Identify Microbial Species Produced Biogenic Amines in Some Types of Cheeses and Assay the Health Effects in Laboratory Rabbits Yasmeen I. Khalil *, Farooq M. Kamel and Karkaz M. Thalij Food Science Department, College of Agriculture, Tikrit University, IRAQ. Key words: Biogenic Amines, Cheeses, Laboratory Rabbits. Article History Received: 15/03/2016 Accepted: 20/03/2017 Available online: 30/03/2018 ABSTRACT The study was conducted in the laboratory of graduate studies in the Department of Food Science, Faculty of Agriculture, University of Tikrit and laboratories of Education Faculty inuniversity of Kirkuk.In aimes to detecting the presence of Biogenic amines formed in 25 samples of ripping cheeses collecting from locally markets in Tikrit city.used of Liquid Chromatographymass spectroscopy (LCmass), and identification of microbial species that contaminated of samples and capable to produced biogenic amines types through laboratory cultured in chesse samples as media.as well as determining the physiological effects in Rabbits laboratories after orally injection. Results showed that 8 cheese samples were contamination with Biogenic amine (32%). Also appear that bacterial isolates which contamination of samples and capable to produced the biogenic amines was Lactobacillusfermentum, Lab. delibricii sub. bulgaricus, Lab.brevis and Leu.mesentroides and Staph.aureus, Staph. epidermidis, Streptococcuspyogenes, Listeriamonocytogenes, Klebsiellaoxytoca.the isolates appear as most produced the concentration from biogenic amines was Leu.mesentroides.the results also show the influence of orally dosage at three concentrations of biogenic amines at 25, 10 and 50 µg/ml for laboratory rabbitswere caused a significantly (P<0.05) reduction on the value of Hemoglobin (Hb) and the total counts of (RBCs) Red Blood Corpuscular and an increase in the total count of white blood cells and lymphocytes, which offset a decline in the proportion of neutrophils at 50 µg/ml compared with values in the control group. While didn't get an effected change with the 10 and 25µg/ml. Also were decreased of total protein, albumin and increased of globulin and urea levels with increasing the concentration of biogenic amines. تحديد األنواع الميكروبية المنتجة لألمينات الحيوية في بعض أنواع االجبان وتقدير تأثي ارتها الصحية في األ ارنب المختبرية ياسمين إسماعيل خليلوفاروق محمود كامل وكركز محمد ثلج قسم علوم األغذية كلية الز ارعة جامعة تكريت الع ارق. الكلمات المفتاحية: االمينات الحيوية اال ارنب المختبرية االجبان. االستالم: 2016 / 3 /15 القبول: 2017 / 3 / 20 الخالصة أ جريت الد ارسة في مختبر الد ارسات العليا في قسم علوم األغذية كلية الز ارعة جامعة تكريت ومختب ارت كلية التربية جامعة كركوك بهدف الكشف عن ت اركيز بعض أنواع األمينات الحيوية amines( )Biogenic في عينة من األجبان في األسواق المحلية لمدينة تكريت باستعمال تقنية كروماتوك ارفيا السائل ذا االداء العالي( LCmass ). وتشخيص األنواع البكتيرية وتحديد المنتجة منها لألمينات الحيوية من خالل تقدير ت اركيزها المنتجة مختبريا فضال عن تحديد تأثي ارتها الصحية عند اعطائها فمويا بت اركيز مختلفة لأل ارنب المختبرية. بينت النتائج احتواء 8 عينات من األجبان على أنواع االمينات الحيوية وبنسبة )32%(. كما تبين إن 25 األنواع البكتيرية المنتجة لها كانت من األنواع Lactobacillusو fermentum sub. Lab. delibricii و Staphylococcus aureus و وMonocytogenes Listeria. وmesentroides Leuconostoc Streptococcus. Pyogenes Lab brevisوbulgaricus Staph. epidermidis و وoxytoca. Klebsiella وقد تميزت بأنها األكثر إنتاجا لالمين الحيوي مختبريا )30,142,7 40,8 Leu.mesentroides حيث سجلت إنتاج لكل األمينات المستخدمة وبأعلى الت اركيز حيث بلغت )93,5 * Corresponding author Email: Yasmeen12 @yahoo.com 233
مايكروغ ارم/غ ارم للهستامين والتي ارمين والكادافيرين والتربتامين على التوالي. كما تبين من النتائج ان تأثير تجريع مجاميع األ ارنب بثالث ت اركيز من االمينات عند 25 و 10 50 مايكروغ ارم/ مل في حصول انخفاض معنوي )0.05>P( في قيمة خضاب الدم Hb واالعداد الكلية لكريات الدم الحمر RBC وزيادة األعداد الكلية لخاليا الدم البيضWBC وارتفاع نسبة الخاليا اللمفية الذي قابلها انخفاض نسبة العدالت معنويا عند التركيز 50 مايكروغ ارم/ مل مقارنة مع مجموعة السيطرة. ولم يحصل التغير بشكل معنوي في حالة التركيزين 10 و 25 مايكروغ ارم/ مل كذلك حصل انخفاض معنوي في مستوى البروتين الكلي واأللبومين وارتفاع مستوى الكلوبيولين واليوريا مع زيادة تركيز األمينات المجرعة. المقدمة: ازداد في اآلونة األخيرة تعدد وتنوع االم ارض الناتجة عن تلوث األغذية بأنواع األحياء المجهرية أو المتايضات الناتجة عنها كالسموم البكتيرية أو الفطرية. إضافة إلى االم ارض الناتجة عن التلوث بأنواع العناصر الثقيلة أو المبيدات والمطه ارت وغيرها التي ترتبط بمصادر تأثير متعددة يمكن ان ينتج عن استهالكها مع الغذاء في إحداث تأثي ارت ضارة أو غير مرغوبة. كما ان تأثيرها يمكن ان يكون ذا أهمية في تغير نوعية الغذاء ومدى أمكانية االستفادة منه )يوسف و التارقي 2005(. التأثير تبين من الد ارسات الميدانية في وجود عالقة بين بعض حاالت التسمم الغذائي واستهالك األغذية التي تتواجد فيها المركبات االمينية. حيث إن هذه المركبات) amines )Biogenic كان لها القدرة في إحداث التسمم وظهور أع ارض مرضية متنوعة. وان حالة منها يكون ناتجا من النشاط البايولوجي التي تتميز به كل نوع من األمينات الحيوية اعتمادا إلى نوعية التركيب الكيميائي المكون لها والذي يختلف اعتمادا إلى نوع األحماض االمينية والكائن المجهري المنتج لها والملوث للغذاء( 1996 Shalaby (. تعرف األمينات الحيوية بأنها المركبات العضوية القاعدية )نتروجينية( ذات األو ازن الجزيئية الواطئة التي تتكون بشكل رئيسي خالل عملية نزع مجموعة الكاربوكسيل )Decarboxylation( لألحماض االمينية الحرة.تأتي أهمية د ارسة ت اركيز الصحية من تأثيرها المباشر في الجهاز الوعائي لإلنسان (Human ascular) األمينات الحيوية وكذلك في عمل الجهاز العصبي وتأثي ارتها (Neuron system) فضال عن توفر انواع المواد الغذائية في االسواق الع ارقية التي يمكن ان تكون بيئة مناسبة للتلوث بأنواع األحياء المجهرية المنتجة لها وبت اركيز يمكن ان تكون ذا تأثي ارت سلبية في صحة االنسان المستهلك لها. السيما من األجبان التي تكون صناعتها غير خاضعة للرقابة والسيطرة النوعية Stadnik) وDolatowski Spano2010 ;وآخرون 2010 ) لذا كان من الضروري أن يتم في هذه الد ارسة الكشف عن ت اركيز األمينات الحيوية في عينات بعض األجبان في األسواق الع ارقية وتحديد أنواع األحياء المجهرية الملوثة والقادرة على إنتاجها. فضال عن تقدير تأثير تلك األمينات عند إعطائها فمويا في ت اركيز محددة في بعض المعايير الفسلجية لأل ارنب المختبرية. المواد وط ارئق البحث جمع العينات:تم جمع 25 نموذج من األجبان من األسواق بواقع مكررين وهي )البقرة السعيدة وياسمين وهنا وSmile ك ارفت و وجبنة دانون قرص و جبنة دانون مبشورة( جميعها كانت معبأة بعبوات معدنية أو ورقية مصفحة بأشكال وأحجام مختلفة وفي كل مرة يتم فيها جمع العينات يتم نقلها من السوق المحلية إلى عليها وكما في Roberts وGreenwood 2003(. عزل وتشخيص البكتيريا:بعد إعداد عينات األجبان تم زرع التخفيفين االخيرين منها على المختبر مباشرة وحفظها مبردة لحين أجر اء الفحوصات المختبرية الالزمة األوساط الزرعية المالئمة التي كانت )MacConkey agar, MRS agar, Nutreintagar, Cetrimide agar, Blood base agar, mannitol salt agar( المجهزة من شركة Oxoid االمريكية. بعد ظهور العزالت تم تنقيتها على األوساط لكل نوع ثم التشخيص للعزالت من خالل الصفات الظاهرية والمجهرية والصفات المزرعية والكيموحيوية اعتماد على مصنف بيركي في Holt( 2000( ولجميع العزالت. وآخرون Carr 1994 وآخرون 234
تحديد ت اركيز االمينات الحيوية:استخدمت تقنية الكروماتوك ارفيا السائلة من خالل جهاز عينات االجبان LCmass وهي )الهستامين والتاي ارمين والتربتامين والكادافيرين ) واعتمادا على ما ذكر في والمحورة من قبل Ozagul( واخرون 2002(. تحديد قابلية العزالت البكتيرية في إنتاج أنواع االمينات الحيوية:تم الكشف عن قابلية لتقدير األمينات الحيوية Hwang) األنواع البكتيرية المعزولة وآخرون في )1995 في إنتاج أنواع األمينات الحيوية األربعة من خالل تنميتها على بيئة المنتج المعقم اذ كانت التنمية عند º 35 م لمدة 48 ساعة. بعدها تم سحب 10 مل من كل وسط تنمية واجري لها االستخالص للكشف عن االمينات الحيوية باستعمال تقنية كروماتوك ارفيا السائل في جهاز LCmass وكما ذكر في الطريقة أعاله. التجربة البايولوجية :استعمل في هذه الد ارسة 52 أرنبا من ساللة Albino بيضاء اللون بعمر) 65 ( أسابيع وبمعدل وزن ( 600 750 ) غم قسمت الحيوانات عشوائيا الى ثالثة عشر مجموعة وبواقع 4 أ ارنب لمكررين لكل مجموعة تضمن كل مكرر أرنبين. تم إعطاء األمينات الحيوية من خالل التجريع الفموي بعد اذابة المادة االصلية)االمينات الحيوية( للحصول على الت اركيز المقترحة للتجربة وهي عند 25 10 و 50 )مايكروغ ارم/ مل( في 2 مل من الماء المقطر الذي أعطي على وجبتين صباحية ومسائية/ يوم/ حيوان. استمرت التجربة لمدة 28 يوما وقد روعيت ظروف تربية الحيوانات المختبرية كما مشار اليه في )2002.)NASNRC, فحوصات الدم blood( Tests ):تم of عد كريات الدم الح مر (RBC) والعد الكلي والتفريقي لخاليا الدم البيض WBC الشريحة الخاصة والمسماة باستخدام )Hb( أما تقدير نسبة خضاب الدم (1986( وكما جاء فيColes Hemocytometer chamber اعتمدت طريقة Cynmethemoglobinالموصوفة من قبل )2005( Tietz. اختبا ارت الدم الكيموحيوية Assay) :(Blood Biochemical تقدير تركيز البروتين الكلي في مصل الدم :استخدمت طريقة بايوريت method Biuret لتقدير تركيز البروتين الكلي في مصل الدم إذ تم استخدام عدة التحليل الجاهزة )Kit( وكما في )1995 Young (. تركيز تقدير االلبومين في مصل الدم : االلبومين تركيز تم تقدير باستخدام عدة التحليل الجاهزة Kit. االسبانية وكما جاء في) 2005 Tietz ( SPINREACT المجهزة من شركة تقدير تركيز الكلوبيولين في مصل الدم :تم احتساب تركيز الكلوبيولين من خالل الفرق بين البروتين الكلي واأللبومين وكما جاء في.)2005 Tietz( تقدير تركيز اليوريا:استخدمت طواقم محاليل قياسية )Kits( مجهزة من شركة Spinrect )اسبانيا( Urea اليوريا لحساب ديسلتر( Bishop( وآخرون 2010(. )ملغم/ التحليل اإلحصائي:حللت نتائج التجارب بإستخدام النموذج الخطي العام General( ) Linear Model ضمن البرنامج اإلحصائي الجاهز SAS( 2001( لد ارسة تأثير العوامل على وفق التصميم العشوائي الكامل CRD كما أجري إختبار دنكن 1955 Duncann( )لتحديد معنوية الفروق مابين متوسطات العوامل المؤثرة على الصفات المدروسة عند مستوى )0.05(. النتائج والمناقشة: تبين من النتائج أن عينات الجبن التي كانت ملوثة بأنواع األمينات الحيوية هي عند 8 عينات )32%( من مجموع العينات الكلية للجبن التي كانت عند 25 عينة)الجدول 1 (.كما تبين أن األمين الحيوي من نوع Histamine كانت األكثر في تك اررها عند %75 في تلويث عينات الجبن مقارنة مع األنواع األخرى. وقد ت اروحت األمينات الحيوية األخرى من Tryptamine و Tyramine و Cadaverine عند 25 37.5 و % 25 على التوالي. 235
اتفقت النتائج أعاله مع ( Gram وآخرون 2002; Linare وآخرون 2010( في نسب تواجد تلك األمينات الحيوية في عينات الجبن المفحوصة من قبلهم. يمكن يكون االختالف في أن األمينات ت اركيز إلى أعاله الحيوية تركيبة بروتين الجبن من األحماض االمينية المكونة لتلك بت اركيز مختلفة. فضال عن االختالف في أنواع األحياء المجهرية الملوثة لتلك العينات. تم عزل األنواع البكتيرية الملوثة لعينات أنواع األجبان باستعمال األوساط الزرعية المالئمة لها التي تضمنت األوساط من األنواع MacConkey agar, MRS agar, Nutreint agar, Cetrimide agar, Blood base agar, mannitol salt agar وكانت تلك األوساط مالئمة لعزل االنواع الميكروبية الملوثة من السالبة والموجبة لصبغة ك ارم وذلك الحتوائها على العناصر الغذائية الكافية لتنميتها Winn( وآخرون 2006 (. ان تشخيص األنواع البكتيرية تم من خالل مقارنة نتائج االختبا ارت الظاهرية والمجهرية والمزرعية والكيموحيوية المتحصل عليها مع مامثبت في موسوعة بيركي ومع ما ذكره ( Salminenوآخرون 2004). حيث تميزت 9 أنواع بكتيرية ملوثة لعينات الجبن في أنها كانت منتجة لألمينات الحيوية التي تبين بانها من االنواع Staph. epidermis, K.oxytoca Lb.delibricus sub. bulgaricus Lb. fermentum L. monocytogenes Str. pyogenes Staph. aureus Lb. brevis. Leu. mesentroides وكما مبين في جداول االختبا ارت التشخيصية والكيموحيوية )2( و 3 (. يوضح الجدول )4( تركيز األمينات المنتجة مختبريا من أنواع الميكروبات الملوثة لعينات الجبن. بينت النتائج جميع أن العزالت البكتيرية الملوثة للجبن كانت منتجة Histamine مختبريا وقد سجلت العزلة Leu. mesentroides أعلى إنتاج في تركيز الهستامين مقارنة مع بقية العزالت وبتركيز 93,5 مايكروغ ارم /مل من وسط االنتاج الزرعي. ولم تنتج العزلة.K oxytoca الهستامين مختبريا.وقد انتج بعض العزالت البكتيرية االمين الحيوي Tyramineوهي Leu. mesentroides و Lb.delibricus sub. bulgaricus و Staph. وaureus Lb.fermentum ولم تتمكن العزالت L. و K. وoxytoca Staph. epidermis Lb. وbrevis وStr.pyogenes monocytogenes أما لنوع الحيوي األمين Cadaverine من إنتاجه مختبريا. فقد انتجته العزلة Leu.mesentroides بأعلى تركيز تلتها العزلة Lb. fermentum واخي ار العزلة Staph.aureus أما بقية العزالت فانها لم تتمكن من انتاجه مختبريا. كما أنتج االمين الحيوي Tryptamine مختبريا حسب الترتيب في كمية اإلنتاج التي كانت Lb.delibricus sub. bulgaricus وmesentroides Leu. وoxytoca.K وepidermis Staph. إن االختالفات المعنوية في ت اركيز األمينات وأنواع أما بقية العزالت المنماة فإنها لم تنتجه. الحيوية الملوثة لعينات الجبن المفحوصة يمكن أن يعود إلى اختالف المعامالت التصنيعية وان االجبان وجميع االغذية المصنعة تصنع وفق مواصفات معملية قياسية خاصة لكل منتج باختالف نسب البروتين )وبالتالي االختالف في ت اركيز االحماض االمينية المكونة والتي تمثل مولدات لهذه االمينات وحسب نوع الجبن المصنع وبالتالي كمية االمين الحيوي المتكون وكذلك أي إضافة خالل عملية التصنيع ومن البديهي ان أي إضافة إلى خط التصنيع تكون مصدر لزيادة التلوث او الحمولة الميكروبية للمنتج الغذائي المصنع.كذلك اختالف نوعية الفلو ار البكتيرية الملوثة له Saaid( وآخرون 2009 ). مما تسبب في اختالف الت اركيز من تلك األمينات الحيوية في عينات الجبن المفحوصة أو المنتج الغذائي. أن مقارنة ت اركيز األمينات الحيوية المفحوصة في عينات الجبن في الد ارسة مع الت اركيز المسموح بها فإنها تشير إلى أن تلك الت اركيز تعد ضمن الحدود المسموحة لكل أمين على حدة ولكن تلوث عينات الجبن بأكثر من نوع منها يسبب في زيادة خطورتها وإمكانية إحداثها لحاالت التسمم الغذائي او الحاالت المرضية الناتجة عنها السيما عند وجود انواع الهستامين والتي ارمين والكادافيرين التي تعمل تازريا مع بعضها.كما أكثر وجود إن من نوع منها يسبب في زيادة امتصاصها في األمعاء من خالل تثبيط عمل نظام األنزيمات الموجود في الجسم DAO وPAO MAO وHNMT.وتختلف التشريعات القانونية للمستوى المسموح به لألمينات في دول العالم المختلفة وذلك الختالف العادات الغذائية ومستوى تناول جميع األمينات ضمن الوجبة الواحدة وتناول االدوية وخاصة مثبطات.)2001 FDA ;1999 وآخرون Bodmer; 1996 Shalaby;1995 Bardocz( MAOI 236
كما وجد Linare وآخرون )2010( إن المنتج الرئيسي لألمينات الحيوية في الجبن هي البكتيريا الموجبة لصبغة ك ارم وأنواع بكتريا حامض الالكتيك وأنواع العائلة المعوية Enterococaceae وأنواع جنس Streptococcus ويكون مصدرها م ازرع البادئ المستعملة أو سوء االهتمام بخطوات التصنيع والخزن والتداول الرديء( Naltingham 1992 (. لقد اشار )1994( Nout المستوى المسموح به من الهستامين والتي ارمين والكادافيرين في االغذية يمكن ان يكون بحدود 50 100 ملغم / كغم وان الكميات اعلى من ذلك يمكن ان تسبب في حصول التسمم الحاد والت اركيز اقل منها يمكن أن يسبب اع ارض مرضية مختلفة كالصداع النصفي وزيادة ضغط الدم واالحتقان Naila; وآخرون (2012. أما وأع ارض من الحساسية وغيرها ( Dopkericineوآخرون 2000 فيما يخص التأث ارت الصحية لالمينات الحيوية على اال ارنب المختبرية فقد بينت النتائج في الجدول) 5 (والجدول ) 6 (.عدم حصول تغير معنوي (0.05 >P( في العدد الكلي لكريات الدم الحمر RBCوخضاب الدمHb عند التركيز )10( مايكروغ ارم/ مل لأل ارنب المختبرية المجرعة فمويا. ولكن االنخفاض في قيم المعيارين أعاله كان معنويا في حالة التركيزين 25 و 50 مايكروغ ارم/ مل ومع كل أنواع األمينات األربعة مقارنة مع قيمها في حيوانات مجموعة السيطرة. كما أظهرت نتائج التحليل اإلحصائي ارتفاع معنوي في العدد الكلي لخاليا الدم البيض وازداد األعداد الكلية مع زيادة الت اركيز من أنواع األمينات المجرعة للحيوانات ومع جميع مجاميع الحيوانات المجرعة من أنواع االمينات األربعة مقارنة بمجموعة حيوانات السيطرة. كما أظهرت نتائج الحليل االحصائي عدم حصول اختالف معنوي في نسب الخاليا اللمفاوية لكل المجاميع المجرعة باألمينات الحيوية األربعة المستخدمة بالتجربة عند التركيز 10 و 25 مايكروغ ارم / مل ما عدا في حالة التجريع بالتركيز 25 مايكروغ ارم / مل من االمين الحيوي الكادافيرين حيث سبب التجريع منه في االرتفاع المعنوي في نسبة الخاليا اللمفية.وقد سبب التركيز 50 مايكروغ ارم / مل من جميع أنواع األمينات في زيادة نسبتها معنويا كما ارتفعت معنويا نسبة خاليا العدالت عند التركيز 50 مايكروغ ارم / مل لكل المجاميع وكل أنواع األمينات األربعة المستخدمة بالتجربة وتباينت فعالية األمينات الحيوية األربعة في زيادة نسبة خاليا العدالت عند التركيزين 10 و 25 مايكروغ ارم / مل. يمكن أن يعزى السبب في انخفاض أعداد كريات الدم ال حمر إلى حدوث فقر الدم التحللي وذلك نتيجة النحالل كريات الدم الحمر او قد يعود الى التأثر على العوامل المتعلقة بتكوين الدم في نخاع العظم مؤدية بذلك إلى انخفاض تركيز خضاب الدم وبالتالي فإنها لم تؤد وظائفها في نقل المغذيات إلى أنسجة وخاليا الجسم المختلفة مما يدل على زيادة في االستجابة المناعية مما يتسبب في انخفاض فعاليتها وربما موتها والتأثير في فعالية الجسم بصورة عامة( Martin وآخرون 2006(. كما يعتقد إن االرتفاع في أعداد خاليا الدم البيض يمكن أن يعود إلى تأثيره على نخاع العظم ومن ثم زيادة إنتاج هذه الخاليا في نخاع العظم كما قد يحفز الغدد اللمفاوية المسؤولة عن نضج الخاليا اللمفاوية وتخصصها في المناعة المضادة لألم ارض ومن ثم زيادة أعدادها في الدم المحيطي أن هذا االرتفاع في نسبة Lymphocytes إلى Neutrophilis يدل على حصول المناعي في الحيوانات التي ارتفعت معها مما يؤكد التأثي ارت السلبية منها في أعضاء الجسم Ganong( 1997). اإلجهاد كما أظهرت نتائج التحليل االحصائي لبعض المعايير الكيموحيوية في الجدول )6( الى حصول انخفاض معنوي في مستوى البروتين الكلي في مصل الدم لجميع مجاميع الحيونات المجرعة بكل أنواع األمينات ولكافة الت اركيز المستخدمة ماعدا الهستامين والكادافيرين عند التركيز 10 مايكروغ ارم / مل حيث سجلت قيم ت اركيزها عند )6.40 6.43( غم / ديسيلتر للهستامين والكادافيرين على التوالي مقارنة بمجاميع مجموعة السيطرة التي بلغت 6.42 غم / ديسيلتر. كما يالحظ من الجدول حصول انخفاض معنوي في مستوى االلبومين ولكافة الت اركيز المستخدمة وباستخدام االمينات األربعة في التجربة وحصول ارتفاع معنوي في مستوى الكلوبيولين واليوريا لكافة مجاميع الحيوانات المجرعة بالكادافيرين وبالتركيز 10 مايكروغ ارم / مل لم تسجل فرق معنوي في مستوى اليوريا. 237
ويعود السبب في اإلخالل بإنتاج االلبومين بسبب تأثر الكبد المصنع له او بسبب زيادة طرح الكلية لاللبومين بسبب السمية حيث ي دل انخفاض بروتين األلبومين من العالمات السريرية الشديدة إلم ارض الخاليا الكبدية والمتسببة عن أعاقة في تخليقه او قد يعزى النقص الحاصل إلى زيادة فقدان األلبومين نتيجة العتالل الكبيبات الكلوية Anraku( وآخرون Glumerulaopathy 2011(. كما يعزى سبب انخفاض مستوى البروتينات الكلية في حالة تجريع الحيوانات باألمينات الحيوية المختلفة إلى تركيبها الذي يكون له فعل في تحلل البروتين أو منع تخليقه في الجسم قد تعمل المضاعفات التي تحدث للكلى بسبب التعرض لألمينات الحيوية ) Murray وآخرون 2000 Bartosikova; وآخرون (2003. اتفقت النتائج مع كل من Bakry وآخرون ( 2010( اللذين وجدوا إن هناك زيادة في تركيز الكلوبيولين نتيجة الفشل الوظيفي للكبد الذي يسبب انخفاض االلبومين وارتفاع بعض البروتينات مثل الفا وبيتا كلوبيولين في بالزما الدم أن االرتفاع في تركيز اليوريا يمكن ان يكون ناتجا عن تأثير االمينات الحيوية المجرعة في إحداث اختالالت في وظيفة الكلية Nakamura) وآخرون ;2005 Demir وآخرون.)2009 جدول 1. أعداد ونسب أنواع األمينات الحيوية الملوثة لعينات الجبن. أعداد عينات الجبن الكلية أنواع األمينات الحيوية المختبرة أرقام العينات الملوثة أعداد ونسب األمينات الحيوية من العينات الموجبة % األعداد 75 6 17 14 112 22 21 Histamine 25 25 2 2 11 3 8 3 Tyramine Cadaverine 25 37,5 3 17 11 8 Tryptamine 32 Biogenic amines 238
جدول 2. نتائج االختبا ارت الكيموحيوية التشخيصية للبكتيريا المعزولة من عينات الجبن. Coagulase Haemolysin Bactracin Gelatin Liquefication Kliglar iron agar Urease Simmon's citrate oges Proskauer Methyl red Indol Motility Catalase Oxidase Gram stain نوع االختبار األنواع الجرثومية تكوين االمونيا من االرجنين من تكوين الكلوكوزCO2 النمو في درجات ح اررة مختلفة النمو في ت اركيز الملح مختلفة 6.5% 4% 45 م O 37 م O 10 م O Lb. fermentum _ Klebsiella oxytoca Lb.delibricus sub.bulgaricus Listeria monocytogenes Leu. mesentroides Lb. brevis v Staph. Aureus Staph. epidermis Streptococcus pyogenes 239
جدول 3. اختبار تخمر الكربوهيد ارت للبكتيريا المعزولة من عينات الجبن األنواع الجرثومية نوع االختبار كلوكوز ارفينوز كالكتوز مالتوز مانتول فركتوز ازيلوز الكتوز ا اربينوز اريبوز ت اريهالوز سكروز سوربيتول المليلبايوز ارمنوز اينوسيتول سيليبايوز Lactobacillus fermentum Klebsiella oxytoca Lb. delibricus sub. Bulgaricus Listeria monocytogenes Leuconostoc mesentroides Lactobacillus brevis Staphylococcus. aureus Staph. epidermis Streptococcus pyogenes 240
مصدر عزل األنواع البكتيرية جدول 4. تركيز األمينات الحيوية المنتجة مختبريا من أنواع المايكروبات الملوثة لعينات الجبن. نوع العزلة تركيز االمينات الحيوية المنتجة )مايكروغ ارم/مل( Tryptamine Cadaverine Tyramine Histamine 5,9 12,5 Staph. Epidermis 10,6 52,9 42,7 25,7 28 30,1 8,9 15,2 22,6 40,8 32,7 16,3 45,6 51,9 71,8 93,5 81,2 Klebsiella oxytoca Staphylococcus aureus Listeria monocytogenes Streptococcus pyogenes Lactobacillus fermentum Lb.delibricus sub. Bulgaricus Leuconostoc mesentroides Lactobacillus brevis عينات الجبن المعامالت جدول 5. تأثير أنواع األمينات الحيوية في صفات الدم الطبيعية لذكور األ ارنب. صفات الدم الطبيعية % للخاليا التركيز المجرع )مايكروغ ارم/ مل( العدالت % للخاليا االعداد الكلية لكريات الدم االعداد الكلية لخاليا الدم البيض 10 6 /mm 3 اللمفية الحمر 10 6 /mm 3 خضاب الدم (g/dl) 33,9a 63,8b 8,17c 6,3a 12,9a صفر السيطرة 33,2a 64,2b 8,29b 6,3a 12,7a 10 31,4b 65,8b 8,53a 5,6c 12,0b 25 Histamine 29,2b 67,3a 8,71a 5,1d 11,1c 50 33,0a 64,4b 8,47b 6,2a 12,9a 10 32,5a 65,6b 8,59a 6,0b 12,2b 25 Tyramine 30,0b 67,3a 8,66a 5,3c 11,2c 50 32,8a 64,7b 8,32b 6,2a 12,7a 10 31,6b 66,4a 8,48b 5,9b 12,3b 25 Cadaverine 29,3b 68,5a 8,60a 5,2d 11,2c 50 33,1b 64,2b 8,22b 6,4a 12,8a 10 31,6b 65,1b 8,35b 5,8b 21,1b 25 Tryptamine 30,2b 68,1a 8,54a 5,4c 11,4b 50 األحرف المختلفة في العمود الواحد تعني وجود اختالفات معنوية عند مستوى احتمالية 0.05 241
جدول 6. تأثير انواع االمينات الحيوية في صفات الدم الفسلجية والمناعية لذكور اال ارنب. المعامالت التركيز المجرع الصفات الفسلجية والمناعية لذكور اال ارنب) ) g/dl )مايكروغ ارم/ مل( البروتين الكلي االلبومين الكلوبيولين اليوريا السيطرة صفر 25f 3,19f 3,13a 6,42a 28e 3,42d 2,98b 6,40a 10 31c 3,68c 2,62d 6,30d 25 Histamine 34b 4,34a 1,70f 6.04h 50 27e 3,37d 3,00b 6,37b 10 29d 3,54d 2,81c 6,35c 25 Tyramine 31c 3,91b 2,24e 6,15g 50 25f 3,31e 3,12a 6,43a 10 27e 3,43d 2,96b 6,39b 25 Cadaverine 30d 3,88b 2,31e 6,19f 50 29d 3,47d 2,89c 6,36c 10 32c 3,71c 2,55d 6,26e 25 Tryptamine 36a 4.30a 1.64f 5,94j 50 األحرف المختلفة في العمود الواحد تعني وجود اختالفات معنوية عند مستوى احتمالية. 0.05 المصادر: يوسف محمد كمال السيد و التارقي زينب ھارون محمد )2005(. دور المواد المضادة للتغذية في تغذية اإلنسان مجلة أسيوط للد ارسات البيئية البيضاء يناير )كانون الثاني( العدد 28: )55( ص. Bakry, S.; Hassan, A.M.; Shahat, M.M.A. and Abdullah, A.( 2010). Effect of depoprovera on estrous cyclicity, serum proteins and lipid profile in mice. World Appl. Sci. J. 8, 10421049. Bardocz, S.( 1995). Polyamines in food and their consequences for food quality and human health. Trends Food Sci. Technol. 6, 10, 341346. Bishop, ML.; Fody, EP.and Schoeff. LE, (2010), Clinical Chemistry Techniques Principles Correlation (6): 268274. Bodmer, S.; Imark,C. and Kneubühl, M. (1999). Biogenic amines in foods: histamine and food processing. Inflammation Res. 48, 296300. Carr, F. J.; Chill, D. and Maida, N. ( 2002 ). The lactic acid bacteria. A literature survey. Critical Reviews in Microbiology, 28 ( 4 ): 281370. Coles, E.H. (1986).eterinary clinical pathology, 4 th ed. W. B. Sounders Co.USA. Dapkevicius, M.L.N.E.; Nout, M.J.R.; Rombouts, F.M., Houben, J.H. and Wymenga, W., (2000). Biogenic amine formation and degradation by potential fish silage starter microorganisms. International Journal of Food Microbiology 57, 107 114. Demir,B.C.Topkaya,A.R.Erbay, M. anddogan D.(2009).Yucellschemia modified albumin elevation after percutaneous coronary intervention reflects albumin concentration rather than ischemia Ann.Clin.Biochem., 46,PP.327. Duncan, D.(1955).Multiple range and Multiple FTest.Biometrics.11:142. FDA, (2001).Scombrotoxin (histamine) formation. Page p. 73 in Fish and fishery products hazards and controls guide. 3rd ed. Department of Health and Human Services, Publich Health Service, Food and Drug Administration, Center for Food Safety and Applied Nutrition. Office Seafood Washington, DC. Ganong, W. F. (1997). Review of Medical Physiology. Asian and Schuster Company. U.S.A. Gram,L.L.; Ravn,M.; Rasch,J.B.; Bruhn,A.B.; Christensen and M.; Givskov. (2002).Food spoilage interactions between food spoilage bacteria. International Journal of Food Microbiology 78, 7997. 242
Holt, J. G.; Kring, N. R.; Sneath, P. H. A.; Staley, J. J. and Williams, S. T. ( 1994 ). Group 17 grampositive cocci. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 9 th ed. W. R. and Forlifer, L. E. pp. 527543. Hwang.D.F., Chang. S.H.,Shiau, C.Y.,& Cheng,C.C.(1995). Biogenic amines in the fish of Sailfish (Istiophorusplatypterus) responsible for scombriod poisoning.journal of Food Science,60,926928. J.H., Wymenga, W., (2000). Biogenic amine formation and degradation by potential fish silage starter microorganisms. International Journal of Food Microbiology 57, 107 114. Linares DM, Cruz Martı n M, Ladero, Alvarez MA, Ferna ndezm(2010). Biogenic amines in dairy products. Critical Rev Food Sci.Nutr. (in press). has a global translational effect during acid adaptation in Salmonella entericaserovar typhimurium. J Bacteriol 189, 2417 2425. Naila,A.; Flint,S.; Fletcher,G.; Bremer,Ph.; Meerdink,G.(2012).Histamine Degradation by Diamine Oxidase, Lactobacillus and ergi bacillus halodoniticans donitrificans Nai18, http://dx.doi.org/10.4172/21577110.1000158. Nakamura M Minmi K,Uezono Y, (2005): The effect of the tramadol metabolic O desmethyl on muscarinic reseptorinduced response in xenopus oocytes expressing coined M1 or M3 recptors or M5recptors.Anesth Analg; 101: 180186. National Research Council Recommended (NASNRC) (2002) "Dietary Allowance "15th ed., Washington D.C., National Academy Press. Nout, M.J.R. (1994). Fermented foods and food safety. Food Res. Int.,27:291296. OZUGUL, F.; TAYLOR, K.D.; QUANTICK, P. Y OZAGUL, Y. (2002). Biogenic amines formation in Atlantic herring (Clupeaharengus) stored under modified atmosphere packaging using a rapid HPLC method. International Journal of Food Science and Technology, 37: 515 522. Roberts, D. and Greenwood, M. Practical Food Microbiology, Ed, 3ed, Blackwell Publishing Ltd, (2003), 296. Saaid, M.; Saad, B.; Hashim, N.H.; Salhin, A. & Ali, A.M. (2009). Determination of biogenic amines in selected Malaysian food. Food Chemistry, ol. 113, No. 4, pp. 13561362 Salminen,S.; Wright.A.; Ouwehand,A.(2004) " Lactic acid bacteria, microbiological and functional aspect " third ed., Marcel Dekker,Inc.,New York. SAS (2001). SAS User s guide: Statistical system, Inc. Cary, NC. USA. Shalaby A.R., (1996). Significance of biogenic amines to food safety and human health. Food Res. Int. 29 (7), 675690. Spano, G., Russo, P., LonvaudFunel, A., Lucas, P., Alexandre, H. and Grandvalet, C. (2010). Biogenic amines in fermented foods. European Journal of Clinical Nutrition 64(S3): S95S100. Stadnik J, Dolatowski ZJ (2010) Biogenic amines in meat and fermented meat products. ActaSci Pol Technol Aliment 3:251263. Tietz, Y., (2005), Clinical Biochemistry, 6 th ed., McGraw Hill, New York. 825. Winn, J.W.; Allen,S.; Janda,W.; Koneman,E.; Procop,G.; Schreckenberger, P.; and Woods,G.(2006).Konemans Color Atlas andtextbook of Diagnostic Microbiology, 6 th ed. Lippincott Williams and Wilkins, U.S.A. Young, D. S., (1995), Effect of drugs on clinical laboratory tesis, 4 th ed. 243