مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6 2015 - د. ارما أحمد عزيز التوصيف الجزيئي ودرجظ القرابظ بين بطض الطرز البريظ لنبات األوريعانوم Origanum syriacum في سوريظ باستخدام تقانظ التضخيم الطشوائي متطدد األشكال للدنا RAPD د. ارما أحمد عزيز جامعة دمشؽ- كمية الز ارعة الممخص استخدمت تقانة الػدنا المخػخ عشػيا يا RAPD لمحصػيؿ عمػ معميمػات عػف درجػة الق اربة الي ارثية بيف طرز برية مف نباتػات اأيريغػاي Origanum syriacum فػ سيريا. اسػػػػػتخدمت 27 مرسػػػػػة عشػػػػػيا ية )Primers أعطػػػػػت بمحممدػػػػػا تعدديػػػػػة شػػػػػكمية )Polymorphism بيف الطرز المدريسة. أظدرت نتا ج التحميؿ اإلحصػا باسػتخدا برنامج STATISTICA يريتيف CLUSTER يمصفيفة النسب الم يية لعػد التيافػؽ )PDV Percent Disagreement Values أف قػي PDV قػد ت اريحػت بػيف 0.09 بػػيف الطػػ ارزيف 7 ي مػػف الالذقيػػة( ي 0.61 بػػيف الطػػ ارزيف 1 مػػف طرطػػيس ي 5 مف السييداء( يكاف العنقػيد الشػجرا النػاتج متيافقػا إلػ حػد كبيػر مػ قػي مصػفيفة عػد التيافؽ. أظدرت النتا ج يجيد عالقة قيمة بيف درجة ق اربة الطػرز المدريسػة يالمياقػ الجغ ارفيػة يأمكف تجمي الطرز بحسب مياقعدا الجغ ارفية ي ليحظ أف عناقيػد المنطقػة الياحػدة تتجمػ مػػ بعخػػدا الػػبع يعمػػ نحػػي مسػػتقؿ عػػف قيرمػػا مػػف المياقػػ ممػػا يسػػاعد عمػػ تمييػػز المياقػػ المختمفػػة بعناقيػػدما المسػػتقمة. عػػالية عمػػ ذلػػؾ أثبتػػت نتػػا ج مػػذا الد ارسػػة مقػػدرة 761
تقانة RAPD عم تحديد ميية الطرز المدريسة البصمة الي ارثيػة( لأليريغػاني يالكشػؼ عف درجة الق اربة فيما بيندا. إف لنتا ج مذا الد ارسة أممية كبيرة ف مجاؿ د ارسات التنيع الحييا ف القطػر الػذا يعػيزا اسػػػػتخدا التقانػػػػات عمػػػػ المسػػػػتيب الجزي ػػػػ ينيصػػػػ بافسػػػػتفادة مػػػػف مػػػػذا التقانػػػػات فػػػػ تيصػيؼ الطػرز الي ارثيػة بشػكؿ عػا يد ارسػة عالقػات القربػ فيمػا بيندػا ي بشػكؿ خػا ف د ارسة اأنياع الطبية البرية المدمة الت ل تيصؼ ف القطر عم المستيب الجزي. أيريغاني. RAPD - الكممات المفتاحية: تيصيؼ جزي تنيع ي ارث مر سات 761
2015 - مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6 د. ارما أحمد عزيز Molecular Characterization and Genetic Relatedness Between some Accessions of Origanum syriacum in Syria Using RAPD Technique Dr. Rama Ahmad aziz Damascus University- Faculty of Agriculture Abstract Randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) technique was used to study the genetic relationship among wild accessions of Origanum syriacum grown in Syria. All 27 random decamer primers used, produced polymorphism. Results show, using the STATISTICA computer package and CLUSTER routine with Percent Disagreement Values (PDV), that PDV ranges between 0.09 (between 7 and from Lattakia), and 0.61 (between 1 from Tartus and 5 from Swaida), and the resulting dendrogram was in general in agreement with the matrix. The results also showed a good relationship between the degree of accessions relatedness and their geographic localities, with the accessions of each locality being clustered together independently from other localities which made it possible discriminating different localities in its separate clusters. Moreover, the results of this study proved the ability of RAPD technique to identify some Origanum genotypes through unique fingerprints and to unveil the degree of its relationship in the cluster. 761
The results of this study may have a great impact on the national biodiversity program which lacks the employment of molecular techniques, and thus we recommend making use of these techniques in genotype identification in general, and studying the relationship among them, and in particular in studying important wild species of medical importance which have not been described yet on the molecular level. Key words: Molecular characterization, genetic diversity, primers, Origanum, RAPD. 711
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. التوصيف الجزيئي ودرجظ القرابظ بين بطض الطرز البريظ لنبات األوريعانوم Origanum syriacum في سوريظ باستخدام تقانظ التضخيم الطشوائي متطدد األشكال للدنا RAPD د. ارمػػػا أحمد عزيز جامعة دمشؽ- كمية الز ارعة 1 -المقدمة: ازدادت أمميػػة النباتػات الطبيػػة يالعطريػػة فػػ التفكيػػػر العممػػػ فػػػ السػػػنيات اأخيػػػرة نحػػػي اسػػػتخدامدا فػػػ 717 اآلينػػة اأخيػػرة إلػ حػد كبيػػر يقػد اتجػػ عػػػالج الكثيػػػر مػػػف اأمػػػ ار يافبتعػػاد مػػا أمكػػف عػػف اأدييػػة الكيميا يػػة المصػػنعة ذات التػػيثي ارت الجانبيػػة ذات فعاليػػة عالجيػػة كبيػػرة( يالتػػ نتا جدا إف بعد فترة زمنية طييمة مف استخدامدا. ياف كانػػت تشػػكؿ خطػػػيرة عمػػ صػػحة اإلنسػػاف يالتػػ ف تظدػػػر تتميػػػز منطقػػػة شػػػرؽ المتيسػػػط ببي ػػػة جغ ارفيػػػة يمناخيػػػة مال مػػػة لنمػػػي عػػػدد كبيػػػر مػػػف اأنياع النباتية المختمفة ينظ ار أف سػيريا متميػزة بتنػيع مناخدػا يطبيق ارفيتدػا مػف جبػاؿ شػػػامقة يمخػػػاب يسػػػديؿ متباينػػػة افرتفػػػاع( جعمدػػػا ازخػػػرة بتشػػػكيمة قنيػػػة مػػػف النباتػػػات الطبيعيػػة يالتػػ تشػػكؿ مخزينػػا ي ارثيػػا ياقتصػػاديا مامػػا. ييتبػػيف مػػف الجػػيفت الميدانيػػة فػػ المناطؽ المختمفة مف سيريا يجيد العديػد مػف اأجنػاس ياأنػياع لمنباتػات الطبيػة يالعطريػة يالتػػ يمكػػف تيظيفدػػا فػػ صػػناعات طبيػػة يصػػيدفنية يتجميميػػة يقذا يػػة يتشػػكؿ بػػديرما دخػػػال جيػػػدا لممػػػياطنيف خاصػػػة فػػػ المنػػػاطؽ الز ارعيػػػة الدامشػػػية. عممػػػا أف قالبيػػػة مػػػذا المصػػػػادر الي ارثيػػػػة مدػػػػددة بػػػػافنق ار يافنػػػػدثار الػػػػي ارث لألصيؿ البرية لدذا النباتات الطبية فما ازلت بقاياما. يبػػػػالرق مػػػػف التػػػػدمير الكبيػػػػر منتشػرة فػ بي ػات مختمفػة يمقايمػة
لمعيامؿ البي ية القاسية يمف أممدا: نبات افيريغاني الزعتر اأخخػر( يالمريميػة ياكميػؿ الجبػؿ يسػياما يمػذا ماحػذب بالبػاحثيف يالمدتمػيف فػ مجػاؿ التنػػيع الحيػيا بالمبػادرة إلػػ القيػا بالد ارسػات يالنشػاطات المتعػددة لممحافظػة عمػػ مػذا المػيارد الطبيعيػة يحمايتدػا مػف التدمير يافنق ار يافستفادة مندا ياستخدامدا لألجياؿ القادمة. مف مذا المنطمؽ كاف الداف لنا بالقيا بد ارسة أحد النباتػات التابعػة لمفصػيمة الشػفيية التػ تعػػد ياحػػدة مػػػف أمػػ الفصػػا ؿ النباتيػػة ذات القيمػػة افقتصػػادية العاليػػة فػػ إنتػػاج الزيػػيت الطيػػارة يالتػػ تنتشػػر أنياعدػػا بصػػيرة طبيعيػػة فػػ منػػاطؽ مختمفػػة يمػػي نبػػات اأيريغػػاني Origanum syriacum الذا يحظ بيممية طبية يصػيدفنية كبيػرة يالػدليؿ عمػ ذلػؾ يريد ذكػػػرا فػػػ دسػػػتير اأدييػػػة البريطػػػان (7( يدسػػػتير اأدييػػػة اأيربػػػ (11) يترجػػػ أمميتػػ الػػ زيتػػػ العطػػرا الػػذا يتكػػػيف بشػػكؿ أساسػػ مػػػف الثيمػػيؿ يالكارفػػاكريؿ يالتػػػ تختمؼ نسسبدا تبعا لمظريؼ البي ية يالميقػ الجغ ارفػ يمرحمػة النمػي النبػػػػات خػػػػيا مخػػػػادة لألكسػػػػدة يالفطػػػػير يالبكتريػػػػا ييمكػػػػف اسػػػػتخدام 2,1(. ييمتمػؾ مػذا 20,,3( كمػػا أثبتػػػت فعاليتػػ كمخػػػاد لػػػألي ار يكمقػػي لمقمػػػب كمبيػػػػد حشػػػػرا 2,16,12( مػػػذا ي يسػػػػتخد النبػػػػات كشػػػػ ارب لعػػػػالج حػػػػافت التدابػػػػات الصػػػػدر يالقصػػػػبات الحػػػػاد السػػػػعاؿ يالتدابات اأذف ياآلف المرتبطة بدا (. ييستخد زيت كمطدر خارج ف مػ ارم الت ػا الجػػريح يمعقػػ فػػ الشػػ اربات لعػػالج افخػػط اربات التنفسػػية يبمستحخػػ ارت افستنشػػاؽ. يتعػػػػيد خػػػػيا العقػػػػار المعقمػػػػة يالمطدػػػػرة يالمقشػػػػعة إلػػػػ محتػػػػياا العػػػػال مػػػػف الثيمػػػػيؿ يالكارفاكريؿ.)6 مػػف منػػا كػػاف الدػػدؼ مػػف البحػػث مػػي تسػػميط الخػػيء عميػػ مػػف خػػالؿ د ارسػػت يمعرفػػة درجػػػات الق اربػػػة الي ارثيػػػة بػػػيف طػػػرزا البريػػػة يقػػػد اسػػػتخدمت تقانػػػة الػػػدنا المخػػػخ عشػػػيا يا Random Amplified Polymorphic DNA )RAPD يالتػ تفيػد فػ الكشػؼ عف درجة افختالفات الي ارثية بيف الطرز المدريسة عم المستيب الجزي ػ ي الػذا كمػا مي معريؼ ف يتيثر بالظريؼ البي ية الت تؤثر معنييا عم شكؿ ي درجة نمي النبات. يتجدر اإلشارة إل أف مذا البحػث يعتبػر مسػاممة مامػة فػ صػيف مصػادرنا الي ارثيػة النباتية يالحفاظ عميدا. 711
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. هذه تهدف الد ارسة إلى: 7- تقػدير التبػايف الػي ارث بػيف الطػرز المدريسػة التابعػة لنبػات اأيريغػاني باسػتخدا تقانػة الدنا المخخ عشيا يا.)RAPD) -1-1 الحصيؿ عم معميمات حيؿ درجة الق اربة الي ارثية بيف الطرز المدريسة. تعريؼ ياسمات الي ارثية لدذا الطرز. مؤش ارت( جزي ية فريدة تميػز بعػ 2- المواد وط ارئق البحث :Materials and Methods -1-2 المادة النباتية: Plant material الطػرز يبالتػال تحديػد البصػمة شممت المادة النباتية مجميعة طرز مف نباتات اأيريغانيsyriacum Oiganum البريػػػػػة التابعػػػػػة لمفصػػػػػيمة الشػػػػػفيية (Lamaiaceae يعػػػػػددما 71 طػػػػػرز( يالمتميػػػػػزة بيمميتدػا الطبيػة ياسػتخداماتدا الصػيدفنية يالمتياجػدة فػ منػاطؽ جغ ارفيػة مختمفػة يذلػؾ خالؿ الفترة.)1171-1171 الجدول رقم )1(: مواقع العينات المدروسة من نبات الوريغانوم الرقم الموقع النوع الرتفاع )م( خط الطول خط العرض 16.11. 16.11.11.01.11.01.41 16.17.71 16.11.04 16.14.11 16.11.41 16.11.17 16.11.11 14.01.11 14.41..41.11.16.44 11.11.44.11.41.11.14..17 11.41.11 11.11.11 611 611 411 111 017 441 116 111 7711 7114 Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum Origanum syriacum طرطيس- شيخ بدر طرطيس- مالجة طرطيس- تخمة المالذقية كسب السييداء عرب الالذقية قرداحة الالذقية الحفة الالذقية الجيبة السييداء- يلغا دمشؽ- رخمة 1 2 3 4 5 6 7 9 11-2-2 استخالص ال DNA Extraction : DNA 711
تػ عػزؿ الػػ DNA تػػػ عػػػزؿ الػػػػDNA لكامػؿ الجينػي مػف اأي ارؽ الفتيػة لمعينػات المدريسػة.حيػث Cetyl Trimethyl Ammonium بطريقػػػة CTAB (26))Bromide مػػػػ إجػػػػ ارء بعػػػػ الحصػػػػػيؿ عمػػػػػ كميػػػػػة كبيػػػػػرة مػػػػػف الػػػػػػ DNA يتػػػػػتمخ يتعديالتدا كما يم : - - التعػػػػديالت الالزمػػػػة عميدػػػػا بحيػػػػث تمكنػػػػا مػػػػف خطػػػػػيات طريقػػػػػة العػػػػػزؿ يزنػػػت عينػػػات يرقيػػػة بحػػػديد 1-7 غ مػػػف كػػػؿ نبػػػات أخخػػػر يطحنػػػت بيجػػػيد افزيت السا ؿ لمحصيؿ عمػ المػادة النباتيػة بشػكؿ مسػحيؽ. يمػف ثػ نقمػت إلػ ديرؽ سعة 01 مؿ يحيا عم 71 مؿ مف محميؿ افستخال مكيف مف: {0 mm Tris HCl (PH=); 1.5 mm NaCl; 25 mm EDTA; 1% P.V.P (polyvinilpyrolidone); 0.2 % Mercaptoethanol}. تمت المجانسة ث يخػعت الػديارؽ الحاييػة عمػ المػزيج فػ حمػا مػا عمػ درجػة ح اررة 60 درجة م يية لمدة نصؼ ساعة م التحريؾ المستمر. أخيؼ لممزيج 6.0 مؿ كميرفػير : أيزيميػؿ الكحػيؿ( )7 : 14 خمطػت بمطػؼ - مدة عشر دقا ؽ عم الػػرجاج ثػ التثفيػؿ بسػرعة 6011 ديرة بالدقيقػة يلمػدة 70 دقيقة. رفػػ الرشػػاحة إلػػ انبػػيب جديػػد يأخػػيؼ لدػػا 1/1 مػػف حجمػػ ) كحػػيؿ افيػػزي بريبانيؿ المبرد ثػ مػزج محتػيب اأنبػيب جيػدا يبدػديء حتػ تبػدأ خيػيط الحمػ النييا الريب منقي درجة ح اررة 4 لمدة نصؼ ساعة. افيكسػجيف DNA بػالظدير ثػ حفػظ فػ المجمػدة عمػ - - التثفيؿ لمدة 0 دقا ؽ بسرعة 4111 ديرة/ دقيقة. قسػػؿ الػػDNA بمحمػيؿ قسػيؿ مبػػرد Buffer.)71 mm ايتػػانيؿ %16 يأمينيػي اسػػيتات 111 استبعاد الرشػاحة يالتجفيػؼ لمػدة 71 دقػا ؽ تبعػ إذابػة الػػ DNA بإخػافة - ميكريليتير ماء مقطر معق طيؿ الميؿ يعم درجة ح اررة 4. 3-2- تقانة التضخيم العشوائي متعدد الشكال لمدنا )الدنا المضخم عشوائيا(: 714
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. )Random Amplified Polymorphic DNA( RAPD : تػػػػػػػػػ الحصػػػػػػػػػيؿ عمػػػػػػػػػ المرسػػػػػػػػػات مػػػػػػػػػف شػػػػػػػػػركة Operon Inc. USA )Technologies يشػركة Inc.).(Amersham Pharmacia Biotech أذيبػت المرسػػات بالمػػاء المقطػػر لمحصػػيؿ عمػػ 11 مرسػػة تػػ اختيارمػػا عمػػ نحػػي عشػػيا تركيػػز 11 نػػانيق ار / مػػايكريليتر. ياسػػتخدمت تػػ الحصػػيؿ عمػػ dntps مػػف شػػركة Rouche يعمػ كػؿ مػف Mg Cl2 ي Taq DNA polymerase يالمحمػيؿ المػيق.Eurobio مف شركة X PCR تمػػت شػػريط التخػػخي كمػػا يصػػؼ مػػف قبػػؿ (31) مػػ بعػػ التعػػديالت يكػػاف حجػػ التفاعؿ الندا ميكريليتر متخمنا : 20 mm Tris-HCl ( PH=.4 at 25C), 50 mm KCL, 3.4 mm MgCl2, 0.3 mm dntps, 60 ng primer, 5U/ Ml Taq DNA polymerease,30 ng tamplate DNA المحسػػيب كميتدػػا عمػػ جدػػاز Cintra 5- UV-Vis Double-Bam Spectrometer مػف شػركة )GB سػبؽ ذلػػػؾ خػػػبط الشػػػريط المثمػػػ لنبػػػات افيريغػػػاني( لمتخػػػخي بجدػػػاز PCR يحػػػددت الكميػة المثمػ لكػؿ مػف الػػدي ارف الحػػ اررا Hybaid Thermal Cycler الػػ Taq ي.DNA أجػرا تفاعػؿ PCR باسػتخدا جدػاز (Geniu TECHNE حيث تخمنت ظريؼ التخخي: مػػػف شػػركة رق الجديؿ يبيف رميز المر سات المستخدمة ف تقانة RAPD يأطيالدا الجزي ية :)1 يتسمسمدا النييكمييتيدا الرقم رمز المرئسة أسس المرئسة الرقم رمز المرئسة أسس المرئسة GGTACTCCCC OPN-03 15 AAGAGCCCGT Amersham 4 1 CAGCCCAGAG OPN-07 16 CCCGTCAGCA Amersham 6 2 7
ACCTCAGCTC OPN-0 ACAACTGGGG OPN- TCGCCGCAAA OPN-11 CACAGACACC OPN-12 CCCAAGGTCC OPE-01 TCAGAGCGCC OPO- TGGCGTCCTT OPO-15 TCGGCGGTTC OPO-16 CTCGCTATCC OPO-1 GGTGCACGTT OPO-19 CCTCCTCATC OPR-19 17 1 19 20 21 22 23 24 25 26 27 TTCGAGCCAG OPC-01 AAAGCTGCGG OPC-11 TGTCATCCCC OPC-12 AAGCCTCGTC OPC-13 ACCGCGAAGG OPD-01 AGCGCCATTG OPD-11 CATCCGTGCT OPD-15 CCCAAGGTCC OPE-01 TTATCGCCCC OPE-12 GGTGACTGTG OPE-16 ACGGATCCTG OPF-01 ACGGTACCAG OPF-12 3 4 5 6 7 9 11 12 13 14 * تمسخ (Denaturation فصػؿ أيلػ لجػديمت الػػ DNA يذلػؾ عمػ حػ اررة 14 درجػة م يية يلمدة دقيقة ياحدة تبعدا 40 ديرة حيث تخمنت كؿ ديرة : - تمسخ :(Denaturation ف ح اررة 14 درجة م يية يلمدة عشر ثيان. - اسقاء :)Annealing ف ح اررة درجة م يية يلمدة عشر ثيان. -استطالة :)Extension ف ح اررة 11 درجة م يية يلمدة دقيقة يعشر ثيان. * استطالة ندا ية لديرة ياحدة فقط عم ح اررة 11 درجة م يية يلمدة دقيقتيف. أبقيػػت نػػياتج التفاعػػؿ عمػػ درجػػة حػػ اررة 4 درجػػة م ييػػة ثػػ فصػػمت عمػػ مالمػػة أقػػاريز %7.1 مػف شػػركة )Merck خػمف محمػيؿ مػيق 0.5X TBE مخػػاؼ لتمػؾ الدالمػػة إثيػػديي بريمايػػد مػػف شػػركة )Fluka لكشػػػؼ حػػز الػػػ DNA مػػف خػػالؿ خػػيء الػػػUV ياسػػتعمؿ مؤشػر قياسػ سػم دنػػا( 1 kb مػف شػركة )Invitrogen يشػير لمياقػ يحجػ الحػػز لمعرفػػة اأي ازف الجزي يػػة التقريبيػػة لنػػياتج التخػػخي. طبػػؽ الػػرحالف الكدربػػا بجدػػد فيلت يلمدة ساعتيف ينصؼ ث صيرت الدالمة بجداز فيديي حاسيب. 4-2- تحميل البيانات: درسػػػت نػػػياتج التخػػػخي لممرسػػػات المدريسػػػة بمقارنػػػة المسػػػا ارت الناتجػػػة فيمػػػا بيندػػػا يأحصػػػيت الحػػػز الناتجػػػة عػػػف أجػػػ ازء الػػػدنا DNA عمػػػ اسػػػاس يجػػػيد الحزمػػػة 7( أي قيابدػػػا 1( يلمعرفػػػة درجػػػة الق اربػػػة الي ارثيػػػة بػػػيف الطػػػرز المدريسػػػة اعتمػػػادا عمػػػ عػػػدد يحػدات التخػػاعؼ تػ انشػاء مصػػفيفة النسػب الم ييػػة لعػد التيافػػؽ )PDV) Percent 716
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. Disagreement Values بتطبيػػػؽ متيسػػػطات المجميعػػػات الزيجيػػػة قيػػػر الم ازنػػػة (UPGMA) باسػػػػتخدا برنػػػػامج (25) STATISTICA ثػػػػ يخػػػػعت النتػػػػا ج عمػػػػ شكؿ شجرة ق اربة تمثؿ التحميؿ العنقيدا.)Dendrogram 3- النتائج: الػ يستخد التفاعؿ السمسم لمبيليمي ارز (PCR) ف تقانات عديدة جدا لدا استعمافت ف مختمؼ العمي البييليجية يالطبية يمف أقد مذا التقانات يأيسعدا انتشا ار م تقانة RAPD 31( الت استخدمت ف البحث لد ارسة درجة الق اربة بيف طرز افيريغاني المختمفة يمعرفة درجة التعددية الشكمية بيندا polymorphism يتتميز بالبساطة يقمة التكمفة يالسديلة النسبية يعد الحاجة أا معرفة مسبقة بالجيني المدريس إف ان يؤخذ انخفا عميدا إمكانية التعددية الشكمية الكبيرة ف اإلعادة الػ حيث تصعب مقارنة النتا ج بيف RAPD بالجيني ف عدة مياق يتنتج التباينات لميحدات المتخاعفة مخابر مختمفة. تعزب إل قدرة المر سات العشيا ية عم افرتباط amplicons مف حديث طف ارت لمجيني تؤدا إل تنيع ف ميق ارتباط المر سات مما يجعمدا تستخد كاداا لتقانات المؤش ارت الجزي ية Molecular Markers 1-3- د ارسة التعددية الشكمية لنباتات الوريغانوم باستخدام تقانة ال :RAPD نتج عف تطبيؽ الػ 27 مرسة عم طرز افيريغاني 11.O syriacum يحدة تخاعفية amplicons كانت 2 مندا يحيدة التك ارر Monomorphic بينما كانت 17 ذات تعددية شكمية.Polymorphic يقد أظدرت جمي المرسات تعددية شكمية عند استخدامدا م طرز اأيريغاني.O syriacum المدريسة. ت حصر عدد يحدات التخاعؼ لكؿ مرسة (Number of amplified DNA fragments) يقد ت اريح بيف 2 م المرسة OP-N12 ي 12 م المرسة OP-R19 بمتيسط يقدرا 6770 لكؿ مرسة بيف طرز اأيريغاني المدريسة. ف حيف ت اريح عدد يحدات التخاعؼ ذات التعددية الشكمية OP- بيف 2 م المرسة (Number of polymorphic amplicons) N12 ي 12 م المرسة OP-R19 بمتيسط 6763 لكؿ مرسة. ييالحظ مف خالؿ 711
الجديؿ أف النسبة الم يية لمتعددية الشكمية ف مذا النيع كانت 975 يمذا يعن أف نسبة التعددية اأحادية Monomorphic كانت 1715 يمذا النسبة تفيد ف البحث عف حزمة مميزة لدذا النيع يكمما ازد عدد مذا الحز المفردة كمما دؿ ذلؾ عم درجة التجانس داخؿ النيع. يقد أمكف الحصيؿ عم 2 حزمة مميزة لدذا النيع م 2 مرسة مف المرسات المستخدمة. ف حيف اف نسبة التعددية لمجميع الحز ف النيع.O syriacum فكانت 97763 يكانت اقؿ بشكؿ طفيؼ مف النسبة الم يية لمتعددية الشكمية مما يدؿ عم يجيد تقارب كبير لبع الطرز داخؿ نفس النيع. الشكؿ رق 1(: ييخح النسب الم يية لمتعددية الشكمية اأحادية يالمتعددة لطرز الزعتر المدريسة باستخدا تقانة الػ RAPD الجديؿ رق 3(: يبيف عدد يحدات التخاعؼ amplicons يحز التعددية الشكمية polymorphic fragments الناتجة مف مرسات الػ RAPD م الطرز المختمفة لنباتات افيريغاني Origanum syriacum الرقم 1 2 3 4 5 6 7 رمز المرئسة Amer4 Amer6 OP-C1 OP-C11 OP-C12 OP-C13 OP-D1 العدد الكمي لم Amplicons 5 5 7 7 7 4 التعددية الشكمية لم Amplicons 5 4 7 7 7 4 النسبة المئوية لمتعددية الشكمية 0 0 0 0 0 0 0 مجموع الحزم الكمي 23 26 24 24 24 44 33 مجموع حزم التعددية 23 16 24 24 24 44 33 نسبة التعددية لمجموع الحزم 0 61.54 0 0 0 0 0 الوزن الجزيئي لم Monomorphic 1700 711
2015 - مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6 ارما أحمد عزيز د. 550 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 74.36 0 97.63 35 26 1 35 31 31 25 30 19 22 12 15 20 26 15 44 30 29 31 690 25.56 35 26 1 35 31 31 25 30 19 22 12 15 20 26 15 44 30 39 31 7 26.30 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.9 0 9.5 9 3 6 9 4 9 5 7 5 6 2 5 3 12 179 6.63 9 3 6 9 4 9 5 7 5 6 2 5 3 9 12 11 6.70 OP-D11 OP-D15 OP-E1 OP-E12 OP-E16 OP-F1 OPF12 OP-N 3 OP-N 7 OP-N OP-N OP-N11 OP-N12 OP-O1 OP-O OP-O15 OP-O16 OP-O1 OP-O19 OP-R19 المجميع المتيسط 9 11 12 13 14 15 16 17 1 19 20 21 22 23 24 25 26 27 الشكؿ رق 1(: يبيف التغاير الشكم الناج مف استخدا المرسات OP- OP-R19 OP-O15 OP-O16 OP-O OP-O1 N12 بيف طرز اأيريغاني الػ المدريسة ف تقانة الػ RAPD كمثاؿ البع النتا ج المتحصؿ عميدا. M 1 2 3 4 5 6 7 9 M M 1 2 3 4 5 6 7 9 M OP-R19 (1-) 711 OP-N12 (1-)
M 1 2 3 4 5 6 7 9 M M 1 2 3 4 5 6 7 9 M OP-O1 (1-) OP-O (1-) M 1 2 3 4 5 6 7 9 M M 1 2 3 4 5 6 7 9 M 2-1-3- د ارسة العالقة الو ارثية بين الطرز المختمفة من الوريغانوم باستخدام تقانة OP-O16 (1-) OP-O15 (1-) ال :RAPD العالقػػػة الي ارثيػػػة بػػػيف طػػػرز اأيريغػػػاني البػػػرا عػػػف طريػػػؽ حصػػػر عػػػدد تمػػػت د ارسػػػة يحػػػدات التخػػػاعؼ مػػػف تقانػػػة الػػػػ RAPD يأنشػػػيت مندػػػا مصػػػفيفة النسػػػب الم ييػػػة لعػػػد الناجمة عف تطبيػؽ متيسػطات التيافؽ (PDV) Percent Disagreement Values )UPGMA باسػػػػتخدا برنػػػػامج STATISTICA المجميعػػػػات الزيجيػػػػة قيػػػػر الم ازنػػػػة اعتمػادا اأريغػاني درجة الق اربة الي ارثية بيف الطػرز المدريسػة لنبػات ) لمعرفة اإلحصا فػػػ 1.17 بنسػػػبة تشػػػاب عم عدد نياتج التخاعؼ المشتركة. ت اريحػػػت قػػػي الػػػػ PDV بػػػيف 1.11 بػػػيف الطػػػ ار زفي 1 ي 1 ي 0 بنسػبة تشػابة 1.11. يمنػا 1.67 بػيف الطػ ارزيف 7 قيمة PDV مػ حيف كانت أعم 711
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. كاف التنيع الي ارث عاليا بيف مذيف الط ارزيف فدما مف منطقتػيف مختمفتػيف بي يػا طرطػيس يالسييداء( مقارنة بط ار زا لدما يالمذيف الالذقية نفس الظريؼ البي ية. الجديؿ 4(: مصفيفة النسب الم يية لعد التيافؽ( PDV ) بيف الطرز المدريسة لنبات اأيريغاني.O syriacum الناجمة مف تطبيؽ متيسطات المجميعات الزيجية قير الم ازنة UPGMA لنتا ج تقانة RAPD 1 2 3 4 5 6 7 9 1 0.00 2 0.11 0.00 3 0.12 0.14 0.00 4 0.25 0.23 0.29 0.00 5 0.61 0.54 0.59 0.50 0.00 6 0.29 0.32 0.34 0.20 0.52 0.00 7 0.2 0.29 0.32 0.19 0.52 0.11 0.00 0.29 0.32 0.33 0.21 0.57 0.12 0.09 0.00 9 0.60 0.53 0.5 0.50 0.35 0.53 0.53 0.57 0.00 0.3 0.34 0.41 0.29 0.39 0.30 0.29 0.33 0.39 0.00 التحميل العنقودي لطرز الوريغانوم باستخدام تقانة ال : RAPD -3-1-3 تمت د ارسة التنيع الي ارث بيف طرز اأيريغاني بناء عم المدريسة البرا بيانات مصفيفة نسب عد التيافؽ Percent Disagreement Value يأنشات شجرة الق اربة الي ارثية التحميؿ العنقيدا( Dendrogram بيندا لمعرفة العالقة الي ارثية يالمسافة افرتباطية بيف الطرز المختمفة. يعميما د ارسة العالقة بيف الطرز الي ارثية المختمفة يكيف بناء عم الصفات المظدرية يالكيميا ية يالياسمات الت تفرؽ بيف الطرز عم مستيب الػ.DNA المؤش ارت( الجزي ية نجد أن يبناء عم التحميؿ العنقيدا لنتا ج الػ RAPD يجيد تيافؽ كبير بيف البيانات المصفيفة يشجرة الق اربة يالت قسمت بديرما النيع.O syriacum عند قيمة عد تيافؽ 0.53 إل تحت تجمعيف احدمما يشمؿ طرز مف الالذقية يطرطيس يدمشؽ ياآلخر يشمؿ عم طرز السييداء. مف م مالحظة تجم طرز كؿ منطقة جغ ارفية م 717
بع. يكاف التنيع الي ارث عال ف طرز السييداء 5 ي 9 ( أكثر مف 0.34 بينما كاف التنيع الي ارث منخف ف الالذقية 7 ي ( 0.09 يتبتعد العينة 6 عند بمقدار 0.11 أا أف الطرز الثالثة تق ف تجم ياحد يدرجة التشاب بيندا كانت أعم مف %90. كما ييالحظ يجيد عالقة ظامرية بيف طرز اأيريغاني المدريسة يميقعدا الجغ ارف حيث تجمعت طرز كؿ منطقة ف عنقيد مستقؿ. 711
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. الشكؿ رق 1(: يبيف شجرة الق اربة بيف طرز اأيريغاني الػ 71 اعتمادا عم النسبة الم يية لعد التيافؽ لمتيسطات المجميعات الزيجية قير الم ازنة UPGMA 4-1-3- تمييز الطرز الو ارثية باستخدام تقانة ال :RAPD يمكف افعتماد عم المعممات الي ارثية ف د ارسة البصمة الي ارثية Fingerprinting يالتفريؽ بيف الطرز مف خالؿ يجيد نيعيف مف الحز المتباينة يقير المتباينة التمييز بيف بياسطة حيث تعتبر مذا الحز طرز تابعة لمنيع مفيدة ف التمييز بيف الطرز المدريسة. يقد أمكف O. syriacum 27 باستخدا حزمة فريدة مندا 15 6 OP-R19 استطاعت اف تميز 3 OP-O16 OP-O01 OP-C11 حزمة ميجبة ي 9 حز سالبة(. مر سة عشيا ية ييالحظ اف المر سة طرز. ف حيف اف كؿ مف المر ساتAmer4 OP-C12 OP-F12 استطاعت أف تميز ط ارز ياحد فقط. يقد ت اريح حج الشدؼ المخخمة لطرز اأيريغاني O. syriacum المر سة 2250 ي 300 بيف OP-R19 كاف اقؿ يزف جزي 36 يالطر از زيج مف القياعد يعند يزف جزي 2250 300 أمكف تمييز طرز طرطيس يأعم يزف جزي زيج مف القياعد م المر سة OP-C11 زيج مف القياعد يالط ارز كاف م ف حيف يقد 35. 3 2 1( بمجميعة حز مشتركة يكذلؾ طرز الالذقية 7 6 4( يكذلؾ مجميعة طرز المنطقة الساحمية مف طرطيس يالالذقية 7 6 4 3 2 1(. الجديؿ الط ارز رق فريدة عند استخدا الموقع التقريبي لمحزمة الفريدة السالبة 11 71 0(: الطرز الي ارثية لنبات اأيريغاني الت تميزت بحز تقانة الػ RAPD الموقع التقريبي المرئسة الط ارز لمحزمة الفريدة المرئسة الموجبة OP-R19 16 71 Amer4 OP-R19 7111 OP-C12 711
111 111 1 71 7011 OP-R19 OP-R19 OP-O Amer4 Amer4 4 11 1 001 111 111 OP-F12 OP-O16 OP-O16 OP-O16 1 OP-C11 111 OP-C11 تقانة 6(: الحز المميزة لكؿ مجميعة طرز خمف النيع عند استخدا الجديؿ رق RAPD الػ الموقع التقريبي لمحزمة الفريدة الموجبة المرئسة الطرز 111 OP-O1 1-1-7 1 OP-O19 1-1-7 1111 OP-R19 1-1-7 1 OP-E12 1-1-7 11 OP-D1 1-1-7 11 OP-C12 1-1-6-4 1411 OP-C11 1-1-6-4 1111 OP-C1 1-1-6-4 1111 OP-D1 1-1-6-4 111 OP-O1 1-1-6-4 1 OP-N12 1-1-6-4-1-1-7 714
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6 د. ارما أحمد عزيز 7011 1 111 2015 - OP-D11 OP-C11 OP-O1 1-1-6-4-1-1-7 1-1-6-4-1-1-7 1-1-6-4-1-1-7 4- المناقشة اف افعتماد عم الصفات المظدرية الميرفيليجية( يالفيزييليجية لمتمييز بيف الطرز الي ارثية ل العديد مف السمبيات يذلؾ بسبب تيثر مذا الصفات بالظريؼ البي ية المحيطة يم ارحؿ نمي النبات باإلخافة إل الزمف الالز فنجاز مذا العمؿ (27). لذا تستخد المعممات المؤش ارت( الجزي ية لدذا الغر حيث أف المادة الي ارثية أكثر ثباتا باإلخافة إل أف معظ مناطؽ التعددية لمػ DNA تعتبر مفيدة كمعممات ي ارثية (4). يعميما تعتبر د ارسة التنيع الي ارث يالعالقة بيف الطرز المختمفة متطمب أساس لحفظ اأصيؿ الي ارثية. ينجد أف معممات الػDNA تسمح لنا بإيجاد التنيع ف المعميمات الي ارثية الت تحممدا الطرز المختمفة يتعط معميمات ميثيقة تفيد ف ب ارمج التربية لنقؿ الصفات المرقيبة مف الط ارز البرا إل الطرز المزريعة (22) يكذلؾ لتخفي عدد المدخالت المتكررة ف بنؾ الجينات (30). مف خالؿ مذا البحث ت تطبيؽ تقانة الػ RAPD مف المعممات المؤش ارت( الجزي ية لمتمييز بيف طرز مختمفة مف نيع اأيريغاني.Origaum syriacum يمف المعريؼ أف تقانة الػ RAPD تعتمد عم ميق ارتباط المرسات العشيا ية عم الجيني (21). يتعتبر التقانات المعتمدة عم التفاعؿ السمسم لمبيليمي ارز مف التقانات المتميزة بسديلتدا يقدرتدا عم التمييز بيف المدخالت بشكؿ جيد مقارنة بالتقانات اأخرب. حيث تبيف نتيجة إج ارء د ارسة عف التحميؿ الي ارث لعشرة طرز مف البازفء باستخدا تقانة ISSR RAPD ي 3 تقانات تعتمد عم التفاعؿ السمسم لمبيليمي ارز م RFLP AFLP أف نتا ج التقانات المعتمدة عم التفاعؿ السمسم لمبيليمي ارز كانت أفخؿ يأقيب ف الكشؼ عف التبايف الي ارث مف تقانة RFLP خمف الطرز المدريسة (17). يمذا 7
يتفؽ م ماتيصؿ الي الذا درس (14) التنيع الي ارث لنباتات المريمية fructicosa باستخدا تقانة Salvia مر سات أعطت 9 ليحظ أف يقد RAPD عصابة 135 أحادية الشكؿ م تبايف ي ارث عال ت اريحت بيف 250 145 زيج مف القياعد. يقد بينت النتا ج أف تقانة RAPD م تقانة سريعة يدقيقة لتحديد الطرز الي ارثية لمنيع.S.fructicosa كذلؾ استطاعت مذا التقانة أف تميز نباتات اأيريغاني Origanum magorana L. السمسم لمبيليمي ارز (PCR) (15). RAPD تقانة أف (5) يذكر لحصر اأعداد الكبيرة مف المصادر الي ارثية لمزيتيف. فف حالة النيع المدريس.O syriacum نسبة مف التعددية الشكمية ييجد أيخا أف متيسط عددما لمتعددية الشكمية كاف تخاعفية فريدة م بعد إج ارء بع التعديالت عم ظريؼ التفاعؿ تعتبر طريقة سدمة يرخيصة يتعط نتا ج ياقعية فقد يجد أف تقانة الػ RAPD 9.5(. يكاف متيسط عدد يحدات التخاعؼ أعطت.6.70 6.63. يقد أمكف تمييز 15 يحدة طرز مدريسة مند 9 حز سالبة ي 6 حزمة ميجبة م تقانة الػ RAPD بياسطة 27 مرسة عشيا ية مختمفة. يقد تيافؽ ذلؾ م ما ذكرا 54 أمكف تمييز حيث (9) طرز المدريسة 9 حزمة ميجبة. يقد استخد عم نباتات الرز ف تقانة الػ RAPD يحدة تخاعفية فريدة م الػػ حز سالبة ي 6 مند 4 (29) المؤش ارت الجز ية لد ارسة التنيع الي ارث ف )Ocimum spp.l. Basil العشيا ية المستخدمة يعددما باستخدا تقانة RAPD 9 )11 مف الػ أجناس يقد أعطت المر سات حزمة متعددة الشكؿ ت اريح حجمدا بيف 300 2000 زيج مف القياعد. باستخدا مذا التقانة. يقد أظدرت الد ارسة إمكانية التصنيؼ إل أنياع يتحت أنياع أما بالنسبة لمميق الجغ ارف أمكف ربط الطرز الميخيذة مف نفس الميق الجغ ارف ببع الحز المشتركة بدا الجديؿ رق طرطيس 1 ي 2 ي 3( استطاعت 5 مرسات ف تقانة 6( فف الطرز الميخيذة مف RAPD أف تعط 5 يحدات 716
مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6-2015 ارما أحمد عزيز د. تخاعؼ مشتركة ف مذا الميق الجغ ارف )OP-E12, OP-D1 ت اريح حجمدا بيف المر سات يقد استطاعت المر سات OP-O1, OP-O19,OP-R19, 250-2500 OP-C12,OP-C11 زيج مف القياعد م OP- OP-C1 O1, OP-D1, أف تميز طر از الالذقية )-7-6-4 بياسطة 6 يحدات تخاعؼ مشتركة ت اريح حجمدا بيف 2500-700 زيج مف القياعد. ف حيف استطاعت المرسات OP-O1, OP-C11, OP-D11 OP-N OP-N12 المنطقة الساحمية لكؿ مف طرطيس تخاعؼ مشتركة لدذا المنطقة ت اريح حجمدا تيافؽ ذلؾ م د ارسة 3-2-1( يالالذقية بيف 1500-750 )23 المدريسة اعتمادا عم تقانة عم الكاكاي RAPD الت أظدرت أف أف تميز طر از -7-6-4( بيرب يحدات زيج مف القياعد. يقد التبايف الي ارث بيف العينات كاف متيافقا م التبايف الجغ ارف يالبي لممناطؽ الت جمعت مندا العينات إخافة إل ذلؾ فقد كاف معدؿ التبايف خمف العشا ر أعم مف معدل بيندا. يمذا يثبت كفاءة تقانة RAPD العشا ر يالمناطؽ الجغ ارفية يفا دتدا ف تسديؿ إنشاء البنيؾ الي ارثية ف كشؼ التبايف الي ارث يتيزع عبر عف طريؽ إعطاء معميمات ميثيقة تفيد ف تخفي عدد المدخالت المتكررة خمف البنيؾ الي ارثية إخافة إل إعطا دا تحديدا دقيقا لمتنيع الي ارث الميجيد ف بنيؾ الميرثات. يف نفس افتجاا درس )1 التبايف الي ارث لمذرة البيخاء تيافؽ بيف يجيد يتبيف العينات ياأصؿ الجغ ارف لدا فيجديا أف % 13 مف التبايف الي ارث يمكف أف يعزب إل افختالفات الجغ ارفية. ياستطاعت مذا التقانة تحديد الديية الي ارثية لألصناؼ المدريسة إخافة إل تحديد المناطؽ الجغ ارفية الت تخ أعم قدر مف التبايف الي ارث يمف منا. نستنتج اممية مذا التقانة ف تحديد التبايف الي ارث يفا دة ذلؾ ف اختيار الطرز يالت اركيب الي ارثية المتباينة إلدخالدا ف ب ارمج التربية المختمفة. يقد تيافقت مذا النتا ج م ماذكرا 13( عند استخدا تقانة الػ RAPD لد ارسة يتقيي العالقات الي ارثية لألنياع المنتمية لفصيمة Fagaceae يبافعتماد عم نتا ج لمبيانات أمكف تجمي اأف ارد المدريسة تبعا لمتيزع الجغ ارف RAPD يالتحميؿ العنقيدا لدا يذكريا أف النباتات المجميعة مف مكاف ياحد كانت أقرب ي ارثيا لبعخدا مف العشا ر الت تنتم أماكف 711
متباعدة. يقد تيافقت النتا ج م الد ارسة الت أج ارما (19) لمكشؼ عف درجة الق اربة الي ارثية بيف اأصناؼ خمف بع اأنياع الشجرية ف سيرية باستخدا تقانة الػ RAPD حيث أمكف تجمي بع اأصناؼ ف مجامي تبعا لمتيزع الجغ ارف. يف د ارسة أج ارما (24) حيؿ التنيع الي ارث لنبات النعناع Mentha spicata.l باستخدا تقانة RAPD تبيف أف تقانة RAPD كانت مؤش ار جيدا لمتميز بيف المدخالت باختالؼ المناطؽ الجغ ارفية. 5- الستنتاجات و التوصيات: أظدػػرت نتػػا ج مػػذا الد ارسػػة مقػػدرة تقانػػة الػػػ RAPD عمػػ الكشػػؼ عػػف العالقػػات الي ارثيػػػػة بػػػػيف طػػػػرز اأيريغػػػػاني المدريسػػػػة كمػػػػا اسػػػػتطاعت أف تميػػػػز بػػػػيف الطػػػػرز المدريسة بياسطة حزمة أي عدة حز خاصػة بدػا عمػ نحػي جيػد يعمػ تحديػد درجػة الق اربػػة بيندػػػا إخػػافة إلػػػ قػػػدرتدا عمػػػ إيجػػاد العالقػػػة بػػيف نػػػياتج التخػػػخي يالميقػػػ الجغ ارفػ لمطػرز المدريسػة حيػث ظدػر جميػا أف طػرز المنطقػػة الياحػدة تجمعػت مػػ بعخدا البع بشكؿ مستقؿ. تكتسب نتا ج مذا الد ارسة أممية كبيرة فػ مجػاؿ التنػيع الحيػيا فػ القطػر الػذا يعيزا استخدا التقانات عم المسػتيب الجزي ػ. ينيصػ بافسػتفادة مػف مػذا التقانػات ف تيصيؼ اأصناؼ ياأنياع يالطػرز عامػة ياأنػياع الطبيػة البريػة المدمػة خاصػة كنبات إكميؿ الجبؿ يالنعناع يد ارسة عالقػات القربػ فيمػا بيندػا عمػ أف تجػرب أمثمػة افستخال يبرمجة التفاعؿ بما يتناسب م كؿ نيع. 711
2015 - مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6 ارما أحمد عزيز د. References: 1- ODEH, A; DEWIK, H; QABAJAH, M; IMAM, A; DEMBITTSKY, M; HANUS, L 2007- Natural compounds of Palestine flora, Biomed. Pap. Vol.151: 21-29. 2- ODEH, A; DEWIK, H; QABAJAH, M; IMAM, A; DEMBITTSKY, M; HANUS, L 200- Thymol and carvacrol production from leaves of wild Palestinian Origanum syriacum. Bioresour. Technol.,Vol. 99: 3914-391. 3- ASLIM, B; YUCEL, N 200- In vitro antimicrobial activity of essential oil from endemic Origanum minutiflorum on ciprofloxacin-resistant Campylobacter spp. Food Chem., Vol. 7: 602-606. 4- Al-SAID, M 2001- Genetic studies on Egyptian cotton using molecular markers, M.Sc.In Science, Cairo University, Egypt. PP130. 5-BELAJ, A. ;SATOVIC, Z.; ROLO, I. And TRUJILLO, I 2004- Optional use of RAPD markers to identifying varieties in olive (Olea europea L.) germplasm collections. Journal of the American Society for Horticulture Science, Vol.129: 266-270. 6-BLUMENTHAL, M 2000- The complete German commission E Monographs. Austin, Texas : American Botanical Council, 57p. 7-BRITISH HERBAL PHARMACOPOEIA 193- Keighley: Bristish Herbal medicine Association. -CHEVALLIER, A 1996- The Encyclopedia of Medicinal plants. Dorling Kindersley Limited. London. 9-CHOUDHURY, H; REVERT, A; LALUSIN, G; PANK, E 2001- Genetic analysis of rice using RAPD markers. Breeding Science,Vol. 54 (3) 195 201. 711
- DE SOUZA, E; DE BARROS, J; DE OLIVEIRA, C; DE CONCEICAO, M 20- Influence of Origanum vulgarizes L. Essential oil on entero toxin production, membrane permeability and surface characteristics of Staphylocoque aureus. Int. J. Food Microbiol.,Vol.137: 30-311. 11-EUROPEAN PHARMACOPEIA 200- Sixth edition, pp. 2749-2750. 12-GALI-MUHASIB, H; ROESSNER, A; SCHNIDER-STOCK, R 2006- Thymoquinone: a promising anti-cancer drug from natural sources. Int. J. Biochem. Cell Biol.,Vol. 3: 1249-1253. 13-GALLOIS, A; AUDRAN, J and BURRUS, M 199- Assessment of genetic relationships and population discrimination among Fagus sylvatica L. by RAPD. Theoretical and applied Genetics.Vol. 97: 1 2, 211 219. 14-Ibtisam, h 1997- Evaluation of the genetic diversity in Salvia fruticosa selected clones from Greek, using RAPD markers. Chania (Greece), 113p. 15-klocke, E. ; Langbehn, J. ; Grewe, C. ; Pank, F. ; Franz, C. (2002). DNA fingerprinting by RAPD on Origanum majorana L.. Breeding research on aromatic and medicinal plants. part 1. Selected paper from the Second International Conference on Breeding Research on Medicinal and Aromatic Plants, Chania, Crete. Journal of Herbs -Spices and Medicinal Plants, Vol. 3-176; 2-171; 5 ref. 16- KOKA, P; MONDAL, D; SCHULTZ, M; ABDEL- MAGEED, A; AGRAWAL, K 20- Studies on molecular mechanisms of growth inhibitory effects of thymoquinone against prostate cancer cells: role of reactive oxygen species. Exp. Biol. Med.,Vol. 235: 751-760. 17-Lu, J. H.; Knox, M. R.; Ambrose M. J.; Brown J. K. ; Ellis T. N. (1996). Comparative analysis of genetic diversity in pea assessed by RFLP and PCR based methods. Theoretical and Applied Genetics. 93: 7, 13 1111. 711
2015 - مجلة جامعة البعث المجلد 37 العدد 6 د. ارما أحمد عزيز 1-Menkir, A.; Goldsbrough, P.; Ejeta G. (1997). RAPD based assessment of genetic diversity in cultivated races of Sorghum. Crop science, 37: 564 569. 19-MIR ALI, N; NABULSI, I 2003- Genetic diversity of Syrian pistachio cultivars using RAPD technique. Advances in Hort. Sci. Vol.17: 215-222. 20- OCANA-FUENTUS, A; ARRANZ-GUTIEREZZ, E; SENORANS, F; REALERO, G 20- Supercritical fluid extraction of oregano (O. vulgarie) essential oils: Antiinflammatory properties based on cytokine response on macrophages-thp-1. Food Chem. Toxicol.,Vol. 4: 156-1575. 21-POWLL, W; MORGANTE, M; ANDRE, C; HANAFEY, M; VOGEL, J; TINGEY, S. and RAFALSKI, A 1996- The comparison of RFLP, RAPD, AFLP and SSR (microsatellite) markers for germplasm analysis. Mol. Breed. Vol. 2: 225-22. 22-RANPARKHE, M; GUPA, V; VEN-MURTHY, M; RANJEKAR, P 1995- Genetic fingerprinting of Pigeonpea (Cajanus cajan L. Mill) and its wild relatives using RAPD markers. Theoretical and Applied Genetics, Vol. 91: 93 9. 23-RUSLLE, J; HUSIEN, F; JOHNSON, E; WAUGH, R and POWELL, W 1993- Genetic differentiation of Cocoa (Theobroma cacao L.) populations revealed by RAPD analysis. Molecular Ecology. Vol. 2:9-97. 24-SHAANY, A; ALKA, S; BAHL, J; SHARMA, S ; SUHAIL, K 2002- Genetic diversity assessment of Mentha spicata L. germplasm through RAPD analysis. Plant Genetic Resources Newsletter, No. 5-13; 1 ref. 25-STATSOFT 2003- Statistica (data analysis soft ware system), version 6. www. statsoft. com. 26-SUMAN, P; SHASANY, A; DAROKAR, M; KMAR, S 1999- Rapid isolation of DNA from dry and fresh samples of 717
plants producing large amounts of secondary metabolites and essential oils. Plant Molecular Biology Reporter. 17: 1-7.India. 27-TANSLEY, S; YONG, N; PATERSON, A and BONIERBALE, M 199- RFLP mapping in plant breeding, new tools for an old science. Bio Technology, Vol. 7: 257-264. 2-TORRES, M; PONNUSAMY M; CHAKRABORTY, S; SMITH, L; DAS; S; ARAFAT; H; BATRA, S 20- Effects of thymoquinone in the expression of mucin 4 in pancreatic cancer cells: implications for the development of novel cancer therapies. Mol. Cancer Ther., Vol.9: 1419-1431. 29-VIEIRA, R; GOLDBROUPH, P; SIMON, J 2003- Genetic diversity of Basil (Ocimum spp.) based on RAPD maekers. Journal of the American Society for Horticultural Science, Vol. 12, 94-99. 30-VIRK, P; FORD LIOYD, B; JACKSON, M; NEWBURY H 1995- Use of RAPD for the study of diversity within plant germplasm collections. Heredity,Vol. 74: 170 179. 31-WILLIAMS, J; KUBELIK, A; RAFALSKI, J and TINGEY, S 1990- DNA polymorphisms amplified by arbitary primers are useful as genetic markers. Nucl. Acids Res.Vol.1: 6531-6535. 711