte( والطور المتكيس,)Cyst( ويحدث المرض عادة بالتهام األكياس الناضجة مع الطعام أو الشراب الملوث ( 4 (ففي حالة الخمج بداء الجيارديات,)Giardiasis( فان أهم األعراض السريرية التي يمكن مالحظتها هي اإلسهال )Diarrhea( واالمساك )Constipation( والغثيان )Nausea( والصداع )Headache( وانتفاخ البطن )Flatulence( ) 5 (.اما داء االميبات المعوي )Amoebiasis( فيتميز عادة بأربع عالمات سريرية تظهر خالل المرحلة الحادة من الخمج وهي الزحار )Dysentery( أو االسهال الدموي )Fulminating Colitis( والتهاب القولون المفاجئ )Bloody diarrhea( والتهاب الزائدة الدودية االميبي appendicitis( )Amoebic و ورم اميبي بالقولون Colon( )Amoeboma of the كما يسبب تقرحات في القولون خصوصا األعور )Cecum( والقولون السيني Colon( )Sigmoid والمستقيم, وتكون هذه القرح أما عقدية )Nodular( أو غير منتظمة )Irregular( إذ تكون القرح العقدية صغيرة بالحجم ) (سم, ودائرية الشكل ترتفع قليال عن الطبقة المخاطية. اما القرح غير المنتظمة فتتميز بمراكزها المتنخرة التي تكون محاطة بإطار من خزب االنسجة tissue( )Edematous )6( وعلى الرغم من ان األمراض 162

164 الطفيلية كمشكلة صحية عامة, تتسم بأهمية كبرى في كثير من البلدان, اال أن الجهود التي تبذل لمكافحتها غير كافية, ففي الوقت الحاضر اليمكن منع انتشار هذه األمراض واليوجد لقاح ضدها فضال عن أن مكافحة هذه األمراض يعوقها في العادة الجهل بالمعدل الحقيقي النتشار هذه الطفيليات او األمراض, واالستخفاف بمقدار ما تسببه للناس من معاناة واعتالل. مواد وطرائق العمل تحضير المحاليل المختبرية المستعملة : :Normal Saline Solution المحلول الملحي الفسلجي %0.9 حضر المحلول بإذابة 9 غرامات من كلوريد الصوديوم sodium chloride لتر من الماء المقطر ليصبح تركيز الملح % 0.9 )7( في محلول صبغة اليود اللوكالي Lugol s Iodine Solution حضر المحلول بإذابة 5 غرامات من بلورات اليود Iodine crystals و 10 غرامات من ايوديد البوتاسيوم Potassium Iodide في 100 مللتر من الماء المقطر ثم وضع المحلول في قنينة زجاجية داكنة بعيدا عن الضوء تم التخفيف قبل االستعمال بإضافة حوالي 5 اضعاف من الماء المقطر وتم تجديده كل أسبوعين ألنه يفقد فعاليته تدريجيا بعد التخفيف في حين يبقى المحلول األصلي ثابتا لشهور )7( المحلول السكري المشبع : Solution Saturated Sugar حضر المحلول بإذابة 350 غراما من السكر و 20 غراما من الفينول Phenol في 1000 مللتر من الماء المقطر. ثم ثبتت الكثافة النوعية Specific Gravity عند 1.12 في درجة حرارة المختبر باستخدام مقياس الكثافة النوعية للسوائل )7(Hydrometer 163

165 طرائق العمل Materials and Methods جمع العينات Patients and Collection of Samples أجريت هذه الدراسة للفترة من 2016/2/1 إلى 2016/12/30 اذ تم جمع 581 عينة غائط من األشخاص المراجعين الى مستشفى سامراء العام, تضمنت عينات من كال الجنسين ومن فئات عمرية مختلفة تراوحت ما بين 4 أشهر 70 سنة وبصورة عشوائية, وقد كانت عينات الذكور 328 عينة في حين كانت عينات اإلناث 252 عينة الفحص المختبري Laboratory test تم فحص عينات الغائط التي جمعت من المراجعين لمستشفى سامراء العام وبعض المختبرات األهلية حيث كان المراجعون من مدينة سامراء والمناطق التابعة لها بالطرق التالية : 1 طريقة الفحص المباشر Direct method فحصت العينات بطريقه المسحة المباشرة وذلك بأخذ قطرة من المحلول الملحي الفسلجي ووضعه على الشريحة الزجاجية وأخذت كمية قليلة من الغائط بقدر رأس عود الثقاب ومن أماكن متعددة بوساطة عود خشبي نظيف,stick وخلطت كمية الغائط مع المحلول الملحي المتوازن الموجود وبعد المزج الجيد, و ضع فوقها غطاء شريحة بحذر لمنع تكون فقاعات هوائية, و ر وعي في أثناء الفحص اختيار األجزاء المخاطية أو الدموية في العي نة. هذه الطريقة مفيدة على وجه الخصوص للتحري عن الناشطات الحية المتحركة. على الشريحة, وبعدها وضع غطاء الشريحة وفحصت بالمجهر الضوئي باستخدام العدسة الشيئية 4X ثم 40X للتأكد من وجود الطفيلي.)8) 164

166 الشرائح الرطبة المصبغة باليود Mounts Iodine Staining Wet استعمل في هذه الطريقة محلول يود لوكل بدال من المحلول الملحي الطبيعي وح ض رت بالطريقة السابقة نفسها. ان صبغة اليود تساعد على تأكيد وجود األكياس إذ أنها تصبغ الفجوات الكاليكوجينية واألنوية بصورة واضحة 2 طريقة التركيز Concentration method Zinc sulfate flotation تقنية التطويف method بكبريتات الخارصين مزج 21 غم من الغائط في كمية كافية من الماء المعقم بواسطة قضيب زجاجي لتحرير األكياس من الغائط, ثم رشح المزيج من خالل أربع طبقات من الشاش وبعدها ينقل الراشح الى أنابيب االختبار, وتوضع في جهاز الطرد المركزي لمدة 5 دقائق بسرعة 1111 دورة /دقيقة., وي طرح الطافي من أنابيب االختبار ثم أضيف قليال من الماء المقطر إلذابة الجزء المترسب ثم يمأل األنبوب بالماء ويعاد الى جهاز الطرد المركزي وتعاد عمليه الترسيب وتعاد عمليه الغسل والترسيب حتى يصبح الطافي رائقا ثم أهمل الرائق وأضيف محلول كبريتات الخارصين إلى الراسب, ثم تعاد أنابيب االختبار لجهاز الطرد المركزي بالسرعة والمدة نفسها. وسحب الطافي بواسطة ماصة باستور بعناية ويوضع على شريحه زجاجيه مع قطره من محلول يود لوكل وفحص تحت المجهر تقنية التطويف بمحلول السكروز Sucrose solution تتبع نفس الخطوات في الفقرة السابقة كبريتات الخارصين.( 9 ) النتائج والمناقشة ويستخدم محلول السكروز بدال من محلول بينت الدراسة الميدانية التي تضمنت اخذ نماذج غائط من المراجعين إلى مستشفى سامراء العام ان نسبة الخمج الكلي بلغت %31 من االوالي المعوية كما في الجدول )1(,وجاءت نتائج هذه الدراسه متوافقة مع )11( في تكريت حيث سجلت نسبة 165

167 و% اصابه كليه %31 ومع )1( في بيجي بنسبة %29 وكانت هذه النتيجة اقل مما سجله بعض الباحثين )11( في البصرة بنسبة %5119 و )12( في تكريت بنسبة %6119 وأعلى من )13( في الدوز بنسبة %1717,ويوضح الجدول ان اميبا النسيج كانت أعلى في نسبة الخمج الكلي أذ سجلت %26.8 في حين سجلت الجيارديا المبليا نسبة %2.2 في حين الدودة الشريطية القزمة بنسبة 118 %وهذه النسب اقل مما سجله )11( في البصرة حيث كانت اميبا النسيج %6512 والجيارديا %3111 وأعلى مما سجله )1( حيث نسبة االميبا %715 والجيارديا %5 و) 13 ( نسبة االميبا %12 والجيارديا %5 جدول )1( اعداد المخمجين باالوالي المعوية والنسبة المئوية موزعة بحسب الجنس ونوع الطفيل نوع الطفيل الذكور عدد العينات المفحو صة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج اناث عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج الكلي عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج E.histoly tica G.lamb ila H.nana المجموع 328 يشير التحليل االحصائي وجود فروق معنوية حسب الجنس بمستوى (0.05 < p) كما أشارت هذه الدراسة الى ارتفاع نسبة الخمج في الذكور بهذه االوالي من مجموع العينات المخمجة وبنسبة %3314, في حين كانت نسبة الخمج في اإلناث %25, اما بالنسبة للجنس فقد كانت نسبة اخماج الذكور باميبا النسيج والجيارديا المبليا والدودة الشريطية هي %2815 و %211 و %116 على التوالي هي اعلى من نسبة اخماج االناث التي كانت %2114 و 213 %112 على التوالي وان ارتفاع نسبة اإلصابة بين الذكور في االوالي يمكن ان يعزى الى كثرة عدد الذكور المراجعين 166

168 للمستشفى مقارنة بعدد االناث وقد يكون للعادات االجتماعية السائدة دورا في ذلك, او قد يرجع السبب إلى ان الذكور أكثر فعالية واحتكاكا بالبيئة الخارجية من اإلناث. ان االختالف في نسبة الخمج المسجلة في الدراسة الحالية إلى الدراسات المذكورة أعاله ربما يعود إلى االختالف في مستوى الصرف الصحي, والنظافة الشخصية,والكثافة السكانية والموقع الجغرافي,والظروف المناخية, والعدد الكلي من العينات المفحوصة, وطرق الفحص,ومدة الدراسة,والفئات العمرية من سكان الدراسة,كذلك طريقة حساب النسبة المئوية للخمج (14(. يظهر جدول )2( ان نسبة الخمج الكلي باميبا النسيج كانت %2618 توزعت بين %2815 من الذكور و %2114 من االناث, وقد كان اعلى خمج في الفئة العمرية 2111 سنة من الذكور وبنسبة %3813 واقله كان %23 في الفئة العمرية 4131 سنة, اما بالنسبة لإلناث فقد كانت الفئة العمرية 51 سنة هي االعلى في نسبة الخمج %32.8 واقله في الفئة 5141 سنة حيث لم تسجل اصابة. جدول )6( أعداد المخمجين ب E.histolytica موزعة بحسب الجنس والفئات العمرية العمر الذكور اناث الكلي عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% )سنة ) > المجموع

169 و 5 يشير التحليل اإلحصائي على وجود فروق معنوية (p < 0.05) حسب الفئات العمرية بمستوى وتتفق هذه الدراسة مع ) 15 (حيث بلغت اإلصابة %21 ومع )16( في بغداد حيث بلغت 2213 %وتختلف مع )12( في تكريت حيث بلغت اإلصابة %1816 ومع )17( في الطوز بلغت 1918 %و )18( بنسبة % 1713 و )19( في ديالى, إذ بلغت نسبة االصابة باالميبا الحالة للنسيج % 1817, اما من ناحية الجنس فان ارتفاع نسبة الخمج باميبا النسيج في الذكور أكثر من اإلناث وهذا متفق مع نتيجة دراسة ) 13,21 (ومخالف مع )15( وقد يرجع السبب كما ذكرنا في السابق إلى ان الذكور أكثر فعالية واحتكاكا بالبيئة الخارجية من اإلناث ان نسبة الخمج العالية بطفيلي. histolyticae هي % 2618 في الدراسة الحالية يعكس مدى التلوث البرازي للماء والغذاء حيث يسود هذا الطفيلي في البلدان النامية ذوات الثقافة الصحية الواطئة, وقلة االهتمام بالنظافة الشخصية وطرق انتقاله المباشرة عن طريق الماء والغذاء والخضروات الملوثة,ويقوم الذباب المنزلي بنشر الخمج وذلك بنقله لألكياس )21(. اما الجدول )3( فيظهر نسبة الخمج الكلي بالجيارديا المبليا اذ كانت %212 توزعت بين %211 في الذكور و %213 في االناث, وقد كان أعلى خمج في الفئة العمرية 6 11 سنة من الذكور وبنسبة %515 في حين كان اقل خمج في الفئة العمرية 51 سنه وبنسبة %1.2 في حين لم تسجل الفئة العمرية و 5141 سنة أي خمج, اما بالنسبة لإلناث فقد كانت الفئة العمرية 3121 سنة هي األعلى في نسبة الخمج %6 واقله كان الفئة العمرية 2011 سنة وبنسبة %2 في حين لم تسجل الفئة العمرية سنة أي خمج وتتفق هذه الدراسة مع ( 21 ) وتختلف مع )1,11,13( ويعزى السبب بهذا النسبة إلى وجود خلل في الجهاز المناعي بسبب تقدم العمر وعدم قدرة المريض مقاومة المرض وكذلك يعزى الى ان دورة حياته مباشرة فهو ينتقل أيضا كما في اميبا النسج عن طريق الماء والغذاء الملوثين والخضروات والفواكه الملوثة باألكياس عن طريق تلوث األغذية من خالل الحشرات واأليدي الملوثة, والسيما أيدي عمال األغذية وكذلك هناك سبب آخر هو ان أكياس الجيارديا المبليا تكون اكثر مقاومة لظروف البيئة والتعقيم بواسطة الكلور للمياه 168

170 جدول )1( أعداد المخمجين ب G.lambila موزعة حسب الجنس والفئات العمرية العمر الذكور اناث الكلي عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% )سنة ) > المجموع 328 يشير التحليل اإلحصائي (p < 0.05) على وجود فروق معنوية حسب الفئات العمرية بمستوى املا الجلدول )4( فيظهلر نسلبة الخمللج الكللي لللدودة الشلريطية القزملة كانللت %118 توزعت بين %116 فلي اللذكور %112 فلي االنلاث, وقلد كلان أعللى خملج فلي الفئلة العمريلة 11 6 سلنة ملن اللذكور وبنسلبة %113 فللي حلين كلان اقلل خملج فلي الفئللة العمرية 51 سنه وبنسبة %1.2 فلي حلين للم تسلجل الفئلة العمريلة 5111 سلنة أي خملج, املا بالنسلبة لإلنلاث فقلد كانلت الفئلة العمريلة 51 سلنة هلي االعللى فلي نسلبة الخمج %412 واقله كان في بقيه الفئات العمرية حيث لم تسجل اي خمج وجاءت هلذه النتائج مقاربه )11( وغير متوافقة مع )22( قد يعزى وجود هذه النسبة للشريطية القزمية في الدراسلة الحاليلة والدراسلات األخلرى إلى طرق االنتقال المباشرة,وعدم االهتمام بالنظافة والسيما األيدي,فقد تنتقل الى الفم عن طريق األيدي الملوثة بالبراز,او عن طريق اإلصابة الذاتية بتفقيس البيوض داخل 169

171 أمعاء الشخص المصاب مباشرة,او عن طريق تلوث الطعلام ببلراز الفئلران المصلابة في األماكن الملوثة,ويلزداد انتشلاره فلي األطفلال بعملر ملن 146 سلنة,ويقلل بتقلدم العمر نتيجة لنمو وتتطور جهاز المناعة,فضال عن الوعي بأهمية النظافة جدول )4( أعداد المخمجين ب H.nanaموزعة حسب الجنس والفئات العمرية العمر الذكور اناث الكلي عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% )سنة ) > المجموع 328 يشير التحليل اإلحصائي (p < 0.05) على وجود فروق حسب الفئات معنوية العمرية بمستوى يظهر الجدول )5( نسبة الخمج باالوالي موزعة بحسب منطقة السكن, اذ بلغت أعلى نسبة انتشار في الريف وبنسبة %4418, في حين سجلت اقل نسبة انتشار في المدينة وبنسبة %2419, وقد لوحظ ان نسبة الخمج بأميبا النسيج في الريف كانت %38 في حين في المدينة كانت %23, اما الجيارديا المبليا فقد كانت نسبته في الريف %417 وفي المدينة %113, اما الشريطية فقد كانت نسبته في الريف %2 وفي المدينة %

172 وقد اتفقت هذه النتيجة مع ما سجله )23( في قضاء بيجي, وما سجله )15( في مدينة سامراء, وما سجله )18,21( في مدينة تكريت وما سجلته) 1 ( في قضاء بيجي. ومع )11( ولم تتفق مع ما سجله )24( حيث سجل نسبة خمج في المدينة أعلى من الريف %26193 و %.والسبب في ذلك ربما يعود إلى أن السكان الذين يقنطون الريف ال تتوفر فيهم الشروط الصحية والوعي الصحي,أي عدم عنايتهم بالنظافة الشخصية في المأكل والمشرب والملبس,كذلك كثرة وجود الحشرات الناقلة ميكانيكا لألكياس وقد يلعب المناخ وكثرة المزارع واألمراض الزراعية وطبيعة المهنة التي يزاولها سكان الريف,باإلضافة إلى عدم وصول ماء اإلسالة إليهم بصورة كافية مما يؤدي إلى اعتمادهم على مياه اآلبار واألنهار والتي تكون غير معقمة مع انتشار الحيوانات في هذه المنطقة وبشكل كبير وتربيتها داخل المنازل وبذلك يكون مصدر الخمج بالطفيليات أما سكان الحضر فيتم فيها تصريف مياه المجاري بصورة صحيحة باإلضافة إلى اعتماد األطفال في المدينة على مياه اإلسالة وبعضهم على المياه المعقمة للشرب. جدول )2( توزيع االوالي المعوية حسب منطقة السكن مكان العينة المفحوصة نوع الطفيل الريف عدد العينات المفحو صة عدد العينات المخمج ة النسبة المئوية % المدينة عدد العينات المفحو صة عدد العينات المخمج ة النسبة المئوية % E.histolyti ca G.lambila H.nana المجموع 147 (p < يشير التحليل 0.05) اإلحصائي على وجود فروق معنوية حسب السكن بمستوى 171

173 اما عند متابعة انتشار االوالي المعوية وعالقته بمصدر الماء المستخدم للشرب كما يظهره جدول )6( فقد كانت أعلى نسبة خمج لألشخاص الذين يعتمدون على مياه البئر والنهر وبنسبة %3919, وفي حين سجلت اقل نسبة خمج لألشخاص الذين يعتمدون على مياه اإلسالة وبنسبة %2215, هذه النتيجة توافق )1,11,23,25,21,13(, ويتعارض مع ما توصلت اليه )26,27( إذ تعزى هذه النتيجة إلى تلوث مياه النهر واآلبار بمختلف الملوثات الطبيعية والصناعية فضال عن ان اغلب األشخاص يستخدمون هذه المياه بدون معالجته بالغليان او إضافة الكلور إلى مياه البئر مباشرة للشرب,مما يؤدي إلى حدوث اوبئة والعديد من األمراض وتعد مياه اآلبار عادة معقمة ألنها تمر خالل طبقات أرضية متعددة,وذلك كمرشح لتصفية المياه من األحياء المجهرية,والمواد األخرى القابلة للترشيح,ومع ذلك فإنها تكون معرضة للتلوث بملوثات عدة,قد تتلوث بالغائط وكثيرا ما تعد مصدر لنشر الكائنات التي تصيب اإلنسان وتسبب له العديد من األمراض وذلك لكون اآلبار التي استعملت في المناطق التي أجريت فيها الدراسة آبارها سطحية مفتوحة وقريبته من النهر) 21 ( جدول )2( توزيع االوالي المعوية بحسب مصادر المياه نوع المياه مياه معقمة غير معقمة نوع الطفيل عدد العينات المفحو صة عدد العينات المخمج ة النسبة المئوية % عدد العينات المفحو صة عدد العينات المخمج ة النسبة المئوية % E.histolyti ca G.lambila H.nana المجموع 332 يشير التحليل اإلحصائي (p < 0.05) على عدم فروق معنوية حسب مصدر المياه السكن بمستوى 172

174 أما بالنسبة لتوزيع الخمج الكلي بأميبا النسليج كملا تظهلرمن الجلدول )7( حسلب أشلهر الدراسة, فقد تبين من نتائج العامة للخمج خلالل األشلهر المشلمولة بالدراسلة ان هنلاك نسبة خمج عالية بلغت %5611 خلالل شلهر ايلار وادناهلا %319 خلالل شلهر شلباط, اما بالنسبة للذكور فقد كانت اعلى نسبة خملج %6814 خلالل شلهر ايلار واقلهلا خلالل شهر شباط %616 في حين سجلت االناث اعلى نسلبة %47 خلالل شلهر ايلار وادنلى 515 %فلي نيسلان املا شلهر تشلرين األول والثلاني وكلانون االول للم تسلجل أيلة اصابة,على الرغم من هذا التباين اال انه يالحلظ الخملج بلالطفيلي كانلت اكثلر انتشلارا في شهر ايار وتفق مع ) 15 و 28 ( وتختلف مع ) 11 و 13 ( ان هذا التباين او االخلتالف في نسب الخمج وحسب أشهر السنة ربما يعود إلى التغيرات الفصللية والموسلمية التلي لهلا دور فلي اخلتالف هلذه النسلب,ملن خلالل نتلائج الدراسلة الحاليلة يتضلح إن ازديلاد نسللبة اإلصللابة كانللت خللالل أشللهر الصلليف وربمللا يعللود السللبب فللي ذلللك إلللى تللوفر الظروف البيئية المالئمة لنمو وانتشار الطفيلي حيث إن الطفيليات المعوية تكلون أكثلر انتشارا في المناطق الحارة كذلك يعزى السبب الى الزيادة الحاصلة فلي اسلتهالك ميلاه الشلرب خلالل فصلل الصليف وبالتلالي ازديلاد احتماليلة تنلاول الميلاه الملوثلة بلاألطوار المتكيسة للطفيليات المعوية كما ان فرص إصابة اإلنسان باألميبا الحالة للنسيج تلزداد بدرجلة كبيلرة خلالل أشلهر الصليف الحلارة نتيجلة تكلاثر الحشلرات الناقللة لألملراض وانتشارها ومنها الذباب المنزلي الذي يعد ناقال آليلا ألكيلاس االواللي الطفيليلة وبيلوض بعض الديدان الشريطية واالسطوانية, وقد بينت نتائج دراسات بعض الباحثين أهمية الظروف البيئية كالحرارة والرطوبة والريلاح فلي انتشلار اإلصلابة بالطفيليلات المعويلة وان أعلى نسبة إصابة سجلت خالل أشهر الصيف كما تمت اإلشارة إللى ان الظلروف الباردة تقلل من اإلصابة بالطفيلي من خالل قتلها ألكياس الطفيلي المعدية (29,30) جدول )9( النسبة المئوية للخمج ب E.histolytica موزعة على أشهر الدراسة الشهر الذكور اناث الكلي عدد العينات الكلي عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات الكلي عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات الكلي عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% شباط اذار

175 نيسان ايار حزيران تموز اب ايلول تشرين 22 االول تشرين 34 الثاني كانون 29 االول المجموع 328 يشير التحليل اإلحصائي (p < 0.05) على عدم فروق الدراسة أشهر حسب معنوية بمستوى اما عند مالحظة جدول )8( فنجد ان الجيارديا المبليا قد سجلت أعلى نسبة خمج كلي %6 في شهر حزيران وأدنى نسبة %115 خالل شهر أذار, وقد سجلت نسبة %512 في الذكور وهي األعلى في شهر ايار وأدنى نسبة %2.5 في شهر آب, اما في اإلناث فقد كانت أعلى نسبة %9 في شهر تموز وأدناه %213 في شهر آذار جدول )9( النسبة المئوية للخمج ب G.lambliaموزعة على أشهر الدراسة الشهر الذكور اناث الكلي عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% عدد العينات المفحوصة عدد العينات المخمجة النسبة المئوية للخمج% شباط

176 اذار نيسان ايار حزيران تموز اب ايلول تشرين 22 االول تشرين 34 الثاني كانون 29 االول المجموع 328 يشير التحليل اإلحصائي (p < 0.05) على عدم فروق الدراسة أشهر حسب معنوية بمستوى جاءت هذه النتائج متوافقة مع) 13 ( واليتفق مع) 21,31(, نستدل من ذلك ان ارتفاع درجة الحرارة لها دور في انتشار جيارديا المبليا ومع زيادة درجات الحرارة تؤدي الى زيادة فرصة اإلصابة بالطفيلي نتيجة زيادة تواجد الحشرات الناقلة للمرض وكذلك تعرض المواد الغذائية ومياه الشرب بأكياس الطفيلي اكثر في فصل الصيف وذلك من خالل الدراسة الحظنا ان المراجعين المصابين باإلسهال الدهني والشحمي يكون في زيادة مع بداية فصل الصيف اما عند مالحظة جدول )9( فنجد ان الدودة الشريطية القزمة قد سجلت اعلى نسبة خمج كلي %3 في شهر حزيران وادنى نسبة %2 خالل شهر أب, وقد سجلت نسبة %216 في الذكور وهي األعلى في شهر ايار وأدنى نسبة %2.5 في شهر آب, اما في اإلناث فقد كانت اعلى نسبة %515 في شهر حزيران وادناه %119 في شهر ايار 175

177 ةحورطلاا ةفرصلا مولعلل ددعلا 1028 / نماثلا 176 H.nana ب جمخلل ةيوئملا ةبسنلا )1( لودج ىلع ةعزوم رهشأ ةساردلا رهشلا روكذلا ثانا يلكلا ددع تانيعلا ةصوحفملا ددع تانيعلا ةجمخملا ةبسنلا ةيوئملا %جمخلل ددع تانيعلا ةصوحفملا ددع تانيعلا ةجمخملا ةبسنلا ةيوئملا %جمخلل ددع تانيعلا ةصوحفملا ددع تانيعلا ةجمخملا ةبسنلا ةيوئملا %جمخلل طابش راذا ناسين رايا ناريزح زومت با لوليا نيرشت لولاا نيرشت يناثلا نوناك لولاا عومجملا ليلحتلا ريشي يئاصحلإا قورف مدع ىلع ةيونعم بسح رهشأ ةساردلا ىوتسمب (p < 0.05)

178 المصادر 9 الكيز, فاطمة ستار جبار فرج )6099(, دراسة وبائية الطفيليات المعوية بين طلبة المدارس االبتدائية واإلعدادية في مدينة بيجي مع دراسة بعض المعايير السريرية والكيموحيوية.رسالة ماجستير, كلية التربية / جامعة تكريت. 2Pham, P.; Nguyen, H.; Hattendorf, J.; Zinsstag, J.; Dac Cam, P.and Odermatt, P. (2011). Risk factors for Entamoebahistolytica infection in an agricultural community in Hanam province, Vietnam. Parasit Vectors, 4: Hugo, D.L. and Staffan, S. (2011). Giardia (A Model Organism). Springer Wien NewYork. 326 pp. 4Pritt, BS. and Clark, CG.(2008). Amebiasis. Mayo Clinic Proceedings. 83(10): Ankarklev, J. ; JerlstromHultqvist, J. ; Ringqvist, E. ; Troell, K. and Svard, S.G. (2010). Behind the smile : cell biology and disease mechanisms of Giardia species. Nat. Rev. Microbiol., 8(6): Shannon, N.; Moonah, N.; and William, A. (2013). Host Immune Response to Intestinal Amebiasis. PLOS Pathoge. ( 9) Markell,E.K, John,D.T. and Krotoski,W.A.(2006).Medical parasitology.8 th edw.b.saunders Company Philadelphia 8. Singh, A.; Ericttouft, B.H. and William, A.C. (2009 ). Rapid diagnosis of intestinal parasitic protozoa.j. Infect. Dis.,61(3): Minvielle, M.C.; Molina, N.B.; Polverino, D. and Basualdo, J.A. (2008). First genotyping of Giardia lamblia from human and animal feces in Argentina, South America. Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. Rio de Janeiro, 103(1): الصااافو,فاطمااة حسااين يوسااف زيناال.)6096(. دراسااة وبائيااة طفيلاايdispar / Entamoebahistolytica والطفيليات االخرى واالحياء المجهرياة المرافقاة وتاأثير خماج الطفيلاي علاى بعاض الفحوصاات المختبرياة لادى األطفاال فاي مديناة تكريات. رساالة ماجستير,كليه التربية, جامعه تكريت. 99 االسدي, حيدر عبد الجليل راضي الهزام.)6009(. دراسة وبائية لبعض الطفيليات المعوية مع التركيز على حيوية طفيلي االميبا الحالة للنسيج 177

179 Entamoebahistolytica في مدينة البصرة. أطروحة دكتوراه, كلية العلوم, جامعة البصرة. 96 الجبوري, امين خزعل علي عيسى )2009(, دراسة وبائية عن الطفيليات المعوية في مدينة تكريت وضواحيها.رسالة ماجستير, كلية التربية /جامعة تكريت. 91 البياتي, شجعان رضا حسن ولي. )6099(. دراسة وبائية عن بعض االوالي المعوية الممرضة لألشخاص في قضاء الطوز مع دراسة تأثير الخمج بالجيارديا على انسجة االثني عشري في الفئران المختبرية.(Balbc) رسالة ماجستير, كلية التربية, جامعة تكريت. 14Kurt,O. Demirel,M. Ostan,I., etal.(2008). Investigation of the prevalence of amoebiasis in Izmir Province and determination of Entamoeba Species using PCR and ELIA New. Microbiol.,31: السامرائي,صالح عبد حسن.)6009(. دراسة بعض مظاهر إمراضية الخمج بالمتحولة النسيجية بين األشخاص في مدينة سامراء,رساله ماجستير,كليه العلوم,جامعه تكريت. 92 رؤوف, شااااااااااذى عبااااااااااد الوهاااااااااااب. )6096(. انتشااااااااااار االميبااااااااااا المعويااااااااااة Entamoebahistolytica/ E.dispar في منااطق جناوب بغاداد, مجلاة القادساية لعلوم الطب البيطري, المجلد 99, العدد االلوسي,توفيق ابراهيم و البياتي, شجعان رضا حسن )2008(, دراسة وبائية اميبا الحالة للنسيج للمرضى المصابين في قرية بسطاملي /قضاء طوز /محافظة صالح الدين, مجلة العلوم الصرفة,كلية العلوم /جامعة تكريت, العدد, 2 المجلد الناصار,علي محماد عباد.) 6090 (.دراساة تشخيصاية وحياتياة لطفيلاي اميباا الزحاار Entamoebahistolyticaاميباااااااااااا دسااااااااااابارEntamoebadipar. رساااااااااااالة ماجستير,كلية العلوم,جامعة تكريت. 91. خضير, محمد خليفة جواد, صبا جاسم و نزال, مها فالح. )6099(. دراسة عن مسببات االسهال الطفيلي لدى االطفال في قرية الحديد محافظة ديالى, مجلة بغداد للعلوم, مجلد.)4( 9 60 الدوري,رقية ويس خضر )2009(, دراسة بعض الجوانب الوبائية لالخماج الطفيلية وتاثيرها على بعض معايير الدم لدى المراجعين لمستشفى تكريت التعليمي,رسالة ماجستير,كلية التربية للبنات /جامعة تكريت. 69 االعبادي,اسماء ابراهيم.) 6000 (. وبائية الطفيليات المعوية بين تالميذ عدد من المدارس االبتدائية ورياض االطفال في مدينة الموصل ومحاولة اصابة الفئران المختبرية بالدودة الدبوسيةEntrobiusVermicularis.رسالة ماجستير,كلية التربية,جامعة الموصل 178

180 .22Kanoa,B.;George,E. Abed,Y.;AlHindi,A.(2006).Evaluation of the relation Ship between intestinal parasitic infection and health education among School children in Gaza City,Deitlahia Village and Jabalia refugee.gaza Strip,Palastine.The Islamic University,. J. (Series of National Studies and Engineering ).,14(2) : الناصاري, مبادر عاواد اساعد )2007(, دراساة وبائياة عان اميباا الزحاار لادى االطفاال فاي قضاء بيجي مع تااثير بعاض المستخلصاات النباتياة عليهاا.رساالة ماجساتير,كلياة التربياة /جامعاة تكريت 24ALBayati, Z.M. (2009). Study on Prevalence ofentamoebahistolytica and Entamoebadispar in Kiruk city using Enzyme linked ImmunosorbentAssays.M.Sc.Thesis,Collega,ofScience,Tikrit University 25 الجبوري,علاي حماد طاالل )2008(, دراساة وبائياة وساريرية لمارض الجياردياا فاي اطفاال مدينة الشرقاط وضواحيها, رسالة ماجستير كلية التربية /جامعة تكريت. 62 ا لجبااوري, ضاامياء ابااراهيم علااوان. )6009(. مسااح للطفيليااات المعويااة فااي بعااض المراكااز الصحية في مدينة كربالء, مجلة جامعة كربالء العلمية, المجلاد الخاامس, العادد الراباع علماي الجناابي, ماروان عباد الهاادي.)6094(. تاأثير الكاافيين والمستخلصاات المائياة والكحولياة للشااي االخضار علاى االصاابة التجريبياة لألميباا الحالااة للنساج فاي الفئاران المختبرياة ماع دراساة وبائياة الطفيلاي فاي مستشافى الطفال المركازي فاي بغاداد. رسااله ماجساتير,كلياه التربياة, جامعاه تكريت. 69 الخفاجي,معاااني سااهر عبااد.) 6090 (. بعااض المعااايير المناعيااة للمرضااى المصااابين بطفيلااي األميبااا الحالااة للنساايج Entamoebahistolytica والتغياارات النساايجية فااي الفئااران الباايض.رسالة ماجستير.كليه العلوم للبنات.جامعه بابل 29John,D.T. and Petri W.A.(2006).Medical Parasitology. 9th ednelsevier,amstdan,thewatherlands:

181 30Clark,C.G.;Alsmark,U.C.M. and Trzreiter,F.A.(2007). "Structure and content of the Entamoebahistolytica" a dvanace in parasitology, 65 (2): الصميدعي,انتصار غانم عبد الوهاب.)6096(. تحديد تجمعات Giardia Entamoebahistolytica /Entamoebadispar ومعقد lamblia بالتشخيص الجزيئي )PCR( للمصابين في تكريت.أطروحة دكتوراه كليه التربية جامعة تكريت. 181

182 قياس تراكيز عناصر الرصاص واملنغنيز والنيكل يف حواف طرق مدينة أربيل Measuring the concentrations of Lead, Manganese and Nickel in the roadsides of Erbil city تميم سليمان الجبوري أ.د.إبراهيم عمر سعيد الحمداني قسم علوم الحياة كلية العلوم جامعة تكريت أ.د.قصي كمال الدين األحمدي كلية علوم البيئة جامعة الموصل Tamem Sulaiman AlJibory Prof. Dr. Ibrahim Omar Saeed Department of BiologyCollege of SciencesUniversity of Tikrit Prof. Dr.Qusay kamal Alden AlAhmady College of Environmental Sciences الخالصة تناولت الدراسة الحالية قياس بعض تراكيز المعادن الثقيلة حول حواف بعض الطرق الرئيسة في مدينة اربيل/شمال العراق, اذ تم اختيار ستة عشر موقعا موزعة على ثالثة طرق رئيسية هي )شارع 61 متر في مركز المدينة وشارع 111 متر شبه خارجي وطريق حولي خارجي(, تم جمع عينات من ترب هذه المواقع ولمدة ثالثة أشهر )بمعدل عينة واحدة شهريا لكل موقع(, ابتداء من شهر كانون االول 2116 ولغاية شباط 2117, تم قياس تراكيز سبعة معادن ثقيلة هي )عنصر الرصاص والكروم والمنغنيز والنيكل والنحاس والزنك والكادميوم(, اضافة الى قياس الدالة الحامضية للترب في هذه المواقع قيد الدراسة الحالية.اظهرت النتائج وجود تغايرات واضحة في تراكيز هذه المعادن خالل أشهر الدراسة وفي جميع مواقع للطرق الثالثة وكما يلي: اظهر عنصر الرصاص اختالفا واضحا ومعنوي احصائيا 181

183 في تركيزه للمواقع الستة عشر وخالل أشهر الدراسة اذ بلغت معدالت هذا العنصر ما بين ) (,ppm وسجل الطريق األول )شارع 61 متر( اعلى تركيز لهذا العنصر بلغ )19(,ppm وألشهر الدراسة بلغ اعلى تركيز لعنصر الرصاص )15187( ppm خالل شهر كانون األول.اما عنصر المنغنيز فقد اظهر معدالت تراوحت ما بين ) ( ppm في جميع المواقع وخالل أشهر الدراسة الثالثة, وسجل الطريق األول اعلى تركيز تاله الطريق الثاني ثم الثالث, وألشهر الدراسة حقق شهر كانون الثاني اعلى المستويات لهذا العنصر تاله شهر كانون األول بدون فارق معنوي بينهما ثم شهر شباط الذي اختلف معنويا عن سابقيه.وبينت نتائج الدراسة لعنصر النيكل ان اعلى تركيز له بلغ )233116( ppm للموقع الحادي عشر كمعدل ألشهر الدراسة, وبينت متوسطات الطرق ان شارع 111 متر سجل اعلى التراكيز لعنصر النيكل, وأقل تركيز كان للطريق الحولي, فيما سجل شهر كانون األول اعلى معدل لتراكيز هذا العنصر خالل أشهر الدراسة. Abstract: This study has addressed monitoring the change in the concentration of some heavy metals on the side of some of the main roads in Irbil citynorth of Iraq. Sixteen sites distributed on the main roads we selected for data collection. The chosen main roads were the 60 m road situated in the city centre, the 100 m road (arterial road) and the peripheral road. Soil samples were collected from the aforementioned sites for a period between December 2016 and February The concentration of seven heavy metals namely Lead, Manganese, Chromium, Nickel, Copper, Zinc and Cadmium were measured in the samples along with the ph. The study has shown that there was a noticeable change in the concentration of the heavy metals in the selected sites during the measurement period. The observed changes can be summarised as follows: There was a pronounced and statistically significant change in the concentration of Lead in all the 16 sites during the 182

184 period of data collection. The concentration varied between 6.18 and 28.7 ppm. The first road (the 60 m one) has the highest concentration of this metal (19 ppm), while month wise, December registered the highest concentration of ppm. The concentration of Manganese varied between and ppm for all the selected sites during the data collection period. The first road had the highest concentration of this metal followed by the second road and then the third one. Month wise, January registered the highest concentration of this metal followed by December then February, which was significantly different from the aforementioned months. The collected data has also shown that the observed highest concentration of Nickel in this study was about ppm. The 100 m street had the highest average concentration of this metal whilst the peripheral road had the lowest. December had witnessed the highest concentration of this metal among all the months of the study المقدمة يعرف التلوث على انه التغيرات غير المرغوبة التي تطرا على الصفات الكيميائية والفيزيائية والبيولوجية في محيطنا الهوائي والمائي والتربة والتي تسبب تغيرات مؤذية للحياة البشرية, لذلك كانت اهم افرازات وتوجهات الحضارة الحالية هي مشكلة البيئة ألنها مشكلة متصاعدة تحتاج الى دراسة جد ية وموضوعية, وقد باتت تهدد كافة مقومات الحياة والتوازنات الطبيعية بالخطر الكبير, لذلك اصبح االهتمام بالتلوث البيئي من بديهيات وأوليات اهتمامات االنسان في كل االقطار ومنها قطرنا العراقي كبلد نامي لديه طموحات كبيرة من التوسع الصناعي واالقتصادي )علي, )1987 و)العمر,.)2111 مشكلة التلوث بدأت منذ بدأ االنسان ي سخر المصادر البيئية الطبيعية من اجل خدمته, غير ان المشاكل تعددت وخاصة في القرنيين االخيرين بسبب االستخدام المفرط للفحم الحجري في مجاالت الصناعات المتنوعة والمتعددة, كذلك ازدادت مشكلة التلوث مع

185 184 بداية الثورة الصناعية عام 1951 والتي ادت الى تحرر االبخرة المتصاعدة نتيجة للعمليات المتعددة وهذه االبخرة تكون عادة حاوية على اكاسيد الكبريت واكاسيد النتروجين الناتجة من حرق الوقود في المصانع والسيارات ومحطات توليد الطاقة الكهربائية )العمر, 2111(. للرصاص تأثير سلبي على التطور الجسمي والنمو ويسبب نقص في دقة البصر وعتبة السمع, والتعرض المستمر للرصاص يسبب اضرارا للدماغ وامراض عصبية وقد يؤدي الى الموت Simenov( وآخرون, 2111(. كما سجلت دراسة ا جريت بواسطة Atiemo( وآخرون, 2111( ان مستويات الرصاص في تربة حواف الطرق تتراوح بين ) ( ملغم/كغم, وفي دراسة اخرى وجد كال من Jaradat( وMomani, 1999( ان مستويات الرصاص في تربة حواف الطرق وبمسافات مختلفة من الطريق تراوحت بين ) ( ملغم/كغم, اذ أن االنبعاثات من حركة المرور المزدحمة على الطرق تحتوي على الرصاص والكادميوم والزنك والنيكل, والتي توجد في الوقود كعوامل محس نة للوقود ضد القرقعة في محركات السيارات وهذه تؤدي الى تلوث الهواء والتربة والنباتات المزروعة على جانب الطريق Ikeda( وآخرون, 2111(. المنغنيز عنصر ضروري للفعالية الفسيولوجية لإلنسان والحيوان ويعتبر التعرض الى مستويات منخفضة منه في الغذاء ضروريا في االنسان, بينما التعرض الى الجرعات العالية له تأثيرا سلبيا على صحة االنسان,Calkins( 2119(, عند الجرعات العالية يصبح المنغنيز ساما وتختلف هذه السمية تبعا لطريقة التعرض والصنف الكيميائي للمنغنيز إضافة الى العمر والجنس والنوع الحيواني,EPA( 2114( و) Medlar,Kohl and 2117(. تم تحديد الجهاز العصبي على انه الهدف االول حيث تم مالحظة التأثيرات العصبية عليه بصورة عامة, قد تحدث متالزمة تسمى متالزمة المنغنيز نتيجة التعرض المزمن للمستويات العالية للمنغنيز,EPA( 2114( و) Calkins, 2119(, ان التسمم بالمنغنيز يؤثر على الجهاز العصبي المركزي وعدم التنسيق بين الرأس والعينين ومشاكل في البصر, وتم مالحظة نوع من المتالزمات س م يت بمتالزمة,)Manganism( وتتميز بالشعور بالضعف والتحسس والوجه الشبيه بالقناع واضطرابات نفسية, كما تم مالحظة تأثيرات على التنفس للعاملين الذين يتعرضون له بصورة مزمنة كما تم مالحظة فقدان الرغبة الجنسية عند الذكور المتأثرين بالمنغنيز.)2119,Calkins( يتواجد المنغنيز في المياه السطحية والجوفية نتيجة لتآكل التربة ووصولها الى هذه المياه او نتيجة للنشاطات البشرية,EPA( 2114(. ويعتبر النيكل من العناصر التي تتواجد في البيئة بمستويات واطئة جدا ويعتبر ضروري وبجرعات صغيرة للكائنات الحية ولكن يمكن ان يكون خطرا عند تجاوز الحد االعلى المسموح به, اذ انه يمكن ان يسبب مختلف انواع السرطانات وبمختلف مناطق الجسم للحيوان واالنسان وخصوصا في الكبد,USEPA( 2117(, ان اكثر استخدامات النيكل

186 185 شيوعا هي طالء الحديد وبعض المنتجات المعدنية االخرى, وان المصدر االكبر لتلوث التربة بالنيكل هي معامل طالء المعادن واحتراق الفحم الحجري وعمليات التنقيب في المناجم الستخراج المعادن وبضمنها عنصر النيكل والطالء الكهربائي,Khodadoust( 2114(. ان الكمية االكبر من النيكل المتحرر الى البيئة يتم امتزازها من قبل المترسبات او جزيئات التربة ويصبح بالنتيجة غير متحرك, وفي المحاليل الحامضية يصبح النيكل متحركا ونتيجة لذلك يترسب الى المياه الجوفية المجاورة, اذ تعاني االحياء المجهرية في البداية من انحدار في النمو نتيجة التعرض للنيكل ولكن سرعان ما تتطور مقاومة هذه االحياء المجهرية لعنصر النيكل وتستعيد نشاطها, لم ي عرف ان النيكل يتراكم في النباتات او اجسام الحيوانات ولذلك لم يعرف ان النيكل يتراكم في السلسلة الغذائية Raymond( وFelix, 2111 (.وفي دراسة اجراها ) Atiemoوآخرون, 2111( على تقييم انبعاثات المعادن الثقيلة من المركبات على الطرق في اسكتلندا وجدوا بأن تراكيز عنصر النيكل تراوحت بين )3 33(,ppm وفي دراسة اخرى اجراها الباحث Aslam( وآخرون, 2113( على تلوث التربة بالمعادن الثقيلة على جانب الطريق بالقرب من اشارات المرور المختلفة في مدينة دبي في االمارات العربية المتحدة وجدوا انه في الطريق الذي يحتوي على اكثر من اشارتين مرور فأن تراكيز عنصر النيكل تراوحت بين ) (,ppm اما في الطريق الذي يحتوي على اشارة مرور واحدة فأن تراكيز عنصر النيكل تراوحت بين ) (,ppm والطريق الذي لم يكن فيه اشارات مرورية فأن تراكيز النيكل تراوحت بين ) (.ppm تهدف الدراسة الحالية لمعرفة تراكيز الرصاص والكادميوم والنيكل حول حواف الطرق في مدينة أربيل ومعرفة اعلى واوطأ التراكيز لهذه العناصر الثقيلة وخالل فترات زمنية مختلفة واجراء مقارنة ما بين تراكيز هذه المعادن الثقيلة لمعرفة اي المواقع أكثر تلوثا بها. 6 مواد وطرق العمل 96 وصف منطقة الدراسة مدينة اربيل هي واحدة من محافظات العراق وهي أقدم من مدينة بابل ومتعددة القالع وتقع على سهل رحب وهي رابع أكبر مدينة من حيث المساحة في العراق بعد بغداد والبصرة والموصل والسادسة من حيث عدد السكان, وتبعد عن مدينة بغداد بحوالي 361 كم وتقع مدينة اربيل الى شرق مدينة الموصل والتي تقع شمال القطر العراقي وكما مبين في الشكل رقم )1(, وهي واحدة من أقدم المجتمعات المأهولة بالسكان في العالم والتي وجدت قبل 2311 عام قبل الميالد,Atlas(.)2111

187 اختيار مناطق الدراسة تضم نت الدراسة الحالية اجراء مسح ميداني على ثالثة طرق رئيسية في مدينة اربيل ولمد ة ثالثة أشهر ابتداء من كانون األول 2116 ولغاية شباط 2117, حيث ان عملية المسح تضم نت ستة عشرا موقع مختلف وعلى طول الطرق الثالثة الرئيسية في مدينة أربيل وكانت المسافة بين كل عينة واخرى على طول الطريق هي )215 3 كم(, وهذه المناطق وصفاتها هي:المنطقة االولى: طريق رئيسي ويسمى شارع )61 متر( ويصل طوله حوالي )11( كم, وهو األقرب الى مركز المدينة حسب الشكل )2( ويتميز بأن %95 من السيارات التي تمر عليه تستخدم البنزين, وان ما معدله 8111 سيارة تستخدمه يوميا.المنطقة الثانية: طريق رئيسي ويسمى شارع )111 متر( ويصل طوله حوالي )22( كم, وهذا الطريق ابعد عن مركز المدينة من الطريق األول كما موضح في شكل )2(, ويصل معدل السيارات التي تستخدمه يوميا الى 8111 سيارة %51 منها تستخدم البنزين و %51 تستخدم زيت الغاز )كاز أويل(.المنطقة الثالثة: طريق حولي يربط بين طريق )اربيلمخمور( و )طريق اربيلموصل(, ويصل طوله حوالي )11( كم, يقع خارج المدينة وتحيط به أراضي زراعية من الجانبين, وتمر عليه ما معدله 2111 سيارة يوميا 81 %91 منها تستخدم زيت الغاز وهي مركبات حمل تنقل الوقود الخفيف والثقيل واالسمنت وغيرها من المواد الصناعية. 16 جمع عيانات التربة تم اخذ نماذج التربة من مسافة )3 متر( عن حافة الطريق ومن المواقع المختارة الموضحة في الشكل )2(. وأ خذت ثالثة عينات من التربة من كل موقع من المواقع الستة عشر الم ختارة من طبقة التربة العليا من عمق )111 سم( باستخدام مثقاب من الفوالذ المقاوم للصدأ و وضعت عينات التربة في اكياس البولي أثيلين المعزولة وس ج لت المعلومات والمالحظات على كل كيس ولكل عينة من التربة Mmolawa( وآخرون, 2111(, وتم تجفيف عينات التربة بالهواء ألن محتوى الرطوبة في التربة يمكن ان يؤثر على دقة تحليل العينة اذ ان الرطوبة في العينة تمتص األشعة السينية (Xray) Kalnicky( وSinghri, 2111(, وأ زيلت جميع الكتل الترابية والفتات وتم خلطها بشكل جيد في المختبر, ثم ن خلت العينات خالل منخل 2 ملم )3052 )EPA method إلزالة الجسيمات الخشنة,USEPA( 1995(, قبل أخذ العينات الى الفحص المختبري بواسطة جهاز )XRF( او )X )Ray Florescence وذلك الن التأثيرات الفيزيائية المختلفة مثل تغير حجم الحبيبات وتجانس العينة وتغاير وجود حبيبات للمعادن بتراكيز عالية مثل الرصاص والجسيمات المعدنية او قطع االصباغ المحتوية على الرصاص لها تأثيرات مهمة في اختالف نتائج العينات,USEPA( 1998( و) VanCott وآخرون, 1999(.

188 46 قياس تراكيز المعادن الثقيلة في عينات التربة تم قياس تراكيز المعادن الثقيلة قيد الدراسة بواسطة جهاز XRF نوع Genuis 9000 Handheld Xray Fluorescent Spectrometer من منشأ امريكي والذي يظهر في الشكل )1(, اذ تم تعريض العينات لألشعة لمدة 91 ثانية وبقوة )24(.eV 26 االجهزة المستخدمة في الدراسة تم استخدام اجهزة متنوعة لقياس العديد من المتغيرات في الدراسة الحالية وكما مبين في جدول رقم )1(. جدول رقم )9(: األجهزة المستخدمة في الدراسة. منخل 2 ملم االجهزة المستخدمة المنشأ USA China China Handheld Xray Fluorescent Spectrometer Genius9000 Hot plate 187

189 فرن كهربائي (Oven) جهاز قياس األس الهيدروجيني phmeter ميزان حساس Sensitive Balance جهاز تحريك كهربائي Magnetic Stirrer China Germany Germany China التحليل اإلحصائي ح ل لت النتائج إحصائيا باستخدام برنامج التحليل االحصائي (Statistical (SAS) Analysis system) حيث تم اجراء تحليل التباين )ANOVA( لعوامل التجربة الثالث وهي ستة عشر موقع وثالث مناطق وثالث اشهر للمتغيرات الثالثة )العناصر الثقيلة( وفق التصميم العشوائي الكامل )CRD( الذي حدد معنوية اغلب المتغيرات حسب اختبار )F(, ومن ثم تم اختبار المتوسطات باستخدام اختبار دنكن المتعدد المدى Test( )Duncan Mutable Range لتحديد االختالفات اإلحصائية بين المجاميع المختلفة وكان االختالف المعنوي لجميع االختبارات عند مستوى احتمالية )0.05 P(. 1 النتائج والمناقشة 91 تراكيز عنصر الرصاص Pb اظهرت نتائج الدراسة الحالية اختالفات واسعة في تراكيز عنصر الرصاص Pb وخالل أشهر الدراسة الثالثة, ويالحظ هذا االختالف من الشكل )2( الذي يبين المستويات التي تم تسجيلها لتراكيز هذا العنصر للمواقع الستة عشر ضمن المناطق الدراسة الثالثة وخالل ثالثة اشهر, اذ يالحظ ان الموقع الرابع الواقع ضمن منطقة شارع 61 متر وخالل شهر كانون األول سجلت اعلى مستوى لتركيز هذا العنصر, وجاءت هذه النتيجة مدعومة احصائيا كما يتضح من نتائج جدول )1( إذ حقق هذا الموقع )4( ضمن منطقة شارع 61 متر التركيز األعلى لعنصر الرصاص والبالغ )2817( ppm كمعدل ألشهر الدراسة الثالثة, وبفارق معنوي عن بعض المواقع وغير معنوي عن مواقع أخرى حسب اختبار دنكن المتعدد المدى. فيما بلغ اقل مستوى لتراكيز عنصر الرصاص )6118( ppm للموقع الثالث عشر الواقع ضمن منطقة الطريق الحولي وكمعدل ألشهر الدراسة الثالثة. كما يظهر جليا من الشكل )2( ان تراكيز هذا العنصر ذات مستويات عالية في المنطقة األولى )منطقة شارع 61 متر( والتي هي األقرب الى مركز المدينة وبالتالي األقرب الى النشاط السكاني والصناعي والكثافة المرورية لسارات البنزين والذي يحتوي على رابع أوكسيد الرصاص, ثم

190 SITE 1 SITE 2 SITE 3 SITE 4 SITE 5 SITE 6 SITE 7 SITE 8 SITE 9 SITE 10 SITE 11 SITE 12 SITE 13 SITE 14 SITE 15 SITE 16 تنخفض مستويات هذا العنصر في المنطقة الثانية )منطقة شارع 111 متر( االبعد عن مركز المدينة, وكانت األدنى في المنطقة الثالثة )منطقة الطريق الحولي( وهذه المشاهدات جاءت معززة بما اظهرته نتائج التحليل اإلحصائي الموضحة في جدول )2( والتي حققت فيها المنطقة األولى )شارع 61 متر( المتوسط األعلى )19113( ppm وبفارق معنوي عن المنطقتين الثانية والثالثة اللتان لم تختلف معنويا عن بعضهما Ediin( وآخرون, 2111( و) Simenov وآخرون, 2111(. اما زمنيا فيالحظ نظريا من الشكل )5( واحصائيا من الجدول )3( تفوق شهر كانون األول بالمستويات األعلى لتراكيز عنصر الرصاص, إذ اعطى هذا الشهر المتوسط األعلى احصائيا والذي بلغ )15187( ppm وبفارق معنوي عن شهري كانون الثاني وشباط الذين اختلفا معنويا عن بعضهما, وحل شهر كانون الثاني ثانيا ثم تاله شهر شباط, وهذا سببه ان تراكيز العناصر ترتفع خالل اشهر الصيف وتنخفض شتاء, ولكون شهر كانون األول هو األول في دراستنا وهو أيضا يعتبر اول اشهر الشتاء حافظ على التراكيز العالية لعنصر الرصاص ثم انخفضت تراكيز هذا العنصر مع التقدم في فصل الشتاء, مستويات عنصر الرصاص STREET (60 METER) STREET (100 METER) December January February AROUND STREET شكل )6( تراكيز عنصر الرصاص لمواقع وأشهر الدراسة وعند مقارنة نتائج هذه الدراسة مع دراسات سابقة تبين ان جميع تراكيز عنصر الرصاص هي اقل من سابقاتها من الدراسة, حيث بي نت دراسة )خليل وآخرون, 1989( لشوارع مدينة الموصل ان تركيز عنصر الرصاص كان يتراوح بين ) (,ppm في حين وجدت )العلي, 1996( ان تراكيز الرصاص في الترب داخل مدينة الموصل تراوحت بين )13272(,ppm اما دراسة )سعيد, 1998( فقد توصلوا فيه الى ان تراكيز الرصاص في الترب حول مصافي بيجي 189

191 SITE 1 SITE 2 SITE 3 SITE 4 SITE 5 SITE 6 SITE 7 SITE 8 SITE 9 SITE 10 SITE 11 SITE 12 SITE 13 SITE 14 SITE 15 SITE 16 تراوحت بين )211159(,ppm اما في دراسة كل من,Guney( 2111( و) Alloway, 2113( فقد توصلوا فيها الى ان العنصر الرئيسي الملوث على حواف الترب هو الرصاص نتيجة حركة المرور والملوثات الصناعية في تلك المناطق. 61 تراكيز عنصر المنغنيز Mn اوضحت النتائج المعروضة في شكل )3( ان الموقع األول والذي يقع ضمن منطقة شارع 61 متر سجل اعلى تركيز لهذا العنصر بلغ )417195( ppm خالل الشهر الثالث من الدراسة )شهر شباط(, فيما حقق الموقع الثاني والواقع ضمن منطقة شارع 61 متر أيضا اعلى معدل لمستويات تركيز هذا العنصر بلغ )364131( ppm حسب نتائج اختبار المتوسطات بطريقة دنكن المتعدد المدى المبينة في جدول )1( كمعدل ألشهر الدراسة الثالثة, والذي اظهر أيضا عدم وجود اختالفات معنوية بين مواقع الدراسة الستة عشر. اما بالنسبة للمناطق فيالحظ من خالل نتائج اختبار المتوسطات بطريقة دنكن المتعدد المدى المبينة في جدول )2( ان منطقة شارع 61 متر حققت اعلى مستوى لتركيز عنصر المنغنيز بلغ )321179( ppm على الرغم من عدم وجود اختالفات معنوية مع متوسطات المناطق األخرى وتلتها منطقة شارع 111 م, وهذه النتائج مشابهة لنتائج العناصر السابقة, والتي أظهرت ارتفاعا ملحوظا في مستويات العنصر كلما اتجهنا نحو مركز المدينة, والذي يمثل ذروة النشاط السكاني والصناعي وكثافة الحركة المرورية للمركبات,EPA( 2114( و) Aslam وآخرون, 2113(. تراكيز عنصر المنغنيز STREET (60 METER) STREET (100 METER) December January February AROUND STREET شكل )1(: تراكيز عنصر المنغنيز لمواقع وأشهر الدراسة. 191

192 زمنيا حقق الشهران األوالن من الدراسة اعلى المعدالت لتركيز عنصر المنغنيز إذ بلغت ) و 326 ( ppm لشهري كانون الثاني وكانون األول على التوالي بدون اختالف معنوي بينهما كما يظهر في جدول )3(, وأعطى شهر شباط اقل تركيز مختلفا معنويا عن األشهر األولى, وهذا سببه كما ذكرنا سابقا عملية غسل العناصر من التربة بمياه االمطار والتي تزداد كلما تقدمنا في الشتاء, وهناك العديد من الدراسات التي بينت ان تواجد هذه العناصر في التربة يكون اما نتيجة تحوالت من مصادرها االساسية او من المعادن االولية وتحرير هذه المعادن بفعل الفعاليات الكيميائية او الفيزيائية )الخطيب, 1995( و)الحمداني, 1987(. 11 تراكيز عنصر النيكل Ni بي نت تراكيز عنصر النيكل خالل أشهر الدراسة الثالثة للمواقع الستة عشر والموضحة في الشكل )8( اختالفات واضحة في تراكيز عنصر النيكل, اذ بلغ اعلى تركيز لهذا العنصر )352141( ppm في الموقع الحادي عشر والذي يتبع للمنطقة الثانية )شارع 111 متر( وخالل شهر شباط, وهذه النتيجة جاءت مطابقة لما اظهرته نتائج التحليل االحصائي المبينة في جدول )1( وكمعدل ألشهر الدراسة الثالثة, إذ بلغ تركيز عنصر النيكل )233116( ppm وبفارق معنوي عن معظم مواقع الدراسة األخرى. ويالحظ من الشكل )4( ان منطقة شارع 111 متر حققت أعلى المستويات لتراكيز عنصر النيكل تلتها منطقة شارع 61 متر ثم الطريق الحولي, وهذه النتائج جاءت مدعومة بنتائج اختبار متوسطات المناطق إحصائيا حسب اختبار دنكن المتعدد المدى المبينة في جدول )2( والتي يظهر من خاللها ان أعلى المتوسطات بلغت ) و ( ppm لمنطقتي شارع 111 متر وشارع 61 متر على التوالي واللذان لم يختلفان عن بعضهما معنويا, فيما سجل الطريق الحولي أدنى مستوى لتركيز عنصر النيكل وبفارق معنوي عن المناطق األخرى, مما سبق نالحظ ارتفاع تراكيز عنصر النيكل في المناطق القريبة من مركز المدينة عنها في المنطقة الخارجية )الطريق الحولي( وهي طبيعية بسبب تلوث التربة بمخلفات حرق الوقود المستخدم في السيارات المارة في تلك المواقع )صادق وآخرون, 2118( و) Mohsen و,Mohsen 2118(, في حين بينت دراسات أخرى انه قد يعود الى االنبعاثات الحاوية على العديد من العناصر الثقيلة من ضمنها النيكل او قد يرجع الى نوعية هذه الترب التي قد تكون حاوية على نسبة من الكوارتز وهذا األخير يكون حاوي على نسبة من النيكل إضافة إلى صبغ وسمكرة السيارات,Nies( 1999(. 191

193 SITE 1 SITE 2 SITE 3 SITE 4 SITE 5 SITE 6 SITE 7 SITE 8 SITE 9 SITE 10 SITE 11 SITE 12 SITE 13 SITE 14 SITE 15 SITE 16 تراكيز عنصر النيكل STREET (60 METER) STREET (100 METER) December January February AROUND STREET شكل رقم )4( تراكيز عنصر النيكل لمواقع وأشهر الدراسة. تظهر في جدول )3( نتائج اختبار المتوسطات ألشهر الدراسة حسب اختبار دنكن المتعدد المدى, ومنه يالحظ ان شهر كانون األول سجل اعلى متوسط لتركيز عنصر النيكل بلغ )163199( ppm وبفارق معنوي عن شهر كانون الثاني, وبدون فارق معنوي عن شهر شباط الذي تاله في مستوى تركيز هذا العنصر, وهذه النتائج تشير الى تباين غير واضح في سلوك هذا العنصر خالل فترة الدراسة. جدول )9(: معدالت تراكيز المعادن الثقيلة في حواف الطرق للمواقع قيد الدراسة. Site Sample Pb (PPM) Mn (PPM) Ni (PPM) Site Sample Pb (PPM) Mn (PPM) Ni (PPM) Street(60 meter) Site 1 bc ab bc Street (100 meter) Site 9 bc8.14 ab333.3 bc Site 2 bc a ab Site 10 bc9.193 ab309.4 bc Site 3 ab ab bc Site 11 bc ab a Site 4 a ab bc Site 12 bc ab bc Street (100 Site 5 bc a bc und Stre etsite 13 c6.183 ab bc

194 Site 6 bc ab bc Site 14 bc7.947 ab bc Site 7 bc ab343.3 ab176 Site 15 c7 ab c92.2 Site 8 bc ab ab Site 16 bc8.53 ab bc * القيم ذات الحروف المتشابهة ال تختلف عن بعضها معنويا. جدول )6(: معدالت تراكيز المعادن الثقيلة لمناطق الدراسة. Pb (PPM) Mn (PPM) Ni (ppm) Street (60 meter) a a a Street (100 meter) ab10.95 a a Around Street b7.415 a b * القيم ذات الحروف المتشابهة ال تختلف عن بعضها معنويا. جدول )1(: معدالت تراكيز المعادن الثقيلة والدالة الحامضية ألشهر الدراسة. Pb (PPM) Mn (PPM) Ni (ppm) December a15.87 a326 a January b a b February b9.487 b ab147.9 * القيم ذات الحروف المتشابهة ال تختلف عن بعضها معنويا يستنتج مما تقدم تفاوت واضح في تراكيز هذه الملوثات من المعادن الثقيلة في مواقع الدراسة الستة عشر, إذ تراوحت قيم معدالتها بين ) ( لعنصر 193

195 194 الرصاص, وبين ) ( ppm لعنصر المنغنيز, ولعنصر النيكل بلغ اعلى تركيز )233116(,ppm كما لوحظ ازدياد تراكم العناصر الثقيلة قيد الدراسة حول حواف الطرق كلما اقتربنا من مركز المدينة, إذ سجل شارع 61 متر اعلى المستويات لتراكيز هذه العناصر يليه شارع 111 متر ثم الطريق الحولي. كما وجد انه مع تقدم فصل الشتاء تنخفض مستويات وتراكيز العناصر الثقيلة السبعة المدروسة, إذ سجل شهر كانون االول اعلى المتوسطات لتراكيز هذه العناصر تاله شهر كانون الثاني ثم شهر شباط. لذلك نوصي بمتابعة نوعية الغازات المنبعثة من عوادم السيارات المختلفة واجراء المزيد من الدراسات لتقليل من تأثيراتها الضارة وبشكل دوري. كما نوصي بإجراء دراسات احيائية على النباتات المزروعة حول حواف هذه الطرق لتحديد مدى حساسيتها وتأقلمها للعناصر الثقيلة والسامة. المصادر الحمداني, رائدة اسماعيل عبد اهلل )9199(. التلوث الصناعي للعناصر الصغرى والثقيلة على التربة والنبات, رسالة ماجستير, كلية الزراعة والغابات/جامعة الموصل. الخطيب, مروان عبد المهدي محمود )9119(. تعيين تركيز بعض المعادن الثقيلة الملوثة في مياه وتربة ونباتات مناطق سيل الزرقاء زسد الملك طالل ودير عالرسالة ماجستيركلية العلومجامعة آل البيت. خليل, نبيل فاضل وخالد فتحي الشاهري ومروان الشاروك )9191(. التقصي عن بعض العناصر الثقيلة والنادرة الموجودة في الترب والغبار المستقر في الشوارع الرئيسية لمدينة الموصل. مجلة التربية والعلم. المجلد 2 العدد 9. سعيد, بدران عدنان )9119(. التلوث الصناعي بالعناصر الثقيلة وتأثيره في الغطاء النباتي المحيط بالمواقع الصناعية في بيجي, أطروحة دكتوراهكلية التربية جامعة الموصل. صادق, علي حسين وكاظم مهند كامل )6009). التغييرات الشهرية في تراكيز العناصر النزرة في قناة نهر الغراف الرئيسية لنهر دجلة, قسم االسماك والثروة الحيوانية. كلية الزراعة. جامعة البصرة. العلي, فائزة عزيز محمود )9112(. تأثير المياه الملوثة في نمو ومحتوى النباتات في بعض العناصر الصغرى والثقيلة. أطروحة دكتوراه كلية العلوم جامعة الموصل. علي, لطيف حميد )9199(. التلوث الصناعي لمصادر كيمياء التلوث وطرق السيطرة. جامعة الموصل, دار الكتب للطباعة والنشر. العمر. مثنى عبد الرزاق )6000(. التلوث البيئي. دار وائل للنشر عمان االردن. العمر. مثنى عبد الرزاق )6090(. التلوث البيئي. دار وائل للنشر عمان االردن. Alloway B J (2013). Heavy Metals in Soils Trace Metals and Metalloids in Soils and their Bioavailability, Springer, 3rd Edition p. 396.

196 Aslam J., Khan S. A., Khan S. H., (2013). Heavy metals contamination in roadside soil near different traffic signals in Dubai, United Arab Emirates. Journal of Saudi Chemical Society, Volume 17, Issue 3, Pages Atiemo, S.; Ofuso, F.; Mensah, K.; Tutu, O.; Palm, L. and Blackson, A. (2011). Contamination assessment of heavy metals in road dust from selected roads in Accra Ghana. Rese. Jour. of Environmental and Earth sciences; 3: Atlas. World Atlas (2000). Compact Disk England. Calkins, M. (2009). Materials for sustainable sites: A complete guide to the evaluation. Hoboken, New Jersey: John Wiley and Sons. Pp 451. Calkins, M. (2009). Materials for sustainable sites: A complete guide to the evaluation. Hoboken, New Jersey: John Wiley and Sons. Pp 451. Ediin, G.; Golantu, E. and Brown, M. (2000). Essentials for health and wellness. Toronto, Canada: Bartlett Publishers. Pp 368. EPA. (2004). Drinking water health advisory for Mn. Accessed from Guney M, Onay T T, Copty N K (2010). Impact of overland traffic on heavy metal levels in highway dust and soils of Istanbul, Turkey. Environ Monit Assess164(14): Ikeda, M., Z. W. Zhang, S. Shimbo, T. Watanabe, H. Nakatuska, C. S. Moon, N. Matsuda. Inoguchi and K. Higashikawa (2000). Urban population exposure to lead and cadmium in east and southeast Asia. Science of the total Environmental 249: Jaradat, M. and Momani, A. (1999). Contamination of roadside soil, plants and air with heavy metals in Jordan, a comparison study. Turk jour. of Chem.; 23: Kalnicky, D., and Singhri, R. (2001). Field Portable XRF analysis of Environmental Samples. Journal of Hazadous Materials, 83, pp Khodadoust, A. P., K. R. Reddy, and K. Maturi (2004). Removal of nickel and phenanthrene from kaolin soil using different 195

197 extractants, Environmental Engineering Science, vol. 21, no. 6, pp Kohl, P. and Medlar, S. (2007). Occurrence of Mn in drinking water and Mn control. New York, USA: IWA Publishing. Pp Mmolawa, K. B., Likuku, A. S., Gaboutloeloe, G. K. (2011). Assessment of heavy metal pollution in soils along major road sides in Botswana, African Journal of environmental science and technology. Vol. 5(3), pp Mohsen, B. and Mohsen, S. (2008). Investigation of metals accumulation in Some vegetables irrigated with waste water in share Ray Iran and toxicological application. American Eurasian. J. Agric. Environ. Sci. 4(1): Nies, D. H., (1999). Apple. Microb. Biotech. 51, Raymond A. Wuanal and Felix E. Okieimen (2011). Heavy Metals in Contaminated Soils: A Review of Sources, Simeonov, L.; Kolhubovski, M. and Simeonov, B. (2010). Environmental heavy metal pollution and effects on child mental development. Dordrecht, Netherlands: Springer. Pp U.S Environmental Protection Agency (USEPA) (1995). Test methods for evaluation solid waste. Vol. IA: Laboratory manual physical/chemical methods, SW 846, 3rd ed. US Gov. Print, Office, Washington D.C. USEPA (1998) Field Portable Xray Fluorescence Spectrometry for the Determination of Elemental Concentrations in Soil and Sediment. Method Revised USEPA (2007) Treatment technologies for site cleanup: annual status report (12th Edition), Tech. Rep. EPA542R07012, Solid Waste and Emergency Response (5203P), Washington, DC, USA. VanCott R., McDonald, B. and Seelos, A. (1999). Standard Soil Sample Preparation Error and Comparison of Portable XRF to Laboratory AA Analytical Results. Nuclear Instruments and Methods in Physical Research A, 422, pp

198 A study of cytogenetic effects of Indomethacin and glucosamine drugs in some fertility genes in male Albino rats.. / /.. / / Lecturer : Zubaida Adnan Aljashammi Biology Department /college of education and science Applied/Tikrit university Assistant Lecturer: Nibras Sirhan Kudair Biology Department/college of science /Tikrit university PTGR 2,GSTP 1,HSP70 21 DNA pcr ) / 21 4 /. 7. (,IGFBP 3 4. HSP70

199 Abstract The genotoxicity of Indomethacin and glucose amine was studied in four genes of the fertility genes of male rats (PTGR2, GSTP1, HSP70, IGFBP3) and at 7 mg / kg, 21 mg / kg respectively for two drugs, drinked for 21 days and 4 groups each 4 rats, including the control group, which was drinked with distilled water. DNA was extracted for the tissue cells of both the testes and epidydamises,genes was studied by pcr technique and electrophoreses on agarose gel. A significant effect was observed on the genes isolated from the epididymal cells compared to the testes in all the genes under study except for the HSP70 gene, its not been any effect in both the testes and the epididymises. Introduction Indomethacin is a nonspecific antiinflammatory drug (NSAID) that was developed specifically to abate the inflammatory responses to the indolic hormones, serotonin and tryptophan, It was introduced in 1963 for the treatment of rheumatoid arthritis, degenerative joint diseases, ankylosing spondylitis, gout, acute musculoskeletal disorders, inflammation and oedema following surgical technique and pain associated with primary dysmenorrhea [1,2]. Glucosamine and chondroitin sulfate (CS), both components to the extracellular matrix of articular cartilage, have been used for medicinal purposes for nearly 40 years [3,4] After gaining popularity in Europe and Asia for the treatment of arthritis for the last 20 years, they gained popularity in the United States after the release of several lay publications in the late 1990s.both drugs was used to treatment Osteoarthritis [5,6]. Many of the toxic effects of indomethacin in experimental animais may be due to inhibition of prostaglandin synthesis [7] but afew studies related this effected with fertility gene defected. 198

200 (PTGR2,GSTP1,HSP70,IGFBP3 ) four genes was classified as fertility genes in rat or have roles in spermatogenesis and maturation of sperms [8]. Prostaglandinendoperoxide synthase (PTGS), also known as cyclooxygenase, is the key enzyme in prostaglandin biosynthesis, and acts both as a dioxygenase and as a peroxidase. There are two isozymes of PTGS: a constitutive PTGS1 and an inducible PTGS2, which differ in their regulation of expression and tissue distribution [9]. This gene encodes the inducible isozyme. It is regulate d by specific stimulatory events, suggesting that it is responsible for the prostanoid biosynthesis involved in inflammation and mitogenesis.. A singlenucleotide polymorphism at position 313 in The resulting isoleucine [10]. Glutathione Stransferases gene polymorphisms could impair the capability of defense against oxidative stress and result in the development of some cancers One of the determinant factors of susceptibility of spermatozoa to oxidative damage [11]. Heat shock protein 70 (HSP70)is produced by the HSP70 gene, The HSP70 gene is encoded by a single exon. The open reading frame the gene is 1926 bp and its protein includes 641 amino acids and includes a family of HSPs which range in size from 68 to 73 KDa [12]. HSP70 plays a protective role in reaction to hyperthermia as well as other stress conditions by providing a balance between synthesis and degradation of cellular proteins.elliott et. al. (2009) found that HSP70, as spermbinding oviduct AL proteins, increase longevity and viability of sperm in bull and boar,it was reported that semen quality may be influenced by levels of HSP70 protein in boars [13]. Govin et al.(2006)found 199

201 association between HSP70 function and spermatid DNApackaging proteins during spermatogenesis [14].Insulin like growth factor binding protein 3 (IGFBP3) is a multifunctional molecule with many mechanisms of action, their receptors, and their binding proteins play key roles in regulating cell proliferation and apoptosis [15]. Among the several roles of IGFBP3 are its function as the major carrying protein for IGF1 and IGF2 in the circulation, and its action as a modulator of IGF bioactivity and as a direct growth inhibitor in the extravascular tissue compartment, where it is expressed in a highly regulated manner [16]. The effects of the GST genes (GSTM1, GSTT1 and GSTP1) on male factor infertility have not been well elucidated. A case control study was performed to investigate the association between functionally important polymorphisms in GST genes and idiopathic male infertility [17,18]. The present study aims to study the effect of indomethacin and Glucoseamine on the four genes under study using pcr technique to determine the risk of these drugs on male fertility. Materials and methods Chemicals Indomethacin tablets in (25 mg/tablet) was obtained from sigma chemical company. Glucose amin gelatinous capsules(500 mg/capsule) was obtained from sigma chemical company. 211

202 Experimental animals Sixteen adult male albino rats, age from (1216) weeks and their weights ( gm) were brought at the National Center for Control and Pharmaceutical Research in Baghdad... The animals were acclimatized for two weeks prior to the experiment. They were kept in plastic cages under adequate temperature and ventilation. All rats were provided with free access to water and food with a 12 h light/dark cycle. Experimental design The rats were classified into four groups: Group I (control group): Comprised of 4 rats. They are received saline orally by gavage in a daily for 4 weeks. Group II: (Indomethacin group): Included 4 rats fed on basal diet and given Indomethacin dissolved in salineorally by gavage in a daily dose (7 mg/kg) for 4 weeks. Group III: (Glucose Amin group): Included 4 rats fed on basal diet and given Glucose Amin dissolved in saline orally by gavage in a daily dose (21 mg/kg) for 4 weeks. Group IV: (Indomethacin and Glucose Amin group): Included 4 rats fed on basal diet and given both drugs dissolved in saline orally by gavage in a daily for 4 weeks. At the end of the fourth weeks, animals were anesthetized and decapitated and the the testes with epididymis was harvested by careful rapid dissection and was immediately extracted DNA by DNA Extraction Kitwas equipped by Gene aid Total DNA Mini Kit. 211

203 The quality of the DNA was also reported by passing the samples on the agarose gel by electrophoresis [19]. Genetic analysis was carried with sample PCR. Four Primers equipped withbioneer company (showed in table no.1) were used to amplify products. Applied BiosystemVeriti TM Thermal Cycler was used for deoxyribonucleic acid (DNA) amplification.the polymerase chain reaction (PCR) cycling condition consisted of an initial denaturation for 2min at 95C,followed by 1 cycle of 95 C for5 min,95c 20 sec,and 60 C for 1min,and afinal extension at 72 C for 2 min.polymerase chain reaction products were electrophoresed on a 2% agarose gel and visualized under ultraviolet( figur1). Primers Sequences Size IGFBP 3 IGFBP 3 F R 3'CTGCAAGGCAACACCATTCA 5' 3'ATGGGGGTGCCAATCATCTG 5' 845 Pb HSP70 HSP70 F R 3'TTCTCCCAGTGCTTGTTGGA 5' 3'GGTAGGAAGGCATTAGGACGA 5' 1005pb GSTP1 GSTP1 F R 3' TCTGGCCGTTGTTCCTGTAA 5' 3'TGACCTGAGGTTGCTTTGAGG 5' 1176pb PTGR2 PTGR2 F R 3' AGTGTGTGGTTACGGCTTTCA 5' 3'GCATGCCAAATGGCAGAAAAA 5' 1027pb 212

204 Table 1: showed the four primers used with their sequences and size of bands. Results DNA samples isolated from both the testis and the epididymis showed high purity when measured with a Nano drop( 1.8 2) with concentrated 25 to 125 nm / μl in Fig.1 Fig1:the electrophoreses of hole DNA extracted from testis and epididymis for four groups of animals with control. The results of the polymerase chain reaction(pcr) of multiplying the IGFB3 gene in the 854 Pb in the DNA samples from the testis and epididymis for the experimental animals under study with the three treatment (indomethacin, glucose amine and indomethacin with glucose amine) were reported to be electrophoresed on agarose gel 2% after staining by ethidium bromide stain, The occurrence and dispersion of the band in each of the testes and epididymis in three treatments compared to the standard sample as shown in Figures 22 and 3 respectively. 213

205 Fig.2:show the IGFP3 gene in Fig.3:show the IGFP3 gene in Bands size 845pb for DNA extracted Bands size 845pb for DNA extracted from testes(1:indomethacin from epididymis (1:indomethacin2:glucose amine 3:indomethacin 2:glucose amine 3:indomethacin with glucose amine and C:control) with glucose amine and C:control) fig.4 and fig.5 in respectively was showed the HSP702 gene pcr with band in size 1005 pb,no effect for the all treatment you can see both testes or epididymis samples. There was no effect on the GSTP1 gene for DNA samples of the testis tissue, while primer did not recognize the gene in the samples of the nucleic acid of the epididymis as the gene was affected by the two drugs under study show fig.6 and 7.Same results we can see in PTGR2 gene as fig.8,9 214

206 Fig.4:show the HSP702 gene in gene in Bands size 1005pb for DNA extracted DNA extracted from testes(1:indomethacin (1:indomethacin 2:glucose amine 3:indomethacin 3:indomethacin with glucose amine and C:control) C:control) Fig.5:show the HSP702 Bands size 1005pb for from epididymis 2:glucose amine with glucose amine and 215

207 Fig.6:show the GSTP1 gene in gene in DNA extracted Fig.7 :show the GSTP1 Bands size 1176 pb for Bands size 1176 pb for DNA extractedfrom testes(1:indomethacin from epididymis (1:indomethacin 2:glucose amine 3:indomethacin 2:glucose amine 3:indomethacin with glucose amine and C:control) with glucose amine and C:control) Fig.8:show the PTGR2 gene in gene in Fig.9 :show the PTGR2 216

208 Bands size 1027 pb for DNA extracted DNA extracted from testes(1:indomethacin (1:indomethacin 2:glucose amine 3:indomethacin 3:indomethacin with glucose amine and C:control) C:control) Discussion Bands size 1027 pb for from epididymis 2:glucose amine with glucose amine and Several previous studies have indicated that there is no hereditary toxic effect of indomethacin and glucose aminebut indomethacin inducers of apoptosis and inhibitors of cell proliferation [20,21],but used both drugs as cofactor for treatment of number of cancers [22]. while the present study showed genetic variability of the two drugs on four genes under study.the result of electrophoreses of four genes (IGFP3, HSP702,GSTP1 and PTGR2) clear effects of both drug on this gene specially on epididymis DNA samples comparative with testes DNA samples,only HSP70 gene no effected was showed in both samples. This may refer to the effect of both drugs on the shape and effectiveness of sperm as previous studies indicate The increased HSP 70 expression has positively correlated to DNA damage detected in mice sperm [13].This is what the current study has shown for the other three genes, which have shown that the DNA of the epididymis has been 217

209 destroyed. The reason for the nonsusceptibility of the genes to the testicular specimens may not be due to the high protection of the individual by increasing the specificity of the material being carried from the cell into the cells. Effect of the two drugs on the composition of the sperm to the extent of their ability to fertilize.the previous study have indicated to the role of IGFBP3 and BAX interaction activates germ cell apoptosis via the mitochondriadependent pathway and this regulating germ call homeostasis that may have significance for male fertility testicular disease [19].Indomethacin and glucose amine also showed a clear effect on the GSTP1 gene,which proved its role in maintaining the integrity of the sperms and its germ cells as an antioxidant gene [21,22,23].The gene PTGR2 was also affected by the both drugs and showed several breakdowns in DNA samples of the epidydymis of this gene plays an important role responsible for producing an enzyme PTGR2 is an enzyme involved in the metabolism of prostaglandins. The encoded protein catalyzes the NADPHdependent conversion of 15ketoprostaglandin E2 to 15 keto13,14dihydroprostaglandin E2. This protein may also be involved in regulating activation of the peroxisome 218

210 proliferatoractivated receptor. Alternative splicing results in multiple transcript variants [24,25]. Conclusion We conclude from this study that the two drugs have a hereditary effect on these genes and the longterm use may cause fertility problems in males in further. References 1. HARDMAN J. G., LIMBIRD L E and GILMAN A G. (2001). Goodman and Gilman s The Pharmacological Basic of Therapeutics. 10th International Edition, The McGrawHill Companies Inc. 2. BRANDT, K. D. (1991): The mechanism of action of NSAIDs. J. Rheumatol. 18: Vangsness C, William spiker M D and Juliana Erickson B A.(2009).A Riview of EvideneceBased Medicine for Glucosamin and Chondroitin Sulfate Use in Knee Osteoarthritis.J. Arthro. Rel.Sur.,Vol. 25, No.1: Jamialahmadi K, Soltani F, NabaviFard M, Behravan J and Mosaffa F. (2014) Assessment of protective effects of glucosamine and Nacetyl glucosamine against DNA damage induced by hydrogen peroxide in human lymphocytes. Drug Chem. Toxicol.,37(4):

211 5. Lucio C, Rovati M D, Pharm F G,Massimo D. and Giacovelliph D.( 2016) Effects of glucosamine sulfate on the use of rescue nonsteroidal antiinflammatory drugs in knee osteoarthritis: Results from the Pharmaco Epidemiology of GonArthroSis (PEGASus) study.seminars in Arthritis and Rheumatism.Vol. 45, Issue 4, : S34S Froder J G, Dupeyrón D, Carvalho J C and Maistro E L(2016).In vitro study of the cytotoxic and genotoxic effects of indomethacinloaded Eudragit( ) L 100 nanocapsules.genet. Mol. Res., 12;15(3): TAIWO V. O and CONTEH O L.(2008) The rodenticidal effect of indomethacin: pathogenesis and pathology.veterinarskiarhiv 78 (2): Chou WL, Chuang LM, Chou CC, Wang AH, Lawson JA, FitzGerald GA and Chang ZF.(2007) Identification of a novel prostaglandin reductase reveals the involvement of prostaglandin E2 catabolism in regulation of peroxisome proliferatoractivated receptor gamma activation.j Biol Chem.,282(25): Ahmad H, Wilson DE, Fritz RR.(1990) Primary and secondary structural analyses of glutathione Stransferase pi from human placenta. Arch Biochem. Biophys.,278: Dargenio R, Corbucci MG, Lamanna MA and Garcea N.(1992). Indomethacin and fertility in experimental endometriosis. ActaEurFertil., 23(2): YuB and Huang Z. (2015) Variations in Antioxidant Genes and Male Infertility.Biomed Res Int.: Hiyama G, Matsuzaki M, Mizushima S, Dohra H, Ikegami K, Yoshimura T, Shiba K, Inaba K and Sasanami T.(2013). Sperm activation by heat shock protein 70 supports the migration of sperm released from sperm storage tubules in Japanese quail (Coturnix japonica).reprod.,147(2): Zeng XC 1, Bhasin S, Wu X, Lee JG, Maffi S, Nichols CJ, Lee KJ, Taylor JP, Greene LE, Eisenberg E.(2004) Hsp70 dynamics in vivo: effect of heat shock and protein aggregation.j Cell Sci.,117(Pt 21): Rajoriya J K,Prasad S K, Ghosh P, Perumal, Anujkumar, Shobhanakaushal S S and Ramteke(2014).Studies on effect of different seasons on expression of HSP70 an d 211

212 HSP90 gene in sperm of Tharparkar bull semen.asian Pacific Journal of Reproduction,Vol. 3, Issue 3 : Jia Y, Lee KW, Swerdloff R, Hwang D, Cobb LJ, Sinha Hikim A, Lue YH, Cohen P and Wang C.(2010) Interaction of insulinlike growth factorbinding protein3 and BAX in mitochondria promotes male germ cell apoptosis.j Biol Chem.,285(3): Lakpoura N, Mirfeizollahib A, Farivarb S, Akhondic M M, Hashemid S B, Amirjannatic N, HeidariValac H and Sadeghie M R.(2013). The association of seminal plasma antioxidant levels and sperm chromatin status with genetic variants of GSTM1 and GSTP1 (Ile105Val and Ala114Val) in infertile men with oligoasthenoteratozoospermia. Disease Markers 34 : Millar D S,, Ow k k, Paul C L, Russell P J, Molloy P L and Clark S J.(1999)..Detailed methylation analysis of the glutathione Stransferase π (GSTP1) gene in prostate cancer. Oncogene 18, World Health Organization (WHO).(2002). Weight control and physical Activity.International Agency for Research on Cancer, Vol. 6: Aljashammy Z A.(2014). Molecular genetic study of the gene for the serotonin transporter 5HTT for patients with autism in Iraq. Kirkuk univer. j., Sci. Stud. (KVJSS),Vol.9,Issue 3,Issn : Maity P, Bindu S, Dey S, Goyal M, Alam A,Pal C,Mitra K and Bandyopadhyay U.(2009). Indomethacin, anonsteroidal Antiinflammatory Drug, Develops Gastropathy by Inducing Reactive Oxygen Speciesmediated Mitochondrial Pathology and Associated Apoptosis in Gastric Mucosa ANOVEL ROLE OF MITOCHONDRIAL ACONITASE OXIDATION. J. BIOLOGICALCHEMI.,VOL. 284,No.5: Kapitanović S, Čaćev T, Antica M, Kralj M,Cavrić K,Pavelić K and Spaventi R.(2006). Effect of indomethacin on Ecadherin and βcateninexpression in HT29 colon cancer cells. Experim. Mol. Pathol. Vol. 80, Issue 1: Al srivstava D S, Mandhani A, Mittal B and Mittal R D.(2005). Genetic polymorphism of glutathione S transferase genes (GSTM1, GSTT1 and GSTP1) and 211

213 susceptibility to prostate cancer in Northern India. BJU INTERNAT, 95: Bolan Yu and Zhaofeng Huang.(2015) Variations in Antioxidant Genes and Male Infertility. Bio. Med. Research. International. Vol : 10 pp. 24. Chou WL, Chuang LM, Chou CC, Wang AH, Lawson JA, FitzGerald GA and Chang ZF.(2007) Identification of a novel prostaglandin reductase reveals the involvement of prostaglandin E2 catabolism in regulation of peroxisome proliferatoractivated receptor gamma activation. J Biol Chem. 282(25): Safarinejad M R, Dadkhah F, Asgari M A, Hosseini S Y, Kolahi A A and IranPour E.( 2012). Glutathione S Transferase Polymorphisms (GSTM1, GSTT1, GSTP1) and Male Factor Infertility Risk. Urology Journal,Vol.9,No.3:

214 قياس مستوى اهلوموسستني وبعض اهلرمونات التكاثرية بأمصال النساء املصابات مبتالزمة تكيس املبايض Measuring the level of homocysteine and some reproductive hormones in the serology of women with PCOS شيماء احمد صالح أ. م. د. وسن نزهان حسين العاصي * جامعة تكريت كلية التربية للعلوم الصرفة / قسم الكيمياء Shaymaa Ahmed Salih Wasan Nazhan Hussien Department of Chemistry, College of Education for Pure Sciences, Tikrit University الخالصة: هدفت الدراسة الحالية إلى تحديد عدد من العوامل المسببة إلصابة النساء بمتالزمة تكيس المبايض ومعرفة مدى تأثير الهوموسستين بأحداث تغيرات بالجسم مؤدية الى أصابة النساء بمتالزمة تكيس المبايض. وقد تم قياس بعض المتغيرات الكيموحيوية للنساء المصابات ومقارنتها مع مجموعة السيطرة, وتم جمع عينات الدم من )41( امرأة مصابة بمتالزمة تكيس المبايض و) 31 ( امرأة غير مصابة وتراوحت أعمارهن من )17_41(, وقد شخصت االصابة بالمتالزمة وذلك على أساس حمل المرأة ألثنين على االقل من أعراض متالزمة تكيس المبايض. وقد حملت النساء المصابات عدد من الصفات المظهرية اذ كانت %82 منهن تعاني قلة باإلباضة %75 تعاني من الشعرانية.Hirsutism وقيست تراكيز الهرمونات للمصابات بمتالزمة تكيس المبايض ولمجموعة السيطرة وقد شملت الهرمونات الهرمون اللوتيني فقد بلغ تركيزه للنساء المصابات )3.40+_ mlu/ml 9.84( مقارنة مع النساء الغير مصابات كان تركيزه )4.98_+1.67( mlu/ml وارتفاع بهرمون الحليب /ml ng ( _ ( بالمقارنة مع تركيزه لمجموعة السيطرة /ml ng ( 6.26+_20.06) وارتفاع 213

215 بالهرمون الذكري )Testosteron) فقد كان تركيزه للنساء المصابات (0.49 ) mlu/ml1.45 ± بالمقارنة مع مجموعة السيطرة وكان تركيزها (5.05 )mlu/ml1.30 ± ولكن هذا االرتفاع لم يكون ارتفاعا معنويا, الهوموسستين كان مستواه بالمرضى ( µmol/l ±2155 ) بالمقارنة مع السيطرة ( µmol/l ( ± وكان االرتفاع معنويا. وقد استنتجنا من خالل هذه الدراسة عالقات ارتباطية موجبة بين مستويات الهوموسستين والهرمون اللوتيني وعالقة ارتباطية سالبة عكسية بين مستويات الهوموسستين وتراكيز الهرمون الذكري وهرمون البروالكتين. الكلمات المفتاحية: الهوموسستين, متالزمة تكيس المبايض. Abstract This study was aimed to assessment a number of causative factors to infection with polycystic ovarian syndrome (POCS) in women. The effect of homocystien on other parameters that occur in the body leading to infection with POCS. In oddinanto some biochemical parameters were measured in compare with control. Foruty blood samples from women with POCS and 30 samples from healthy individual were collected with aged group between (17 40years). The infection with syndrome was diagnosed based on a women who have at least two of symptoms of POCS. The infected women have a number of phenotypic characteristics. They were 82% suffered from oligomenorrhea and 75% Hirsutism. Hormones concentration in women with POCS and control was also measured. Luteining human was reached to (9.84 ±3.40 ) miu/ml in infected women compared with healthy women was ( ) miu/ml ). While, prolactin was elevated to ( ± 9.28) ng/ml compared with control (20.06 ±6.26) ng/ml also, there was anelevation in testosterone in infected women ( 1.45 ±0.49) compared with control ( 0.30 ±5.05) but these elevations were insignificant and was level homocystien in patina µmol /L (21.05 ± 2.55) and compared 214

216 215 with control µmol / L (6.27 ± 2.12 ). It was we concluded that, there were a positive correlation between the levels of homocystein and lutein level, while there was negative correlation between homocystien level and testosterone and prolactin concentrations. المقدمة: ان متالزمة تكيس المبايض,تعد من احد األمراض الشائعة التي تصيب مبايض )1( النساء خالل عمر األنجاب,حيث يتم تشخيص هذا المرض سريريا ومن الذين وصفوه هم ستين وليفنثال باالعتماد على أعراض تظهر على المريضة حيث تجتمع اثنين من األعراض او اكثر ومن هذه األعراض هي انقطاع الطمث او عدم انتظام التبويض وظهور حب بالوجه والشعرانية وزيادة الوزن )2(.وان األسباب التي تؤدي لإلصابة بمتالزمة تكيس المبايض تكون غير ثابتة بين النساء المصابات ولكن من اكثر األعراض الموجودة بالنساء المصابات هو اختالل بالهورمونات ويحدث هذا المرض غالبا بسن المراهقة بسبب الزيادة السريعة التي تحدث بالوزن بهذا العمر خاصة وكذلك فأن طبيعة الجسم تحدث فيه تغيرات هرمونية وجسمانية وان هذه )3( األعراض تتباين بين النساء المصابات بمرور الوقت. اقترحت نظريتين أساسيتين لتوضيح مسببات متالزمة تكيس المبايض: 1 نظرية :)LHTIC) Luteinizing hormonetheca Interstitial Cell تقترح ان ارتفاع تركيز الهرمون اللوتيني LH عن المستوى الطبيعي يكمن وراء ظاهرة تكيس المبايض. فهو يسبب الزيادة بنمو خاليا القراب الخاللية TIC وتطورها الى الحويصالت والتي تؤدي إلى اإلفراط بإنتاج االندروجين وحدوث التكيس للمبايض ) 4 ( 6 نظرية Cell GC) Follicle Stimulating HormoneGranulosa )FSH هذه النظرية تقترح ان االنخفاض بمستوى هرمون FSH يؤدي الى القصور بتحفيز انزيم سايتوكروم P450 االروماتي Cytochrome P450 aromatase للخاليا الحبيبة ممايؤدي الى االرتفاع بمستوى االندروجين. تفترض هذه النظرية ان متالزمة تكيس المبايض من الممكن ان تنتج عن حدوث تغير بنظام عمل االنسولين لحدوث خلل بعامل النمو IGF(,IGFInsulin Growth Factor ( وان IGF هو احد عوامل النمو التي تحد منفعالية الغدد التناسلية, ويكون له دور فعال بعملية نمو الحويصالت المبيضية وتمايزها عن طريق دوره بالتأثير على الهرمونات المعتمدة بعملية نمو الحويصالت المبيضية حيث يقوم بمضاعفة االستجابة البايولوجية لمنظمات Selectogenic & atretogenic او تخفيفها. تسهم عدة مسارات باإلصابة بمتالزمة تكيس المبايض وتتضمن مسارات أيض وتنظيم بناء الهرمونات السترويدية

217 , المسارات التنظيمية لعمل الغدد التناسلية, مسارات تنظيم الطاقة والسمنة بالجسم 5 ( ومسارات عمل األنسولين ). الهرمونات المسؤولة عن متالزمة تكيس المبايض : الهرمون اللوتيني: هرمون ينتج من قبل خاليا β الموجودة بالفص األمامي للغدة النخامية وذلك استجابة الفراز الهرمون المحرر لتحت المهاد او المحرر لمحفزات المناسل )GnRH( ) gonadotropin releasing hormone0 من تحت المهاد,وهو من الهرمونات البروتينية السكرية وزنه الجزيئي يصل الى )26,111( دالتون. هذا الهرمون يقوم بتنظيم عملية التبويض بعد ان تنضج الحويصالت بعد الوصول الى سن البلوغ لذا يسمى هذه الهرمون بهرمون االباضة ويشارك في تكوين الجسم االصفر بعد عملية االباضة وايضا يشارك في افراز هرمون االستروجين مشتركا مع هرمونHormone )FSH( Follicle Stimulating )6(. هرمون البروالكتين يفرز البروالكتين بوساطة خاليا حامضية تدعى ( Lactotrophs (من الغدة النخامية االماميةpituitary glandanterior ويكون هذا الهرمون ذا استجابة لهرمونات االستروجين.وان لهذا الهرمون دور كبير في تطور ونمو الخاليا والغدد اللبنية, ويزداد مستواه في الجسم خالل النوم عند كل الجنسين. ولحالة الجسم تاثير على مستوى هذا الهرمون ومنها االضطراب النفسي,االجهاد, القلق حيث كلها تزيد من افراز هرمون البروالكتين. ففي حالة االصابة بمتالزمة تكيس المبايض يزداد مستوى هرمون البروالكتين وقد يؤدي الى ان يفرز الحليب من الصدر او اضطراب الدورية )7( الشهرية. الهرمون الذكري Testosterone احد الهرمونات السترويدية وينتمي الى مجموعة االندروجينات,ان الهرمون الذكري يفرز بكميات قليلة من الغدد الكظرية, وكميات كبيرة من الخصيتين, وان الغدة النخامية تقوم بالسيطرة على افراز الهرمون الذكري عن طريق افراز هرمون )8( LH.ويوجد الهرمون الذكري في جسم االناث ولكن بنسب قليلة جدا, ويتواجد نتيجة تحولAndrostanedione الذي يتم إفرازه من المبيضان واالدرنالين الذي يفرز من الغدة الكظرية )8(., ويرتفع مستواه في الجسم في حاالت ومنها أورام الخصيتين التي تفرز التستسسيرون,)Testosterone( وأورام الغدة الكظرية, وعند االصابة بمتالزمة تكيس المبايض بينما ينخفض مستواه في حاالت المداواة باألستروجين للرجل وعند حدوث قصور في الغدة النخامية وكذلك عند تشمع الكبد )9( أحيانا. 216

218 الهوموسستين هو حامض اميني حاوي على الكبريت وال يوجد في البروتينات ولكنه يشتق من مركبات وسطية أليض الحامض االميني المثيونين,Methionine وبالخطوة االولى من المسار يحفز أنزيم ادينوسايل ترانسفيريز transferase( )adenosyl عملية نقل ثمالة االدينوسين من ATP إلى المثيونين, فيتولد مركب S ادينوسايل مثيونين )S )AMT, أن مجموعة المثيل بعد ذلك يمكن أن تنتقل إلى عدد كبير من المركبات المستقبلة ومن ضمنها DNA و RNA والبروتينات واللبيدات, وهذا التفاعل يعد مفتاحا لعدة عمليات ايضية,بشكل خاص مثيلة DNA والذي له أهمية بعملية التعبير الجيني )11(. ان الفسلجة المرضية لهذه المتالزمة معقدة لكونها تسبب العديد من العالمات المظهرية, حيث ترتبط مع العديد من االمراض المزمنة مثل السكري وارتفاع ضغط الدم واضطراب دهون الدم Dyslipidemia وأمراض القلب واألوعية. الدموية )أمراض القلب الوعائية ) واألورام الخبيثة التي تظهر في سن مبكر )11( المسار األيضي للهوموسستين )96( تشير الدراسات الحديثة الى ان المؤشرات الحيوية لمصل الدم في أمراض القلب الوعائية تكون غير طبيعية في النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض مثل الحساسية العالية للهوموسستين وبروتين سي, C reactive protein واالديبونكتين Adiponectin وبما ان فرط الهوموسستين في الدم يعد حامل خطورة ألمراض القلب الوعائية لذا فأن مستوياته تكون عالية في النساء المصابات بمتالزمة 217

219 تكيس المبايض اكثر من السليمات. بينت العديد من الدراسات أن مستويات الهوموسستين العالية في النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض يمكن ان يحدث بسبب عيوب وراثية باألنزيمات المشاركة في أيض الهوموسستين, مثل انزيم( )Methylene tetraliydra folate reductase MTHFR. او النقص في وحامض الفوليك المجاميع المرافقة لألنزيمات )الفيتامينات ) مثل فيتامين B 12, B 6,ايضا عوامل أضافية تتضمن بعض االمراض المزمنة وتعاطي أدوية معينة بأن فرط Framing Lam )13(.لقد أوضحت دراسة الصحيحة والظروف الهوموسستين يرتبط مع فرط االنسولين أذ يقوم االنسولين بتثبيط نشاط أنزيم Cysta الكبدي الذي يزيد من مستويات ) CBS( thionine B Synthetase الهوموسستين في مصل الدم )14(. طرائق العمل: تم جمع العينات من النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض المراجعات للمستشفيات بمحافظة صالح الدين والعيادات الطبية وكذلك جمع العينات من النساء السليمات من عامة المجتمع وكان جميعهن من محافظة صالح الدين. شملت الدراسة الحالية على )71( عينة )31( عينة منها لمجموعة سيطرة و( 40 ( عينة منها هي ما بين أعمارهن وتراوحت المبايض, تكيس بمتالزمة عينات لنساء مصابات )17_40( سنة. وهذا بعد التأكد من إصابتهن بمتالزمة تكيس المبايض وذلك عن طريق تشخيص الطبيبة المختصة لهن استنادا الى األعراض السريرية الموجودة لكل مريضة, باإلضافة إلى الفحص بالموجات الفوق الصوتية)السونار( وقد تم اعتماد استمارة استبيان لكل مصابه تدون فيها معلومات خاصة لكل منهن الفحوصات السريرية:تم قياس الهرمونات ذات العالقة بمتالزمة تكيس المبايض وهي الهرمون اللوتيني وهرمون البروالكتين والهرمون الذكري Testosterone باستخدام عدة الفحص الخاصة بالهرمونات والمستوردة من شركة Biomerieux واعتمد مبدأ Combines enzyme قياس تراكيز الهرمونات المطلوب قياسه علىاساس immunoassay sandwich method with afinal fluorescent detectionاذ يحدث تنافس بين المستضد الموجود في العينة والمستضد المعلم ب antilh antibodies المغطية ال SPR1 وفي النهاية يتكون ناتج مشع ويتم قياس كمية االشعاع هذا عن طريق الجهاز وبشكل اوتوماتيكي. ويتم قياس كمية اإلشعاع وتعتمد شدة اإلشعاع على التركيز النسبي للمستضد عند طول موجي 451 نانومتر )15( الموجود بالعينة.تم تقدير مستوى الهوموسستين في مصل المصابات بمتالزمة تكيس المجهز من الشركة )Kit) العدة التشخيصية المحضر باستخدام المبايض بطريقة الحولقة االنزيمية إذ إ ن مبدأ ) USA )CRYSTAL CHEM, INC. Co وتحويلها إلى ناتج الفحص يعتمد على تحليل المادة األساس المساعدة وهي جزيئة ليست المادة األساس التي يحولها االنزيم وهي التحتوي Substrate 218

220 على الهوموسستين بهذا التحليل. حيث ان النسبة الطبيعية هي µmol\l)712( )16( وكما في المعادالت اآلتية 1 Oxidizer Hcy Free (Hcy) HcysMethyl transferase 2Free(Hcy) + Co Substrate methionine + (Sadnosylmethionine ( Sadenosylhomocysteine (SAH) SAH hydrolase 3 SAH adenosine + Hcy NADH Gutamate dehydrogenease ) NAD + Ado(adenosine deaminase شكل )9( يوضح تفاعل التحولق األنزيمي للهوموسستين المناقشة: لقد أظهرت نتائج الدراسة الحالية ان %75 من مجموع النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض يمتلكن الشعرانية, وان %82 منهن كانت تعاني من عدم انتظام أوقات الطمث وقلة االباظة, وان %41 من مجموعة النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض لديهن تكيسات على مبايضهن حيث شخصن عن طريق اجتماع اثنين من األعراض, و %45 منهن شخصن عن طريق اجتماع ثالثة من األعراض المذكورة سابقا. حيث ان صفة عدم انتظام االباضة تعتبر الصفة األولى ومن بعدها تأتي صفة السمنة والشعرانية وادرار الحليب هذا يتطابق مع ماجاء بدراسة )عمير( )17(. 219

221 جدول )9( يبين قياس مستوى الهوموسستين وتراكيز الهرمونات المتأثرة بمتالزمة تكيس المبايض Cases Mean ± ST.PTV Parameters الهوموسستين الهرمون اللوتيني هرمون البروالكتين الهرمون الذكري االصحاء 6.27± ± ± ± المرضى 21.05± ± ± ± شكل )6( يمثل تراكيز الهوموسستين والهرمونات التكاثرية لمجموعة النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض ومجموعة السيطرة ان جدول (1( يبين لنا ارتفاع بتركيز الهرمون اللوتيني. بأمصال المصابات بمتالزمة تكيس المبايض (3.40+_ )mlu/ml9.84 مقارنة مع مجموعة السيطرة حيث كان تركيزه )mlu/ml4.98_+1.67) عند مستوى احتمالية <p 0.01 وهذا يتفق مع ما )19( ) 18( جاء بدراسة عبد الرزاق و دراسة Spuy و Dyer واليتوافق مع ما جاء الهوموسستين mol/lµ اللوتينيmIU/ml البروالكتينng/ml الذكريng/ml االصحاء المرضى

222 221 الذي بين ان هنالك انخفاضآ معنويا بتركيز الهرمون بدراسة عباس )21( Sultana اللوتيني بأمصال النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض.حيث أن الزيادة بمستوى أفراز الهرمون اللوتيني LH تقوم بتحفيز خاليا القراب الموجودة بالمبيض على أفراز االندروجين وهو بدوره يزيد من أفراز هرمون LH بالوقت نفسه حيث يقوم االندروجين بتثبيط انتاج SHBG وهذا يؤدي الى ارتفاع نسبة االندروجين الحر بدم المصابات بمتالزمة تكيس المبايض وهذا يكون سبب ظهور الشعرانية بجسم النساء ) 21 وجماعته الذين اشاروا الى وجود المصابات وهذا ماجاء به دراسة ( Braide ارتفاع بتركيز الهرمون اللوتيني بأمصال النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض بالمقارنة مع مجموعة السيطرة, وقد يعود ذلك الى ارتفاع بهرمون األنهين B بأمصال المصابات بمتالزمة تكيس المبايض ) PCOS ) ألن األرتفاع بهرمون االنهين يرافقه ارتفاع بالهرمون اللوتيني وهذا االختالل الحاصل بالهرمونات يسبب اضطراب بأوقات الطمث او انعدام التبويض وهذا يتفق مع ماجاء بدراسة )22( hfischtac. كما يمكن تفسير الزيادة المعنوية بتركيز الهرمون اللوتيني على اساس وجود اختالل بمحور النخامية _تحت المهاد حيث ان هذا يؤدي الى زيادة التحرير النبضي للهرمون اللوتيني ويتطابق مع دراسة )Taylor( )23(. ويمكن أن يعود سبب ارتفاع مستوى تركيز الهرمون اللوتيني أيضاعلى اساس انخفاض مستوى هرموني البروجسترون واالستروجين الن مستوى الهرمون اللوتيني يثبط بارتفاع هذين الهرمونين عن طريق التغذية الراجعه السالبة وفي حالة االصابة بمتالزمة تكيس المبايض. كما ان جدول (1( يبين ارتفاع مستوى تركيز هرمون البروالكتين ارتفاعا معنويا بمصل دم النساء المصابات عند مستوى احتمالية 0.01<p وان تركيز هرمون البروالكتين هو 9.28)ng/ml ) ± للنساء المصابات مقارنة مع مجموعة السيطرة )ng/ml20.06_+6.26).أن الزيادة بمستوى تركيز هرمون البروالكتين لدى النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض عن المستوى الطبيعي قد يعود الى زيادة تحفز الخاليا المسؤلة عن افراز الهرمون الموجودة بالفص االمامي للغدة النخامية وتدعى Lactotrophes مما يؤدي الى زيادة إفرازه وتكون زيادته مرتبطة دائما مع در الحليب لدى النساء وهذا ما تعانيه بعض النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض وهذا يتوافق مع ما جاء بدراسة )24( Eskandari. حيث ان االرتفاع بمستوى هرمون البروالكتين قد يؤدي ألى تحفيز الغدة الكظرية على افراز (DHEAS) Dehydroepiandrosterone وهو من أحد أنواع االندروجينات حيث يرتفع مستواه بحاله اصابة النساء بمتالزمة تكيس المبايض, وان افراز هذا الهرمون يكون متحكم غالبا بوساطة التأثير التثبيطي ل تحت المهاد Hypothalamus( ) ومن خالل واحد او اكثر من العوامل التي تثبط البروالكتين ( PIF )ا Prolactin inhibitory Factor والتي قد تصل الى النخامية عن طريق األوعية البوابية Portal Vessels لغدة تحت المهاد, وأن التراكيز العالية من البروالكتين تقوم بتثبط انتاج منشطات القند )gonadotrophins( في كل من الذكور

223 222 واالناث, على الرغم من أن افرازه شائع بكثرة بالنساء( Goblla ( )25(, وأن التراكيز العالية من هرمون البروالكتين من الممكن ان تؤدي الى عدم انتظام الدورة الشهرية,)Corpus luteum) و كذلك نقصان بالجسم األصفر, Irregular menstruation وزيادة بتراكيز االندروجينات او منشطات الذكورة ) Androgens (.يبين الجدول (1( تركيز الهرمون الذكري بأمصال النساء المصابات بمتالزمة تكيس المبايض (0.49 )mlu/ml1.45± بالمقارنة مع مجموعة السيطرة حيث بلغ تركيزه (mlu/ml 5115 ) 1131 ± التوجد فروقات معنوية بأمصال النساء المصابات ومجموعة السيطرة, وهذا يتوافق مع دراسات أجريت لفترات طويلة والتي أكدت ارتباط ارتفاع مستوى أالندروجين بضعف الخصوبة واالنجاب عند النساء, وعند االصابة بمتالزمة تكيس المبايض قد يصاحبها في بعض االحيان ارتفاع بتراكيز الهرمون الذكري واالصابة بالبدانة وضهور الشعر وانقطاع او ندرة الحيض وهذا يتفق مع دراسة (Maha) )26( وان هذه النتائج تشير الى حدوث اضطراب بالهرمونات المفرزة من المبيض والتي تؤثر على هرموني االستروجين والبروجسترون, ومن الممكن تفسير الفروقات الغير معنويه بين المصابات ومجموعة السيطرة على ان النساء المصابات يتناولن عالج المتفورمين ولمدة التقل على ثالثة أشهر مما يدل على أستجابتها للعالج والذي يتميز بتقليله لعملية تصنيع الكلوكوز من مصادر غير كاربوهيدراتية ) glacuneogenesis ) والتي تحدث بالكبد وتقلل امتصاص الكلوكوز باالمعاء وبالتالي خفض مستوى االنسولين ويقلل من اندروجينات المبيض لذلك فهو. أظهرت الدراسة يساعد على تقليل احتمال االصابة بمتالزمة تكيس المبايض )27( الحالية ان هنالك ارتفاعا معنويا في مستوى الهوموسستين بأمصال النساء النصابات بمتالزمة تكيس المبايض والذي كان مستواه عند المصابات ± µmol L/ (2.55 ) مقارنة مع مجموعة السيطرة (2.12 µmol/l 6.27 (عند ± مستوى االحتمالية 1111 Pوتدل النتائج على ان مستوى الهوموسستين يرتفع عند النساء المصابات ب, PCOS وبالرغم من الدراسات العديدة حول مسببات متالزمة تكيس المبايض لدى بعض النساء اال ان السبب الحقيقي لهذه المتالزمة ما زال مجهوال, لذا فأن العديد من الدراسات أشارت الى ان المستويات العالية من الهوموسستين تلعب دورا مهما في إمراضيه هذه المتالزمة, فقد بينت الدراسة ان المستويات العالية من الهوموسستين تلعب دور وظيفي في االضطرابات األيضية التي تحدث في تراكيز وبينت الدراسات ارتباط PCOS مع األندروجين وأضعاف عملية اإلباضة )28( المستويات العالية من الهوموسستين له عالقة بمقاومة االنسولين Ensulin Rosistanceفقد لوحظت مستويات الهوموسستين المرتفعة في حاالت االرتفاع المفرط لألنسولين, لذا فقد أقترح بأن الهوموسستين له دور كبير كعامل خطورة )29( لإلصابة بأمراض القلب الوعائية لدى النساء المصابات ب. PCOS وأوضحت الدراسات بأن عوامل النمو المرتبطة باألنسولين كعامل نمو 1 IGF واألنسولين المرتبط بالبروتين 3 IGFBP بالسيطرة والتنظيم على نضوج )بلوغ ) الجريبات

224 المبيضية وعلى عملية بناء السترويدات Steroideo gensiiss لذا فأن التأثيرات المباشرة والغير مباشرة لهذه العوامل 1 IGF و 3 IGFBP تشترك وبشكل مستقل مع تكوين خثرات في األوعية الدموية مما يجعل المصابات بمتالزمة تكيس المبايض أكثر عرضة لإلصابة بأمراض األوعية القلبية, يرتبط ارتفاع الهوموسستين مع تخثر األوعية الدموية وهذا يكون السبب رئيسي في االسقاطات المبكرة وتحطم االوعية )13( الدموية المزمن للنساء المصابات. المصادر 1. Legro, R.S. and Strauss, J.F(2002). Molecular progress in infertility : polycystic ovarian syndrome. Fertil and Steril. 78; Battaglia, C. ; Regnani, C. ; Mancini, F.; Iughetti, ; Flamigni, C. and Venturoli, S. (2002). Polycystic ovaries in childhood : a common finding in daughters of PCOS patients.a pilot study. Human Reproduction. 17 : Azziz, R.; Carmina, E.; Dewailly, D.; Diamanti Kandarakis, E.; Escobar Morreale, H. F. and Futterweit, W. (2006). Positions statement : criteria for defining polycystic ovary syndrome as a predominantly hyperandrogenic syndrome : an Andrpgen Excess Society guideline. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91(11) : Nazir, F.(2008). Clinical and genetic studies of polycystic ovarian syndrome. Ph.D. Thesis, Univer. of QuaidIAzam. 5. Urbanek, M. ; Legro, R. S. ; Drisoll, D. A. ; Azziz, R. ; Ehrmann, D. A. ; Norman, R.J.; Strauss, J.F. ; Spielman, R.S. and Dunaif, A.(1999). Thirty seven candidate genes for polycystic ovary syndrome : strongest evidence for linkage is with follistatin. Proc Natl. Acad. Sci. 96: Graaff, K.M.V.& Rhees, R.W.(2001). Human anatomy and physiology. Mc Graw Hill. PP : Beltran, L; FahieWilson, MN; McKenna, T.J; Kavanagh, L; Smith, T.P (2008). "Serum total prolactin and monomeric prolactin reference intervals determined by precipitation with 223

225 polyethylene glycol: evaluation and validation on common immunoassay platforms". Clin. Chem. 54 (10): Clarke R, stansbie D. Assessment of homocysteine as a cardiovascular risk factor in clinical practice Ann clin Biochem 2007;(6): Bassil N, Alkaade S, Morley JE (2009), " The benefits and risks of testosterone replacement therapy : a review",ther Clin Risk Manag, 5 (3) : 427 _ Rodrigo R, Passalacqua W. Araya J, orellana M,rivera G. Implications of oxidative stress and homocysteine ithe pathophysiology of essential hypertension jcardiovasc pharmacol 2008; 42(4): Clap BR, Hirsch fiekld GM, storry C, et.al Inflammation and eno thelial function:direct vascular effects of human creactive protein on nitric oxide bioavalia bifidity. Circulation 2005; 111: Rassoul F, Richter V, Janke C, Purschwitz K, Klötzer B, Geisel J. Herrman W "Plasma homocysteine and lipoprotein profile in patients with peripheral arterial occlusive disease". Angiology 51: Pratio C, Coswami SK, etal. Recurrent pregnancy loss in polycystic ovary syndrome : Role of Hyperhomocysteinemia and Insulin Resistance. PLOs one ; 8(5). 14. Salchpour S, Taherzade P, Neisani Samani E. Homocysteine and Insulin resistance related to PCOS. Intenational Journal of fertility and sterility (IJFS) 2016 ; 3(3) : Morimoto, Y.; Oku, Y.; Sonoda, M.; Haruki, A.; Ito, K.; Hashimoto, S. and Fukuda, A. (2007). High oxygen atmosphere improves human follicle development in organ cultures of ovarian cortical tissues in vitro. Human Rep. 22(22) : Mel.can.R.et al N. Engl.J.Med.(2004),350: عمير, هديل عبد الهادي )2113( " الكشف عن تعدد اشكال الجينات المشفرة للبناء الحيوي للهرمونات الستيرويدية لدى النساء المصابات بمتالزمة تكيس 224

226 المبايض في محافظة صالح الدين.أطروحة دكتوراه علوم حياة كلية العلوم\جامعة تكريت. 99. عبد الرزاق, لينا قيس ياسين )2111 ),دراسة عدد من المعايير الدموية والكيموحيوية وبعض الهرمونات لدى النساء العقيمات في محافظة صالح الدين. رسالة ماجستير,كلية العلوم\جامعة تكريت. 19. Spuy, Z.M. and Dyer, S.J.; (2004). The pathogenesis of infertility and early pregnancy loss in polycystic Ovary syndrome. Best. Pract. Res. Clin. Obstet. Gynecol. 18 : عباس, مادلين قاسم. ( 2118(. التأثير الفسلجي لمستويات عدد من الهرمونات ومكونات الدم في النساء العقيمات من المراجعات لمستشفى تكريت التعليمي, رسالة ماجستير. كلية التربية/ جامعة تكريت 21. Braide, A. S; Adegoke, O. A;, Bamigbowu, E. O. and Ayodele, Martins, B.O. (2011). Gonadotrophic Hormones, Progesterone and Prolactin Levels among Infertile Women Attending University of Port Harcourt Teaching Hospital. Europ.J.of Scientific Research Vol.57 (2), pp Fischtach, ; Boazhir Shterg. M.D. ; Michael, ; Conn, PhD ; Gabriel, I. and Lynnette (2000) Ectopic luteinizing hormone secration and Anovulation, J. England Medicin Vol.(23) p: Taylor, A. E.; Mc Court, B. and Martin, K. A.(1997).Determinants of abnormal gonadotropin secretion in clinically defined women with polycystic ovary syndrome. J. Clin. Endocrinol. Metab. 82: Eskandrali and Z. pcos woman show significantly higher homocystiese level, indepenedent to glucose E2 level " Reprod Bio ued 2010 ; 14 (8) PP: Goblla, C ; Bolognani, F; Dellasota, R. L. and Goya, R. G. (2001).Luteininzing hormone in an oestrous crossbred bitches.reprod. Domest. Anim, 36: Maha F. (2016) " Assessment of leptin levels in the different genotypes and teptin receptor genes in the woman with polycystic ovary syndrome and diabetes mellitus type 2 in Iraq population. 225

227 27. Ehramann, D. A.; Liljenquist, D. R.; Kasza, K.; Azziz, R.; Legro, R.S. & Ghazzi, M. N. (2006) :Prevalence and Predictors of the metabolic syndrome in wamen with polycystic ovary syndrome. J. Clin. Endocrin. Metab.; Jan ; 91(1); Rekha, S., Patel M.L., pooja, G., Amita, D., pushplata, S atei. Correlataion between elevated homocysteine levels and insulin resislance in infertile women with or without polycystic ovary syndrome in North Indian population. Academic Journal 5 (3) : Temel I, Celik O, Sahin I,. Serum nonesterified fatty acids, ghrelin, and homocysteine levels in women with polycystic ovary syndrome. Turk J med sic 2010 ; 40 (2) :

228 مدى استجابة الذرة الصفراء.( L لرش البوتاسيوم والزنك ) Zeamays The Response of Maize ( Zeamays L.) to Spraying of Potassium and Zinc م. م. ايمن احمد عبد الكريم العباسي مديرية تربية ديالى Assistant teacher:aiymen Ahmed A.K. AlAbassi Education directory of Diyala aiymenahmed@yahoo.com المستخلص نفذت تجربة حقلية لدراسة مدى استجابة الذرة الصفراء Zeamays. Lلرش البوتاسيوم والزنك خالل الموسم الخريفي بتصميم القطاعات العشوائية الكاملة وبثالث مكررات, رشت اربع تراكيزمن البوتاسيوم) 2000,1000,500,0 (ملغم K.لتر ¹ بهيئة كبريتات البوتاسيوم واربع تراكيز من الزنك )75,0, 225 (ملغم,150 Zn.لتر ¹ بهيئة كبريتات الزنك, اظهرت النتائج وجود فروق معنوية عند رش البوتاسيوم بتركيز 2000 ملغم K.لتر ¹ في دليل الكلوروفيل وتركيز البوتاسيوم و الزنك في االوراق, كما اظهر رش الزنك فروق معنوية, إذ تفوق التركيز 150 ملغم Zn.لتر ¹ في دليل الكلوروفيل وتركيز البوتاسيوم في االوراق, بينما اظهر التركيز 225 ملغمZn.لتر ¹ تفوق في تركيز الزنك في االوراق. وقد اعطت معامالت التداخل عند * K2000 Zn150 افضل النتائج في دليل الكلوروفيل وتركيز البوتاسيوم, كما ان معامالت التداخل قللت من التأثير السلبي لتركيز الزنك العالي بصورة واضحة. 227

229 الكلمات المفتاحية : الرش.البوتاسيوم.الزنك. الذرة الصفراء. Abstract Afield experiment was conducted to determine the response of maize (Zeamays L.)to spraying of potassum and zinc in during autumn season 2016.Random Complet Block Designwas used in this study with three replications. Spraying four concentrations of potassium (0,500,1000,2000) mgk.l¹ as potassium sulfate and four concentrations of zinc (0,75,150,225) mg Zn.L ¹ as zinc sulfate. The result showed that the suitable K spraying treatment was 2000 mg K.l ¹ which caused significant differences in chlorophyll index,kconcentration and Znconcentration as compared with control. Using Znspraying treatment 150mg Zn.L¹ caused significant differences in chlorophyll index and K concentration, While 225mgZn.L¹ caused significant differences in Znconcentration.The interaction between potassium and zinc K2000 * Zn150 was significant effect in traits parameters of chlorophyll index and (K)concentration compared with control treatment, use (K) decresed high level of (Zn) monitor form. Keywords : spraying, potassium, zinc, maize. 228 المقدمة تسمى الذرة الصفراء ملكة المحاصيل النها تعتبر واحدة من اهم محاصيل الحبوب االقتصادية في العالم إذ تحتل المرتبة الثالثة من حيث المساحة المزروعة واالنتاج( 2108,Licence (.هذا راجع لالستعماالت العديدة للمحصول ) Mandiaواخرون, 2115(. السيما الغذائية والصناعية إذ تستخدم كغذاء لالنسان وعلف اخضر للحيوانات) 2114,USAD (. يعد البوتاسيوم من العناصر الكبرى المهمة للنبات فهو ينظم الهرمونات النباتية كالجبرلين واالوكسين وينقل المواد المصنعة من االوراق الى

230 الحبوب وينظم عملية غلق وفتح الثغور )2115,Cakmak(. يزيد من مقاومة الفطريات والبكتريا ) Wangواخرون, 2113 (. ينقل مركبات الطاقة ) Rafatواخرون ATP, 2112 (.ينشط انزيم تصنيع البروتين Sharma( Protenase واخرون,2113(. فضال عن دوره في تقليل التأثير السلبي لنقص الماء ( عبد االمير واحمد,2113 ). اما العنصر المغذي االخر الضروري فهو الزنك من العناصر الصغرى االمهمة لكل االحياء, فهويوجد في عمليات ايض النبات كمنشط لعدة انزيمات ويعد انزيم carbonic anhydrase اول انزيم اكتشف يحتوي على الزنك وينشط الزنك انزيم نقل الفوسفات مثل,Davis (Hexose kinase 1983(. وينظم ( ph )درجة تفاعل الخلية النباتية,Tony( 2116 (.كما يوجد الزنك في الرايبوسومات وفي اندول حامض الخليك,Hafeezetal.( 2113 (.فضال عن انه يوجد في بناء الحامض االميني, Uchida( RNA 2111 (.كما يساعد على امتصاص المغنسيوم المهم للكلوروفيل) Hristozkovaواخرون, 2115 (.تعد عملية الرش الورقي او التسميد الورقي واحدة من الطرق المستخدمة لتعويض النبات بالمغذيات رشا على الجزء الخضري للنبات ومن ثم النفاذ الى االوراق والتحرك الى اجزاء النبات االخرى معتمدا على االنواع النباتية ونوع التسميد والتركيز وعملية تكرار التسميد ومرحلة نمو النبات,Haytova( 2113(. كما انها من أكفأ الطرق لتزويد النبات بالمغذيات في حالة نقصها والتي تعجز الجذور عن تعويضها ) 2112,Martin (.كما في حالة وجود معوقات لالمتصاص مثل حالة الجفاف او حالة الديدان) RomholdوELFouly, 2111 (.ان الهدف من الدراسة هو تحديد انسب التراكيز لكل من البوتاسيوم والزنك والتداخل بينهما. طريقة العمل نفذت تجربة حقلية خالل الموسم الخريفي 2116 في تربة ذات نسجة مزيجية طينية غرينية في حقل تابع لناحية بني سعد / محافظة ديالى. صممت التجربة وفق القطاعات العشوائية الكاملة بثالث مكررات. جمعت عينة عشوائية من الحقل قبل الزراعة وقدر فيها الصفات الفيزيائية والكيميائية للتربة بحسب جدول) 1 (. زرعت بذور الذرة الصفراء صنف 229

231 بحوث 116 في 2116/7/14 يدويا في خطوط وكانت المسافة بين الجور 31 سم والمسافة بين الخطوط 75 سم وبكثافة نباتية نبات.ه 1 )الساهوكي, 1991 (. بلغ عدد الوحدات التجريبية 16 وحدة وكانت مساحة الوحدة التجريبة ( 115* 25. م 2 ² (.سمدت تربة الحقل لجميع الوحدات التجريبية باليوريا بمعدل 320 كغم.ه ¹ N%46 وبالفسفور بمعدل 111 كغم. ه ¹ بهيئة سوبر فوسفات الثالثي 205%20 P وبالبوتاسيوم بمعدل 160 كغم. ه ¹ بهيئة كبريتات البوتاسيوم K%4115. )الموسوي وابوضاحي, 2112 (. خفت النباتات الى نبات واحد في كل جورة و كوفحت حشرة ساق الذرة الصفراء باستخدام مبيد الديازينون المحبب %11 نثرا وسط النبات بمعدل 115 كغم. دونم 1 بعد 21 يوم من الزراعة كمكافحة وقائية اما المكافحة الثانية فكانت بعد 11 ايام من المكافحة االولى )اليونس, 2112 (. حللت الصفات الفيزيائية والكيميائية لماء الري بحسب جدول) 2 (. جدول( 1 ): بعض الصفات الفيزيائية والكيميائية لتربة الحقل قبل الزراعة. Unite Value Character 8.02 ph

232 قاادرت صااافات الترباااة بحسااب الطريقاااة الاااواردة فااي) Black, 9122a) و) Black, 9122b( و) Page ) )9124, Richards واخرون 9196,.) جدول( 6 ( : بعض الصفات لمياه الدراسة المستعملة في الري. الوحدة Unit دسي سيمنز.م 1 ملي مكافئ.لتر 1 ملي مكافئ.لتر 1 القيمة Value الصفة Character ph االيصالية الكهربائية الكالسيوم البيكاربونات قدرت صفات الماء بحسب الطريقة الواردة في )بشور والصايغ, 6009(. تضمنت معامالت التجربة رش أربعة تراكيز من البوتاسيوم )1,,2111, ( ملغم K.لتر ¹ بهيئة كبريتات البوتاسيوم K%41.5 وأربعة تراكيز من الزنك )Zn%35) بهيئة كبريتات الزنك )1, 75,151,225 (ملغم Zn.لتر ¹. رشت المحاليل على الجزء الخضري في الصباح الباكر خالل مرحلة االستطالة والتزهيروملئ الحبة بحسب جدول )3(, واضيفت مادة ناشرة من مسحوق الصابون السائل بمقدار 115 سم ³ لكل 11 لتر مع المحاليل المغذية )العبادي واخرون, 231

233 للعلوم الصرفة االطروحة ( 2117(. تم حساب دليل الكلوروفيل بعد أسبوعين من التزهير األنثوي Felixوآخرون, 2000(. اما تركيز البوتاسيوم والزنك فكان في مرحلة النضج التام بعد قطع ورقة العلم وهضمها في المختبروقدر البوتاسيوم بينما قدر الزنك بواسطة جهاز االمتصاص الذري) بواسطة جهاز اللهب.)1980,Haynes كل الصفات المقاسة اجريت لخمس نباتات من كل وحدة تجريبية, تم تحليل البيانات احصائيا وقورنت المتوسطات باستعمال باستخدام )الساهوكي ووهيب,1991( اقل فرق معنوي عند مستوى %5 برنامج.Genstat. جدول ( 1( : مواعيد الرش الورقي للزنك للموسم الزراعي الخريفي 2016 عدد الرشات مرحلة الرش مواعيد الرش تاريخ الرش بعد 30 من الزراعة 2016 / 8 /14 الرشة االولى االستطالة بعد 60 من الزراعة 2016 / 9 /14 الرشة الثانية التزهير بعد 90 من الزراعة 2016/ 10 /14 الرشة الثالثة ملئ الحبوب النتائج والمناقشة 1 دليل الكلوروفيل في االوراق( وحدة (SPAD يبين الجدول) 4 ( ان لكل من تراكيز رش البوتاسيوم والزنك والتداخل بينهما تأثير معنوي في زيادة دليل الكلوروفيل في اوراق الذرة الصفراء, فقد بلغت نسبة الزيادة عند رش البوتاسيوم 7172 و و %26164 للتراكيز 511 و 1000 و 2000 بأعلى معدل في على التوالي, اذ تفوق التركيز 2111 ملغم K.لتر 1 ملغم K.لتر 1 هذة الصفة بلغ وحدة SPAD قياسا بمعاملة المقارنة والتي اعطت اقل معدل بلغ وحدة SPAD ويرجع ذلك لدورالبوتاسيوم في تنشيط العناصر الصغرى والمحافظة على الكلوروفيل من خالل تنظيم عملية غلق وفتح الثغور )2005,Cakmak( كما يساعد البوتاسيوم على امتصاص الحديد والذي ينعكس بدوره على تكوين الكلوروفيل )مهدي, 2114(. 232

234 تراكيز رش الزنك الجدول )4 (:تاثير مدى استجابة الذرة الصفراء لرش البوتاسيوم والزنك والتداخل بينهما في متوسط دليل الكلوروفيل.)SPAD( Mean تراكيز رش البوتاسيوم )ملغم.كغم 9( K Zn ملغم.لتر Mean Zn * K Zn K L.S.D Zn=KZinc= Potassium 1 بأعلى معدل بلغ اما رش الزنك فقد تفوق التركيز 151 ملغم Zn.لتر وحدة SPAD في حين اعطت معاملة المقارنة اقل معدل بلغ وحدة, SPAD السبب هو ان الزنك يساعد على امتصاص المغنسيوم المهم لتكون الكلوروفيل ) Hristozkovaواخرون, 2005( وبناء الحامض النووي RNA Hafeez( واخرون, ; 2113 Uchida, 2000 ).. اما االنخفاض الذي بلغ وحدة SPAD فيعود الى بداية عندالتركيز 225 ملغم.Zn لتر 1 التأثير السلبي للزنك, اما التداخل فقد ادى الى الحصول على أعلى معدل بلغ مقارنة وحدة SPAD عند معاملة التداخل 2000 ملغم.لتر K*Zn151 1 بمعاملة المقارنة والتي كانت اقل معدل بلغ وحدة.SPAD 6 تركيز البوتاسيوم في االوراق )%( يالحظ في الجدول) 5 ( ان تركيز البوتاسيوم في االوراق قد ازدادت معنويلا ملع زيلادة 1 تراكيز رش البوتاسيوم اذ اعطى التركيز 2111 ملغم K.لتلر اعللى معلدل فلي نسلبة البوتاسيوم بلغ %31113, في حين اعطت معاملة المقارنة اقل معدل بلغ

235 راكيز رش الزنك %, ان سللبب زيللادة نسللبة البوتاسلليوم فللي االوراق يرجللع لللدور التغذيللة الورقيللة فللي التجهيز المباشر للبوتاسيوم عند رشه مما زاد من تركيزه في الورقلة وملن ثلم االنتقلال اللى اجلزاء النبلات االخلرى Kannan(, 1986(.كمللا يوضلح الجلدول) 5 ( وجللود اعللى معلدل فروق معنوية عند رش الزنك, إذ اعطى التركيز 151 ملغم Zn.لتر 1 في نسلبة البوتاسليوم بلغلت % وبنسلبة زيلادة بلغلت %علن معامللة المقارنة والتي كانت اقل معدل بلغ %212477, ويرجع ذلك للدور الزنلك فلي تنظليم امتصلاص البوتاسليوم فلي النبلات ( فرحلان واللدليمي, 2111 (.املا االنخفلاض عنلد فيعلود اللى بدايلة التلأثير السللبي للزنلك.ان التلداخل بلين التركيز 225 ملغم Zn.لتلر 1 البوتاسيوم والزنك قد اثر بشكل معنوي في نسبة البوتاسيوم وتم الحصول عللى اعللى بللغ % مقارنلة معدل عنلد معامللة التلداخل ZnK2000*151 ملغم.لتلر 1 بمعاملة المقارنة والتي كانت اقل معدل بلغ % والذي لم يختلف معنويا علن 1 1 معامالت التداخل *150K1000 Zn ملغم.لتر و 75 ZnK2000* ملغم.لتر و 1 و 75 ZnK1000* ملغم.لتر. الجدول ) 2 (:تاثير مدى استجابة الذرة الصفراء لرش البوتاسيوم والزنك والتداخل بينهما في متوسط تركيز البوتاسيوم )% (. Mean تراكيز رش البوتاسيوم ملغم.لتر K Zn ملغم.لتر Mean Zn * K Zn K L.S.D Zn=KZinc= Potassium 234

236 1 تركيز الزنك في االوراق)ملغم.كغم 9 ) يشلير الجلدول) 6 ( ان تركيلز الزنلك قلد زاد معنويلا ملع زيلادة تراكيلز رش البوتاسليوم وبنسلللبة زيلللادة بلغلللت و و % للتركيلللز 511 و 1000 عن معامللة المقارنلة عللى التلوالي, اذ اعطلى التركيلز 2111 و 2000 ملغمK.لتر 1 في حين اعطت معامللة المقارنلة أعلى معدل بلغ ملغم.كغم 1 ملغمK.لتر 1 وان سللبب زيللادة تركيللز الزنللك يرجللع لللدور اقللل معللدل بلللغ ملغم.كغللم 1 البوتاسيوم في تشجيع امتصاص الزنك )مهدي,2114(. اما رش الزنلك فقلد أعطلى أعلى معدل في تركيز الزنك بللغ ملغم.كغلم 1 التركيز 225 ملغم Zn.لتر 1 1 بينما أعطت معاملة المقارنة اقل معدل بلغ ملغم.كغم, ان سبب زيادة تركيز الزنللللللك فللللللي األوراق يرجللللللع للتجهيللللللز المباشللللللر لعنصللللللر الزنللللللك عنللللللد رشلللللله )1986,Kannan( الذي زاد من تركيز العنصر في الورقة بشكل كبيلر اال انله بقلي ضللمن حللدود النبللات ( علللي وشللرقي,2111( ومللن ثللم االنتقللال الللى اجللزاء النبللات االخلرى, ملن جهلة اخلرى زاد محتلواه نتيجلة رشله فلي وسلط الزراعلة القاعلدي اللذي يعيق االمتصاص للزنك رغم وفرته في التربة بحسب جدول) 1 (. بالرغم من ان هلذا ) يفلوق حاجلة نبلات اللذرة الصلفراء مملا سلبب المستوى ملن الزنلك )225 ملغم.لتلر 1 حدوث خلل في امتصاص وتوازن العناصر المغذية اي حدوث التضاد بين العناصلر مثلل الفسلفور والحديلد والمنغنيلز والنحلاس وغيرهلا لكنله قلل كلملا زاد تراكيلز رش البوتاسيوم كونه يساعد في عالج التراكيلز العاليلة للزنلك ( 1989,Yamauchi )النله رش البوتاسليوم يسلاعد عللى تلوازن االيونلات كالزنلك داخلل الخليلة النباتيلة )عيسلى, 1991( ملللن خلللالل تنشللليط امتصلللاص المنغنيلللز اللللذي لللله دور فلللي عمليلللة االكسلللدة واالختزال الخاصلة بالزنلك فلي النبلات, فضلال علن ان البوتاسليوم يسلاعدعلى زيلادة امتصلاص الكالسليوم اللذي بلدوره يقللل ملن امتصلاص الزنلك وهلذا ملايعرف بالتضلاد الكمللي mass antagonism )سللكري واخلرون, 1988 (. فضلال عللن امتصللاص النحاس الذي له دور كبير كعامل منشط في البناء الضوئي ( )1983,Davis فضلال عن انه يزيد من امتصاص النتروجين الذي يساعد على بناء البروتينات )طه, 2117( كما يحفز البوتاسيوم امتصاص الفسلفور اللذي يلدخل فلي بنلاء مركبلات الطاقلة ATP مما ينعكس في زيادة طاقة النبات لنقل المركبات ElSayed( وآخرون,2111(. 235

237 راكيز رش ملغم.لتر 9 الزنك الجدول )2 (:تاثير مدى استجابة الذرة الصفراء لرش البوتاسيوم والزنك والتداخ ل بينهما في متوسط تركيز الزنك )ملغم.كغم.) 9 Mean 2000 تراكيز رش البوتاسيوم )ملغم.كغم 9( K Zn Mean Zn * K Zn K L.S.D Zn =KZinc= Potassium لهلذا تعلد اللذرة الصلفراء ملن النباتلات ذات الكفلاءة العاليلة فلي االسلتفادة ملن الزنلك و مقاومة سميته لوجود جين رئيسي مع جينات متنحية تلؤثر عللى هلذة الصلفة ( علواد, 2119( وهذا مااكده Sarrwy( وآخلرون, 2012 ( إذ اشلاروا ان سلمية الزنلك تعلالج بإضافة البوتاسيوم بتراكيز عاليلة.لهذذا ندذا ا أعلذ معذا للذ ملغم.كغذم 9 مقارنذة لمعاملذة المقارنذة تالتذن كانذ عنا معاملة التااخل 553*K0 Zn ملغم.لتذر 9 تا هذذذا النةذذبة قلذ كلمذذا زاا تركيذذز البوتاسذذوم اقذل معذذا للذذ ملغم.كغذم 9 المرشوش تصذو الذ مةذتوال م لذم لتركيذز الزنذك ذن أتراق نبذات الذذرة الصذفراء تهذا راجع لاتر البوتاسيوم المشار له أع ا. االستنتاجات اظهرت طريقة الرش الورقي زيادة معنوية في الصفات المدروسة. ان اعلى حاصل تم الحصول عليه من عند معاملة التداخل. Kملغم.لتر 2111*Zn151 1 ادى الى انخفاض في ان رش الزنك بتركيز 225 ملغمZn.لتر 1 دليل الكلوروفيل وتركيز البوتاسيوم بسبب التأثير السلبي للزنك

238 4 ان استجابة النبات في حالة التداخل لرش البوتاسيوم بالتراكيزالثالثة مع التركيز العالي للزنك ) 211 ملغم.لتر 1 (كان اكبر من استجابته عند رش التركيز العالي للزنك لوحده االمر الذي ادى الى تقليل التأثير السلبي للزنك تدريجيا. 5 ان جميع التداخالت للصفات المدروسة كانت اكبر من معاملة المقارنة. التوصيات 1 أضافة البوتاسيوم بتركيز 2111 ملغمK.لتر ¹ في جميع مراحل نمو النبات. Zn.لتر ¹ 2 اضافة الحديدالمخلبي بتركيز 151 ملغم في جميع مراحل نمو النبات. 3 تطبيق نتائج هذه الدراسة على محاصيل اخرى مثل الذرة البيضاء وزهرة الشمس. المصادر السلاهوكي, ملدحت مجيلد وكريملة محملد وهيلب تطبيقلات فلي تصلميم وتحليلل التجلارب. وزارة التعليم العالي والبحث العلمي. جامعة بغداد. الساهوكي, مدحت مجيد الذرة الصفراء انتاجها وتحسينها. وزارة التعليم العالي والبحلث العلمي. جامعة بغداد. الموسوي, احمد نجم عبداهلل و يوسف محمد ابوضاحي تأثير تجزئة السماد البوتاسي والماء الممغنط في نمو وحاصل الذرة الصفراء. L.Zea mays مجلة جامعة كربالء العلمية :)1(10. العبللادي, جليللل سللباهيم حمللد محمللد صللالح و حسللن شلللش سللعدون العناصللر النللادرة واسلتخدامها رشلا عللى جميلع المحاصليل الزراعيلة. نشلرة ارشلادية رقلم )41(. جمهوريلة العراق. وزارة الزراعة. الهيئة العامة لالرشاد والتعاون الزراعي. اليونس, عبد الحميد احمد زراعة الذرة الصفراء في العراق.االنترنيت. بشور,عصلام وانطلوان الصلايغ طلرق تحليلل تلرب المنلاطق الجافلة وشلبه الجافة.منظملة االغذية والزراعة الدولية.روما. سللكري, فيصللل عبللد القللادرم فهيمللة عبللد اللطيللف م احمللد شللوقي و عبللاس ابللوطبيخ فسيولوجيا النبات. وزارة التعليم العالي والبحث العلمي. كلية العلوم. جامعة بغداد. طه, اوراس محي تأثير اضافة النتروجين والبوتاسيوم الى التربة وبالرش في تراكم المادة الجافلة وتراكيلز النتلروجين فلي المجملوع الخضلري لنبلات الحنطلة Triticumaestivium L.مجلة كلية التربية االساسية. العدد) 52(:

239 عبد االمير, اسامة قاسم و شذى عبدالحسن احمد تأثير الشد المائي والبوتاسيوم في الحاصل ومكوناته وكفاءة استخدام الماء لزهرة الشمس.مجلة العلوم الزراعية العراقية.44)5(: علي, فوزي محسن و حنين شرتوح شرقي تأثير التسميد اللورقي بالزنلك والحديلد فلي نملو وحاصلل اللذرة البيضللاء.L Sorghumومحتلوى bicolor االوراق والبلذور ملن الزنللك والحديد.مجلة االنبار للعلوم الزراعية :)4(8.عدد خاص بالمؤتمر. عواد, حسن عودة وراثة وتربية المحاصليل لتحملل االجهلاد البيئي)الجلزء الثلاني(. المكتبلة المصرية للنشر والتوزيع.مصر. عيسللللى, طالللللب احمللللد فسلللليلوجيا نباتللللات المحاصلللليل. وزارة التعللللليم العللللالي والبحللللث العلمي.جامعة بغداد. (مترجم). فرحان, حماد نواف و ثامر مهيدي بدوي الدليمي تأثير التسميد الورقي ببعض المغذيات الصغرى على نمو وانتاجية القمح )TriticumaestivumL.). المجلة االردنية في العللوم الزراعية :105)1( مهللدي, عمللار صللادق تللأثير رش الحديللد والزنللك فللي نمللو وحاصللل السمسللم. مجلللةالعلوم الزراعية العراقية. 45)1(:2518. Black,C.A.1965a.Methods of soil analysis part (1).Physical and mineralogical soil properties. American Societed of Agronomy Inc.puplisher,Madison,Wisconsin,USA. Black,C.A.1965b.Methods of soil analysis part (2).Chemical and microbiological soil properties. American Societed of Agronomy Inc.puplisher,Madison,Wisconsin,USA. Cakmak,I The role of potassium in alleviating detrimental effects of abiotic stresses in plant.journal of plant nutrition.soil Sciences.168: Celik,H.;Asik,B.B.;Gurel,S. and Katkat,A.V a.effect of Potassium and Iron on macro element uptake ofmaize.turkijosuludag Universitetas.zemdirbyste Agriculture.97(1):p Celik,H.;Asik,B.B.;Gurel,S. and Katkat,A.V b.potassium as an Intensifying Factor for Iron Chlorosis.International Journal of Agriculure and Biology. TurkijosUludag Universitetas.12: Davis,F.R.1983.Micronutrients and plant nutrition.j.american Rhododendron Society.37(1) ELSayed,A.A ; Fawzi,A. and Khalifa,K.E.2000.Balnced nutrition of lentil:role potassium and micronutrients foliar spray.proc. of the 2 ed Intl. Workshop of foliar fertilization.bangkok.thailand.p Felix,L. Graboskyم,J.andBassuk.N Use of the Minolta SPAD502 to determine chlorophyll concentration in FicusbenjaminaL. and Populus deltoids Marsh leaf tissue.hort Sci. 35(3):

240 Gul, H.; Said, A. ; Saeed, B. ; Mohammad, F. and Ahmad,I Effect of foliar application of nitrogen,potassium and zinc on wheat growth. ARPN Journal of Agricultural and Biological Science.6(4):5658. Hafeez,B.; Khanif,Y.M. and Saleem,M Role zinc in plant nutrition A Review. American Journal of Experimental Agriculture.3(2): Hanyes,R.L.1980.A Comparison of two modified kjeldhal digestion techniques for Multielement plant analysis with conventional wet and dry ashing methods Comm.SoilSci.Plant Analysis.11(5): Haytova, D.2013.Areview of foliar fertilization of some vegetables crop.annual Review and Research in Biology.3(4): Hristozkova,M.; Stancheva,I. and Geneva,M Responses of inculated pea plant (Pisumsativum L.) to foliar fertilizer application with elevated concentration.ecology and Future.1:1417. Kannan, S A foliar absorption and transport of inorganic nutrient. C.R.C. Crit. Rev. plant. Sci. 4: License, S. A Maize from new world encyclopedia.organizing knwledge for happiness.prpsperity and world peace. world enclopedia. Org. maize. Mandic, V. ; Krnjaja,V. ; Bijelic, Z. ; Tomic,Z. ; Simic, A. ; Stanojkovic,A. ; Petricevic,M. and CaroPetrovic,V The effect of crop density on yield of forage maize.biotechnology in animal husbandry. BelgradoZemun. 31(4): Martin,P.2002.Micronutrient deficiency in Asia and the pacific Borax Europe limited.uk.at.2002.ifa.regional Conference for Asia and the Pacific. Singapore.Novermber Page,A.L.;Miller,R.H. and Kenney,D.R.1982.Methodes of soil analysis part (2).Chemicaland microbiological properties, American.Societed of Agronomy.Madison.Wisconsin. Rafat,N;Yarnia,M. and Panah,D.H.2012.Effect of drought stress and potassium humat application on grain yield related traite of corn (CV.604).J. of food Agic.and Environment. 10(2): Richards,L.A.1954.Diagnosis and improvement of saline and alkaline soile.usda.hand book.no.60.usda,washington DC. 239

241 Romhold,V. and ElFouly.M.M.2000.Foliar Nutrient application challenge and llemits in crop production(publ)2 nd.international Workshop on foliar fertilization.bangkok.thialand.p.133. Salem,H.M. and ElGizawy.2012.Tmportance of Micronutrients and its Application Methode for Improving Maize( Zeamays L.) Yield in Clay Soil.AmericanEurasian J.Agric. and Environ.Sci.12(7): Sarrwy,S.; ElSheikh,M. ;Kabeil,S. and Shamse, A Effect of foliar application of different potassium forms supported by zinc on leaf mineral contents, yield and fruit quality of Balady Mandrinetrees.MiddleEast J. of Sci. R. 12(4): Sharma,T.;Dreyre,I.and Riedelsberger,J.2013.The role of K + channels in uptake and redistribution of potassium in the model plant Arabidopsis thaliana. Frontiers in Plant Science.4: 19. Tony,W.2006.Growing food.a guide to food production.pp U.S.D.A World agricultural supply and demand estimates.the world agricultural outlook board.u.s.a. Uchida,R.2000.Essential nutrients for plant growth:nutrient functions and deficiency symptoms.univ of Hawaii al Manoa.chapter3.pp32. Vazin, F Effect of zinc sulfate on quantitative and qualitative characteristics of corn (Zea mays L.) in drought stress. Cercetariagronomice in Moldova.45(3):1524. Wang,M;Zheng,Q;Shen,Q. and Guo,S.2013.The critical role of potassium in plant stress response.internationalj.of Molecular Sc.14: Yamauch,M Rice bronzing in Nigeria caused by nutrient imbalances and its control by potassium sulfate application.plantand Soil. 117 ) 2( :

242 دراسة تأثري العسل على قيمة السكر يف الدم مقارنة مع السكر املصنع يف الفئران البيض املستحدث فيها مرض السكري Study the effect of honey on the value of sugar in the blood compared with the sugar plant in the white mice that developed diabetes م.م. قتيبة حمادي محمود السامرائي جامعة سامراء كلية العلوم التطبيقية قسم التحليالت المرضية Assistant teacher:qutaiba Hommadi Mahmood Al Samarraie University of Samarra Col. of Applied SciencesDep. of Pathological Analytical الخالصة في بحثنا هذا استخدمنا عسل النحلل الهجلين ( الكرينلولي وااليطلالي ) المربلى عللى ازهار الحمضيات بتركيز %111 وتركيلز %51 ( 5 ملل ملن العسلل ملع 5 ملل ملن الماء المقطر ) والسكر المصنع ( المذاب في الماء ) على عدد من الفئران والمكررات فيها كان لكل حالة ثالث فئلران وكانلت هلذه الفئلران معزوللة علن بعلض لضلمان علدم حصول خلط بين انواع األغذيلة والفئلران, وفلي هلذه الدراسلة تلم اسلتخدام مجملوعتين مجموعلة تعطلى علالج لملرض السلكري قبلل التغذيلة وأخلرى ال تعطلى علالج. وكلان استحداث مرض السكري في الفئران بواسطة استخدام مادة االلوكسان Alloxan التي تعمل على تعطيل خاليا بيتلا فلي جلزر النكرهلانز فلي البنكريلاس وبلذلك يتوقلف انتلاج األنسولين. وكانت النتائج تدل على ان العسل %111 هو ال يعمل على ارتفاع نسبة السكر فلي الدم ويكون اقرب للنسبة قبل التغذيلة فلي العسلل سلواء كلان ذللك بأخلذ العلالج ام بغيلر 241

243 عالج, العسلل بتركيلز %51 فقلد رفلع نسلبة السلكر فلي اللدم ولكلن كلان هلذا االرتفلاع طفيفا, أما السكر فقلد رفلع نسلبة السلكر فلي اللدم بشلكل كبيلر جلدا وملحلوظ وكلان هلذا االرتفاع في حالة استخدام العالج او عدم استخدامه. Abstract Study the effect of honey on the value of sugar in the blooin our research, we used hybrid bee honey (crinol and Italian) citrus flowers mixed on 100%, 50% concentration (5 ml of honey with 5 ml of distilled water) and processed sugar (dissolved in water) on a number of mice. These mice were isolated from each other to ensure that there was no mixing between Kinds of mice and kinds of food. In this study, two groups were used to treat diabetes before nutrition and others were not treated. The development of diabetes in rats by the use of Alloxan, which works to disrupt the beta cells in the Islands of Lancherhans in the pancreas and thus stop production of insulin. The results indicated that honey 100% is not working on high blood sugar and be closer to the proportion before nutrition in honey, Whether by taking the treatment or not, honey concentration of 50% has raised the proportion of sugar in the blood, but this increase was slight, Sugar raises the blood sugar level very much and was noticeable whether we use the treatment or not. المقدمة: العسل مركب معقد يحتوي على أكثر من )68( عنصر أساسيا واللبعض اآلخلر أكلد أنللله يحتلللوي عللللى )88( عنصلللرا منهلللا السلللكريات )Carbohydrate( ومائيلللات الكاربون والبروتين )Protean( واألمالح المعدنية salt( )Material والبوتاسليوم 242

244 )Potassium( والكاليسلللليوم )Coliseum( وبعللللض الللللدهنيات معقللللدة التركيللللب الكيميلائي. وهلو بشلكل علام يميلل إللى الللون اللذهبي الصلافي أو الللون البنلي أو الللون المائل إلى السواد ويعتبر مادة محالة أكثر من ضعفي السكر العادي نسبة لنفس الحجلم أو المقللللدار وإضللللافة إلللللى احتوائلللله علللللى هرمونللللات )Hormone( وفيتامينللللات )Vitamins( وأحملاض أمينيلة acid( )Amino وملواد عطريلة ومضلادات أكسلدة ) Antioxidation (.والعسل ال يصبح عسال طبيعيا إال بعد تخميره وتجهيزه في معدة النحلة ألنه يختلط بالعديد من اإلنزيمات كما يفقلد نسلبة كبيلرة ملن رطوبتله. وال يلدعى العسل بالعسل إال إذا مر في معدة النحلة وإال فهو ال يحمل أسم العسل وإنما إسم المواد األخرى أي يصبح دبسا. والدبس هو المادة المستحضلرة ملن الفواكله والتملور والملواد الغذائية الحلوة األخرى )شاكر, 1986 (. ويتميللز العسللل بعللدة مميللزات منهللا كونلله حلللو المللذاق, قواملله يتللراوح بللين الجامللد والسائل حسب نوع العسل ودرجة الحرارة السائدة في الجو ومحتواه من الملاء, بشلكل عام تقدر كثافة العسل النوعية ب) 1,42 ( فهو أثقل من الماء ب) 1,42 ( % وهذه الكثافة تختلف باختالف نوع الرحيق وتركيبه الكيميائي, ويكون تأثير العسل حامضلي واألس الهيدروجيني له )4,53,2(, ال تزيد نسبة رطوبته عللى )25( %, ولله قابليلة كبيلرة على امتصاص الرطوبة من الجو ويكون لونه ناتجلا علن مكونلات ذائبلة فلي الملاء ملن أصل نباتي مفرزة من الرحيلق وهلي عبلارة علن الكلوروفيلل والكلاروتين والزانثوفيلل وغيرها ويتوقف وجودها على نلوع النبلات والظلروف الجويلة ويغملق للون العسلل إذا اشتدت حرارة الشمس في موسم الرحيق أو إذا حزن في أوراق شلمعية داكنلة, ويتغيلر لون العسل إذا حفظ في أوعية تسمح بمرور الضوء من خاللها, وتتراوح ألوان العسل مللن عسللل عللديم اللللون كعسللل البرسلليم الحجللازي إلللى عسللل أسللود كعسللل السللمر )السامرائي, 2112(. ويتكون العسل من مكونات كثيرة حيث وجد العلماء والباحثين إن العسل يختلف فلي تركيبلللله الكيميللللائي ومللللن حيللللث نسللللب السللللكريات )Carbohydrate( والرطوبللللة واألحملللللاض )Acids( واألملللللالح )Salts( والفيتامينلللللات )Vitamins( وبعلللللض المركبات األخرى باختالف مصادر الغذاء التلي تجملع منهلا العسلل, كملا يختللف أيضلا في لونه وطعمه ودرجة الحموضة )Acidic( فيه. إلى إن بعض الباحثين أضافوا لهلذه االختالفلات عواملل أخلرى مثلل سلاللة النحلل, والظلروف الجويلة, والبيئيلة, وخلواص التربلة. وقلد تبلين إن النتلائج التلي أوردهلا الباحلث جلاءت مقاربلة للنتلائج التلي أوردهلا 243

245 الدكتور ديمي شوفان مع اختالف بسيط في بعض النسب, والحقيقة إن كال الباحثين كان مصيبا في تحليله, وان الفروق في النسب إنما تعود لسبب وجيه هلوة اخلتالف المرعلى ونلوع الزهلور وسلاللة النحلل التلي تغلذت عللى تللك المصلادر وقلد أورد األسلتاذ عللي المصري في كتابه مملكة النحل نتائج الباحث براون على النحو التالي: %41,5 %34,12 %1,9 %17,7 %1,5 سكر الفركتوز أو سكر الفاكهة )Fructose( كلوكوز أو سكر عنب )Glucose( سكروز أو سكر قصب )Sucrose( ماء )Water( دكسترين وصموغ )Decstrin( رماد )حديد, نحاس, سيلكا, منغنيز, كلورين, كالسيوم, بوتاسيوم, فوسفور, كبريت, %1,18 المنيوم, مغنيسيوم( %4,19 مواد غير معروفة )أبلللللللو عيانلللللللة والملللللللزين, 2119 م عبلللللللد الغنلللللللي, 2119 م الحسلللللللناوي, 2111 م النجار, 2111 (. الجزء العملي : تم اخذ 36 فأرة بيضاء مقسمة على طيل فترة الدراسة حيث كلان لكلل عينلة دراسلة 3 فئران )مكررات( معزولة على حدى لضمان عدم حصلول اخلتالط بينهلا ملن ناحيلة العالج والتغذية, وكان تجهيز مادة االلوكسان Alloxan بأذابة 1,113 غم من الملادة في 5 مل من الماء المقطر مع التحريلك المسلتمر لحلين تحلول للون الخلليط اللى الللون الشفاف وبعد هلذا التحلول الللوني يلتم حفظهلا فلي ظلروف مظلملة وجافلة لضلمان علدم تغير فعالية هذا الخليط. وتم حقن الفأر بكمية 1,12 مل من هذا الخليط تحت الجلد فلي اسفل البطن وتم قياس السكر في اللدم لضلمان حصلول تعطيلل عملل االنسلولين. وكلان تجهيز تراكيز العسل) عسل الحمضيات ) بإذابة 2,5 ملل ملن العسلل فلي 2,5 ملل ملن 244

246 245 الماء المقطر وبذلك تلم الحصلول عللى تركيلز %51 ملن العسلل, أملا التركيلز %111 فهو بدون أي أضافة. والسكر المذاب كان تجهيزه بإذابة 21 غم من الكلوكوز فلي 11 ملل مللن الملاء وتللم وضللعه علللى سللطح حللار مللع التحريللك المسللتمر لضللمان حصللول التجانس بين الخليط. النتائج والمناقشة : تم قياس نسبة السكر في الدم ل 15 فأرة تم أختيلارهم بشلكل عشلوائي وكانلت معلدل نسبة السكر في الدم هي 57 ملغم\دسل وبعدها تم حقن نفس الفئران التي تم قياس نسبة السكر في الدم فيها بمادة االلوكسان ثم قمنا بقياس نسبة السلكر لهلا بعلد 24 سلاعة ملن الحقن وكانت نسبة السكر هي 164 ملغم/دسل وبذلك تم ضلمان فعاليلة ملادة االلوكسلان الن هذه المادة تعمل على ابطال عمل االنسولين من خالل تعطيل عمل خاليلا بيتلا فلي جزر النكرهانز في البنكرياس )السامرائي, 2111(. *نسبة السكر في الدم عند التغذية بدون استخدام العالج : تم الحصول عللى نسلب السلكر فلي اللدم كملا موضلح فلي الجلدول ادنلاه وكانلت هلذه القراءات بدون اعطاء الفئران عالج مرض السكري قبل التغذية. بدون العالج القياس بعد ساعتين القياس بعد ثالث ساعات نسللللبه السللللكر التغذيلة بالعسلل التغذية بالسكر التغذيلللللللللللللللللللللللللة التغذية بالسكر بالعسل %111 قبل التغذية % تم تجويع الفئران لمدة 6 ساعات ثم بعد ذلك تمت التغذية بالعسل %111 حيلث كانلت نسبة ارتفاع بالسكر بالدم في الفئران المتغذية على العسل %111 هي 164 ملغم/دسل وهي اقرب لنسبة السكر في اللدم قبلل التغذيلة 161 ملغم/دسلل واقلل بكثيلر فلي الفئلران المتغذيلة عللى السلكر 232 ملغم/دسلل وكلان هلذا القيلاس بعلد سلاعتين ملن التغذيلة وقلد يعزى ذلك ألحتواء العسلل عللى نسلبة عاليلة ملن السلكريات السلريعة التمثيلل االيضلي مثل الفركتوز والكالكتوز وكانت هذه النتيجة قريبة لما حصلل عليله & kadiruelu gurtu في 2115 عندما أجروا بحثهم تأثير عسل نحل االحمضيات عللى نسلبة السلكر في الدم في ماليزيا وكان هناك فرق طفيف في النسب عملا حصلل عليله Enginyurt وجماعته في 2117 عندما استخدموا عسل اليوكالبتوس وقد يعزى هذا األخلتالف اللى ان عسل اليوكالبتوس نسبة اقل من الفركتوز والكاالكتوز. اما خليط السكر المذاب فأنه

247 قلد رفلع نسلبة السلكر فلي اللدم أكبلر بكثيلر ملن العسلل حيلث كانلت النتيجلة هلي 211 ملغم/دسل وكان هذا االرتفاع الكبير في نسبة السكر هو نتيجلة صلعوبة تمثيلله الغلذائي بسبب انعدام األنسولين بفعلل ملادة االلوكسلان وكانلت هلذه النسلب نفلس ماحصلل عليله Erejuwa وجماعته في 2112 عندما اسلتخدموا السلكر مقارنلة ملع العسلل الملاليزي على فعالية بعض هرمون األنسولين وبالتالي حصلوا عللى ارتفاعلات عاليلة فلي نسلب السكر في الدم. وتم القياس لنسب السكر في الدم بعد ثالث ساعات من التطعليم وكانلت النسبة هي 156 ملغم/دسل وهذه مطابق لما حصل عليه Abdallrhman في 2116 عنلدما درس التغيلرات الحاصللة فلي نسلب السلكر فلي اللدم لعسلل النحلل المربلى عللى الحمضيات حيث حصل على نتيجة مشابهة للنفس النتلائج التلي تلم الحصلول عليهلا فلي بحثنا وقام بقياس نسبة السكر في الدم بعد ثالث ساعات لضمان التمثيل الغذائي الكامل للعسلل. املا بالنسلبة لقيلاس لسلكر بعلد ثلالث سلاعات 232 ملغم/دسلل وهلذا يلدل عللى أنعدام االنسولين في الدم وزاد تركيز السكر في الدم وقد تم مالحظة موت هذه الفئلران بعد ساعات قليلة نتيجة ارتفاع السكر وهذا ما حصلل عليله etal,2011( ) Shariff عندما استخدموا الكلوكوز المصنع في تأثيره على نسبة السكر. كانلت النتلائج عنلد التغذيلة بتركيلز العسلل %51 والسلكر الملذاب كملا موضلحة فلي الجدول ادناه مع عدم اعطاء الفئران عالج السكري قبل التغذية. بدون العالج القياس بعد ساعتين القياس بعد ثالث ساعات نسلللللبه السلللللكر التغذيلة بالعسلل التغذية بالسكر التغذيلة بالعسلل التغذية بالسكر %51 قبل التغذية % كانت نسب السكر فلي اللدم عنلد التغذيلة بالعسلل %51 اعللى ملن نسلب السلكر عنلد التغذية بالعسل %111 حيث كانت نسبة السكر في اللدم عنلد القيلاس بعلد سلاعتين ملن التغذية هي 184 ملغم /دسل ألن التمثيل الغذائي كان أقلل ملن التمثيلل العسلل %111 ألن عند تجانس العسل مع الماء المقطر فقد دفع ذلك الى حصول تفكك أو تحلل لبعض المركبات التي قد كانلت بشلكل جزيئلات أكبلر مثلل السلكريات الثنائيلة التلي حصلل لهلا تحلل مائي تنتج عنها سكريات أحادية وهذه القيم السكر في الدم التي تم الحصول عليها كانت مطابقة لما حصل عليه Bobis وجماعته في 2114 عندما استخدموا التراكيلز المختلفة للعسل الروماني لنوعي مرض السكري األول والثاني وكانلت النتيجلة للقيلاس بعد ثالث ساعات هي 177 ملغم/دسلل وكانلت مقاربلة لملا حصلل عليله Enginyurt 246

248 247 وجماعته في 2117 عندما استخدموا عسل اليوكالبتوس وقد يعزى هذا االخلتالف اللى ان عسل اليوكالبتوس نسبة اقل من الفركتوز والكاالكتوز. *نسبة السكر في الدم عند التغذية مع استخدام العالج : في الجزء من البحث تم أخذ علالج ملرض السلكري الشلائع فلي األسلواق وكلان ملن اخذ المادة الفعاللة لعلالج ملن الشلركة العاملة لصلناعة األدويلة والمسلتلزمات الطبيلة سلامراء والتلي هلي Glibenclamide BP وكانلت بشلكل مسلحوق وتلم اذابلة 111 مليغرام من العالج في 11 مل من الماء المقطر وتم وضعها مع الماء الشرب الخلاص في الفئران وفي هذا الجزء تم تعطيش وتجويع الفئران ثم بعد ذلك تعطى الماء والعالج ثللم بعللدها بنصللف نبللدأ بالتغذيللة بالعسللل ذو التركيللز %111 والسللكر المللذاب وكانللت النتائج التي تم الحصول عليها لقياس نسبة السكر في الدم هي كما موضحة في الجدول ادناه. مع العالج القياس بعد ساعتين القياس بعد ثالث ساعات نسلللللبه السلللللكر التغذيللة بالعسلل التغذية بالسكر التغذيللة بالعسلل التغذية بالسكر %111 قبل التغذية % كانلت نسلب السلكر فلي اللدم المقاسلة بعلد أخلذ العلالج والتغذيلة عللى العسلل بتركيلز %111 بعد التغذية بساعتين قريبة من النسبة قبل التغذية دل عللى ان التمثيلل الغلذائي للعسل سواء كان العالج موجودا أو غير موجود كلان كلامال وكانلت النسلبة للسلكر فلي الدم هي 158 ملغم/دسل, وهذه النسب مطابقة لما حصل عليه Naznin وجماعتله فلي 2117 عندما استخدموا أنواع العسل وتأثيرها عللى قيملة السلكر فلي اللدم وكلان عسلل الحمضيات أقلها تأثيرا, وكانت مقاربة لما حصل عليله Kadervelu & Gurtu فلي 2113 و Abdulrahman فللي 2113 عنمللا اسللتخدموا عسلل السللدر وتللأثيره علللى مرض السكري. أما بالنسبة للتغذية على السكر فقد كانلت النسلبة هلي 185 ملغم/دسلل وهذه تعتبر أقل بكثير من النسبة من دون عالج وهذا الذي دل عللى ان التمثيلل للسلكر كان اكثر من السابق بسبب عالج األنسولين الصلناعي المعطلى علن طريلق الفلم وهلذا النتيجة مما حصل عليه Erejuwa وجماعته في 2112 عندما تأثير السكر باسلتخدام العالج على مرضى السكري. وكانت النتائج لنسب السلكر فلي اللدم بعلد ثلالث سلاعات اقل من النسبة قبل التغذية وهذا يدل على ان العسل ساهم فلي خفلض السلكر ملن تمثلله نهائيلللا وهلللذا يلللدل عللللى ان العسلللل سلللريع التمثيلللل وهلللذا مطلللابق لملللا حصلللل عليللله

249 Hemmati وجماعته في 2115 عندما استخدموا تأثير العسل على بعض المتغيرات الكيموحيوية في الجسم. أما التغذية على السكر فقد زاد تمثيله على ما هو قبلل سلاعتين وكانت النسبة هي 181 ملغم/دسل وهذا يدل على مفعول الدواء في تقليل النسبة للسلكر في اللدم وهلذه مقاربلة لنتيجلة Shariff وجماعتله فلي 2111 عنلدما اسلتخدموا السلكر المصنع في تغيير نسبة السكر مقارنة مع العسل باستخدام بعض االعشاب. أما بالنسبة الستخدام العسل بتركيز %51 النتائج كما موضحة في الجدول أدناه في التغذيلة بعلد تطعليم العلالج فقلد كانلت مع العالج القياس بعد ساعتين القياس بعد ثالث ساعات نسلللللبه السلللللكر التغذيلة بالعسلل التغذية بالسكر التغذيلة بالعسلل التغذية بالسكر %51 قبل التغذية % كانت الفارق ما بين النسبتين ( قبل التغذية وبعدها ) اقل من الفارق بينهما فلي حاللة عدم وجود عالج وكانت النسبة بعد ساعتين من التغذية 169 ملغم/دسل وهذا دل على ان العالج ساعد في زيادة التمثيل الغذائي للعسل بتركيز %51 وهذا مقارب لما حصل Kosternoy & Bayumi في 2115 عندما اعتمدوا تخلافيف العسلل للحفلاظ عللى مسلتوى السلكر فلي اللدم خشلية األنخفلاض نتيجلة العمليلات الجراحيلة فكلان ذو فعاليلة ايجابية على الحفاظ على مستوى السكري, وكانت النتائج بعد ثالث ساعات من التغذية هي 177 ملغم/دسل اقل من القراءة قبل ساعتين الن ذلك دل عللى ان التمثيلل الغلذائي زاد عما سبق وكانت هذه النتائج مطابقة لملا حصلل عليله Enginyurt وجماعتله فلي 2117 عنلدما اسلتخدموا عسلل اليوكلالبتوس وقلد يعلزى هلذا االخلتالف اللى ان عسلل اليوكللالبتوس نسللبة اقلل مللن الفركتللوز والكللاالكتوز عنلدما اسللتخدموا العلالج السلكري للمالحظة األختالفات في نسب السكر. 248

250 المصادر: أبو عيانة, رمزي عبد الارحيم المازين, جماال علاي) 6001 (. منتجاات نحال العسال غاذاء ودواء. إبداع لإلعالم والنشر, القاهرة, جمهورية مصر العربية. الحسناوي, منتصر صباح )6090(. عسل النحل غذاء كاف وشفاء شاف. الطبعة الثانية. دار المعارف الحديثة, اإلسكندرية, جمهورية مصر العربية. السامرائي, قتيباة حماادي محماود )6096(. الخصاائص المناطقياة لعسال النحال الهجاين وبعض الصفات الكيموحيوية التثبيطية له على بعض األحياء المجهرية الممرضة لالنسان. كلية العلوم. جامعة تكريت. السامرائي, محمد حميد محل )6099(. دراسة تاأثير المستخلصاين الماائيين لباذور نبااتي العنااب والحلبااة علااى بعااض المتغياارات الكيموحيويااة فااي الفئااران المسااتحدث فيهااا داء السكري وفرط الحديد. كلية العلوم. جامعة تكريت. شاااكر, نااوال )9192(. العساال غااذاء ودواء. مطااابع البيااان التجاريااة, دبااي, األمااارات العربية المتحدة. عبد الغني, وليد )6001(. نحل العسل ومنتجاتها وفوائدها الطبياة. دار الرضاوان, حلاب, سوريا. النجار, زغلول راغب محمد )6090(. الحيوان. جاار المعرفاة للطباعاة والنشار, بياروت, لبنان. Abdulrhman, Mamdouh (2013). Honey Therapy in a Patient Volunteer with Type 2 Diabetes Mellitus: Case Report. Clinical Trials. Volume 3. Issue 4. Abdulrhman, Mamdouh Abdulmaksoud (2013). Honey as a Sole Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus. Endocrinology & Metabolic Syndrome. Volume 5. Issue 2. Bobiş, Otilia ; Daniel S. Dezmirean; Adela Ramona Moise (2013). Honey and diabetes: the importance of natural simple sugars in diet for preventing and treating different type of diabetes. International Journal of Collaborative Research on Internal Medicine & Public Health. Vol. 5 No. 4. Enginyurt, Ozgur; Lutfullah Cakir; Ahmet Karatas; Soner Cankaya; Yasemin Kaya; Handan; Tugcu H; Dogan Iscanli M; Necda Cankaya & Seyma Yarilgac (2017). The role of pure honey in the treatment of diabetes mellitus. Biomedical Research. India. Volume 28 Issue

251 Erejuwa, Omotayo O.; Siti A.Sulaiman; Mohd S. Ab Wahab (2012). Honey A Novel Antidiabetic Agent. International journal of biological scinces. Hemmati, Mina; Mehdi Karamian and Mohammad Malekaneh (2015). Antiatherogenic Potential of Natural Honey: Antidiabetic and Antioxidant Approaches. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 3 (2015) Kadirvelu, Amudha& Sunil Gurtu (2013). Potential benefits of honey in type 2 diabetes mellitus: A review. International Journal of Collaborative Research on Internal Medicine & Public Health. Vol. 5 No. 4. Kosternoy, Alexander and Emad K. Bayumi (2015). Use of Honey in Management of Diabetic Foot Infecti on:patient s Satisfaction and Outcome. Journal of Surgery 3(21): Lubna Naznin; Muhammad Rabiul Hossain; Debashish Saha; Sarmin Sultana and Mreenal Kanti Sarkar (2017). Glycemic Effects of Honey Compared to Glucose Using Standard OGTT. Journal of Enam Medical College. Vol 7 No 2 May Sheriff, M.; M. A. Tukur; M.M. Bilkisu; S. Sera and A.S. Falmata (2011). The effect of oral administration of honey and glucophage alone or their combination on the serum biochemical parameters of induced diabetic rats. Research in Pharmaceutical Biotechnology Vol. 3(9), pp , October

252 تنمية جمموعة من البكرتيا على األوساط الزرعية القياسية واألوساط املصنعة حمليا )قشور الباذجنان( ومعرفة التغاير الوراثي بتقنية Finger printing Developing a group of bacteria on the standard cultural media and the manufactured local medium (Eggplant Aubergine)and detecting the genetic changes by using finger printing technology. الملخص ا.د.رشيد حميد حسن حذيفة ارحيم علوان كلية التربية /جامعة سامراء Rasheed H.Hassan College of Education/Samarra university Huthaifa R.Alwan College of Education/Samarra university اجريت الدراسة في مختبرات قسم علوم الحياة في كلية التربية جامعة سامراء للمدة ملللن 5 ايللللول 2016 اللللى 1 ايلللار وتضلللمنت اسلللتخدام وسلللط قشلللور الباذنجللانSolanummelongena فللي تنميللة االحيللاء المجهريللة. حيللث اسللتخدم خمسلللللللللللللللللللللللللللة انلللللللللللللللللللللللللللواع ملللللللللللللللللللللللللللن البكتريلللللللللللللللللللللللللللا, وهلللللللللللللللللللللللللللي Klebsiella.pneumoniae وEschrichia.coli و Streptococcus.pneumonia.وStaphylococcus.aureus 251

253 وaeruginosa.Pseudomonas حيلللث بينلللت النتلللائج امكانيلللة تنميلللة هلللذه المايكروبللللللات علللللللى الوسللللللط المصللللللنع.وكللللللان اعلللللللى معللللللدل نمللللللو لبكتريللللللا coliوpneumoniaeklebsiella Eschrichiaو )+++aeruginosapseudomonas) وتليهلللللللا بكتريللللللللا (++(.aureuss و ( pneumonias.+(.فضال عن استخدام تقنية Fingerلمعرفلة printing التغيلرات الوراثيللة لبكتريللا K.pneumoniae وE.coli مللن خللالل النتللائج بللين عللدم وجللود Abstract تغيرات وراثية لهذه االنواع مقارنة باألوساط القياسية. This study has done in the laboratories of the Department of the biological Sciences in the College of Edocation university of samarra, for the period from September to may it is included using the medium of.eggplant.aubergine (solanum melongena) in the development of microorganism. Five species of bacteria are used ; Klebsiella.pneumoniae, Eschrichia coli, Staphylococcus.aureus, Streptococcus.pneumonia, Pseudomonas aeruginosa,,the results showed the possibleity of developing these microorganism on the manutactured medium.the highest growth ratio of bacteria occurred in Klebsiella pneumonia, Eschrichia coli andpseudomonas aeruginosa(+++),and followed by Staphylococcus aureus (++), and followed by Streptococcus pneumonia(+). it is also used a Finger printing K. pneumonia and E. coli the results also appeared there are a few changes in these species in comparison with the standard media 252

254 المقدمة : تعتمد تنمية األحياء المجهرية وخصوصآ البكتريا المرضية والفطريات على استعمال أوساط زرعيه غذائية بسيطة أو معقدة توفر الطاقة الالزمة للفعاليات الحيوية لهذه األحياء )الزيدي,2000( حيث قادت العديد من الدراسات وخاصة دراسة العالمينPastorو Koch إمكانية تنمية البكتريا بإستخدام أوساط زرعيه مناسبة خارج جسم الكائن الحي )Stanier.,1987( إن عملية تنميه االحياء المجهرية في المختبر تتطلب توفر جميع االحتياجات الغذائية التي تحتاجها هذه الكائنات وهذه االحتياجات موجودة في األوساط الزرعية Culturemedia( ) الداخلة في تكوين مجموعة من المركبات بشكل خليط متوازن من المواد الغذائية التي تحتاجها األحياء المجهرية بنسب معينة وتسمح بنمو جيد )الزيدي, 2000 ( وتعتبر االوساط الزرعية الخاصة بتنمية االحياء المجهرية ذآت أهمية في عزل وتشخيص هذه االحياء ودراستها manuall.,1999( )Difco إن بداية االهتمام بهذه األوساط كان في النصف الثاني من القرن التاسع عشر واليزال الباحثون حتى الوقت الحاضر يعملون على تخليق او تصنيع أوساط جديده سواء كانت أوساط طبيعية media( )Synthetic او نصف تركيبية ( media )Semi synthetic مصنعة.)Pirt.,1999;Cruickshank.,1975) إن االحياء المجهرية تنمو وتتكاثر أينما تتوفر الظروف المالئمة لذآلك من عناصر كبيرة )C,H,O,N,P( ورقم هيدروجيني PH ودرجة حرارة )الخفاجي,1990(. تقسم االوساط الزرعية لقسمين رئيسيين :األوساط الطبيعية media( )Nutural واألوساط التركيبية ( Synthetic )media وتستخدم االوساط الطبيعية على الغالب بتمية الجراثيم متغايرة التغذية )Heterotroph( فهي تتكون من مواد كيميائية وعضوية غير محدد التركيب مثل البروتينات والكاربوهيدرات حيث تحتاج البكتريا إضافة مواد كالدم والمصل والفيتامينات وغيرها من المواد أما االوساط التركيبية وتستخدم بتنمية الجراثيم ذاتية التغذية )Autotroph) حيث تتكون هذه االوساط من مواد كيميائية ذآت تراكيز معروفة )Prescott.,2005;Cruckshank.,1980) وإن التراكيز العالية للمركبات والعناصر الدخلة في تركيب الوسط الزرعي ليس شرط في الحصول على نمو أفضل ألن العديد من المواد ذات تأثير سلبي إذا زاد تركيزها في الوسط الزرعي)الزيدي 253

255 ,2000) وعند تحضير هذه االوساط في دراستنا هذه تم مراعاة أن تكون كفوءة ومن مواد متوفرة ورخيصة الثمن وبمتناول اليد ولهذا. هدفت الدراسة الىتنمية انواع بكتيرية مختلفة على االوساط القياسية ) Normal (واالوساط المصنعة )Manufactory( محليا )قشور الباذنجان ),دراسة التغيرات الوراثية التي يمكن أن تحصل لألنواع البكتيرية المستخدمة في الدراسة بتقنية ال printing( )Finger المواد وطرائق العمل تحضير األوساط الزرعية حضرت األوساط الزرعية حسب ماجاء في تعليمات الشركة المصلنعة باإلعتملاد عللى التعليملللات المثبتلللة عللللى العبلللوات الخاصلللة باألوسلللاط الزرعيلللة وعقملللت بالمؤصلللدة ولملدة 15 دقيقلة )Autocluve( بدرجة حرارة 121 م وتحت ضغط 15 باوند/انج 2 ثم صبت بأطبلاق بتلري وحضلنت عنلد درجلة حلرارة 37 م ولملدة 24 سلاعة لغلرض التأكد من عدم تلوثها. وحفظت عند درجة حرارة 4 م فلي الثالجلة حتلى إسلتخدامها, أما األوساط الزرعية التالية حضرت حسب ماجاء عن.)Macfaddin.,2000) انواع األوساط الزرعية القياسية التي تم استخدامها في التجربة MacConkey agae medium Nutrient agar medium وسط أكار الماكونكي وسط األكار المغذي وسط أكار Blood agar medium وسط بكتريا الزوائف الزنجارية Pseudomonas agar medium وسط المانيتول الصلب Mannitol salt agar وسط المثيل االزرق (EMB) Eosin.Methylene.Blue Agar وسط مولرهنتون Muller Hinton Agar Medium 254

256 وسط قشور الباذنجان المحلي حضللر هللذا الوسللط حسللب طريقللة) السللامرائي 2013(, تللم وزن 60 غللم مللن قشللور الباذنجلان منزوعلة الملاء dehydratedمجففلة ومطحونلة بشلكل جيلد. وضلعت فلي بيكر وأضيفت لها 1 لتر من الماء المقطر وغليت لمدة 5 دقائق ثم ترك ليبرد ثم رشح بعد ذلك بالشاش والقطلن ثلم غللي ملرة ثانيلة أيضلا ولملدة 5 دقلائق ثلم تلرك ليبلرد رشلح بالشاش والقطن وأكمل الحجم الى 1 لتر من الماء المقطر أضيف له 15 غم ملن األكلار لتحويللل الوسللط الللى الحالللة الصلللبة عقللم الوسللط بالمؤصللدة بدرجللة حللرارة 121 م وضغط 1.5 باوند /انج 2 ولمدة 15 دقيقة ثم ترك ليبرد قليال صب بأطباق بتلري نظيفلة ومعقمة ثم ترك لمدة 24 ساعة في الحاضنة للتأكد من خلوها من التلوث. تقدير النمو البكتيري بجهاز المطياف الضوئي Spectro photo mete للوسط القياسي Nutrient agar والوسط المصنع قشور الباذنجان عند الطول الموجي 24/ 600 nm ساعة. 1 يحضللر الوسللط الزرعللي Nutrient broth بعللد عمليللة التعقلليم ويحضللر مستخلص قشور الباذنجانmelongena Solanum بدون اضافة االكار.agar 2 يوضللع فللي تيوبللات Plain tubes معقمللة ونظيفللة 5 مللل مللن المللرق المغللذي Solanum melongena ومسلللتخلص قشلللور الباذنجلللان Nutrient broth وتترك في الحاضنة لمدة 24/ ساعة االجل التاكد من عدم تلوثها. 3 بعللد عمليللة التحضللين يللتم تلقلليح االنابيللب Plain tubes الحاويللة علللى المللرق المغذيbroth Nutrient ومستخلص قشور الباذنجان Solanum melongena بالبكتريا المستخدمة ولمدة 24/ ساعة ألجل الحصول على نمو. 4 نضلع 1 ملل فلي Cuvette الخاصلة بجهلاز المطيلاف الضلوئي ملن الملزرعتين وبواقع ثالثة مكررات. 5 نضع Cuvette في جهاز المطيلاف الضلوئي Spectrophotometer ويثبلت مقدار االمتصاصية عند 600 ويقارن nm مع Blanck الغير مزروع من الوسلطين لمعرفة مقدار وكمية النمو الحاصل وتسجل القراءات.)الطائي,2008( 255

257 الخصائص الجزيئية characteristic: Molecular تنمية بكتريا الكليبسيال واالشريكيا القولونية إلستخالص DNA حضللر وسللط األكللار المغللذي. Nutrientالوسللط Agar القياسللي ووسللط قشللور الباذنجان المصنع في دوارق زجاجية نظيفة بإذابة 23 غم للوسط القياسي فلي 1 لتلرمن الماء المقطر,و 60 غم للوسط المصنع قشور الباذنجان في 1 لتر من الملاء المقطلر ثلم عقم بالمؤصدة وبرد فلي ظلروف المختبلر إللى 40 م تقريبلا, وقسلم الوسلط فلي أطبلاق بالستيكية معقمة, ثم أخذتمسحة صغيرة بوساطة الناقلل ملن مسلتعمرة مفلردة نقيلة لكلل ملن عزللة Klebsiella pneumonia و Escherichiacoli وزرعلت بطريقلة التخطلليط, ثللم حضللنت األطبللاق فللي 37 م لمللدة 24 سللاعة وبعللد الحضللانة وظهللور النملو,لقح وسلط الملرق المغلذي Nutrient broth السلائل الملوزع فلي مجموعلة أنابيب اختبار والمعقم بالمؤصدة, بمسحة نشلطة ملن النملو الجديلد لألطبلاق المزروعلة سابقا لضمان نقاوة العزالت, ثم حضلنت األنابيلب الملقحلة فلي حاضلنة هلزازة بدرجلة 1 حللرارة 37 م وسللرعة اهتللزاز 100 دورة. دقيقللة لمللدة 24 سللاعة, وبعللد الحضللانة قيست االمتصاصية بالمطياف عند الطول الموجي 600 نانوميتر لمعرفة أعداد الخاليا التي تكون مناسبة في الحصول على كمية جيدة من المادة الوراثية. DNA استخالص الحامض النووي )الدنا(: DNA extraction أجلللري اسلللتخالص DNA ملللن بكتريلللا Klebsiellaو pneumonia Escherichia coli وفق طريقة 2000) H., ) AL Samarria T و كما يلي: 1 نقلل حجلم 1.5 ملل ملن الملزروع البكتيلري فلي وسلط الملرق المغلذي ووضلع فلي أنابيب ابندورف بالستيكية معقمة سعة 2 مل. 2 فصللللللللت الخاليلللللللا فلللللللي أنابيلللللللب االبنلللللللدورف بعمليلللللللة الطلللللللرد المركلللللللزي Centerifugation بسرعة دورة / دقيقة ولمدة 5 دقائق لترسيب وتجميلع الخاليا والتخلص من الراشح. 3 أ عيد تعليق وحل الخاليا المترسبة في أنابيب االبنلدورف بإضلافة 500 ملايكرولتر من المحلول المحللsolution lysis buffer والمحضر بتراكيز 40 ملي ملولر ملن ملادة Tris acetate و 20 مللي ملولر ملن ملادة خلالت الصلوديوم Sodium Ethylene diamine tetra acetic )EDTA( و 1 ملي ملولر ملن acetate acid ملع %1 ملن ملادة )SDS( Sodium dodecyl sulfate وزن/ حجلم. 256

258 مللزج الخللليط بلطللف لعللدة مللرات, ثللم أضلليف 165 مللايكروليتر مللن محلللول كلوريللد الصوديوم 5 NaCl مول / لتر, ثم قلبت أنابيب االبندورف رأسا على عقب يدويا عدة مللرات لتجللانس المللزيج, ثللم طللرد مركزيللا بسللرعة دورة / دقيقللة لمللدة 10 دقائق. 4 نقلل الراشلح اللى أنابيلب ابنلدورف جديلدة, ثلم أضليف حجلم 500 ملايكروليتر ملن الكلوروفورم المبرد, ثم قلبت أنابيب االبندورفات رأسلا عللى عقلب يلدويا برفلق بملا ال يقلل علن 50 ملرة حتلى يصلبح المحللول حليبلي الللون, ثلم طلرد الملزيج فلي األنابيلب مركزيا بسرعة 1200 دورة / دقيقة لمدة 3 دقائق. 5 نقلت الطبقه العليا )المائيه( إلى أنابيب ابندورف جديدة أخرى, ثم أضيف االيثلانول المبرد بتركيز %95 مع التقليب لترسيب الدنا, وطرد مركزيا بسرعة دورة / دقيقة لمدة 10 دقائق والتخلص من الرائق. 6 كلررت عمليلة غسلل الراسلب فلي قلاع أنابيلب االبنلدورفات بإضلافة ايثلانول مبلرد مخفلف بتركيلز %70 وطلرد مركزيلا بسلرعة دورة / دقيقلة لملدة 10 دقلائق ايضا. 7 بعد التخلص من االيثانول جففت االنابيب بوضعها مقلوبة على ورق نشاف نظيلف لضمان زوال االثر المتبقي للكحول. 8 أ ذيب الدنا المستخلص والخالي من الكحول االثيلي فلي 20 ملايكروليتر ملن Tris.)TE( EDTA buffer قلللدر تركيللز الللدنا النلللاتج ونقاوتلله باسللتعمال جهلللاز المطياف الضوئي Nanodrop فلي قيلاس امتصاصلية طيلف االشلعة فلوق البنفسلجية للعينلات عنلد الطلولين الملوجيين 260 و 280 نلانوميتر. وتلم التأكلد ملن نجلاح عمليلة االستخالص بترحيل الدنا عللى هلالم االكلروز بتركيلز % 0.5 تلم حفلظ االنابيلب فلي الثالجة عند 4 م لحين االستعمال الحقا او عند 21 م للحفظ لمده اطول. ترحيل DNA باستخدام هالم االكروز تلم خللط 3ml ملن صلبغة التحميلل Intron/korea( ) ملع 5 ml اسلتخدام الترحيلل الكهربللائي لتحديللد قطللع الللدنا بعللد عمليللة االسللتخالص وفللق Sam brooket )al.,1989) تم تحضير هالم االكلروز بتركيلز 0.5 بإذابلة 0.5 غلرام ملن االكلروز 257

259 فلي 100ml ملن 1XTBE buffer المحضلر مسلبقا. يسلخناالكاروز حتلى الغليلان ويتلرك ليبلرد لدرجلة 5045 م. يضلاف 5ml ملن محللول صلبغة االثيلديوم برومايلد mg/ml( 10(. ويسكب الهالم في الطبق المخصص له بعد تثبيت المشط. ويسكب هللالم االكللروز برفللق ويتللرك لمللدة 31 دقيقللة ليتصلللب تمامللا ثللم يوضللع فللي خللزان ويضاف 1X TBE buffer بكمية بحيث تغطي سلطح الهلالم ثلم يلزال المشلط برفلق لمنع تكون الفقاعات. وتم ترحيل العينات عند تيار كهربائي 7v لمدة من نصف ساعة او الى ان تصل الصبغة الى قرب نهايلة الجانلب االخلر ملن الهلالم. تلم اختبلار الهلالم على مصدر االشعة فوق البنفسجية عند طول موجي. 336nm تحديد التغايرات في البصمة الوراثية باستخدام االنزيم القاطع تم تقطيع الدنا باسلتخدام انلزيم Nco1 الجدول التالي الحجم طبقلا لطريقلة عملل الشلركة المصلنعة وحسلب المادة DNA 5 µl R. E. 3 µl Buffer 1.5 µl DW µl52. Temperature/Time hour137ᵒ C / Reaction condition of Restriction Enzyme (Nco I) (500U) (Biolab/newengland) ترحيل الدنا باستخدام هالمacrylamide boly 1 تللم تحضللير %31 w/v مللن اكرلمايللد بللس اكرلمايللد وذلللك بللوزن 29 غللم مللن اكرلمايد و 1 غم من بس اكرلمايد وذوب في ماء مقطر واكمل الحجم الى 111 مل 258

260 2 رشح خليط االكرلمايد بس اكرلمايد من خالل اسلتخدام فلتلر دقيلق μn) 0.45( للحصول على خليط نقي تم حفظ المحلول االساسي في قنينة معتمة عند 4 م طريقة تحضير هالم الفصل هالم الفصل المستخدم في هذه التجربة ذات تركيز )%8) حيث تم اخذ 4 ملل اكرلمايلد بللس اكرلمايللد )%31( واكمللل الحجللم الللى 15 مللل 0.5X TEB ثللم اضلليف 151 مايكرو ليتلر ملن %11 امونيلوم برسللفيت المحضلر انيلا. و 21 ملايكروليتر ملن مادة TEMD ويخلط الملزيج جيلد وبسلرعة لفتلرة محلدودة ويسلحب الملزيج باسلتخدام ماصة ويتم صب المزيج بين الوجهين الزجاجيين باستخدام اسرنجة اللى ان يصلل اللى حافة اللوح الزجاجي السفلي ويوضع المشط ويترك يتصلب من 3121 دقيقلة بدرجلة حرارة الغرقة تحميل العينات يتم اضافة بفر الترحيل 1X TBE في الخزان الداخلي لحين وصوله الى المشط. يلتم رفع المشط ببطء وحذر لمنلع تكلون فقاعلات وتخللط العينلات ملع حجلم مماثلل ملن بفلر التحميل, اومحلول التحميل Loading solution ثم ياخلذ 21 ملايكروليتر وتحملل على العينة. ظروف الترحيل الكهربائي تم اجلراء الترحيلل الكهربلائي باسلتخدام جهلاز Minislab gel provided بدرجلة حلرارة الغرفلة باسلتخدام بفلر الترحيلل المبلرد مسلبقا. 1X TEB باسلخدام 100V لمدة ساعتين بعد انتهاء عملية الترحيل ثم نقل الهالم الى حجملين التصلبيغ وغملرة فلي محلول الصبغة 1X TEB مع 111 مايكروليتر من االثيديوم بروميد 1mg/ml لمدة 31 دقيقة مع التحريك برفق. تم اجراء ازالة الصبغة بغسل الهلالم بتعريضله لالشلعة فوق البنفسلجية بطلول ملوجي 336nm وتلم تصلوير الجلل باسلتخدام Document.system 259

261 التحليل اإلحصائي Statistical Analysis حلللت البيانلات إحصلائيا باسلتخدام تحليلل التبلاين )ANOVA( F( test(, وقورنلت المتوسلطات الحسلابية للمعلامالت بإسلتخدام اختبلار دانكلن متعلدد الحلدود Duncun Multiple Range بمسللتوى معنويللة )0.05 P( بتطبيللق البرنللامج اإلحصللائي Minitab النتائج والمناقشة 9 كفاءة وسط قشور الباذنجان اغلب األحياء المجهرية تتسم بكونهلا ذات متطلبلات غذائيلة بسليطة.ان احتلواء الوسلط الجديد على العناصر االساسية إضافة لمصدر النايتروجين والكاربون والتي تعتبر ملن اهللم المكونللات التللي تجعللل البكتريللا قللادرة علللى القيللام بالفعاليللات الحيويللة األساسللية والتكللاثر والنمللو.ان معللدل نمللو االنللواع البكتيريللة الموجبللة والسللالبة المسللتخدمة فللي الدراسللة وكللذلك االنللواع الفطريللة نمللت بشللكل جيللد مقللارب واحيانللا اعلللى فللي بعللض االنللواع الفطريللة فللي الوسللط المصللنع قشللور الباذنجللان مقارنللة بالوسللط القياسللي ان معدالت النمو الجيدة تفسر احتواء وسلط قشلور الباذنجلان عللى مكونلات اساسلية تالئلم نملو البكتريلا السلالبة والموجبلة واالنلواع الفطريلة ذات التبلاين فلي احتياجاتهلا الغذائيلة.)Cruickshank.,1975) ان كمية 60 غم من قشور الباذنجان الالزمة لتحضير لتر من الوسط كافية لحدوث نمو مقارب لالوساط القياسية اوساط السيطرة حيث تشيرالنتائج الى ان طريقة تحضير هذا الوسلط مالئمللة وتحتللوي علللى المصللادر الضللرورية للفعاليللات الحيويللة لنمللو البكتريللا الموجية والسالبة لصبغة كرام والفطريات. اضافة الى ان هذا الوسط غيلر ملدعم بلأي مادة اضلافية فلي تشلجيع نملو البكتريلا. و التحليلل الكيميلائي اللذي اجلري عللى قشلور الباذنجان يشير الى محتوى جيد من المواد الكاربوهيدراتيلة والبروتينيلة باإلضلافة اللى العناصر االساسية للنمو 261

262 6 نمااو االنااواع البكتيريااة علااى االوساااط القياسااية والمصاانعة بطريقااة طيااف االمتصاص )Spectrophotometer( اختبللرت االنللواع البكتيريللة لمعرفللة مللدى قللدرتها علللى النمللو وكفلاءة الوسلط المصللنع لألنواع السالبة والموجبلة لصلبغة كلرام. حيلث كلان اعللى متوسلط أمتصلاص لبكتريلا S.aureus للوسلط القياسلي والوسلط المصلنع وبكتريلا nm, E.coli وP.aeruginosia و S.pnumoniae بمتوسط امتصاص nm وبكتريا S.pneumoniae0.128 nm بينلللت النتلللائج وجلللود زيلللادة فلللي نملللو بكتريلللا E.coliعلى الوسط المصنع عند طيف امتصاص 600nm مقارنة باالنواع البكتيرية االخرى. وبقية االنواع كانت اقل نمو ومتقاربة فيملا بينهلا ملن حيلث النملو, اخلتالف نمو االنواع البكتيرية يعود لقابلية وقدرة كل بكتريا على النمو ومدا قدرتها على التكاثر وتمثيلل الملواد الغذائيلة والعناصلر المعدنيلة, ان زيلادة نملو بكتريلا القولونيلة E.coli يعللللللود ألحتياجاتهللللللا البسلللللليطة للمللللللواد الغذائيللللللة ومتطلبللللللات النمللللللو والتكللللللاثر.)Pellet.,1976) ملا متوسلط الوسلط, فقلد كانلت امتصاصلية بكتريلا S.aureus0.204 عنلد طلول ملوجي 600 nm للوسلط القياسلي و للوسلط المصلنع قشلور الباذنجلان,وبكتريلللا P.eaeruginosa0.202 للوسلللط القياسلللي و للوسلللط المصلللنع واعطلت بكتريلا K.penuomonia للوسلط القياسلي و للوسلط المصنع وابدت بكتريا E.coli0.349 للوسط القياسي و للوسط المصنع,أما بكتريللا S.penumoniae اعطللت نمللو للوسللط القياسللي و للوسللط المصللللنع.وبينللللت نتللللائج معللللدالت النمللللو لألنللللواع البكتيريللللة S.aureus و P.eaeruginosa وS.penumoniae علدم وجلود فلروق معنويلة عنلد مسلتوى P 0.05 اما بكتريلا K.penumoniae وE.coli ملن خلالل معلدالت النملو حيلث بينت وجود فروق معنوية عند مسلتوى P 0.05 ملع االنلواع البكتيريلة األخلرى. ان معدالت النمو المتباينة بين الوسطين من حيث االمتصاص دلت عللى امكانيلة اسلتخدام مستخلص قشور الباذنجان كوسط لتنميلة البكتريلا السلالبة والموجبلة لصلبغة كلرام. ان مستخلص قشور الباذنجان يحتوي على مكونات فعالة وخاصة ومشابهة للمكونات التي يحتويها الوسط القياسي فهو يحتوي على أمالح وبروتينلات وعناصلر معدنيلة سلاعدت لجعله وسط تنمو علية البكتريا بكفاءة عالية )Dagleish.,2008( 261

263 جادول ( 1( معادل نماو االناواع البكتيرياة الساالبة والموجباة لصابغة كارام علاى األوسااط القياساية الماارق المغااذي (Nutrient.broth( واألوساااط المصاانعة مسااتخلص قشااور الباذنجااان بجهاااز المطياف الضوئي Spectrophotometer( (عند طول موجي 600 nm خالل 24 ساعة. نوع البكتريا نوع الوسط الزمن خالل/ 24 ساعة متوسط الوسط متوسط نوع البكتريا S.aureus قياسي B مصنع p.aeruginosa قياسي B مصنع k.pnumoniae قياسي C مصنع E.coli قياسي A مصنع

264 S.pneumoniae قياسي مصنع B * االحرف المتشابهة عاموديا تعني عدم وجود فروق معنوية عند مستوى 0.05 P * االحرف المختلفة عاموديا تعني وجود فروق معنوية عند مستوى 0.05 P 3 تاثير الوسط الزرعي على النمط الحزمي ملن خلالل تنميلة بكتريلا Klebsiella penumonia و Escherichecoli عللى كلل ملن للوسلط القياسلي والوسلط المصلنع واسلتخالص اللدنا والتقطيلع بواسلطة انلزيم (I Nco )والترحيل على هالم البولي اكرلمايد.حيث بينت النتيجة عدم وجود تغير في النمط الحزمي بين كال الوسطين للنلوعين سلابقين اللذكر. وعللى ذاللك فلأن هلذا الوسلط المصنع ال يؤثر على النمط الحزمي لهذه البكتريا عند اجلراء فحلص البصلمة الوراثيلة,Fingerprinting عللللى نقللليض ذللللك أظهلللرت نتلللائج التقطيلللع فلللي دراسلللة جديلللدة )اللدلوش, 2117) لبكتريلا Staphylococcusو aureus Pseudomonas aeruginosa المنماة على وسط قياسي ووسط مصنع اخر )النخالة( تباينلا ملحوضلا في النمط الحزمي مما يدل على عدم ثبات نمط البصمة الوراثية عند تغير الوسط لكلال النوعين للبكتريا حيث ظهرت حزملة جديلدة لبكتريلا Staphylococcus aureus على الوسط المصنع بحجم 2111 pb تقريبا, مما يدل على ظهلور موقلع قطلع جديلد عللى الوسلط المصلنع. واختفلت حزملة لبكتريلا Pseudomonas aeruginosa على الوسط المصنع, بحجم 2400 pb تقريبا, مما يدل على إختفاء موقع القطلع فلي تلك المنطقة. وهنا نستنتج ان تغير نوع المغذيات والظروف البيئية لعدة انواع بكتيرية يؤدي الى تغير النمط الحزمي عند إجراء تحليلل البصلمة الوراثيلة. وملن هنلا اليمكلن 263

265 تعميم النمط الحزمي ألنه يتغير بتغير الوسط الزرعي ويعلد خلاص لمجموعلة البكتريلا قيد الدراسة في ظروف التجربة المحددة. مثال على ذلك تحليل البصمة الوراثيلة التلي اجريلللت ملللن قبلللل( 2000 etal., AL Samarria T H. )عللللى بكترياaeruginosa. Pseudomonas وحسب علمنا تعد هذه النتجة االولى من نوعها حيث لم يتم التطرق سابقا الى تأثير مكونات الوسط الزرعي على نتلائج التغلاير في النمط الحزمي عند اجراء تجارب البصمة الوراثية للبكتريا. شكل )9) نمط التقطيع الحزمي بأستخدام انزيم )1 )Nco لبكتريا E.coli و.K Pneumonia للوسط القياسي والمصنع. شكل )6) نمط التقطيع الحزمي بأستخدام انزيم )1 )Nco لبكتريا S,aureus و P.aeruginosa للوسط القياسي والمصنع. 4,6 الوسط المصنع قشور 1,9 الوسط القياسي Nutrint agar الباذنجان. 4,6 الوسط المصنع من نخالة 1,9 الوسط القياسي Nutrint agar الحنطة. ( الدلوش, 6099( 264

266 2 المصادر: الخفاجي, زهرة محمود. )1991(. التقنية الحيوية.جامعة بغداد وزارة التعليم العلالي والبحلث العلمي.دار الحكمة للطباعة والنشر. الدلوش, صباح جمال صباح.) 2117 ) تنمية مجموعة من الفطريات والبكتريا على االلقياسية واالوساط المصنعة من نخالة الحنطة وفحصها جينيا بتقنية. Finger brinting رسالة ماجستير قيد الدراسة, كلية التربية جامعة سامراء. الزياادي, حاملللد مجيلللد.) 2000(. عللللم األحيللاء المجهريللة. جامعللة بغللداد. وزارة التعللليم العوالبحث العلمي. دار الحكمة للطباعة والنشر. السااامرائي, ياسللمين حميللد جاسللم محمللد. )2013(. دراسللة كيميائيللة حياتيللة ألنللتج أوسللاط غذائيةزرعية ميكروبية من مصلادر نباتيلة محليلة ودراسلة أهلم المكونلات الكيمائيلة لهلا. رسلالة ماجستير. كلية التربية. جامعة سامراء. الطااااااائي, محمللللللد ابللللللراهيم )2008( دراسللللللة مللللللدى تحمللللللل بكتريللللللا Rizobium Leguminosarum bv.viciae مجلة التربية والعللم مجللد 21 العلدد 4 كليلة عللوم البيئلة وتقاناتها,جامعة الموصل. Cruickshank,R.;Duguid.,J.P.;Marmion.,B.P.and.Swain.R.H.(19 80).Medical Microbiology (The practice of medical microbiology ) 12th ed. Churchill Livingstone, England. Cruickshank, J.P. Medical Microbiology12th.VOL.2.Edinburgh London and New York. Published by Churchill Livingstone (1975). Difco,. Manual of Dehydrated Culture Media and Reagents for Microbiological and Clinical laboratory Procedures. 9thed. Difco laboratories incorporated, Detroit, Michigan, (1999). Macfaddin, J.F. ( 2000 ). Biochemical test for identification of medical bacteria. 3 ed ed. The Williams and Wilkins Baltimor USA. PP Al Samarrai,T. H., and Schmid,J.(2000). A simple method for extraction of fungal genomic DNA. Letters in applied microbiology, 30(1):

267 Stanier, R.Y.; Ingrahm, J.L.; Weelis.M.L., and Painter, P.R" General Microbiology".5th ed. MacMillan Education LTD. London. (1987). Pirt, S.,I. principle of Microbe and Cell Cultivation. Blackweel. Scientific Publication, Oxford,London Al Samarrai,T. H., and Schmid,J.(2000). A simple method for extraction of fungal genomic DNA. Letters in applied microbiology, 30(1): Prescott,L.M.Hearley,J.P.Klein,D.A.Microbiology.W.M.C.New York. Brown publisher, (2005) Published by Difco Laboratories Inc., Detroit. Pellet, P.L and Shadarevian, S. Food Composition2nded. American university of beriut, beriut, Lebanon.(1976). Dagleish,M.P. ;Barley,J.J; Finlayson, R.J and Foster,G.Brucella ceti associated pathology in the testicle of harbour prorpoise.j.ofcomparative pathology, 139(1) 5459 (2008). Sambrook, Joseph,Edword F.Fritsch, and tom Maniatis. Molecular cloning: a laboratory manual. No. Ed.2.Cold spring harbor laboratory press,(1989). 266

268 Minimizing Harmful Effect of Extreme Environment (Water Stress) on Mungbean(Vigna Radiata L.)by using Potassium Fertilization L.Vigna Radiata.. / / Ghassan.F.AlSamarai Department of Biology, College of Education University of Samarra, Samarra, Iraq Abstract A field experiment carried out in summer season 2010, to study the effect of two irrigation period (714) days, and three levels of potassium (0, 50, 100) Kg/ha on growth and yield of Mung Bean(Vigna Radiata L.). The results of irrigation period showed a superiority of the plants which irrigated every 7 dayshighest rate of number of branch,length of plant and number of pods/plant(10, 73 and 23)respectively.While the Level of fertilization using potassium with (100) kg\ harecorded higher percentage of all characteristics under study compared with 0 and 50 kg/

269 ha.interaction between irrigation and fertilization(7 days and 100 hg/ha) by given maximum value of branch number and plant length while,treatment (7 days and 50 hg/ha) recorded higher number of pods/plant. Keywords: Water Stress, Potassium fertilizing,mung bean, Extreme Environment. 1. Introduction The water resources are considered to be one of the most important natural resources the life depends on, and to preserve these resources is considered to be granted, aggregation sector is considered to be the main consumer of these resources and there is an increasing worries concerning these resources future, considering its limitation many calls focused on keening on the optimum use of these Irrigation resources.recently, some of the agricultural applications were followed, aiming to overcome the physiological syndromes that could happen to the plants growing in thehard environment; thirst, Drought, groundwater shortage, that all contribute to supply the plants with the water need[1]. It is noticed that that the plants that are exposed to severedrought gradually in its growing season would be more resistant when exposing to another drought era if we compare it with other plants that have never experienced drought ever before [2]. The mungbean(vignaradiata L.)is a summer legume that is widely planted in Iraq field, because it has a short growing season (90120) days, and it can bearthe drought

270 in all growing phases except for blossoming phase[3].the mung bean is planted to get its seeds that have an high nourishment values for humans and animals, because it is rich with the alimentary elements, protein percentage in its seeds (20%), Carbohydrate (65%) whereas oil percentage (1.5%), as well as the usage of mung beanas a green grass, and for feeding the animals, and using it as a green fertilizer to enhance the quality of the soil, and considering the importance of this harvest, it become important to thoroughly study the requirement of its growth and production[4].iraqi soils are generally characterized by low organic matter content, high ph and high concentrations CaCo3[5]. This leads to a decrease in the availability of most of the nutrients found in the soil, including potassium. Which has proved that studies have an important role to influence directly or indirectly in the activation of more than 120 enzyme, including responsible for energy activation and representation of nitrogen and breathing[6].considering all above importance, a field study has been carried out to study the effect of the irrigation periods and the potassium fertilizingon growth and yield mungbean. 2. Materials and Working Methods 2.1 Experiential A field experiment was held in summer season 2013 in the field of one of the farmers on the banks of the Euphrates river iniraq. Soil with physical and chemical characteristics illustrated in the Table.1

271 Table.1: Physical and chemical characteristics of the field soil before planting. The Characteristic Value Electrical conductivityds.m The degree of soil interaction 7.35 Nutrients Instant nitrogen PPm 64.2 WPready PPm 13.7 Organic matter g/kg 1.09 Apparent density mg.g/m 1.22 Volumetric distribution of separate soil )G. kg soil) Sand 144 Clay 320 Silt 536 Conception clay alluvial Fusion Percentage soil moisture when pulling 33 KPa 31.4 Percentage soil moisture when you lift 1500 kpa 16.6 The phosphate fertilizer was added at one time before planting in a form of triple superphosphate (45% P) with the reality of 75 Kg /h (Alfahdawi, 2004).Whereas the Nitrogen fertilizer was added as urea (46% N) Kg /h with four doses, the first dose was added directly after the germination, the second dose after 21 days from the first dose, the third with the start of flowering, and the fourth dose when starting forming the pods /plant.r.c.b.d design was used in three duplications. The experimental field was plowed, softened,straightened and divided to trial units to 3x3m every single

272 trial unit has 6 lines with 0.50m, between the lines and the distance between the hole 0.25 with leaving a safe distance of 2 meters between a duplicates, and 1.5m between a treatment units to control the movement of the water. 2.2 Characteristics of Study The characteristics where studied were number of branches per plant, number of leaves per plant and the seed yield. 2.3 Statistical Analysis The experimental data were subjected to oneway analysis of variance (ANOVA). The significant differences between mean values were determined using LSD multiple range test (P 0.05). The ANOVA statistical analysis was performed using SPSS version (SPSS Inc, Chicago, USA). 3.Results and Discussion 3.1Number of Branches /Plant Results indicated in Table.1 and Figure 1, It was shows the influence of water deficit and potassium fertilizer on the number of branches per plant. It was showed that irrigation treatment a significantly influenced on the plant height. The results showed the superiority of the plants it was irrigated every (7) days at with (100kg/hg)with recorded highest rate for number of branches per plant was (10)branch/plant, with a significant difference from the plants was irrigated other treatments.whilelawest rate registerd with irrigated plant after 14 dayes with dosge(0) kh of potassium with vaule(7.33)branch/plant.

273 Table 1: Effect of Potassium and Potassium Application on Number of branchesin Mungbean Potassium kg/ha Irrigation(days) 10a 9.65b 8.50d b 8.95c 7.33e 14 *Means sharing the same letters do not differ significantly, at 5% probability level by LSD test The reason of that the availability of the soil moisture through the stages of growth has led to increased photosynthesis speed and increase the number of absorbed elements from the root which reflected positively in increased cell division and elongation thereby increasing the total plant growth and plant height of it, this result is consistent with who was found a decrease in the plant height when exposed to water deficit [7].Also may be availability of the soil humidity and potassium in the soil may be led to increase the photosynthesis and that reflected positively growth [8].

274 days 14 days Number of branches Potassium (kg/ ha) Figure.1 effect of Irrigation (days) and potassium fertilizer(kg/gh)on the number of branches per plant. 3.2 Length of Plant(cm). The results of the table2and Figure.2 showed the impactof water deficit and potassium fertilizer on the Length of branches (cm).that irrigation treatmentsshowed a significantly influenced on the Length of branches (cm). The plants it was irrigated every (7) days recorded the highest rate for Length of branches (73), with a significant difference from the plants that was irrigated every 14 days it has given (63). From other hand the lengh of plant showed increase with increasing amount of potassium The water shortage is causing a slowdown in the member growth may be reduced of leaf area under the influence of water deficit is the behavior of the plant was shown to avoid drought[9].

275 Table 2: Effect of Irrigationand Potassium Application on Length of Mungbean Potassium kg/ha Irrigation(days) 73a 68c 63d 7 70b 61e 60ef 14 *Means sharing the same letters do not differ significantly, at 5% probability level by LSD test The finding current study come out the long length of plant reached with interactions of (7 days) and (100 kg/h) potassium which, significant difference from all other interactions, while the lowest (65cm)lengthwerewith treatment of (14 days) and ( 0 kg/ha) of potassium. The positive effect of potassium in increasing the length of branches, perhaps due to the importance in the collecting of food was manufactured by photosynthesis, which led to increased division and elongation in thebranches cells[10] days 14 days Length of Potassium (kg/ ha) Figure.2Effect of Irrigation (days) and potassium fertilizer(kg/gh)on the Plant Length(cm).

276 3.3Number of pods/plant It can be seen from the results in the table 3 and Figure 3the impactof water deficit and potassium fertilizer on Number of seeds/branches. That irrigation treatments showed a significantly influenced on the Number of seeds in plants irrigated every 7 days (23), compared with 14 days it has given (16).While the amount 50 kg/ha of potassium recoded highest and statistically from (0 and 100 kg/ha) which differences between theme. Table 1: Effect of pods/plant. Irrigationand Potassium Application on Number of Potassium kg/ha Irrigation(days) 21b 23a 17e 7 19c 18d 14f 14 *Means sharing the same letters do not differ significantly, at 5% probability level by LSD test That the lack of water may be has led to an imbalance in the physiological processes of the plant[11], where the drought lead to a reduction of the vegetative and proliferative growth, thus the plant growth is negatively affected under water deficit conditions, which directly affects the cell division process in the plant, which in turn leads to a lack of cells and the inhibition of cellwidening process [12].

277 days 14 days Number of pods/ plant Potassium (kg/ ha) Figure.3 Effect of Irrigation (days) and potassium fertilizer(kg/gh) on nnumber of pods/plant The results in the Table 3 showed the outweigh that interactions 7 days and 50 (Kg/h) potassium in the highest rate of the number of Number of pods/plant () with a significant difference from the other interactions, while the lowest rate Number of pods/plantat the interactions 14 days and (0) potassium. This may be due to the direct effect of potassium in the control of plant hormones,which have a relationship with the composition and pollinate on the flowers and fertilized,in addition to the positive effect in facilitating the movement of manufactured materialswich industrialize in the photosynthesis of their manufacturing nutrientsto the sites of new development in the reproductive stage of plants (flowers), which increases the rate of fertilization and thus increase the number of seeds[13, 14].

278 4.conclusion The current study concluded to possibility reducing of effect drought under extreme environment with using high level of potassium in agricultural land planted with mung bean. In future research need focus on more studies todecrease the negative impact of water stress with the emergence of the problem of lack of water resources and then need to find suitable solutions. References 1. Islam, m., et al., gentic diversity analysis in mungbean [vigna radiata (l.) Wilczek] under water stress. International journal of agriculture environment & biotechnology, (2). 2. Nur, a., isolation and characterization of nodule bacteria from mungbean and investigation its to drought water stress on soybean plant Alzarqaa, a., et al., he physiological response of mungbean (vigna radiata) to water deficit stress and meloidogynejavanica infection. Sustainable irrigation and drainage v: management, technologies and policies, : p Das, s. And r.k. Kar, role of hormones in differential growth responses of mung bean vigna radiata l. Wilczek seedlings under water stress Abdullah, a.s., minimum tillage and residue management increase soil water content, soil organic matter and canola seed yield and seed oil content in the semiarid areas of northern iraq. Soil and tillage research, : p Majid, s.n., analysis of organic functional groups and some trace heavy metals in the settleable dust particles (dustfall) of sulaimani city/kurdistan regioniraq

279 7. Holzman, m.e., r. Rivas, and m. Piccolo, estimating soil moisture and the relationship with crop yield using surface temperature and vegetation index. International journal of applied earth observation and geoinformation, : p Shahzad, n., et al., foliar application of potassium mitigates negative impact of water deficit stress and improves physiological growth of mungbean (vignia radiata)., 2014: p Boyle, r., i. Dodd, and m. Mcainsh, effects of deficit irrigation frequency on plant growth, water use and physiology of pelargonium x hortorum and tomato (solanum lycopersicum l. Cv. Ailsa craig). 2015, lancaster university. 10. Saa, s., et al., foliar application of microbial and plant based biostimulants increases growth and potassium uptake in almond (prunus dulcis [mill.] Da webb). Frontiers in plant science, Krashes, m.j., physiology: forecast for water balance. Nature, (7622): p Ghadami firouzabadi, a., et al., nondestructive estimation of sunflower leaf area and leaf area index under different water regime managements. Archives of agronomy and soil science, 2015(aheadofprint): p Battielaclau, p., et al., influence of potassium and sodium nutrition on leaf area components in eucalyptus grandis trees. Plant and soil, (12): p Osakabe, y., et al., osmotic stress responses and plant growth controlled by potassium transporters in arabidopsis. The plant cell, (2): p

280 13A study of cytogenetic effects of Indomethacin and glucosamine drugs in some fertility genes in male Albino rats Lecturer : Zubaida Adnan Aljashammi Applied/Tikrit university Assistant Lecturer: Nibras Sirhan Kudair 14Measuring the level of homocysteine and some reproductive hormones in the serology of women with PCOS Shaymaa Ahmed Salih Wasan Nazhan Hussien 15The Response of Maize( Zeamays L.) to Spraying of Potassium and Zinc Assistant teacher:aiymen Ahmed A.K. AlAbassi 16Study the effect of honey on the value of sugar in the blood compared with the sugar plant in the white mice that developed diabetes Assis.:Qutaiba Hommadi Mahmood AlSamarraie 17Developing a group of bacteria on the standard cultural media and the manufactured local medium (Eggplant Aubergine)and detecting the genetic changes by using finger printing technology. Rasheed H.Hassan Huthaifa R.Alwan 18Minimizing Harmful Effect of Extreme Environment (Water Stress) on Mungbean (Vigna Radiata L.)by using Potassium Fertilization Ghassan.F.AlSamarai

281 7Synthesis, Characterization of some 1,3Oxazepane 4,7Dione by Traditional and Microwave routes method and evaluation of their biological activity Fawzi Hameed Jumaa ALObaidy Adil Hussein Dalaf Al Majma'i 8Assessment of molecular effects of on Rhuscoriaria on the liver and kidney of Male Swiss Albino Mice (MusMusculus) Salma zher Abdulla Pro.Dr. Aziz Khalid Hamid Asst.Prof. : Adnan Fadhil Al_Azaawie Aziz k. Hameed 9A biochemical study on capability of milk that prepared by lactobacillus acidophilus to the prevention of diarrhea induced by Cryptosporidium parvam in male rabbits Assit. lec. Maysoon Mustapha Jasim Proff. Dr Abdullah Hussain Abdulla Proff. Dr. Tawfeeq Ibraheem AlAlusii 10Study of the effect of lead contamination on the healthy environment in the courts of Balad and Dujail Ayad Ismail Kazem Prof. Riad Abbas Abed Al Jabbar 11Epidemiological Study for the Spread of Intestinal Parasites in Samarra Dr. Ouhood mozahim Shakir Assist instructor: Nibras A. almbashaa Assist instructor: Marwa Malik alhayli 12Measuring the concentrations of Lead, Manganese and Nickel in the roadsides of Erbil city Tamem Sulaiman AlJibory Prof. Dr. Ibrahim Omar Saeed Prof. Dr.Qusay kamal Alden AlAhmady 268

282 Content 1 Effect of water extract of broccoli plant (Brassica oleracea) on some hormones of female white rats exposed to oxidative stress with hydrogen peroxide Sura Samir Abdul Hamid AlMarza Asst.Prof. Dr: Ali Abdul wahab Jasim 2 Anatomy study for leaves Epidermal for two Genera from Myrtaceae family(eucalyptus and Myrtus).in the middle region of Iraq. Evan Abdul rahmanhamza Prof. Dr.Yaseen MohammadAhmed 3Environmental and diagnostic study of algae in irrigation AlAlam project Prof. Dr. Riadh Abas Abdul Jabar Asst. Prof. Tawoos mohammed kamel Sabine khader saleh 4The study of saturated and unsaturated fatty acids of 9 secies of olives Hussam Nafea Shakir Mahmood AL_ahbaby Yaseen Mohammad Ahmed Rana Hashim Aloush 5First record of hendersonula branch wilt disease in eriobrotra japanica and its in iraq biological control Fadhil Hasan Yaseen 6Synthesis, identification some derivatives of new oxadiazole, thiadiazole of Butaric acid and Stearic acid Ghassan Khalifeh Ghareeb Nabil Jamal Alasli

283 271

284