??????? ?????? ?????? ???????? ??????

الخالصة اسممممممت تمممممم )Staphylococcus aureus ا استخالص وتنقية البروتين المرتبط بالفايبرونكتين من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية تنقيممممممة البمممممم تي عباس فاضل, انت بمم عادل عبيد حسوني السعدي الكلية التقنية المسيب رياض ك ازر, المعهد التقني المسيب الممممممم تبا برلنممممممريب نكتي عمم ا 6 بكتي يممة ممم مجممم جمهوريه سعدي ممممممم الجممممممدا ال لمممممم م لبكت يممممممر المكمممممم ا العنق ديممممممة ال بيممممممة ( 30( ) ع لممة تمم ال عمم ا عليهممر ممم م تبمم ا مدينممة الامب و م تبم العم ة العرممة نسم التقنيمر ال يرايمة مي كليمة العلم ي جرمعمة بامداد و ج يم علم م العم ا كر مة اا تبمر ا التش يعية التأكيدية لا ض التأكد م نقر تهر ند تهر عل انترج الب تي برلم جممر اسممت ل البمم تي بنبمم العممرلر البكتيمم م ممي جهممر المنبمم المبمم د الم تبا برلنريب نكتي )Cooling centrifuge ( تكسممي ال يممر البكت يممة مم ر العمم تية ب سممراة جهممر التكسممي الكه بممراي ( Sonicator ) و كمم المسممت ل الب تينممي ب سممراة كب يتممر الم نيمم م ث بعملية الديل الت شيح النرار لا ض الت ل م كب نسبة ممكنة م الم ح الش ااب الم ج د ي الم ل ا نقي المست ل بعممد نمم ال المسممت ل الم ا د عند جم ال الت يما الكه بمراي مي م الب تيني ب سراة ك م ت غ ا ير الت شيح اله مي علم عمم د م السمينرك يا 200-S إ اننعمل نمتمر النممرتل علمم امم ا ممم جي 080 نممرن ميت و تمم التأكممد ممم نقممر بمم تي االتعممرر السمما ي لمم ب همم مممة الج يامي با يقمة الت شميح اله ممي م كبت ايثمرن ا قمد نمد الم الج يامي مي م ال رلمة بمقمدا ااك يما امريمد المتعمدد ب جم د المم اد المرسم ة SDS بينم نتمرال ت عمي الت يما الكه بمراي علم م ااك يما امريمد المتعمدد ب جم د المم اد المرسم ة للبم تي البم تي إ SDS 58000( ) دالتم ) 59000 ( تبمي مم م ا ماربقمة الم الج ياي للب تي مع اا ا الج ياية للب تينر القيرسية ا الب تي الب تي الم تبا برلنريب نكتي Abstract The extraction and characterization of fibronectin binding protein from cellular wall of Staphylococcus aureus, was carried out 6 out of 30 isolates bacterial specimens had been selected which had been get from medical city laboratories, public health laboratory and biotechnology department of college of science / Baghdad university All diagnostic confirm test had been done in order to be sure of its purity and ability on production of fibronectin binding protein Extraction of protein included, bacterial suspension centrifugation by cooling centrifuge followed by bacterial cells destruction by sonicater device, also protein extract had been concentrated by ammonium sulphate, followed by dialysis operation and ultra filtration in order to get ride high percent of salts and reasted which are present in solvent protein Purification results were revealed that molecular weight by gel filtration chromatography method, on the other hand electrophoresis method on polyacrylamide gel at present of denatured materials for protein SDS and mercaptoethanol molecular weight was (59000 ) and (58000 ) dalton approximately, the protein was afibronectin binding protein via the compared of protein with standerd proteins المقدمة تعمد بكت يمر المكم ا العنق ديمة ال بيمة Staphylococcus aureus العرمما الممم ض ال ايسمي مي را م اض المجتمع المكتسبة عربر المستشن, يعد التج ي النني المرمي الم ال ايسمي لبكت يمر المك ا العنق دية ال بية S aureus تنتل بكت ير S aureus (Kluytmans et al,1997 العديد م السم التي تتجمع تبعر لنعرلية البكت ير مثا س - لنر α) -Toxin) تمددم الم رم مم بمم تي نممة الج ياممي 33 كيلمم دالتمم يسممبب ممد ثقمم ب تايمم ا لتهربيممة ممي يممر اللبممرا متسلسما نمد ينتشم يمددم الم مر تمدع مت ممث التجم ث المدم م al, (Javanka et 1303

Journal of Babylon University/Pure and Applied Sciences/ No(4)/ Vol(22): 2014 (2003 al, ;2005 Beyan et ) مسترمد المم ينر المقميح ت كيبيممر يتكم ممم ممرض مينيممة متجرنسممة رانهممر ممي الت ممرد مممع ب تينممر العممن الثممرني لمعقممد الت ا ممر النسممجي Major histocompatapility (MHC II) complex II مسمببة م ال يمر التأايمة للترمرع ت يم السمريت كري cytokine الب تينمر المنرعية( 1999, (Bhakdi ج ياة ال ينر الدا لي المع م ) (enterotoxin مسمد لة عم مدا م رمي ممر مت مممة العممدمة السمممية التسممم الامم ااي يمم لسممم مت مممة العممدمة السمممية ال ا ت كيبممر يمرثمما المم ينر المعمم م C,B الجممي المسممد ا عمم ينممر مت مممث العممدمث السممميث اا ا ي جممد بنسممبة %20 ممم بكت يممر S (Bhakdi et al,1999 ) aureus يتكمم جممدا بكت يممر S aureus ممم ببتيممد ك يكر peptidoglycan ال ممرمض الممد ني Lipoteichoic acid العديمد مم النم اتل السمرمة المنم التمي مم الم تمما تشمت مي العمدمة السممية ب سراة المك ا العنق دية ) 1999, Cohen (Sriskandan and بينمر ات نرلم عم اض للعمدمة عنمدمر يكم المعما م كم بعرمما التن م الم مي لنمر ) α (Tumor Necrosis Factor- ا نمث يعمد مد سريت كينر اللتهرب ال لي المسد ا ع العدمة السمية ي البكت ير السرلبة لعباة غم ا, كممر ا م نتمرج عرمما التن م الم مي لنمر ) α (Tumor Necrosis Factor- م غي كمر ي للتسمبب بمأع اض العمدمة مي رلممة ال مممل بممرلمك ا العنق ديممة, لمم ل ممأ ا ليممة المدديممة المم العممدمة السمممية بممرلمك ا العنق ديممة نممد تكمم متعدد الع اما ),1999 Cohen (Sriskandan and النممريب نكتي مم عبممر عمم بمم تي سممك م Glycoprotein ج ياممي عممرا يقممد ب مم الي ) Skorstengaard et al, 1986 ; Ana et al,2002( 070kd ي تم م مي ت كيبمث علم اكثم مم %5 كر ب يمممد ا م تبامممة ممممع مسممتلمر ب تنيمممة تمممدع النتكممم ي Integrin يممم تبا ايرمممر ممممع مك نمممر مممر ج ل يممة ا مم ل مثمما الكم اجي Collage النممريب ي Fibrin الهيبممر ي Heparin النممريب نكتي يمكمم ا ي جممد علم شمكلي الم ااب Soluble globulin الم م يتكم مم مدتي ثمرن يتي مقمدا مر 050 كيل دالتم رتمر ال مدتر ت تبامر ممع بعرمهمر ب سمراة اعم ثنرايمة الكب يتيمد disulfide bonds ي جمد م ا الشمكا مي ب مر الد س ااا الجس الم تلنة مثما سمراا الن مر الشم كي الد ا علم العديمد مم سما ح ال يمر الا ايمة مي النسمجة الرمرمة )1978, older ) Yamada & اممر الشمكا ا م للنمريب نكتي هم الكل بيم لي غي ال ااب يتك ا الن م تبرا عد دا ثرن ية معقد ا التعمرر بكت يمر المكم ا العنق ديمة ال بيمة S aureus بأنسمجة المرمي تعتبم ال ام ال لم ل دا العمربر الم تلنمة و نمد اثبتم التجمر ب ا م البكت يمر لهمر القربليمة علم تام ي لليمر عديمد لام ض يرد ر ا تهر و تأكد بأ للنريب نكتي الد السرس ي م اريتهر م ا عتبر رلة ساية مي عمليمة اللتعرر التي ت عا بي النريب نكتي الم ج د ي ير المري مع بم تي االتعمرر السما ي المنم مم الجدا ال ل م للبكت ير ( نمد جمد ا البم تي المم تبا برلنمريب نكتي يتمأل مم ممدتي ثرنمم يتي )A ) B ا جممم ياي يقمممد ب مم الي ( 000000 دالتمم ) ت كيمم يبلمم مم الي 30 ملامم ي مليلتمم نمم يمد جيني ( 7 70 ) Proctor et al, 1982 ( ) ph و مم ثم تم ار ال يمر المعمربة منهمر ير اللبرا التي تشما ال ير الا اية ال ر جية الدا لية اللينية ب سمراة تكم ي جسم بمي البم تي المم تبا برلنممريب نكتي ممي البكت يممر ممريب نكتي ال ليممة البشمم ية عمم ا يممر جممم د مستلممممر رعمممة بهمممم ا البم تيممم تمدعم النتك يم ( al,1999 ) Kusela,1978 ; Van et al,1998 ; Joh et 1304

- المواد وطرائق العمل Materials and Methods جمع العينات جمع 30 مس ة س ي ية ع لة م م تب الع ة العرمة الم ك م الم تب التعليمي ي مدينة الاب نس التقنير ال يراية ي كلية العل ي جرمعة باداد م ج ال م تلنة م الجس ( الن و ال و البلع و الج ح و ن ح الجلد و اإلد ا و المهبا ) للنت م ي ا نيسر 0006 - تشخيص العينات تممم تشمممالج اثيممممازل اث ثمممة اعت مممعلا علممم اثرممموعل اث اعلمممة اثوائيمممعل اث ع ئ ل لع لمممة Difco, 1984 ; Cowan, 1985; Cruikshank et al,1975 ; Sneath et al,1986 ( ) Baron and Feingold, 1990 ; - استخالص البروتين المرتبط بالفايبرونكتين Extraction of fibronectin binding protein ت ت ري المست ل سب ا يقة ب اد د ( النتائج والمناقشة - العزل ا ر الب تيني سب مرجرل ) Halby, 1975) Bradford, 1976 Result and Discussion النترال للت م ع امر تقدي ت كي الب تي قد ند ) براستنرد إل من ني الب مي المعا البق م القيرسي ج د بكت ير المك ا العنق دية ال بيمة S aureus المسمببة للعديمد مم اإلعمممربر الم رمممية مممي 30 عينمممة لم رممم يعمممرن مممم التهربمممر الجممم ح ال ممم ر التهربمممر البلعممم ال التقي مر الجلديمة الم تلنمة مم لبكت ير المك ا العنق دية ال بية )6( S aureus م جمم ال م ل مي الجسم بعمد إجمم ال اا تبمر ا التش يعمية بلم عمدد االعمم ا 30 ع لة - التشخيص - الصفات المظهرية بمممممي الن ممممم ت ) Sood, 1989 ( - الصفات الزرعية المجهممممم م ا البكت يمممممر م جبمممممة لعمممممباة غممممم ا متجمعمممممة علممممم شمممممكا عنرنيمممممد العنمممممب كرنمم المسممتعم ا النرميممة علمم سمما الكممر المامم م داا يممة ملسممرل م تنعممة بعمم نليلممة عمم سمماح ال سمما ال عممي ا لممم ك يممممي معمممت و كممممر لممم تايممم لمم سممما كمممر الممممرنيت ا المل مممي مممي المنمممرار الم يامممة برلمسممتعم ا النرميممة ممم اللم الم دم إلمم اللم العممن و لمم ل جم د كرشمم النينم ا ال ممم ممممر يممدا علمم نربلية البكت ير عل ت م سك المرنيت ا يعد ا ال سا م ال سرا التن يقيمة لبكت يمر المكم ا العنق ديمة ) Macfadin, 1985 ال بية ( S aureus - انتاج انزيم الكوكيليز إل ب مر متجلاث ا اا تبر بعد ا تبر ت م سك المرنيت ا إ تمكن نس م الع ا م ت يا الب مر السرالة )Fibrin( إل النريب ي )Fibrinogen( ل لقد تهر عل إنتمرج إنم ي الكم كيلي ) Coagulase) ) Dickson and Marples,1986 ( - اختبار انتاج األسيتوين الم م يقم بت يما النمريب ين جي 1305

Journal of Babylon University/Pure and Applied Sciences/ No(4)/ Vol(22): 2014 ج م ا اا تبمر للعم ا الم جبمة ا تبمر إنتمرج الكم كيلي ( )Coagulase لم لام ض التن يمر بمي بكت يمر S بقيمة العم ا ال م ل الم جبمة ا تبمر الكم كيلي إ تميم عم ا بكت يمر S aureus aureus بك نهممر م جبممة ا تبممر إنتممرج السمميت ي ممم مم ا ت مم ا لمم ال سمما المامم م ال ممر م علمم الممم البكتي م إل الل ال دم ( 1975, al ) Cruickshank et - انتاج االنزيم المحلل للدم اجم م مم ا اا تبممر للعمم ا البكت يممة الم جبممة لن مم الكم كيلي ااسمميت ي لامم ض د اسممة نم الت لمما الدم م انترج البكت ير ان ي الهيم ايسي كرن النتيجة م جبة ا كر الت لا الدم م مم نم بيتمر ارم ر م ا المستعم ا ( 1985, Cowan ) استخالص وتنقية البروتين المرتبط بالفايبرونكتين ممم بقريممر ال يممر المت للممة اسممت د ممما ال اسممب المتكمم تي للبمم بعممد ا تممم عمليممة ااسممت ) الب تيني ( 1975, Halby ال اشح ال ر م عل المست ل المنمتل مم بكت يمر المكم ا العنق ديمة ال بيمة S aureus المم تبا برلنمريب نكتي البم تي ت ت كيم ا ر ال ل الت سيب ع ا عل د جة م النقر برست دا ث م نسبة كبي م المرل الش ااب لل للت ل الثرلثمة الت كيمم الا يقمة الثرنيممة الت كيم بعمليمة الممديل بمأم ح غيم عرم ية تمثلم برسمت دا كب يتممر الم نيم ب سراة الت شيح النرار ( Ultrafiltration ) الجيمد بعمدد مم ال عمرا م ا الهم يمتمر ا -S 200 Sephacryl نقي الب تي برست دا عم د ال رجمة إلم التقيمد بمرل ن ب ر المقر مة ل نرارا س عة الج ير التي تسرعد عل النعما الجيمد السم يع د الثبمر لممد ا يلمة و يمكم ب سمراتث تقمدي الم الت كي الي ني ر عم سمه لة الت رمي الهيد جيني ال رمعية التمي يكم عم الشم نة التمي ي ملهمر منق ج اير باض الن رمر الج ياي للب تي س ال كر ) نمد اسمت د م ا 1985, Pharmacia يهمر إ يمكم اسمت دامث لمم ا عديمد مي عما الب تينمر ( 00000 بمي مد د النعما لهم ا الهم مي الد اسمة ال رليمة لم لقد تمة علم النعما يم تبلم الهم, Stellwagen عل و ممر يكسبث ند اكب عل النعا تسمح برل ع ا عل د جة نقر 000000 دالت يرد نقر الب تي إل ند دل است دامنر له ا اله ) ) 1990 توصيف البروتين ممم بكت يممر المكمم ا العنق ديممة المسممت ل الممم تبا برلنممريب نكتي الج ياممي للبمم تي تمم سممرب المم السمينرك يا با يقتي و إ تم سمربث ا با يقمة الت شميح اله ممي برسمت دا عمم د م S aureus ال بية SDS ااك يمما امريممد المتعممدد ب جمم د ا يقممة الت يمما الكه بممراي ممي مم Sephacryl S 200 ) SDS- PAGE ( للب تينمر الج يامي ال كمة النسمبية Rm) ( است د المن ني القيرسي ( الع نة بي ل غر ت الم الج يامي للبم تي الممد س با يقمة SDS عنمد تقمدي الم ااك يما امريمد المتعمدد ب جم د المم القيرسمية مي م ااك يا امريد المتعدد ب ج د SDS-PAGE S ي الت يا الكه براي ب ج د الم اد المرس ة للب تي 59000 دالتم نهمر الج يامي % 5 كر مة ا د عل ااك يا امريد المتعدد بت كي ه ل الج يامممي للبممم تي المقمممد با يقمممة علممم التممم الي يترمممح مممم النتمممرال المست عممملة إ الممم 58000 دالتممم ا يع د إلم إ الج ياي للب تي المقد برلت يا الكه براي بمر يقر ب م تي الت شيح اله مي عل م ال 1306

( 0- م كبت ايثمرن ا ) دل إلم نمد البم تي يتمأل مم كثم مم مد ا جم د المم اد المرسم ة SDS ا ت اا ال اع تنك الب تي إل داتث المك نة الم ت لمة الم الج يامي للبم تي Kenneth, ( 2005 ( ( 1982 Proctor جمرعتمث ( الممم تبا برلنممريب نكتي المنقمم المسممت ل ممم بكت يممر المكمم ا العنق ديممة ال بيممة قممد تمكنممر ممم عمم ا مم ا البمم تي ممم الجممدا ال لم م لبكت يممر المكم ا العنق ديممة ال بيممة برسممت دا ك م ت غ ا يممر االنممث ثمم جمم ا عمليممة الت يا الكه براي إ جد ا إ الب تي يتك م دتي نهمر الج ياي 000000 دالت ( 1982, Inge Mogen and عم ا البم تي ممم كم ل اسمتار البر ثمر ( غشممية العممني ر الدم يممة المعممربة ببكت يممر تمكنمم ا ممم اسممت المم تبا برلنمريب نكتي تنقيممة مم ا البمم تي Sepharose SDS PAGE Saureus ب سمراة ك م ت غ ا يمر اللنمة ) Chromatography (Affinity ) عنمد ت يما المسمت ل الب تينمي علم الهم الب تي مة ا د ند نث الج ياي ب الي برسمت دا عمم د السمينر ( بعمليمة الت يما الكه بمراي ب جم د ا هم 000000 دالت Franke & Inge, ( 1982 ) المست ل شممر م بكت ير المك ا العنق دية ال بية إلمم همم مم متي للبمم تي عند ت يا الب تي عل الممم تبا برلنممريب نكتي ااك يا امريمد S aureus المتعمممدد ال ممممة اا لممم تقمممد ب ممم الي 097000 دالتممم ال مة الثرنية تقد ب الي 60000 دالت م الجدا ال ل م لبكت ير المك ا العنق دية ال بية التي تمثا الب تي التمممي تمثممما البممم تي المعممم ا مممم الب ممممر البشممم م الم تبا برلنريب نكتي ال م ت است عث References S aureus Ana, M ; Kellie, S ; Elena, L ; Jrina, M ; Dudley, K and Steven, C L ( 2002 ) The low density Lipoprotein receptor Related protein mediates fibronectin Accumulation on cell surfaces J Biol chem 277 : 1660 1666 Baron, E T and Finegold,S ( 1990 ) Diagnostic microbiology, 8 th ed Bailey and Scotts, The C V Mosloy company Beyan, H, Buckly, L R Yonsaf, N, Londi, M, and Leslie R D (2003) Arole for innate immunity in type 1 diabetic Diabetes metab Res Rev 19, 89-100 doi : 10-1002 ( dmrr 341 ) Bhakdi S ; T Klonisch ; PNuber and dw Fischer(1991) Stimalation of morokine production by lipoteichoic acids Infect Immun 59 :4914-4620 Brad Ford, M M ( 1976 ) Arabid and sensitive method for the quantation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding Analyt Biochem 72 : 248 255 Cowan, S J ( 1985 ) Cowan and Steel manual for Identification of medical bacteria, (2 nd ed ) Cambridge Univ Press U K Cruickshank, R ; Marion, B P ; Duguid, S R and Swain, P H A ( 1975 ) Medical microbiology : The practice of medical microbiology (12 th ed ), Curchill Livingstone, Edinburgh, london, Newyork 2 : 587 Dickson, J and Marples, R ( 1986 ) Coagulase production by strains of Staphylococcus aureus resistance charecters : acomparison of tow traditional methods with alatex agglutination system detecting both clumping factor and protein A J Clin Pathol 39 : 371 375 Difco ( 1984 ) Difco manual of dehydrated culture media and reagent for microbiology and clinical laboratory procedures 10 th ed Difco laboratory, Detroit, Michigan, U S A 1307

Journal of Babylon University/Pure and Applied Sciences/ No(4)/ Vol(22): 2014 Eric, B ; Brain, G ; Talbot and Francosis ( 2003 ) The fibronectin binding protein of Staphylococcus aureus many promote mammary gland colonization in alactating mouse model of mastitis, Infection and immunity 71 : 2292 2295 Franke, E and Inge, C ( 1982 ) Isolation of fibronectin binding protein from Staphylococcus aureus J Infection & Immunity 37 : 526 531 Greenberg, R and Benes, C ( 1990 ) Time Kill studies with oxacillin vancomycin and teicoplanin versus Staphylococcus aureus J Infect Dis 161 : 1036-1037 Halby, N ( 1975 ) Cross reaction between Pseudomonas aeruginosa and 36 other bacterial species Scand J Immunol 4 : 187 196 Humpherys, H ( 1997 ) Staphylococcus : Skin infections : Osteomylitis : Food poisoning : Foreign body infections : Medical microbiology( 5 th ed) Churchil Livingstone Irina, S ; Vinogrador, E ; Flahant, S and Grigoris ( 2005 ) Extraction and purification of fibronectin Staphylococcus aureus, Jour Infect Immun 73 : 3007-3017 Javanka, M V Keven, R B, Danial E s Adeline R W Battouli S S Stephen, F P (2005) In sight, in to mechanism used by Staphylococcus aureus to avoid destruction by human neutphil, 175 : 3907-3919 The American Journal of medicine Jennifer, P ( 2004 ) Students of fibronectin pathogen intraction using NMR Spectroscopy, Mol Microbiol 52 : 631 641 Joh, D ; Speziale, P ; Gurusiddappa, S ; Manor, J and Hook, M( 1999 ) Role of fibronectin binding protein in bacterial adherence and entry in to mammalian cells, Matrix Biol 18 : 211 223 Kenneth Todar ( 2002 ) The bacterial flora of Human, University of Wisconsin Madison Department of bacteriology Kenneth Todar ( 2005 ) Staphylococcus aureus Text book of bacteriology, Univercity of Wisconsin, Department of bacteriology Kluytmans,J,AVamBelkum and Verbrag(1997)Nasal carriage of Staphylococcus aureus; epidemiology,underlyin,mechanism,and associated risks; clinmicrobial Kusela, P ( 1978 ) Fibronectin binds to Staphylococcus aureus, Nature ( London ) 276 : 718-720 Lind, L ( 1974 ) Protein A production in different Strains of Staphylococcus aureus under varied growth conditions Acta path Microbiol Scand S B 82 : 821 828 Macfadin, J F ( 1985 ) Biochemical test for Identification, The E test and detection of men A for determination resistance in coagulase negative Staphylococci, Eur, J Clin Microbial infection disease 15 : 567 573 Matthias, G ; Hassain, M ; Petra, B ; Christine, H ; Georg, P and Bhanu, S ( 2004 ) Truncation of fibronectin binding protein in Staphylococcus aureus strain newman leads to deficient adherence and host cell invasion due to loss of the cell wall anchor function Infection and immunity 72 : 7155 7163 Mogen, S H and Inge, C ( 1982 ) Afibronectin binding protein from human platelet membranes Biochem J 201 : 629-633 Ozeri, V ; Rosenshine, L ; Mosher, D F ; Fassler, R and Hansk, E ( 1998 ) Role of integrin and fibronectin in the entry of Streptococcus pyogenes in to cells via protein F1, Mol Microbial 30 : 625 637 1308

Pharmacia Laboratory Seperation Division ( 1985 ) Gel filtration theory and practice and gel filtration calibration kit instruction manual Uppsala Sweden Proctol, R A ; Mosher, D F ; Olbrantz, P J ( 1982 ) Fibronectin binding to Staphylococcus aureus J Biol Chem 24 : 788-794 Skorstengaard, K ; Jensen, M S ; Sahi, P ; Petersen, T E ( 1986 ) Fibronectin Eur J Biochem 161 : 441 453 Sneath, P A ; Mair, N S ; Sharp, M E and Hott, J G ( 1986 ) Bergeys manual of systematic bacteriology : 1013 1035 William and wilkans, U S A Sood, R ( 1989 ) Acolor atlas of practical pathology and microbiology Jaypee brothers Sriskandan,S,and Cohen,J(1999)Gram-positive sepsis mechanism and differences from gram-negative sepsisinfectdisclinnam13:397-412 Stellwagen, E ( 1990 ) Gel filtration In : Deutscher ( ed )methods in enzymology Guide to protein purification Academic Press San Diego 182 : 317-328 Van, P ; J P ; Duensing, T D and R L ( 1998 ) Entery of opaa gonococci in to HEP-2 cells requires concerted action of glycosaminglycans, fibronectin and integrin receptors,mol Microbial 29 : 369 379 Yamada, K M and Olden, K ( 1978 ) Fibronectin adhesive glycoproteins of cell Surface and Blood, Nature ( london ) 275 : 179 184 1309