مجلة جامعة االنبار للعلوم الصرفة. المجلد التاسع العدد الثالث لسنة 5102 ISSN: اختبار كفاءة تحلل الهيدروكربونات بواسطة بكتريا معزولة من ترب مل

النسخ

1 ISSN: اختبار كفاءة تحلل الهيدروكربونات بواسطة بكتريا معزولة من ترب ملوثة بالمشتقات النفطية ظافر فخري عبد القادر هونر هيوا عارف عدنان علي حماد جامعة االنبار كلية التربية للعلوم الصرفة الخالصة تضمنت هذه الد ارسة التعرف على فاىة ا التفترىة تىل تالىي الك ىدرافرتانةت لذ ع لىت 38 ع لىة تفت رىة ماللىة للك ىدرافرتانةت مى 5 نمةذج ترب ملاثىة ممعىت مى ميىةتل اا انىةت تىل ماةتلىة السىل مةن ة ت مىل ش ايىت العى لت المال تى ا اسىتعمي ع نىةت ناىر فرفىاخ الاىةت المتاسىر مى ميىا المنتاتىة تةتعتمىةد على الااايىةت الملكر ىة ال رع ىة الف ماا ا ىة الكىرت النتىة Bacillus cereus (D32) ا الع لة Pseudomonas aeruginosa (B22( د ر سىت بةتل ىة العى لت الماللىة فةنت اتفاأ ت ل الع لىة الع تت تل تالي الك درافرتانةت. لك ىدرافرتانةت الىنار الاىةت مى اىهي تنم تكىة على اسىر ا مىه المعدن ىة تاتى ارت اضى ماتلاىة 24( )1, 96, 72, 48, سىةعة الاىةا على ت ارف ى ماتلاىة مى الىنار الاىةت.5( %)3, 2, 1, ا تتى فةنىىىت اتضىىىي مىىىدا اضىىى هىىىل 1 )%42.1( امىىة تفترىىة اتستكهخ) 51.7 %( هىذا الترف ى مى اىهي النتىة سىىىةعة ا ىىى بىىىدرت النسىىىتة الم ا ىىىة تسىىىتكهخ الىىىنار الاىىىةت تاعىىىي تفترىىىة.P aeruginosa تتلغىىت النسىىتة )%32.8( ا ا اتضي ترف فة )%1( ا ( %35.8 ) امىة الع لىة تلغت تفةنىت نسىتة اتسىتكهخ %27.2( ) نىاعل التفترىة تامىد ا اللاىة المى داج فىة افثىر فاىة ا تىل اسىتكهخ الك ىدرافرتانةت مى اتستكهخ )%5.7(. امىىة تاعىىي اللاىىة المىى داج الماضىىر مىى نىىاعل التفتر ىىة تتلىى نسىىتة نستة استكهخ الىنار الاىةت تاعىي الع لىة.P aeruginosa فىي مى امىة تاعىي الاىة العى لت كلمات مفتاحية : النفط الخام aeruginosa Pseudomonas تشخيص البكتريا عنىد المى داج الماضىر مى على اىده ا فةنىت نسىتة المقدمة : النار الاةت ها م معاد م المرفتةت الك درافرتان ة العررة ا التة ارت ن ة اتل اةت ة مع اتافسم النترام المرفتةت الماتا ة عل الفترت اماد اارى تاتا عل معةد عضا ة اغ ر عضا ة )1(. ذفر )2( ل النار الاةت تفا م ممماعة م المرفتةت الك درافرتان ة المتم ا ف م ة ة التل تترلب آل ةت ماددا للتاع ي اتستكهخ. اىىىىىدد فث ىىىىىر مىىىىى العلمىىىىىة لنىىىىىا ماتلاىىىىىة مىىىىى الفة نىىىىىةت الا ىىىىىة الدب اىىىىىة التىىىىىل لكىىىىىة الاةتل ىىىىىة علىىىىى اسىىىىىتكهخ المرفتىىىىىةت الك درافرتان ىىىىىة الاعةلىىىىىة تىىىىىل الت ىىىىىة الرت ع ىىىىىة مثىىىىىي التفترىىىىىة الاررةت الامة ر الراةلب. )3( إ الترتة الملاثة تةلتتراي تاتىا على مىاد متناعىة ارىرا مثىىىىىي الك ىىىىىىدرافرتانةت العررىىىىىىة ا الك ىىىىىىدرافرتانةت العررىىىىىىة المتعىىددا الالاىىةت اهىىل ذات بىىدرا سىىةمة امراىىرا ا مسىىررنة لإلنسة الا انةت النتةتةت (4 ). عىىىىد الىىىىد ي ااىىىىد المشىىىىتاةت المكمىىىىة للىىىىنار الاىىىىةت التىىىىل تسىةهت تشىفي ر سىل تىل تلىا الترتىة مىع ا د ىةد الرلىب على الىىىد ي فابىىىاد تىىىل السىىى ة ارت الشىىىةانةت المالىىىدات المفىىىة الينةع ة ا لفانه ناىي عتىر مسىةتةت را لىة تأنىه لىا الترتىة اهي ااد التسرب (5(. تنتشىىر التفترىىة الاررىىةت الماللىىة للك ىىدرافرتانةت علىى نرىىةو اسىىع تىىل المنىىةرو التارىىة الم ىىةه العذتىىة الترتىىة إذ تىىت الفشف ع Cyanobacteria الماللة للمىاد الك درافةرتان ىة اممماعىىىةت تفت رىىىة معراتىىىة لكىىىة الاىىىدرا علىىى تالىىىي المىىىاد الك درافةرتان ىة تشىمي Pseudomonas,Marinobacter, Alcanivorax, Sphinogomonas, Micrococcus, Cellumonas Gordonia ) 6 (.ذفر )7( ا الفة نىةت الا ىىىىة الدب اىىىىة المنتشىىىىرا تىىىىل الترتىىىىة تسىىىىتعمي الك ىىىىدرافرتانةت النار ىىىىة فميىىىىةدر للفرتىىىىا الرةبىىىىة تعمل ىىىىة التالىىىىي الا ىىىىا للنار الاةت اتنت مرفتةت تعةلة سرا ة إ عمل ىىىىة المعةلمىىىىة الا ا ىىىىة ااىىىىدا مىىىى اتضىىىىي الرىىىىرو تستعةدا الترتىة الملاثىة اذلىخ تةسىتعمةي الفة نىةت الا ىة الدب اىة التىىىىل تالىىىىي الك ىىىىدرافرتانةت النار ىىىىة السىىىىةمة ياانكىىىىة عمل ىىىىة تس رة اتعةلة م ا ى التفلاىة اتنرتىو على مسىةاةت اسىعة ممة ؤد ال تالي فةمي للملاثةت (8(.

2 Selective Agar base (MYP) المواد وط ارئق العمل عينات النفط الخام م لتت ع نةت نار فرفاخ الاةت المتاسر م ميا ت مل تةستعمةي بنةنل مةم ة معامة امعتمة امعلمة ا افت ااالت تل مفة تةرد لا عينات التربة اتستعمةي. غلاكة ممعت ع نةت الترتة م عمو ( 112 ) ست م مابع ماتلاة تل ميةتل اا انةت اهل ة تل مد نة السل مةن ة المذفارا عل التالل )ا انةت ب ا ا انةت هةا ميا سا ار ميا ه ا ميا اةا (ااضعت تل اف ةس تهست ف ة معامة امعلمة انالت ال الماتتر. عزل الدراسة البكتيريا المحللة للنفط الخام المستخدمة في هذه أ وسط االمالح المعدنية BHM ا ضر الاسر تتعة لى Malatova عةت 5 تفا هذا الاسر م ا مه ا ت ة : )1g) KH2PO4 1g( MgSO4 (.2g) (NH4)2SO4 (1g) KNO3) (.2g) FeCl3 (.5g) CaCl2 المرف تذاب هذه ا مه الااد تلا ا ار تل لتر م المة المارر ا ع دي ا س الك درام نل ال 7 ثت عات تمكة المؤيدا تدرمة ا اررا ت لمدا 11 دب اة. استعمي هذا الاسر تل تمرتة ب ةس نستة الاادا الفمل للنار الاةت. ب وسط اختياري لبكتريا Bacillus cereus Selective ا ضر هذا الاسر Agar base (MYP) 43 g م اسر اسب تعل مةت الشرفة المينعة تإذاتة المة المارر الفمي الامت ال 9 ml تل 1 ml م ثت عات تمكة المؤيدا تدرمة ا اررا ت لمدا 11 دب اة ترد الاسر ال درمة ا اررا 5 45 م ا ة ثت اض ف 1 ml مستالب ياةر الت ض Egg yolk emulsion الض ف م 2 Polymyxin B م مالاي ml استعمي هذا الاسر تات ةر تفترة Bacillus cereus ااتتةر بةتل تكة عل اللس ث ن (9).lecithinase ج وسط األكار المغذي: 11 ا ض ر تإذاتة دب اة انتةج ان ت (28g ) م اتفةر المغذ تل لتر م المة المارر ثت عات تمكة المؤيدا تدرمة ا اررا ت لمدا الستعمي الاسر لغرض الع ي ا الل اد ارسة الااص الم رع ة الملكر ة للتفتر ة المع الة. د وسط السترمايد اكار اضر الاسر تإذاتة )46.7 ) g م افةر السترمة د تل لتر م المة المارر ت لمدا 11 دب اة لتفتر ة Pseudomonas. ه وسط اكار الدم االساس ثت عات تمكة المؤيدا تدرمة ار ارا ا استعمي الاسر فانه اسر انتاة ل ا ضىر هىذا الاسىر تاسىب تعل مىةت الشىرفة الميىنعة ثىت عاىت تمكىىة المؤيىدا تدرمىة اىى اررا ت لمىدا 11 دب اىىة اتىىىىرخ ل تىىىىرد تدرمىىىىة اىىىى اررا 51 م ا ىىىىة ثىىىىت اضىىىى ف ال ىىىىه دت اتنسىة تنسىتة % 1 مى ج م ىدا اسىتعمي هىذا الاسىر للفشىف عىىىىىى بىىىىىىدرا العىىىىىى تت التفت ر ىىىىىىة علىىىىىى انتىىىىىىةج اتنىىىىىى ت الاىىىىىىةي (1(hemolysin Bacillus cereus شكل )( يوضح نمو العزالت ونوع التحلل على وسط اكار الدم 122

3 قدرة العزالت البكتيرية على تفكي وسط الهيدروكربون الصلب ااىذت ع نىة ا نكىة (1 g) تاىةت ف عشىرة ثىت ناىي 1( ml مى مى فىي نىا ترتىة اعمىي لكىة ( فىي مى التاا اى الاىىةمس مىى انةت ىىب اتاتتىىةر الىى ارتىىةو تتىىر ال ارتىع اتعىىد ذلىىخ ي ب اسر ا مه المعدن ة تل اترتىةو ترفىت للتيىلب ثىت رش علىى اترتىىةو مالىىاي ا ثىىر الىىنار الاىىةت )1% )v/v اضىىنت ابرتىىةو تىىل الاةضىىنة تدرمىىة اىى اررا 37 ت لمىىدا 72 سىىىىةعة تفىىىىررت العمل ىىىىة مىىىى ارت عد ىىىىدا اسىىىىتعمي هىىىىذا الاسىىىىر لغرتلىىىىىىىة العىىىىىىى تت الفاىىىىىىىا ا الاىىىىىىىةدرا علىىىىىىى تال ىىىىىىىي المرفتىىىىىىىةت الك درافةرتان ة ع غ رهة. الغربلة الثانوية واختيار العزالت األكثر كفاءة الفاأهة تعىىىد اات ىىىىةر العىىىى تت الاىىىىةدرا علىىىى تال ىىىىي الىىىىنار الاىىىىةت م الغرتلة ا ال ة نم ت مرا لارى عل اسر اتمىه المعدن ىىة المعرتىىة لفاىىة العىى تت ىىتت ذلىىخ مىى اىىهي تشىىف ي المنراىىة الاضىىاة )الشىىاةتة ) اذلىىخ مىى اىىهي رش مالىىاي لث ىىىر الىىىنار الاىىىةت v/v( 1%( تشىىىفي مااىىىد علىىى سىىىر لرتةو اسر لفةر BHM اليلتة إذ ا ثنىة ل اث ىي ل ثىر تتاىر تا ار ا تتا رتاة م النار الاةت عل سر ا فىةر ا رعىت الع تت التفت ر ة النا ة التىل تىت الايىاي عل كىة مسىتاة اذلىخ تنشرهة عل دا را بررهىة (1 سىت ) تىل منتيىف إرتىةو BHM اليىلتة تابىع ثىه مفىر ارت لفىي ع لىة ثىت اضىنت ابرتىةو تدرمىة اىى اررا C 37 المىىدا ) (سىةعة ابىىد اات ىىرت الع تت التفت رة التل لعرت بر ار لفتر. تشخيص العزالت المنتخبة في الد ارسة (11). ش ايىىت ع لتىىة تفت ر ىىة مىى مممىىا العىى تت الماللىىة للىىنار الاىىىىةت مىىىى مىىىىابع ا انةت هةا الانكة اد ارسىة بامكىة ماتلاىىىى ت ىىىى اهىىىىل ع لىىىىة B22 مىىىى ا D32 م ميا ه ىا ااىدد امىت المسىتعمرا لمسىىتعم ارت تفترىىة Bacillus cereus ا تعىد التأفىد مى إ تلىخ المسىتعم ارت مشىةتكة aeruginosa اتعىىىد تنم تكىىىة علىىى ااسىىىةر انتاة ىىىة ( Pseudomonas MYP, )Cetrimide اات ىىرت ع نىىة مىى المسىىتعم ارت الممةثلىىة ليىىاةت هىىذه التفترة اذلخ تأاذ مساة تاسرة لاب الى ر انشىره على شىراة مةم ة معامة اتثت ته ام ثت تيت غة تيىتغة فى ارت امعة نىة شىىفي الال ىىىة التفت ر ىىة امابىىىع السىىىتا ارت ت كىىة ا عىىى ررىىىو ااتتىىىىىىةر اتافسىىىىىىد الفتىىىىىىةل اتنىىىىىىداي المث ىىىىىىي اتامىىىىىىر ا استكهخ الست ارت ا ااتتةر ال ار الارفة )12). د ارسة الظروف البيئية المثلى لنمو العزالت البكتيرية المحللة للمركبات الهيدروكاربونية: أ تأثير مدة الحضن في نمو العزالت البكتيرية ا ml( 1( مىى اسىىر ا مىىه المعدن ىىة تىىل دارو سعة ml( 25( اعىدي الىربت الك ىدرام نل الى )7( اعامىت تىل المؤيىدا تدرمىة اى اررا ت المىدا 15 دب اىة اتعىدمة ت ردت الدارو الى درمىة 45 ت لضى ف لكىة الىنار الاىةت المعاىت تةلترشىى فميىىدر للفرتىىا الرةبىىة تترف ىى % 1 ثىىت لااىىت الىىىىدارو تىىىىى).1ml ( مىىىى اللاىىىىة التفت ىىىىر للعىىىى تت المنتاتىىىىة )D32 B22(, لتاد ىد لتضىىي مىدا اضىةنة لفىي ع لىىة ا ا ضىنت الىدارو تىل الاةضىنة الكى ا ا تسىرعة 1 دارا/دب اىة ادرمة ا اررا 37 ت لمدا 5 ل ةت بدرت اعداد الاه ىة انسىتة استكهخ الك درافرتانةت اتعىد مىدا اضى ماتلاىة ) ( سةعة ب البكتيرية: تأثير ت اركيز مختلفة من النفط الخام في نمو العزالت اضىىىع (1ml( مىىى اسىىىر اتمىىىه المعدن ىىىة تىىىل دارو مارار ىة سىعة ml( 25( اعىدي الىربت الك ىدرام نل إلى ( ) 7 اع امىىىىىت الىىىىىدارو تةلمؤيىىىىىدا تدرمىىىىىة ت المىىىىىدا 15 دب اىىة الضىى ات إلىى الىىدارو ت ارف ىى ماتلاىىة مىى, 1,.5( الىىنار الاىىةت (% 3, 2 المعامىة تةلترشى لتاد ىد لتضىي ترف ىىىى للىىىىنار الاىىىىةت لنمىىىىا فىىىىي ع لىىىىة ا لااىىىىت الىىىىدارو تىىىىى ).1ml( مىىىىىىىىىى اللاىىىىىىىىىىة لفىىىىىىىىىىي مىىىىىىىىىى العىىىىىىىىىى لت المنتاتتىىىىىىىىىى )B22,D32( ااضنت الدارو تىل الاةضىنة الكى ا ا تسىرعة 1 دارا/دب اىة اتدرمىة اى اررا 37 ت المىدا 1 سىةعة ا بدرت نستة استكهخ الك درافةرتانةت حساب النسبة المئوية إلستهال الهيدروكاربونات اسىىىتعملت الرر اىىىة الا ن ىىىة تىىىل اسىىىةب نسىىىتة إسىىىتكهخ الك ىىىىىدرافةرتانةت تاسىىىىىب (13) مىىىىى اىىىىىهي اسىىىىىةب فم ىىىىىىة المتتاىىىل مىىى الك ىىىدرافةرتانةت اذلىىىخ عىىى رر ىىىو لاىىىذ اربىىىة ترشىى معامىىة نىىا اتمىىة )No.1( Whatman filter paper اتما اكىىىىىة تىىىىىة ات Oven لمىىىىىدا 24 سىىىىىةعة تدرمىىىىىة 45 ت اا نكىىة ثىىت ر ش ىى الاسىىر تاربىىة الترشىى اتعىىدهة م اىىف تىىىىىىىة ات Oven لمىىىىىىىدا 24 سىىىىىىىةعة تدرمىىىىىىىة 45 ت ثىىىىىىىت ا لمعرتىىة الاىىرو تىىةلا بتىىي اتعىىد الترشىى إذ ل ا ال ارسىىب مثىىىي المتتاىىىل مىىى الك ىىىدرافةرتانةت مىىىع مهالىىىة ل العمل ىىىة فةملة تتت تات لراف معامة اسب الاةنا التةلل: R =نستة المستكلخ م الك درافةرتانةت A =فم ة الك درافةرتانةت المضةتة B =فم ة المتتال م الك درافةرتانةت النتائج والمناقشة R= (AB/A) x1% قدرة العزالت البكتيرية على تفكي وسط الهيدروكربون الصلب ا تعد ر الع تت عل اسر BHM التفتر ة تنما تعد مع النار الاةت لاال 24 سةعة اتال م الاض تدل

4 النما تل اترتةو ا ايلت تغ ارت عل رتاة النار المامادا عل الاسر اذ اات لت فم تكة م الاسر اليتات تشفي بر ارت يغ را تستب تممع الاه ة التفت رة االكة فمة تل الشفي ( 2 (. الكر تتة نة تل فم ة النما ت المستعم ارت الماتلاة عل هذا الاسر تاد الكرت نتة الد ارسة تأ )25( ع لة تفت رة )65.78 (% فةنت بةدرا عل استكهخ النار الاةت ا الفة في عل اده ميد ار للفةرتا الرةبة م ممما )38( ع لة تل ا تشلت )13( ع لة تفت رة )34.22(% تل استكهفه. ابد ع ى ستب عدت نما التفترة عل هذا الاسر ال عدت امتهفكة الاةتل ة عل تاف خ هذه المرفتةت نت مة لعدت اماد النلةت اتن مل المتايص )14(. تتعة لذلخ انتاتت الع تت الفاا ا تل اتستكهخ بم ار التمةرب الهااة. A B شكل )2( يوضح نمو العزالت على وسط BHM مع النفط الخام عند درجة ح اررة C 37 و ph(7( الصورة A تمثل نمو العزلة واستهال النفط الخام اما الصورة B توضح فشل العزلة من النمو على وسط BHM واستهال النفط. الغربلة الثانوية واختيار العزالت الكفوءة اعتمىدت نتىة فاىة ا اسىتكهخ الىنار الاىةت مى اىهي ب ىةس برىر المنىةرو الشىاةتة على اسىر افىةر BHM اليىلب الكىرت ا الع لىة Pseudomonas aeruginosa اعرىت برىر )3.1cm( اعلى مىى الع لىة cm( Bacillus cereus.)2.6 شفي )3( اض ذلخ (v/v الحضن عند شكل )3( يوضح تشكيل المنطقة الشفافة على وسط BHM الصلب مع محلول ايثيري النفط الخام )%1 بدرجة ح اررة C 37 ولمدة 1 ساعة الملكر ة اتعض الياةت الاسلم ة الااايةت الت اف م ة ة ا ذلخ تةتعتمةد عل مدااي التشا ص المعتمدا. فمة مت تل مداي )1( ا) 2(. تشخيص العزالت البكتيرية ذات الكفاءة العالية شايت الع لت الفاا ا المرشاة للد ارسة اهل )D32 ا B22) المع الة م ت ت ماتلات عل اسةس ياةتكة جدول )1( المواصفات الزرعية و المجهرية للعزالت البكتيرية المنتخبة و D32 B22 العزلة الشكل دائري دائري طبيعة المستعمرات على الوسط المغذي الصلب اللون اخضر ابيض القوام جاف جاف الحافة منتظمة متعرجة الشفافية معتمة معتمة االرتفاع مسطحة مسطحة شكل الخلية عصوي عصوي تجمع الخلية مفرد مفرد صبغة كرام سالبة موجبة B22 D32

5 جدول )2( الفحوصات الكيموحيوية للعزالت البكتيرية المنتخبة B22 و D32 D32 B22 انواع البكتريا ت االختبارات Catalase 1 Oxidase 2 االندول 3 Methyl red 4 Voges Proskauer 5 تحلل النشأ 6 Motility 7 Urease 8 Simmon Citrate 9 النمو على وسط الماكونكي 1 /ح CO2/ /ح اختبارالكلكلر KIA 11 انتاج انزيم اللسيثين 12 β α Hymolysis 13 انتاج H2S 14 النمو على وسط السترمايد 15 النمو على وسط MYP 16 فحص السبورات تحت المجهر 17 )( النتيجة الموجبة للفحص ) (النتيجة السالبة للفحص β تحلل كامل للدم α تحلل جزئي للدم ق/ح قاعدي/حامضي. تأثير مدة الحضن درس تأث ر مدا الاض الماتلاة تل نما الع تت تعد تنم تكة عل اسر اتمه المعدن ة السة ي الاةا عل النار الاةت تترف % 1 37 ت اتربت ه درام نل 7 اعند درمة ا اررا اتسرعة رج 1 دارا/دب اة ابارنت النتة تنستة اتستكهخ ال ةدا تل اعداد الاه ة فدتلة عل تاف خ النار الاةت الشفي (5( لتفترة اتال م الاض الاةت ات ت نستة استكهخ النار الاةت تاد تلغت اهي الى )24( سةعة )%6.6( استمر التالي الا ا للنار ايي تعد 1 سةعة )%42.1( امة تفترة.B cereus تاد فةنت نستة استكهخ النار الاةت ت كة اهي )24( سةعة اتال )%5.8( استمر تاف فكة للنار الاةت ات ايلت النستة تعد 1 سةعة )%32.8(. تعد د ارسة فاة ا الع لت التفت ر ت مناردا عل استكهخ المرفتةت الك درافةرتان ة لاة تفت ر م داج م ب د الد ارسة تيارا الناع aeruginosa( P. تت تاض ر B. cereus ) ابد ااضات النتة استكهخ النار الاةت تفاة ا اعل م استكهخ في م ناعل التفتر ة تيارا مناردا تتلغت اهي الى) 24 ( سةعة اتال )%9.6( استمر اتستكهخ تةت د ةد ات 1 تعد تل. )%51.7( سةعة تؤفىىىىد فث ىىىىر مىىىى الد ارسىىىىةت علىىىى تعةل ىىىىة التىىىى ر التفت ىىىىر تىىىىىل تاف ىىىىىخ المرفتىىىىىةت النار ىىىىىة )15( اتفمىىىىى الاة ىىىىىدا مىىىىى اسىىىىىىىتعمةي اللاىىىىىىىة التفت ىىىىىىىر المىىىىىىى داج تةلاىىىىىىىدرا علىىىىىىى تال ىىىىىىىي ماتلىىىىىىف المرفتىىىىىىةت الك درافرتان ىىىىىىة تىىىىىىدا تىىىىىى ارفت للمرفتىىىىىىةت الاسر ة السةمة )11(. (17) ذفر ضم ال ر تفت ر ل تفترة.P aeruginosa استعملت Consortium الثتت ل لكة الادرا عل تال ي ت المارفةت ابد ع ي هذا الال ر م الترتة الم ةه المات ة الملاثة تةلمشتاةت النار ة. لشةر )18( إل ا.P aeruginosa بد اعرت اعل نستة تالي للنار الاةت تعد مدا اضةنة )84( ا ةت عند درمة ا اررا 3 ت تةلنار الاةت تار هذا ل ست نكة مع الة م الت ة الملاثة الف ا ضة تمتهفكة اتن مةت الماللة للك درافرتانةت ا فثر فاة ا انشةرة م التفت رة اتارى.

6 النسبة المئوية لالستهالك % H 96H 72H 48H 24H مدة الحضن )بالساعات( مدة الحضن شكل) 4 (: تأثير مدة الحضن المختلفة في نسبة استهال النفط الخام لبكتريا aeruginosa P. bacterial inoculum في وسط االمالح المعدنية الحاوي على %1 نفط خام وفي رقم هيدروجيني( 7 ( وبدرجة ح اررة 37 م وبسرعة مزج 1 دورة/دقيقة ولمدة بين 24 1 ساعة. د ارسة تأثير تركيز النفط الخام في نمو العزالت البكتريا اضىىىىىىنت اتاسىىىىىىةر ال رع ىىىىىىة الملااىىىىىىة تىىىىىىةلع تت المنتاتىىىىىىة المشايىىة مسىىتاة.P aeruginosa ا.B cerues ا bacterial inoculum عنىىد درمىىة الاىى اررا 37 ت 1 2 3( الربت الك درام نل )7( اتإضةتة ت ارف ماتلاة مى الىنار الاىةت.5 (% فمىىىىىىىىىىىىىة ماضىىىىىىىىىىىىى تىىىىىىىىىىىىىل اتشىىىىىىىىىىىىىفةي )1( )1( )7( )8(. الكىىىىىىرت النتىىىىىىة ااىىىىىىتهف العىىىىىى تت تىىىىىىل بىىدرتكة علىى تاف ىىخ الىىنار الاىىةت المسىىتعمي تماتلىىف الت ارف ىى. تاىىىد فةنىىىت نسىىىتة اسىىىتكهخ للع لىىىة.P aeruginosa الترف ىىىى عنىىىد %.5 اىىىىهي 24 سىىىىةعة اتالىىىى )%3.2( اسىىىىتمر اتسىىىتكهخ تةلت ا ىىىد اتىىى تلىىى تعىىىد 1 سىىىةعة )%25.8( امىىىة الع لىة Bacillus cereus تتلغىت نسىتة اتسىتكهخ )2.4 %( تعىىىد 24 سىىىةعة اضىىى امىىىة تعىىىد 1 سىىىةعة تاىىىد تلغىىىت نسىىىتة اتسىىتكهخ )%21.4( امىىىة عنىىىد الترف ىىى اسىىتكهخ الىىنار الاىىةت تعىىد 24 % 1 تفةنىىىت نسىىىتة سىىةعة تاعىىي aeruginosa P. ( %4.9( اتعىد مىدا اضى 1 سىةعة ا داد اتسىتكهخ اتى تلىىىىى )%35.8( امىىىىىة تفترىىىىىة.B cereus تلغىىىىىت نسىىىىىتة اتسىتكهخ )%3.4( عنىد 24 سىةعة اتالى اتعىد مىدا تاضى 1 سىىىىةعة تلغىىىىت نسىىىىتة اتسىىىىتكهخ )%27.2( امىىىىة نسىىىىىتة اتستكهخ عند الترف )2 ) 3, تتلغت نسىتة اسىتكهخ الىنار الاىىةت تاعىىي تفترىىة.P aeruginosa )%2.2( ا )%1.2( علىى التىىالل تعىىد 24 سىىةعة اضىى اتىىدرمت نسىىتة اتسىىتكهخ تةت د ةد اتى تلغىت تعىد 1 سىةعة )%17.8( ا )%11.5( على التىالل امىة تفترىة.B cereus تتلغىت نسىتة اسىتكهفكة للىىنار الاىىةت اىىهي 24 سىىةعة اتالىى )%1.5( ا )%1( علىى التىىىىالل ا ضىىىىة ا تعىىىىد مىىىىدا اضىىىىةنة 1 سىىىىةعة تلغىىىىت نسىىىىتة اتستكهخ )%13.7( ا )%8.7( عل التالل. امىة تةلنسىتة لترف ى الىنار الاىةت امى اىهي التمىةرب نهاىل ا الترف ىى )%1( هىىا اتمثىىي إذ تااىىو اتضىىي اسىىتكهخ للىىنار الاىىةت امىى اىىهي ذلىىخ نىىدرخ ا ضىىة انىىه اذا فىىة ترف ىى الىىنار ابىىىي مىىى )%1( تأنىىىه ىىىؤثر سىىىلتة تىىىل نسىىىتة اتسىىىتكهخ النمىىىا الغ ىر فىةتل للعى تت تسىتب ناىص ميىدر الفىةرتا امىة اذا فىة اعلىىى مىىى )%1( سىىىاف فىىىا لىىىه تىىىأث ر سىىىةت علىىى الفة نىىىةت الا ة الدب اة ممة ستب تىأث ار فت ى ار تىل نسىتة اتسىتكهخ امعىدي النما (. )11 اتعىىىىىىىد د ارسىىىىىىىة العىىىىىىى تت تشىىىىىىىفي مناىىىىىىىرد امعرتىىىىىىىة نسىىىىىىىب تال لكىىىىىىة للىىىىىىنار الاىىىىىىةت تاىىىىىىد لمرىىىىىىت تمىىىىىىةرب معىىىىىىةمهت تىىىىىى ر تىىىىى العىىىىىى لت المنتاتتىىىىىى تىىىىىناس اللىىىىىىراف اللكىىىىىىرت النتىىىىىىة نسىىىب اسىىىتكهخ اعلىىى ممىىىة لىىىا فةنىىىت تشىىىفي مناىىىرد إذ اعرىىىت نسىىىىتة اسىىىىتكهخ اعلىىىى عنىىىىد الترف ىىىى )%1( ناىىىىر اىىىىةت افةنىىىىت )%5.7( امىىىىىىىىىىىىىىىىىىىة عنىىىىىىىىىىىىىىىىىىىد الترف ىىىىىىىىىىىىىىىىىىى )%.5( تفةنىىىىىىىىىىىىىىىىىىىت ( %33.2( اعنىىىىىىىىد الترف ىىىىىىىى )%2( تتلغىىىىىىىىت نسىىىىىىىىتة اتسىىىىىىىىتكهخ )%28.7( اعنىىىىىىىد الترف ىىىىىىى )%3( تلغىىىىىىىت نسىىىىىىىتة اتسىىىىىىىتكهخ )%.2( عنىىىىىىىد مىىىىىىىدا اضىىىىىىى 1 سىىىىىىىةعة. اتااىىىىىىىت هىىىىىىىذه الد ارسىىىىىىة تنتة مكىىىىىىة مىىىىىىع الفث ىىىىىىر مىىىىىى الد ارسىىىىىىةت التىىىىىىل ام ارهىىىىىىة التىىىىىةاث امىىىىىىنكت ( 21( الىىىىىذ افىىىىىىدا تنتىىىىىة مكت تىىىىىىة التىىىىىى ر تىىىى اتنىىىىا التفت رىىىىة فىىىىة اتفاىىىىأ تىىىىل تال ىىىىي مرفتىىىىةت الىىىىنار الاةت. امة )7) تاد ت ل اتا ة الممكرة فةنت م اتضي العامي الماللة للك درافةرتانةت المشتعة الداالة تل ترف ب النار الاةت المتدتو. تل معلت الاةتت sp. Bacillus سةدت ااةية تل الترتة الملاثة تةلنار الاةت بد فا هذا تستب بدرا هذه التفترة عل إنتةج الستا ارت التل بد تام كة م اآلثةر السم ة للك درافرتانةت.( 12 )

7 نسبة المئوية لالستهالك % النسبة المئوية لالستهالك % النسبة المئوية لالستهالك % H H 72H 48H مدة الحضن )بالساعات( تركيز % H شكل )2( يوضح تأثير تركيز النفط الخام على التحلل الحيوي للنفط الخام بفعل بكتريا.B cereus.p aeruginosa ph ( المضاف له )%.5( نفط خام وعند درجة ح اررة )37 م ( و) BHM المعزولة في وسط bacterial inoculum 7 ولمدة 24( 1 ) ساعة وسرعة مزج 1 دورة/دقيقة تركيز % H H 72H H مدة الحضن )بالساعات( H 3 1 شكل )6( يوضح تأثير تركيز النفط الخام على التحلل الحيوي للنفط الخام بفعل بكتريا.B cereus.p aeruginosa bacterial inoculum المعزولة في وسط BHM المضاف له )%1( نفط خام وعند درجة ح اررة )37 م ( و) ( 7 ph ولمدة 24( ) 1 ساعة وسرعة مزج 1 دورة/دقيقة H 96H 72H 48H 24H مدة الحضن )بالساعات( تركيز % 2 شكل )7( يوضح تأثير تركيز النفط الخام على التحلل الحيوي للنفط الخام بفعل بكتريا.B cereus.p aeruginosa bacterial inoculum المعزولة في وسط BHM المضاف له )2 %( نفط خام وعند درجة ح اررة )37 م ( و) ( 7 ph ولمدة 24( ) 1 ساعة وسرعة مزج 1 دورة/دقيقة

8 النسبة المئوية لالستهالك % تركيز % H H H H H مدة الحضن ( بالساعات( شكل ( 8 ) يوضح تأثير تركيز النفط الخام على التحلل الحيوي للنفط الخام بفعل بكتريا.B cereus.p aeruginosa ph ( 7 المضاف له )3 %( نفط خام وبدرجة ح اررة )37 م ( و) BHM في وسط المعزولة bacterial inoculum ولمدة )24 1 ) ساعة وسرعة مزج 1 دورة/دقيقة Churchill Livingstone. Inc. New York, USA. 7. Diaz, M. P. ; Boyd, K. G.; Grigson, S. J. W. and Burgess, J. G. (2). Biodegradation of crude oil across a wide range of salinities by an extremely halotolerant bacterial consortium MPD. Mimmobilized onto polypropylene fibers. Biotechnology and Bioengineering. Vol. 79, No. 2, PP: AlJaff,B.M.A.(1998)Microbiological and genetical study on local isolates of Bacillus cereus. PhD thesis, university of Baghdad, Iraq. 9. Kumar A, Bisht BS, Joshi V, Dhewa T (11) Review on 1. Bioremediation of polluted environment: A management tool. 11. Int J Env Sci 1(6) 12. Latha, R. and Kalaivani, R., (12).Bacterial degradation of crude oil by gravimetric analysis. Advances in Applied Science Research, 3: MacFaddin, J.E. (). Individual Biochemical Tests in Biochemical for Identifications of Medical Bacteria. 3rd ed. Lippincott Williams and Wilkins. Philadelphia. USA. 14. Malatova, K.(5). Isolation and characterization of hydrocarbon degrading bacteria from environmental habitats in western New York State. المصادر 1. AcunaArguelles, M.E.; OlguinLora, P. and RazoFlores, E. (3). Toxicity and kinetic parameters of the aerobic biodegradation of the phenol and alkylphenols by a mixed culture. Biotechnol. Lett. 25: Arafa, M.A. (3). Biodegradation of some aromatic hydrocarbons (BTEXs) by a bacterial consortium isolated from polluted site in Saudi Arabia. Pak. J. Biol. Sci. 6(17): Atlas, M.R. (5). Hand book of media for Environmental Microbiology.2nd ed. Published by CRC press. Taylor and francis Group 6 Broken sound parkway NW. Boca Raton, FL Bachmann, R.T., Johnson, A.C., Edyvean, R.G.J., (14). Biotechnology in the petroleum industry: an overview. Int. Biodeterior. Biodegrad. 86, Brito, E. M., Guyoneaud, R., Goni Urriza, M. Ranchou peyruse, and Duran, R. 6. Characterization of hydrocarbonoclastic bacterial communities from mangrove sediments in Guanabara Bay. Brazil Research in microbiology 14: Collee, J.G.; Fraser, A.G.; Marmion, B.P. and Simmons, A. (1996). Practical Medical Microbiology. 14th ed. The

9 in a polluted soil using Bacillus subtilis.african J. Biotechnol. 7(12): Okoh, A. I. (3). Biodegradation of bonny light crude oil in soil microcosm by some bacterial strains isolated from crude oil flow stations saver pits in Nigeria. African. Journal of Biotechnology. Vol. 2(5), PP: Pepi, M.; Minacci, A.; Cello, F. D.; Baldi, D., and Fani, R. (3). Longterm analysis of diesel fuel consumption in a coculture of Acinetobactervenetianus, Pseudomonas putida and Alcaligenesfaecalis. Kluwer Academic publishers. Antonie Van Leeuwenhoek. 83: PP: 3 9. Netherlands. 22. Udofia U.S. and Ekpo M.A. (8). Rate of biodegradation of crude oil by microorganisms isolated from oil sludge environment. African Journal of Biotechnology, 7 (24): Zhou Changyi, Lin Qingyuan, Su Guocheng, et al 9. Isolation, characterization and study on properties of a strain for degrdation of offshore petroleum hydrocarbons [J]. Journal of Jimei University (Natural Science Section),, 14(1): 2428 Master thesis of science in chemistry, : Mariano,A.P.;Angelis,D.F.;Pirollo,M.P.S.; Contiero,J.andBonotto,D. M.(9).Investigation about the efficiency of the bioaugmentation technique when applied to diesel oil contaminated soil. Braz. Arch. Biol. Technol.,.52(5): Mc Genity,T.; Folwell,B.D.; McKew,B.A. and Sanni, G.O.(12). Marine crudeoil biodegradation: a central role for.agaticbiosystems, 8(1) : Mesdaghinia, A., Rezaie, S., Shariat, M., Nazmara, S. and Ali Mohammadi, M. (7). Isolation and Detection of MTBE Degrading Bacteria. Pakistan Journal of biological science, 8(7), Milic J.S.,V.P. Beskoski, M.V. Ilic, S.A.M. Ali, G.D. Gojgovic and M.M. Vrvic,( 9). Bioremediation of soil heavily contaminated with crude oil and its products : Compsition of the microbial consortium. J. Serbian Chem Soc.,74: Nwaogu L.A, Onyeze G.O.C. Nwabueze R.N (8). Degradation of diesel oil