بررسی تأثیر افزایش بیان miR-29b1 بر القای آپوپتوز در سلول‌های لوسمی رده سلولی HL60

النسخ

1 ISMJ 2014; 17(): )19 د هب به طت ج ة پض ؾكذ سيغت-پشؽكي خليج فبرط دا ؾگب عل م پشؽكي خذهبت ث ذاؽتي درهب ي ث ؽ ز عبل فذ ن ؽوبر صفح )هزداد ؽ زي ر I2 چكيذ سهي : بررسي تأثير افسايش کتبي ى احوذي ريش ب ه لك ل سلوله يا بيان بر القاي آپوپتوز در لوسمي رده سلولي HL60 *2 1 هغع د عليوب ي ععيذ کب يب ي 1 گز ص تيک دا ؾگب آساد اعالهي احذ عل م تحقيقبت ت زاى 4 2 احغبى عبرفيبى پز يش فالح 2 گز وبت ل صي ثب ک خ ى دا ؾكذ عل م پشؽكي دا ؾگب تزثيت هذرط گز يز طؽ بعي گز ثي ل صي ه لك لي ه ذعي ص تيک هزکش تحقيقبت ف ب ري ثييبخت ت زاى 4 گز عل م آسهبيؾگب ي دا ؾكذ پيزاپشؽكي دا ؾگب عل م پشؽكي الجزس ک چک ت ظيوي )دريبفت هقبل : 91/2/2- پذيزػ هقبل : 91/6/15( غيز رهش ک ذ غت ذ ک قؼ توبيش آپ پت سيظ ايفب هيک ذ. کب ؼ ثيبى در ثغيبري عزطبى ثبفتي عزطبى اعت. آ جبيي ک ثيبى القبي آپ پت سيظ در عل ل ه وي را در فزآي ذ بي هختلف سيغتي وچ ى تكثيز ا غب ي ؾبىد ذ قؼ ه ن ايي ه لك ل در تكبهل عزطب ي ؽبخص ه وي در درهبى آى بعت در ايي هطبلع تأثيز افشايؼ ثب اعتفبد عبختبر ل تي يز عي ثز القبي آپ پت س در رد عل لي پز هيل تيک HL60 ه رد ثزرعي قزار گزفت اعت. ه اد ر ػ ب: افشايؼ ثيبى پبيذار عل ل ثب اعتفبد عبختبر ل تي يز عي حب ي ت الي پيؼعبس حبصل ؽذ. عپظ MTT ثب اعتفبد آسه ى mi تحت تيوبر يز ط قزار گزفت ذ. پظ 72 عبعت اثز آپ پت تيک ايي HL60 ر گآهيشي ثب اتيذي م ثز هبيذ آکزيذيي ا ر ج ع جؼ هيشاى کبعپبس فل عبيت هتزي ا كغيي ه رد ع جؼ قزار گزفت. يبفت ب: تبيج ثب زم افشار آهبري SPSS يزايؼ 1 آسه ى آهبري t-test آ بليش ؽذ ذ. هطق ا تظبر افشايؼ ثيبى ثبعث افشايؼ در القبي آپ پت سيظ گزديذ ث گ اي ک آپ پت سيظ در گز آسه ى در هقبيغ ثب گز ک تزل حذ د ثزاثز افشايؼ ؾبى داد. آ بليش داد ب ؾبى هع يدار ث دى ايي افشايؼ غجت ث گز ک تزل ث د )0/05<P(. تيج گيزي: ثز اعبط يبفت بي ايي ثزرعي هيت ا ذ آپ پت سيظ را در رد عل لي HL60 القب ک ذ. تحزيک آپ پت سيظ ث عيل mi ب هيت ا ذ يكي ث تزيي ه بعتتزيي را ب ثزاي القبي هزگ در عل ل عزطب ي ثبؽذ. تبيج ث دعت آهذ قؼ عزک ةگزي ت ه ر حوبيت هيک ذ ث گ اي ک ص بعي هيت ا ذ در آي ذ ث ع اى يک درهبى ا يپ ص تيک جذيذ ث کبر ر د. اصگبى کليذي: ريش آپ پت سيظ HL60 کت ر ل تي يز عي soleim_m@modares.ac.ir * ت شا دا ب تشثيت ذسع دا ىذ ػ پضؿىي ش بت طي ثب ه خ

2 244 ة ج تط/ لبع /ن ذف ربوؽ / ر يز ؽ دادزه 19 هذقه 1 هچ و ي يظ ت ذوشيغ ذ ؿ ع دذح ذيت ئ و ذ سادص ي يث ب ب بفيا.ذ وي بصتا ت ؼل 2 'UTR m بفذ چ يضدت تيشخت دشو آ چ يؿب خشت ذي ت يئتشپ تؼ ب ػ ذ سآي.)1-2( تج ا ي صبت تث ب mi ذ ا تي يحب ORF بي تي ح 5'UTR بفاذ ا صت ذ ؿ تي ح ذ ا تي بفذ ذ د.)-4( ي يب ذ يآشف يتؼيص ذ ب شيثىت ضيب ت تي ح ت بم عش ؼي ثبت يثشچ حؿشت ي ؼ ا بفيا ذ و دذح.)5( 0 ذص يب ذو ذ و يئتشپ ي بؼ ا ذ ؿي.)6-7( خ ت تبفت ذؿس تب يؼمت ا ت يضشف حشغ دشو ب ى ذ ا تي ي صشث تؿاد ذ ؿ.)8( ي ا يث ب يؼيجع يسبيؼث حاش يىت يب شييغت.ذثبيي لاػ يسبيؼث ي بؼ ا ييب ت ؼل ط تفبي ذ ا صشث ذ عبجتسا.)9-10( س يبفشپ mi و ذ ا تي يساضثا صيخت ي يثؾيپ سبو دس چ يبفشپ m ي يثؾيپ يشت ث ع حش دساد.)11( يث ب ءبضػا دا بخ mir-29 ي يخذث 1 micro 2 Untranslated region Open reading frame ي ب خ يس 4 CLL يػ AML 5 ؽساض.)12( طبجتسا ع ىؼ يث ح غػ دا بخ DNA ح غػ يت يب شفؼ اشت ئؼ يت دشو ش ة وشػ تػلاث ي ا ي بعشػ يس تث.)1( يس ع دسا دشو ي و يذيئ ي دبح تي ثبل تؼيص شيثىت تيػبؼح ي يؿ ي ب ذ دي غلا ءبم ا بؼف ذؿ ب صبپػبو يت آ Mcl-1 ظجتش.)14-15( HL60 يا تفش شث ي ػ يذيئ ي دبح ييبد آ ب ظي عا ا و ع يؿ ييلا ذ سادس خشث دبف يشي سبو ؽس ي ب شث يبپ ي ى يشت و ضسا ػ يشت ث خػبپ تي ا سبيؼث دساد.)16( شثب ث كيمحت HL60 ي ذ شيثأت ةبخت ا.ذيدش mi ؼي بى يياص ي ؿس تي ا دشى ػ آ ب ذ دي ذيبؿ ي ت خ تخب ؿ شتيث يب ؼي بى.ذيب ث دا ه ب ػ ر يل لع تؾک HL60 ه ضوش تبميمحت يسب ف تخبي ث ي ت.ذيدش س وز ظيح RPMI1640)Gibco,USA( يبح 15 ذص 4 Chronic lymphocytic leukemia 5 Acute myeloid leukemia

3 يذوحا ىاربكو زيثأت ل لع زث ب ي /ي بطزع 245 FBS)Gibco( هيت يثيت آ ي يػي پ يؼيب تپش )1X( 2mM ي بت ظياشؿ دساذ ب يب د 7 خ داش يت بػ دذح تث عس 95 ذص Co2 5 ذص تو.ذ ذؿ صس جل ب عشي ب ؽسب ؿ شظ ذص د ث 6 بپيشت ث ثي بيصسا ذ ذؿ ذص د ث تيبضس ؾخث دذح 98 ذص.د ث غپػ تبيب صآ ب صبف ي تيسب ؽسب ؿ دذح تي پ تو بخ 6 تو.ذ ذؿ ب ت تبيب صآ 72 ب عشي plex-jred-mir29b1 ش يش يد ب عشي ي بخ plex-jred تس ص ساشىت د ييبت بد ا ذؿ.)9( يحازط ذيل ت ربتخبع يت ل يع زي ي بح ىص صبػؾيپ غپ صي خت DNA ي ط ي بؼ ا دبف يب ش ياشپ يحاشع ؾ وا يا شيد ص ش ي پ )PCR( شيثىت يب ش ياشپ ي و دس دبف حشؿ شيص : Forward:5'CCGCTCGAGGAACCTTTGTCTGGGCAAC ' Reverse:5'CGACGCGTAGAAAGTCTGTTCATGTTCAATAC' ي ا ت ب يبخ ؽشث د يض آ شثلاادذح XhoІ MluІ )Fermentas( خاد س تو يت يػش ي plex-jred و تحص ي ا ت ي ط ض ي يض آ صح تيوشت يض آ شثلاادذح ي چ ييؼت ي ا ت صح يذ يأت تحص ذييأت ي ا ت يذي ػلاپ تخبػ ب ي عا ى يا تػ ػ ذ وي ب شوسب دس شظ ب د ؿي 6 Viability بي شيخ جل يذ ث تؼث عشي يذي ػلاپ دبف ي بتىف پي 2000 )Invitrogene( خاد يت يسبو ي HEK29T تىفؼ اشت ىفؼ اشت شوسب Jred ح ىػشىي ت ػس ئ ف ت بم يؼيب شپ دضفا تظ غ يؼيب شپ ظيح mi real time PCR تواذؼ اشت تواذؼ اشت ذ دس ثي بيصسا ساشل تفش.)18( س ظ ذي ت يت يػشي ذي ػلاپ تيوشت plex-jred- اش د س تو يت يػش ي يى و بؿ س تو pmd2.g بح VSV-G ذ وذو ؾؿ پ يػشي 7 س تو pspax2 بح د يػشي pol ذ وذو يض آ تؿ س سادشث ع ىؼ ش ت يا gag ذ وذو يئتشپ ذيؼپو يػشي خاد HEK29T دبف ىتشپ يؼ و تبفؼف تىفؼ اشت.ذ ذؿ غپ يسآغ خ يؼ بپػ ػ يػش ي ظي غت آ ت خ ييؼت يػاشتيت عش ي س ظ تػد دسآ تػب تر يػشي هي )MOI( ؽس صيخت ي و Real Time PCR دبف عشي ي بخ ذث ب ت تبيب صآ دبف يعرزث تيوع زثا ط زي MTT ليع ث س ظ تي ػ شثا MTT ذؿ دبف شث عبػا ييب ا ت يذجت ه ي شتت ح اصب س ف ح ب ب ث. 72 ب ه بچ ش 10 7 envelope

4 246 /طت ج ة ي ىش يتش ي ي ش ح اضبف عبل فذ ن/ ؽوبر / هزداد ؽ زي ر 19 Annexin V-FITC دس ع ج 50 ف ئ سػ ت MTT )Sigma( 5 غ ظت ثب ػبػت 4 اص پغ دس ا ى ثبػي تبسيىي دس د بي 7 دسخ خ ت ح ؿذ سػ ة ف س ب اػيذي خزة 100 چب ه ش ث )Merck( دس سي افضد ع اػپىتشفت تش خ ا ذ ؿذ. ثب عل ل ب آ بليش شديذ ج ر گآهيشي ثز هبيذ آکزيذيي ا ر ج ي ىش يتش پغ ايضپشپب 0 اص 570 وشهبى ب تش ثب دليم ت ػظ اتيذي م خ ت ثشسػي تغييشات سيختؿ بػي آپ پت صيغ ػ ب تي بس اص ثؼذ ػبػت 72 ػ ػپب ؼي ػ ي ( 5 )5 10 ثب 1 اس ح آوشيذي 25 اتيذي حد ي 1:1 خ ط 10 ثش بيذ ي ىش يتش ي ىش يتش )Sigma( اص ي ىش يتش اص ح ؼجت ثب اص آ ثش سي ال ي ىشػى پي لش داد ؿذ. پغ اص ت ي ؼتش ثب ػذػي 40x ي ىشػى ح ف ئ سػ ت تغييشات سف طيىي حذال 200 ػ دس 5 ي ذا ديذ تصبدفي غب ؼ ؿ بسؽ لش شفت دسصذ ػ ؼجت ث و ػ ب حبػج ؿذ. فل عبيت هتزي ثب اعتفبد PI Annexin V ث ظ س ىشتيه ت يض اص داد يىذي ش ػ اص ص ذ س آضي آپ پت تيه آپ پت تيه آ ب ثب Annexin V و ظ ؿذ ثب ف ئ سػي ايضتي ػيب بت )FITC( ؿشوت )PI( پشپبيذي يذيذ MACS اػتفبد ؿذ. ثؼذ اص 72 ػبػت اص تي بس ػ ب عي د شح ثب ثبفش تص ؿ ذ ؿؼت ؿذ ػپغ 10 ث ذت ي ىش يتش Annexin V-FITC اضبف آ ب ث دس اتبق د بي دس دليم 15 ؿذ ذ. پغ اص ؿؼت ي دذد ػ ب 5 اضبف تبسيىي ي ىش يتش ا ى ث PI ثالفبص ف ئ سػ ت ػجضس لش ض س PI دس ع ج 600 ب تش ت ػظ دػت ب ف ػبيت تش آ ب يض ؿذ. ثزرعي آپ پت سيظ ث عيل ع جؼ هيشاى کبعپبس ؿشوت ويت اص اػتفبد ثب وبػپبص ضا ػ دؾ Sigma ا دب ؿذ. ث اي ص ست و 72 ػبػت اص ثؼذ ؿؼت تي بس ثب ػ ب اص اػتفبد دس 10 ا شح ي ىش يتش ػ ب ثبفش ثؼذ يضو ذ اص يض ؿذ ذ. ػپغ عجك پشتى 85 ي ىش يتش ثبفش ػ دؾ 10 ي ىش يتش ػ ثؼتشاي وبػپبص )Ac-DEVD-pNA( دليم 90 اص پغ اضبف ا ى ثبػي دس 7 دسخ ػب تي شاد ضا خزة pna آد ؿذ ت ػظ وبػپبص دس ع ج 405 ب تش ت ػظ دػت ب ا يضا سيذس خ ا ذ ؿذ. آ بليش آهبري ت ب اص آص بيبت ؿذ ا دب دتبيي تىش ث ص ست ث خضء آص MTT و ث ص ست تىش ػ تبيي ا دب ؿذ. داد ب پغ اص خ غآسي ثش حؼت ثب اػتفبد student t-test 1 يشايؾ Chicago SPSS Inc( SPSS ش افض USA Il (تدضي تح ي ؿذ ذ 0/05<P ؼ بد دس ظش شفت ؿذ. يبفت ب ت ليذ پالعويذ تزکيت پغ اص عشاحي ػبخت ػبختبس ط ي ت ا ي بػت صحيح ط اي آ آ ػبختبس ث ث داخ plex- Jred - ظش تأي ذي ظ س ػ ثيب ثشسػي HEK تشا ؼفىت ؿذ. ب ع س و دس ؿى 1 خص اػت ثب Jred بسوش ثيب ب ذ ػبػت اص ثؼذ ي ىشػى ح ف ئ سػ ت ب د ذ صحت ثيب اي

5 يض احوذي وكبراى تأثيز ثز عل ل عزطب ي/ 247 ث بسوش ثب سا ذ ب حذد 40 دسصذ ث د. ثيب ط مب ت غ ظت آ تيثي تيه اضبف اص ثؼذ يض پش بيؼي خت ف اي آ تيثي تيه ث ػ ؿذ ب ذ مب ت ػ ثؼذ ػبػت ؿذ. تأي ذي آ ثشاثش وشد تي بس تشا ؼذاوت ؿذ دس تي بس اص تبيح حبص اص mi real time PCR ػ ب افضايؾ حذد ػ ثشاثشي 8 تي بس دس ؿذ ذ ب داد و تأي ذي ثب ط اي ) د 1(. اص اػتفبد ضا دس ثيب مبيؼ ػ ثب دس سا تي بس و ذ فميت دس افضايؾ ثيب ثيب ي وت س plex-jred ؿى 1( )A( تص يش ىشػى ح ف ئ سػ ت اص ػ بي HEK تشا ؼفىت ؿذ ثب پالػ يذ تشويت plex-jred- تأييذ ثيب بسوش )B( Jred تص يش ىشػى ح ف ئ سػ ت اص ب ػ ب شا ثب ػ بي تشا ؼذاوت ذ )ثضسي بيي 100x(. د 1 ( تبيح.mi real time PCR ضا افضايؾ ثيب ػبػت پغ اص تشا ؼفى پالػ يذ تشويت plex-jred-mir29b1 دس ش د تىش آص بيؾ حذد 8 ثشاثش ثيتش اص و تش ث د و ب د ذ فميت دس افضايؾ ثيب اي ط ثب اػتفبد اص اي وت س ثيب ي ث د )0/05<P(. ػ ػپب ؼي ؼتمي تجبط ػ ي د 1 د اػت دسصذ ػ چ ب چ دد. ث د دس ص ذ دس ش آص ثؼذ اص ػبػت حذد 10 دسصذ ثؼذ اص 72 ػبػت حذد 27 دسصذ ؼجت ث ش و تش وب ؾ داؿت اػت. ث اي ؼ ب و ثؼذ اص زؿت 72 ػبػت ػ يشع ثب ػ ب تي بس اص دسصذ ث تشتيت ص ذ دسصذ ث د اػت و اختالف ؼ بدي سا ؼجت ث ش و تش ب داد ذ. يشع ػبيت ت وؼيؼيتي ع جؼ MTT ضا ت ػظ ػ ب سي ثش plex-jred- ح MTT صيي لش شفت. ضا خزة سي ف س ب ت يذ ؿذ ت ػظ ػ ع ج 570 ب تش ثب تؼذاد ػ ص ذ دس ص ذ دس د 2( ػ دؾ اثش ػبيت ت وؼيه يشع plex-jred- ثش ػ بي HL60 ث ػي آص.MTT ثؼذ اص ػبػت ث ع س ب ي دس تىش دسصذ ػ بي ص ذ دس ش آص 91 دسصذ ثؼذ اص 72 ػبػت 77 دسصذ ب ذ ؿذ )0/05<P(.

6 2 ة ج تط/ لبع /ن ذف ربوؽ / ر يز ؽ دادزه 19 ل لع شيلب آ ب ي کيت تپ پآ ح كع زكيه ت عر ئلف يذيشوآ ح سا هي يتبيح ةزخ د ؿي DNA دسا شيص ح ىػشىي ت ػس ئ ف هي يب ضجػ يتب شو.ذ دي ي بح يذيتا ذيب شث ظمف دسا DNA دش يد سب يتب شو دش.ذ د 72 يػشي ب ب ض يذيتا ذيب شث يذيشوآ ح سا يضي آ ذ ذؿ عا ا يتب شو خ ت دبديا هيىفت ؽسب ؿ ذؿ ىؿ(.)1 يس ع تؿز 72 ذ بؿ داذؼت داذؼت. يد ث تؿز ذص ش 6 ذص د ث ي بح ذص ش 20 ذص جػبح ذؿ ذص 5 ذص ي ظ ي د خ ب.ذ د ث ىؿ )2 يضي آ ب ب ض يذيتا ذيب شث يذيشوآ ح سا س ظ ضي ت يب داد دش ذ ب ح ىػشىي ت ػس ئ ف.)40x ييب يسضث( :)A( تؼ يؼيجع ضجػ يتب شو. :)B( تؼ ضجػ يتب شو ي اذيذؿ واشت ؼغل. ؼغل :)C( دش تؼ يؼيجع يتب شو يد سب. يب :)D( دش تؼ يتب شو يد سب واشت لا ؼغل. ؼغل ل لع شيلب آ ب ي کيت تپ پآ يزته تيبع لف ب يػ يضي آ ب يجيوشت Annexin V-FITC PI بى ا صيخت ب تيتشت شيص :ذؿ Annexin V :شيغ يف PI/ يف حش ي ا : Annexin V تجث PI/ يف حش ييب :صشى V Annexin تجث PI/.تجث س ع ب ىؿ ب غپ ذص س ع ي بي 9 ذص 28 ذص د ث غپ 72 ذص س ع ي بي 1 ذص 7 ذص د ث ي ذ د ب

7 ي ؤ ش ي احوذي وكبراى تأثيز ثز عل ل عزطب ي/ 249 دس آپ پت ص ثشاثشي حذد افضايؾ آص ؼجت ث و تش ث د. ؿى ( ف ػبيت تشي ا ىؼي PI V ػ بي HL60 72 ػبػت ثؼذ اص تشا ؼذاو يشع. تبيح ب د ذ افضايؾ حذد ثشاثشي دسصذ ػ بي آپ پت تيه دس ع جؼ هيشاى کبعپبس دس سا وبػپبص ب و خب اد اي اص پشتئبص ب ؼت ذ مؾ ي وبػپبص ب فشآي ذ ػ ثؼتشا بي آپ پت صيغ وبػپبص خت ف ايفب ؼئ و ذ. ثشؽ دس بي آص ؼجت ث بي و تش ث د. ثي آ ضي اص يىي خب اد پشداصؽ حيبتي ضشسي آپ پت صيغ اػت. دس اي غب ؼ پغ اص تي بس آ بد ػبصي ػ ب ب ع س و دس د ب داد ؿذ اػت دس ش د ص ب ضا وبػپبص دس ش آص ؼجت ث ش و تش حذد 2 ثشاثش ؿذ اػت. د ( ػ دؾ ضا فؼب يت وبػپبص 72. ػبػت ثؼذ اص تي بس ثب يشع plex-jred- ثؼذ اص ػبػت ضا وبػپبص دس ش آص ؼجت ث ش و تش حذد 2/2 ثشاثش ثؼذ اص 72 ػبػت حذد 2/4 ثشاثش ؿذ اػت.)P>0/05( ثحث اص آ دبيي و ػشعب يىي اص ػ ا اص ي شي ش ث يظ ثشاي دس ب خ ا غ دس دس ب دس ب سادي تشاپي ا شص ى ي ثبؿذ ت ا ذ دس ب سا وبس خذيذ سايح ثب ح يت خ د ؼجي ث ج د ثخ ذ آ و تش ػشعب اي ى وشد ب ذ ضؼيت اثشات ؿي ي ثي بس فيذتشي آ دس ب ي سا ثبؿذ. ثبؿ ذ. سا وبس بي فيذ ػ ض.)17 16( اػتشاتظي ط دس ب ي ثيتشي تحميمبت خذيذ دس ب ي ث ث ع س دس ب لغؼي وب ي ثشاي يبفت خ ت فشاا ي ثشاي دس ب ػشعب ثب و تشي پبػخ دس ب ت بيض بػت و ي دس ب ي ا دب شفت ؿب چ ي اػت اي ي ا مبي آپ پت صيغ ثبؿذ. ا مبي آپ پت صيغ ث ػ ا يىي اص سؽ دس ب ي خذيذ ذ ظش ثؼيبسي اص تخصصي

8 250 ة ج تط/ لبع /ن ذف ربوؽ / ر يز ؽ دادزه 19 ساشل تفش. ػ د تؿز ذ بؿ تفشيپ ج بخ يب ؽس ي ى ؼ بغ ي يخذث ب. يا د ث ي ظي يب هيت طيپا يدبػشيغ يخذث د خ ذ ساد ييب هي ىت ذ ب ؾد ػ CpG شياضخ يػلايت و ط ؾد ػ صشث تاشييغت يب يئتشپ تؼي ثبل ييبػب ؿ ذ ؿي.)18( دشى ػ يب ؾ خ تفبي ي و يذيئ ي دبح يب ؽس ذ تسذل يش شغ ييبػب ؿ ذ ا ضي ثبل ضي ب آ ي دشى ػ ب ذ بي يؿ knockout يب ضي بى ي i يب تؼيػ يػشيشتس يت يػشي يسبيؼث يب ؽس يصبصتخا ي ش يد ثبل ذ ؿي.)19( ب ا س ع ظي ب يبم ا ضيب ت يشتت بخ يب تفشيپ شيخا فو يب ذ يآشف خ يبم ا يب ي غپ فو دشى ػ ب تي ثبل ب ى ب سب يث سبو تفش ذؿ.)20( غث يب سبى ي ب ي د خ دساد بؿ غػا ذ و يذيت ئ و ي ا ي يض يبخ mi 8 بي ذ ؿذو يب س تو يػشي.)21( يممح شث ذ س ب mi ذ ا تي شث ي ي ظ يخذث يجل خب ت يياض س صبتػبت شيثأت ذ ساز ث.)22( ذ يآشف يا ذيچيپ يدذؼت آ تبجثا ذيػس. 8 mi replacements ب mi ؾيپ ذ شث ي بح ي ش ش يد ذ و آ.)2( يب دشى ػ صخ تث ش ث وشػ بي ب ى ا ذ د ب تي بيح يياص.)2( يس ع تث يش ث وشػ بجيشمت س ع تث شتيث ب ذ ا تفبي خ mir-15a mir-16-1 Let-7 mir-145 ي بح ش يد يجل mir-155 mir-21 بي ؿ خ ي ط mir هي ط ى ا ػ ذ وي 24(.)25 دا بخ mir-29 خ ييب mi يسبيؼث يخذث خ يس CLL يػ AML ذ ا تؿاد ذ ا تي ذ د ب يياص ذؿ.)12( ي ى يب دشى ػ دشتؼ يجل خشچ ضيب ت يساذيبپ ي ط ي ذ جؼچ شيغ.)1( ؾ ظپ ي و يؼػ تاشثا شپ ى بمت ا آ يػ يحاشع تخبػ هي يت يػشي HL60 دس ثي بيصسا ساشل.دشي ث يتؼ ا ت ساذيبپ ب ذ ب يلا دس شظ. يػشث ب يب ساد صبح حيبت ب ؾد ػ صخ ب ت ب اضي ذيد د ؿي تث ذ و ت غ ذ ا ت يبم ا ب يش.ذ د

9 يذوحا ىاربكو زيثأت ل لع زث ب ي /ي بطزع 251 حيبت ؼ بغ حيبت ؾ ظپ ت )Mott( بى تث دشو ذ د ث س ع يمتؼ ذض Mcl-1ي ءبم ا ذ وي ي ا خ دساد يس ع ب mi ثػ ذض ي يساذيبپ اد ي د ؿي.)15( صسب )Garzon( بى ضي ب ذ داد دسا دشو سد ءبضػا دا بخ mir-29 ظي vitro يس ي خاد ييبپ تجػ سد ش ة وشػ يت ذؿس د ؿ يذ يأت ذ و يب تفبي ؾيپ س.)12( ي چ يا ؼ بغ دسا دشو هيتت ػ خاد K562 Kasumi-1 تػلاث AML ي ا تي ثبل تؼيص شيثىت تيػبؼح ي يؿ ي ب ديت تي ثبل دبديا ذ ي و يؿ. غلا ءبم ا بؼف ذؿ صبپػبو صبپػبو 7 Mcl-1 ظجتش. حيبت ي ذ و تيب ح ذ وي.)12( ؼ بغ يش يد نسبپ )Park( بى ذ تفبي ح غػ يذي و P5 شيؼ تؼثا P5 بم ا.ذ و شتيپ تفبي ذ د ث س ع يمتؼ P85α CDC42 ش د ذ و يف P5 ذ وي.)27( ييبد آ يبم ا HL60 ذ ا ت ديت Mcl- DNA 1 يت ب شفؼ اشت شيبػ شور يخد ذؿ ا تي ديت تفش ؼ بغ شيخا حيبت صبح تبميمحت يممح ي ا خ دساد يس ع ا تي بد ا تبؼ بغ تبميمحت ي ي ىت ذ يآ mi هي ب پي ا يىيت ط عا ا ب دبف.د يپ دشث ؼي بى كيلد يىيت ط پي ا يىيت ط تجػ ب ذ ؿي ثػ ؽشتؼ آ ب صيخت ب تيشيذ يسب يث خ ذ ا خ خ ت ييب ا ت م ب mi ا تي ذي ا تؿاد يا ذ يآ هيدض ب ى ب ش ؤ ث يؼغل ش ث.دشث تج ا تبؼ بغ ي ي ىت ي ب صلا بت mi شيبػ يخد تس ص كيلد فذ ييبػب ؿ.ذ ؿ ي چ ييبد آ بمت ا يب يػشي د خ تلاى ي ااشف اش يحاشع يؿس ا تث ؼ بغ تس ص in vivo ذ ي ا يح بد ا داد ذ ؿصسا ذ ا خ.د ث طبپع ي ادرذق بم صبح ب بيبپ يػب ؿسبو ذؿسا يبتو يذ حا تؿس هيت ط ب اد داصآ ي لاػا ذحا ػ تبميمحت اش ت ي ض يػ يذث ب ذ ؼي بم تيب ح ي ب ضوش تبميمحت يسب ف تخبي ث شىت ي ادسذل.ذ يب ي

10 252 /طت ج ة عبل فذ ن/ ؽوبر / هزداد ؽ زي ر 19 References: 1.Garzon R, Marcucci G, Croce C. Targeting micros in cancer: rationale, strategics and challenges. Nat Rev Drug Discov 2010; 9: Shivdasani RA. Micros: regulators of gene expression and cell differentiation. Blood 2006; 108: Drakaki A, Iliopoulos D. Micro Gene Networks in Oncogenesis. Curr Genomics 2009; 10: Ørom UA, Nielsen FC, Lund AH. Micro- 10a binds the 5'UTR of ribosomal protein ms and enhances their translation. Mol cell 2008; 2; 0: Lee I, Ajey SS, Yook JI, et al. New class of micro targets containing simultaneous 5'- UTR and '-UTR interaction sites. Genome Res 2009; 19: Shah AA, Meese E, Blin N. Profiling of regulatory micro transcriptomes in various biological processes. J Appl Genet 2010; 51: He A, Zhu L, Gupta N, et al. Overexpression of micro ribonucleic acid 29, highly up-regulated in diabetic rats, leads to insulin resistance in T-L1 adipocytes. Mol Endocrinol 2007; 21: Garzon R, Calin GA, Croce CM. Micros in Cancer. Annu Rev Med 2009; 60: Calin GA, Sevignani C, Dumitra CD, et al. Human micro genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers. Proc Natl Acad Sci U S A 2004; 101: Li Z, Lu J, Sun M, et al. Distict micro expression profiles in acute myeloid leukemia with common translocations. Proc Natl Acad Sci U S A 2008; 105: Lu J, Getz G, Miska EA, et al. Micro expression profiles classify human cancers. Nature 2005; 45: Garzon R, Heaphy CE, havelange V, et al. Micro 29b functions in acute myeloid leukemia. Blood 2009; 114: Garzon R, Liu S, Fabbri M, et al. Micro- 29b induces global DNA hypomethylation an tumor suppressor gene rerxpression in acute myeloid leukemia by targeting directly DNMTA and DNMTB and indirectly DNMT1. Blood 2009; 11: Havelange V, Garzon R, Croce CM. Micro: new players in acute myeloid leukemia. Br J Cancer 2009; 101: Mott JL, Kobayashi S, Bronk SF, et al. MiR- 29 regulates MCL-1 protein expression and apoptosis. Oncogene 2007; 26: Raquel TL, Sara B, Gabriela MA, et al. Micro regulation of core apoptosis pathways in cancer. Eur J Cancer 2011; 47: Heneghan HM, Miller N, Kerin MJ. Mis as biomarkers and therapeutic targets in cancer. Curr Opin Pharmacol 2010; 10: Figueroa ME, ReimersM,Thompson RF, et al. An integrative genomic andepigenomic approach for the study of transcriptional regulation. PLoS One 2008; : e Nowak D, Stewart D, Koeffler HP. Differentiation therapy of leukemia: decades of development. Blood 2009; 11: Cho WC. Micros: potential biomarkers for cancer diagnosis, prognosis and targets for therapy. Int J Biochem Cell Biol 2010; 42: Esau CC, Monia BP. Therapeutic potential for micros. Adv Drug Deliv Rev 2007; 59: Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell 2000; 100: Yang BF, Lu YJ, Wang ZG. Micros and apoptosis: implications in the molecular therapy of human disease. Clin Exp Pharmacol Physiol 2009; 6: Zhang B, Pan X, Cobb GP, et al. micros as oncogenes and tumor suppressors. Dev Biol 2007; 02: Bandyopadhyay S, Mitra R, Maulik U, et al. Development of the human cancer micro network. Silence 2010; 1: Robert MF, Morin S, Beaulieu N, et al. DNMT1 is required to maintain CpG methylation and aberrant gene silencing in human cancer cells. Nat Genet 200; : Park SY, Lee JH, Ha M, et al. mir-29 mis activate p5 by targeting p85 and CDC42. Nat Struct Mol Biol 2008; 16: 2-9.

11 ISMJ 2014; 17(): Orginal Article Effect of overexpression of on induction of apoptosis in leukemic HL60 cell line K.Ahmadi 1, M.Soleimani 2*, S.Kaviani 2, E.Arefian, P.Fallah 4 1 Department of Genetics, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, IRAN. 2 Department of Hematology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, IRAN. Department of Molecular Biology and Genetic Engineering, Bon Yakhte Biotechnology Research Center, Tehran, IRAN. 4 Department of Hematology, Faculty of Paramedical, Alborz University of Medical Sciences, Alborz, IRAN. (Received 21 Apr, 2012 Accepted 5 Sep, 2012) Abstract Background: Micros are small non-coding regulatory molecules that are involved in diverse biological processes such as proliferation, differentiation and apoptosis. Down regulation of has been found in some of cancers that indicate important roles of this molecule in histological development and cancer. Whereas induction of apoptosis in cancer cells is important for their therapy, in this study, our goal was to examine the effect of over-expression on apoptosis using the lentiviral structure in HL60 cell line. Materials and methods: Permanent overexpression of was established using a lentiviral vector construct containing the precursor of sequence. Then, HL60 cells treated by lentivirus. and 72 hours after transduction, cell proliferation inhibition was estimated by MTT assay. Detection of apoptotic cells was evaluated by EtBr/AO double staining technique and flow cytometry using Annexin V and Caspase- activity was measured by caspase- colorimetric activity assay. Results: Data analysis was done with SPSS 1 softwer and t-test. According to our results, overexpression of led to increase apoptosis. As apoptosis in the test group compared with the control group showed about -fold increase. Data analysis showed a significant increase compared to the control group (P<0.05). Conclusion: According to findings of present study, can induce apoptosis in HL60 cell line. Apoptosis stimulation by mis is probably one of the best and applicable ways to induce death in cancer cells. These data support a tumor suppressor role of, synthetic might be used as a novel epigenetic therapy in future. Key words: micro,, Apoptosis, HL60, lentiviral vector *Address for correspondence: Department of Hematology, Faculty of medical science, Tarbiat Modares University, Tehran, IRAN. soleim_m@modares.ac.ir Website: Journal Address: