Kirkuk University Journal /Scientific Studies (KUJSS) Volume 13, Issue 4, December 2018, pp. ( ) ISSN: (Print), (Online) تأث

النسخ

1 تأثير Sodium Azide عمى انتاج انزيم اليوريز والغشاء الحيوي وعالقتها بظاهرة االنثيال في بكتيريا Proteus Mirabilis 2,1 2 1 عمر سنان صادق الزيدي لمى عبد اليادي زوين قسم عموم الحياة كمية التربية لمعموم الصرفة /ابن الييثم جامعة بغداد بغداد الع ارق. 1 omer_bs2009@yahoo.com, 2 lumaabdalhadee@yahoo.com الممخص جاءت الد ارسة الحالية بغية الكشف عن تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انتاج انزيم اليوريز وتكوين الغشاء الحيوي وعالقتيا بحركة السباحة Swimming واالنثيال Swarming في بكتيريا. جمعت 21 عزلة عائدة لبكتيريا من مصادر سريرية وحيوانية مختمفة خالل المدة الى وشخصت باالعتماد عمى Proteus 18 2 الكشف المجيري واالختبا ارت الكيموحيوية وتم تأكيد التشخيص باستعمال نظام الفايتك اذ تبين ان عزلة فقط تعود لمنوع. امتمكت جميع عزالت بكتيريا القدرة عمى انتاج انزيم اليوريز. كانت جميع العزالت %100 تفتقر لقدرة تكوين الغشاء الحيوي عمى اكار الكونغو االحمر في حين كانت جميع العزالت %100 مكونة لمغشاء الحيوي باستعمال طريقة الصفيحة العيارية الدقيقة وبدرجة قوية. ان اضافة ا ازيد الصوديوم يثبط تكوين الغشاء الحيوي بنسب مختمفة اعتمادا عمى مصدر العزلة والتركيز فضال عن تثبيطو النتاج انزيم اليوريز في الخاليا السابحة واالنثيالية لبكتيريا اذ يختمف تأثيره باختالف التركيز ومدة الحضن. الكممات الدالة: انزيم اليوريز الغشاء الحيوي ا ازيد الصوديوم االنثيال Proteus mirabilis DOI: 838

2 Effect of Sodium Azide on Urease and Biofilm Formation and its Relationship to Swarming Phenomenon in Proteus Mirabilis Omar Sinan Sadiq AlZaidi 0, Luma Abd Alhadee 2 1,2 Department of Biology, College of Education pure science/ Ibn Al. Haitham,University of Baghdad, Baghdad, Iraq. 1 omer_bs2009@yahoo.com, 2 lumaabdalhadee@yahoo.com Abstract The current study was carried out in order to detect the effect of sodium azide on Urease production and biofilm formation in. Twenty one isolates of Proteus were collected from different clinical and animals samples for the period from 15 th October 2017 to 1 st November 2017 and identification depending on microscopic characterization, biochemical tests and conformed by Vitec2 compact system, its turns out that only 18 isolates belong to the specie.all isolates 100% were have the ability to produce urease enzyme. All 100% un able to form biofilm on Congo red agar while 100% were strongly able to form biofilm on microtiter plate. The addition of Sodium azide shown an inhibition ratio in biofilm formation depending on the concentration and source of isolate also shows inhibition ability in urease enzyme production in both swimmer cells and swarmer cells of depending on the source of isolate and concentration. Keywords: Urease, Biofilm, Sodium azide, Swarming, Proteus mirabilis. DOI: 839

3 1. المقدمة: تنتمي بكتيريا Proteus mirabilis المعوية Enterobacteriaceae الى العائمة وتتميز عن بقية اف ارد العائمة )31 x بانتاجيا النزيم Phenylalanine Deaminase [1] وىي عصيات سالبة لممون ك ارم تبمغ ابعادىا ) Chemoorganotrophic مايكرون ح اررة نموىا المثمى 37 م و ذات تغذية كيمائية عضوية وتحصل عن طريق التنفس Peritrichous او التخمر Fermentation عمى الطاقة فضال عن كونيا متحركة باسواط محيطية Respiration والتربة المموثة المياه [3] كما انيا من المنابت الطبيعية لقولون االنسان [2]. flagella تتواجد في العديد من البيئات مثل [1] تتواجد في العديد الحيوانات والمبائن وقد تكون طبيعية Natural طفيمية Parasitic او تكافمية Commensals تبعا Protease الغشاء لطريقة معيشتيا [4]. تمتمك بكتيريا كثير من عوامل الض اروة ومنيا انزيم البروتيز و انزيم اليوريز [5]. Urease يعتبر انزيم اليوريز الحاوي عمى مجموعة النيكل nickel من اىم عوامل الحيوي Biofilm Urea ض اروة بكتيريا لكونو يعمل عمى تحميل اليوريا الى Co 2 و NH 3 وبيذا ترتفع قاعدية البول مسيال من Carbonate Struvite عممية تكون بمو ارت االباتيت Apatite و الست ارفيت و الكاربونيت التي تتجمع لتكون حصى المجاري البولية لكي تحمي البكتيريا من تأثير المضادات الحيوية [6]. يمكن تثبيط انزيم اليوريز باستعمال العديد من المواد التي قد تكون كيميائية او طبيعية ومنيا و مستخمص الكركمين الطبيعي [8] و Curcumin [7] Hydroxamic acids و [6]. اما قابمية البكتيريا عمى تكوين الغشاء الحيوي اذ يتثمل Dipropyl Disulphide N acetyl Cysteine الغشاء بتجمع البكتيريا والتصاقيا عمى االسطح الصمبة ومن المعروف ان البكتيريا تمر بالعديد من الظروف الغير مالئمة اثناء تحوليا من كائن سابح FreeSwimming الى الخاليا التي تتجمع وتمتصق عمى االسطح ان مثل ىذه التغي ارت تؤدي الى تكوين الغشاء الحيوي الذي يعمل عمى حماية الخاليا من الظروف البيئية المختمفة [9]. ان تكون الغشاء الحيوي يمر بخمسة م ارحل وىي مرحمة التصاق الخاليا البكتيرية العكسيadhesion Reversible bacterial عمى االسطح والذي يتميز بنمو الخاليا البطئ وتطاوليا وغياب المواد الخارج الخمويةSubstances Extracellular ثم مرحمة االلتصاق الغير العكسي Irreversible Adhesion والذي يكون مصحوب بقمة استطالة الخاليا وتكون بوليمر المواد الخارج الخموية Extracellular Polymers بعدىا مرحمة تسارع نمو الخاليا البكتيرية فضال عن استم ارر تناقص استطالة الخاليا وتوقف تكوين بوليمر المواد الخارج الخموية والمرحمة االخيرة نضوج الغشاء الحيوي Maturation Of 841

4 Biofilm والذي يتميز بكثافتو العالية وحجمو الكبير وقمة طول الخاليا البكتيرية وانضغاطيا فضال عن زيادة انتاج المواد الخارج الخموية مرحمة انخفاض كثافة الخاليا البكترية و كمية المواد الخارج الخموية نتيجة النفصال الخاليا البكتيرية [10]. اشارت العديد من الد ارسات الى إمكانية تثبيط تكوين الغشاء الحيوي باستعمال مواد مختمفة. وقد تؤثر ىذه المواد عمى ظاىرة االنثيال او العج Swarming وىي ىجرة المجاميع الخموية بسرعة الستيطان البيئات المغذية الغنية او انسجة المضيف Host Tissues والتي تتطمب اشا ارت قد تكون كيميائية Nutrient Rich environment Dimorphic او Physical متبادلة بين الخاليا [11]. ان بكتيريا ثنائية الشكل فيي Chemical Vegetative cells قصيرة في الم ازرع السائل Broth Culture تمتمك )86( اسواط وتعرف بالخاليا الخضرية او بالخاليا السابحة Swimmer cells ولكن عند نقميا الى االوساط الزرعية الصمبة Solid culture media فسرعان ما Swarmer cells تصبح متطاولة متعددة االنوية و ممتمكة اسواط عديدة Hyperflagellated لتعرف بالخاليا االنثيالية [5]. تعد اصابات المجاري البولية احدى المشاكل الطبية التي تعاني منيا معظم دول العالم وتزداد خطورة ىذا المرض عند قدرة المسببات المرضية عمى تكوين الغشاء الحيوي وخصوصا في المرضى الذين تجرى ليم القثطرة البولية. وخاصة ان بكتيريا وقدرتيا عمى تكوين الغشاء الحيوي وانتاجيا النزيم اليوريز فضال عن تميزىا بظاىرة االنثيال التي ليا عالقة وثيقة بالتياب المجاري البولية لذا ىدف البحث الى معرفة تأثير مادة ا ازيد الصوديوم في تكوين الغشاء الحيوي وانتاج انزيم اليوريز وعالقتو بظاىرة االنثيال. 2. المواد وط ارئق العمل: 2.1 عزل وتشخيص بكتيريا جمعتتت 21 عزلتتة بكتيريتتة متتن مصتتادر ستتريرية وحيوانيتتة يعتقتتد انيتتا تعتتود لبكتيريتتا تضتتمنت الد ارستتة 7 عزالت من البول )U( Urine و 3 عزالت لكل متن مستحات الجتروح )W(Wounds swaps و البصتاق )S( Sputum و عزلة واحدة لكل من ب ارز الدجاج )CF( Chicken Feces و مستقيم الكمب )DR( Dog Rectal وعزلتين متن مستتقيم القطتتة )CR( Cat Rectal و 4 عتتزالت متتن بيئتتة المستشتتفيات )H.en( Hospital environment. زرعتتت جميتتع العتزالت عمتى وستط اكتار المتاكونكي MacConkey Agar ووستط اكتار التدم Blood agar المجيتزة متن شتركة Oxiod )US( ثم حضنت االوساط الزرعية ىوائيا لمدة 24 ساعة وبدرجة 37 م. 840

5 3. االختبا ارت الكيموحيوية: Catalase االندول Indole احمر تم اج ارء االختبا ارت االتية ( فحص االوكسديز Oxidase فحص الكتاليز )Voges Proskauer كما جاء Citrate Utilization فوكس المثيل Methyl Red اخت ازل الست ارت بروسكاور في [12] وشخصت باستعمال نظام الفايتك 2 لتأكيد تشخيص عزالت بكتيريا. 3.1 اختبار التحري عن انتاج انزيم اليوريز Urease تم التحري عن قابمية بكتيريا عمى انتاج انزيم اليوريز كما جاء في [12]. 3.2 اختبار التحري عن تكوين الغشاء الحيوي Biofilm تم الكشف عن تكوين الغشاء الحيوي بطريقتين االولى بواسطة اكار الكونغو االحمر كما [13] اما الطريقة اشار الثانية فقد استعممت طريقة الصفيحة العيارة Microtiter plate method كما ذكر في [14] )محورة(. 3.3 اختبار تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انزيم اليوريز Urease لمعرفة تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انتاج انزيم اليوريز في بكتيريا تم اضافة ثالثة ت اركيز (% من ا ازيد الصوديوم الى وسط اكار اليوريا ثم زرعت عزالت بكتيريا بتخطيط ( مائل الوسط بعدىا حضن الوسط ىوائيا بدرجة 37 م ولمدة 24 ساعة. 3.4 اختبار تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انزيم اليوريز Urease لمخاليا السابحة واالنثيالية لمعرفة تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انزيم اليويز المنتج من الخاليا السابحة والمنثالة حضر وسط يوريا السائل 0.01 المضاف لو اكار بنسبة ) (% في انابيب ثم اضيف اليو ثالثة ت اركيز )0.001 ( من ا ازيد الصوديوم وزرعت العزلة U1 بتخطيط مائل الوسط ثم حضنت االوساط ىوائيا لمدة 24 ساعة وبدرجة 37 م. 3.5 اختبار تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى تكوين الغشاء الحيوي Biofilm لمكشف عن تأثير ا ازيد الصوديوم عمى معدل تكوين الغشاء الحيوي تم استعمال طريقة الصفيحة العيارية اذ تم اضافة 3 انابيب عمى حدى حاوية عمى )10( مل من وسط Luria ت اركيز )0.01 (% من ا ازيد الصوديوم الى

6 المجيز من شركة( India ) Himedia والمحضر حسب تعميمات الشركة المصنعة ثم اتبعت التي bertani broth ذكرىا[ 14 ]. 4. النتائج والمناقشة: اعتمادا عمى الخصائص المزرعية عمى وسط الماكونكي واكار الدم االساس تبين ان جميع العزالت البكتيرية تعود 18 1 لمجنس Proteus اذ بينت نتائج االختبا ارت الكيموئية والموضحة في ان الجدول عزلة فقط تعود لبكتيريا [1,15]. تم تأكيد تشخيص العزالت باستخدام جياز فايتك 2 اذ كانت النسبة المئوية لتشخيص العزالت تترواح بين )9993( %. جدول 1: االختبا ارت الكيموحيوية Biochemical tests لعزالت بكتيريا Citrate Utilization العزالت البكتيرية العدد V.P catalase oxidase M.R Indole 08 متغاير M.R: Methyl Red, V.P: Voges Proskauer, نتيجة سالبة : نتيجة موجبة : واظيرت نتائج الكشف عن انتاج انزيم اليوريز ان جميع عزالت بكتيريا السريرية والحيوانية منتجة ألنزيم 2/2 اليوريز وبسرع مختمفة اذ وجد ان 7/7 )%100( عزلة من البول منتجة لالنزيم و )%100( عزلة من الجروح و 3/3 البصاق ومستقيم القطة منتجة 1/1 و لألنزيم )%100( عزلة من ب ارز الدجاج ومستقيم الكمب منتجة و لألنزيم [20] [19] [18] [17] [16] )%100( عزلة من بيئة المستشفيات منتجة لألنزيم. تتفق الد ارسة الحالية مع و و و و و أشاروا الى ان معدل انتاج انزيم اليوريز من عزالت بكتيريا المعزولة من البول و مسحات اذ [21] الجروح كان %100. اما الكشف عن تكوين الغشاء الحيوي اذ استخدمت طريقة الكونغو االحمر وايجابية الفحص عمى اساس اعطاء مستعم ارت سوداء المون اذ كانت جميع العزالت %100 غير قادرة عمى تكوين الغشاء الحيوي عمى اكار الكونغو االحمر اذ اعطت المستعم ارت المون الوردي الباىت الشكل كما في 1 لوحظ من النتائج الحالية ان عزالت بكتيريا 843

7 المعزولة من عينات سريرية ال تختمف عن عزالت العينات البيئية في عدم قدرتيا عمى تكوين الغشاء الحيوي في سط اكار الكونغو االحمر وقد يعود ذلك الى عدم قدرة البكتيريا عمى تكوين الطبقة المخاطية Slime layer والتي تعتمد عمى نوع الوسط المستعمل او قد يعود السبب الى الفعالية التثبيطية لصبغة الكونغو االحمر لظاىرة االنثيال Swarming والتأثير [23] عمى الغشاء الحيوي [22]. تتفق نتائج الد ارسة الحالية مع الذي اشار الى ان %100 من بكتيريا المعزولة من التياب المجاري البولية غير قادرة عمى تكوين الغشاء الحيوي عمى وسط اكار الكونغو االحمر اما [24] فقد اشار الى ان 66.6 % من عزالت بكتيريا المرضية غير قادرة عمى تكوين الغشاء الحيوي عمى اكار 90 الكونغو االحمر في حين اشار [25] الى ان % من بكتيريا المعزولة من التياب االذن الوسطى Otitis Media كانت مكونة لمغشاء الحيوي. اما طريقة الصفيحة العيارية فقد اظيرت نتائج الكشف عن معدل تكوين الغشاء الحيوي من قبل عزالت السريرية والحيوانية ان جميع العزالت كانت مكونة لمغشاء الحيوي وبدرجة قوية وكما مبين في 2. اشار[ 23 ] % 2 من بكتيريا جدول الى ان المعزولة من التياب المجاري البولية قادرة عمى تكوين الغشاء الحيوي بدرجة عالية.في حين اشار[ 21 ] الى ان %100 من بكتيريا قادرة عمى تكوين الغشاء الحيوي وبدرجة قوية اما [26] فقد اشار الى ان نسبة تكوين الغشاء الحيوي في بكتيريا % بدرجة ضعيفة المعزولة من العزالت سريرية كانت % بدرجة قوية و % بدرجة متوسطة و اما العزالت الحيوانية فقد كانت مكونة لمغشاء لمحيوي بنسبة % بدرجة قوية و % بدرجة متوسطة و بدرجة ضعيفة. شكل 1: قدرة بكتيريا عمى تكوين الغشاء الحيوي عمى اكار الكونغو االحمر Congo Red Agar 844

8 U= Urine, W=Wound, S= Sputum, CR= Cat Rectal, DR= Dog Rectal, CF= Chicken Feces, H.en=Hospital environment جدول 2: مصدر وعدد عزالت بكتيريا ودرجة تكوين الغشاء الحيوي باستخدام الصفيحة العيارية الدقيقة معدل الكثافة الضوئية (OD) Optical Density ضعيف وسط قوي عدد العزالت العزالت البكتيرية 7 U 2 W 2 S 1 CF 1 DR 2 CR U= Urine, W= Wound, S= Sputum, CR= Cat Rectal, DR= Dog Rectal, CF= Chicken Feces 2 جدول 3 و اما الشكل يوضح تأثير مادة ا ازيد الصوديوم في تثبيط انزيم اليوريز المنتج من بكتيريا اذ تشير النتائج الى ان تأثير المادة يختمف باختالف التركيز ومدة الحضن ومصدر العزلة اذ لوحظ ان التركيز 24 5 % اعطى فعال تثبيطيا منخفضا في جميع العزالت بعد ساعات من الحضن وبعد اتمام الحضن لمدة ساعة لم يؤثر %0.01 بعد 5 عمى انتاج االنزيم في العزالت السريرية والحيوانية في حين اظير التركيز ساعات من الحضن فعالية تثبيطية منخفضة في عزلة البصاق )S( ومستقيم القطة )CR( وقدرة تثبيطية كاممة في عزلة البول )U( والجروح )W( وب ارز الدجاج )CF( وبعد اتمام الحضن لمدة 24 ساعة اظير تأثير فعالية تثبيطية منخفضة عمى عزلة البول )U( و عزلة 24 5 الجروح )W( اما التركيز % فقد كان فعال في تثبيط انتاج انزيم اليوريز في العزالت السريرية والحيوانية بعد و ساعة حضن. ان امكانية تثبيط انزيم اليوريز باستعمال مواد مختمفة قد يعود لكون ىذه المواد تمتمك قابمية عمى التفاعل المباشر مع مجموعة النيكل في انزيم اليوريز او قد تتنافس مع االنزيم لالرتباط بالموقع الفعال فضال عن ان مثبطات انزيم اليوريز تعمل عمى تكوين روابط او كالليب ترتبط بمجموعة النيكل او تعمل عمى االتحاد مع اليوريا وتحول دون حدوث التفاعل االنزيمي [27,6]. 845

9 جدول 3: تأثير مادة ا ازيد الصوديوم Sodium azide عمى انتاج انزيم اليوريز في عزالت بكتيريا العزالت البكتيرية الت اركيز ( % ) Control Control U W S CF DR CR = عزلة منتجة لالنزيم = عزلة غير منتجة لالنزيم = متغاير H = Hours A B C D شكل 2: تأثير مادة ا ازيد الصوديوم Sodium Azide في انتاج انزيم اليوريز في عزالت بكتيريا A= اكار اليوريا )سيطرة( B= اكار اليوريا المعامل بمادة ا ازيد الصوديوم بتركيز %0.001 C= اكار اليوريا المعامل بمادة ا ازيد الصوديوم بتركيز % 0.01 D= اكار اليوريا المعامل بمادة ا ازيد الصوديوم بتركيز % 846

10 واختبر تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انتاج االنزيم في العزلة )U( المعزولة من البول اذ تبين النتائج و 5 الجدول في 4 تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انتاج انزيم اليوريز المنتج من الخاليا السابحة cell( )Swimmer والمنثالة cell( )Swarmer اذ تشير النتائج ان تأثير المادة يختمف باختالف مدة الحضن والتركيز اذ لوحظ ان كل من التركيز % و % 0.01 اعطى فعال تثبيطيا منخفضا في عزلة )U( بعد خمس ساعات من الحضن وبعد اتمام الحضن لمدة 24 ساعة اظير التركيز % 0.01 فعال تثبيطيا منخفضا اما التركيز % فقد كان فعال في تثبيط انتاج 24 انزيم اليوريز بعد 5 و ساعة حضن. بينت النتائج الحالية ان انتاج انزيم اليوريز في الخاليا االنثيالية لمعزلة )U( ال يختمف عن الخاليا السابحة وفي جميع الت اركيز وىذا ال يتفق مع الد ارسة التي اج ارىا [28] اذ اكد ان انتاج مقدار كبير من انزيم اليوريز في الخاليا المنثالة مقارنة مع الخاليا السابحة مشي ار ايضا ان اضافة مادة )PNPG( Pnitrophenyl glycerol تعمل عمى انخفاض كبير في انتاج عوامل الض اروة ومنيا انزيم Urease في الخاليا المنثالة مقارنة بالخاليا السابحة وىذا قد يعزى الى اختالف الطريقة المستعممة في التحري عن انتاج انزيم اليوريز في الخاليا المنثالة. جدول 4: تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انتاج انزيم اليوريز من قبل الخاليا السابحة في العزلة )U1( % 3.0 Agar Control Control العزالت البكتيرية U جدول 5: تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى انتاج انزيم اليوريز من قبل الخاليا االنثيالية في العزلة )U1( % 3.0 Agar Control Control العزالت البكتيرية U 847

11 الكثافة الضوئية عند طول موجي 630 نانوميتر P. mirabilis ووضحت النتائج في 3 الشكل ان جميع عزالت بكتيريا كانت منتجة لمغشاء الحيوي اذ كانت قيم الكثافة الضوئية Optical Density لمسيطرة حسب ترتيب العزالت ( البول الجروح البصاق ب ارز الدجاج مستقيم الكمب مستقيم القطة( كالتالي ( 0.384( واظيرت النتائج ايضا ان لمادة ا ازيد الصوديوم Sodium Azide تأثير واضح في تثبيط قدرة البكتيريا عمى تكوين الغشاء الحيوي عند تنمية البكتيريا عمى وسط زرعي سائل وبوجود ت اركيز مختمفة من مادة ا ازيد الصوديوم اذ ان زيادة التركيز يؤدي الى انخفاض في تكوين الغشاء الحيوي وكان التأثير واضح في تثبيط تكوين الغشاء الحيوي في جيع العزالت السريرية والحيوانية مقارنة بالسيطرة.Control ان تأثير مادة ا ازيد الصوديوم عمى تكوين الغشاء الحيوي قد يعود الى تأثيرىا عمى انظمة نقل [29] Quorum Sensing System (QS) االشا ارت الكيميائية بين الخاليا البكتيرية والذي يدعى بنظام اذ تعمل مادة ا ازيد الصوديوم عمى تثبيط جزيئات QS والتي ليا عالقة وثيقة بتكوين الغشاء الحيوي [30]. اشارت العديد من الد ارسات ان ال QS اثر واضح في التعبير الجيني لعوامل الض اروة التي تنتجيا البكتيريا ومنيا قابميتيا عمى تكوين الغشاء الحيوي وانتاجيا النزيم اليوريز فضال عن عوامل اخرى. وقد بينت النتائج التي تم الحصول عمييا ان تثبيط عامل من عوامل الض اروة ومنيا اليوريز يعمل عمى تثبيط تكوين الغشاء الحيوي لبكتيريا Control U W S CF DR CR العزالت البكتيرية شكل 3: تأثير مادة ا ازيد الصوديوم Sodium Azide عمى تكوين الغشاءالحيوي Biofilm لعزالت بكتيريا 848

12 5. االستنتاجات: مادة ا ازيد الصوديوم ذات تأثير فعال في تثبيط انتاج انزيم اليوريز من الخاليا السابحة والمنثالة وتكوين الغشاء الحيوي تبعا لمتركيز ومصدر العزلة.عممية تثبيط االنثيال ي ارفقيا تثبيط في عوامل الض اروة ومنيا انتاج انزيم اليوريز و تكوين الغشاء الحيوي. المصادر [1] W. Levinson, "Review of medical microbiology and immunology", 14 th Edition., McGrawHill education,inc (2016). [2] G. M. Garrity, D. J. Brenner, N. R. Krieg, J. T. Staley, D. R. Chairman, V. Boone, P. Chairman, M. DeVos, F. A. Good fellow, Rainey and KH. Schleifer, "Bergey s manual of systematic bacteriology, Vol. 2 the proteobacteria Part B the Gammaproteobacteria", Publisher Springer, (2005). [3] I. Kwill, D. Kazmierczak and A. Rozalski, "Swarming Growth and Resistance of Proteus penneri and Proteus vulgaris Strains to Normal Human Serum", Advances in clinical and experimental medicine, 22(2), 165 (2013). [4] D. Drzewiecka,"Significance and roles of Proteus spp. Bacteriain natural environments", Microbial ecology,72,741 (2015). [5] A. Rozalski, A. Torzewska, M. Moryl, I. Kwil, A. Maszewska, K. Ostrowska, D. Drzewiecka, A. Zablotni, A. Palusiak, M. Siwinska and P. Staczek,"Proteus sp. an opportunistic bacterial pathogen classification, swarming growth, clinical significance and virulence factors", Folia Biologica et Oecologica, 8, 1 (2012). [6] R. M. AbdelBaky, M. A. Ali, G. ED. A. A. AbuoRahma and N. AbdelAziz, "Inhibition of urease enzyme production and some other virulence factors expression in Proteus mirabilis by NAcetyl Cysteine and Dipropyl Disulphide",In: G. Donelli 849

13 (eds) Advances in microbiology, infectious diseases and public health,advances in experimental medicine and biology, Springer, Cham, 973, 99 (2017). [7] J. Hase and K. Kobashi, "Inhibition of Proteus vulgaris Urease by Hydroxamic Acids", The journal of biochemistry, 62(3), 293 (1967). [8] J. Prywer and A. Torzewska, "Effect of Curcumin Against Proteus mirabilis During Crystallization of Struvite fromartificial Urine", Hindawi Publishing Corporation, 2012, 1 (2012). [9] G. O toole, H. B. Kaplan and R. Kolter, "Biofilm formation as microbial development", Annual review of microbiology, 54, 49 (2000). [10] G. Schlapp, P. Scavone, P. Zunio and S. Härtel,"Development of 3D architecture of uropathogenic Proteus mirabilis batch culture biofilmsa quantitative confocal microscopy approach", Journal of microbiological methods, 87, 234 (2011). [11] N. Verstraeten, K. Braeken, B. Debkumari, M. Fauvart, J. Fransaer, J. Vermant and J. Michiels,"Living on a surface: swarming and biofilm formation", Trends microbiology, 16(10), 496 (2008). [12] B. A. Forbes, D. F. Saham and A.S. Weissfeld,"Baily and Scott s diagnostic microbiology", 12 th Ed., Mosby, Inc., an anffilliate of Elsevier, Inc, (2007). [13] D. J. Freeman, F. R. Falkiner and C.T. Keane,"New method for detecting slime production by coagulase negative staphylococci", Journal of clinical pathology, 42(8), 872 (1989). [14] A. Fusco, L. Corettil, V. Savio, E. Buommino, F. Lembo and G. Donnarumma, "Biofilm formation and immunomodulatory activity of Proteus mirabilis clinically isolated strains", International journal of molecular science, 18(2), 1 (2017). 851

14 [15] C. M. O'hara, F. W. Brenner, and J. M. Miller,"Classification, identification, and clinical significance of Proteus, Providencia, and Morganella", Clinical microbiology reviews, 13(4), 534 (2000). [16] P. M. Kafaf, "Study on some biological activity and Biotyping of Proteus mirabilis isolated from clinical samples",ms.c. Thesis, AlMustansiryia University College of Science, Iraq (2006). [17] W. W. AlBassam and AK. AlKazaz," The Isolation and characterization of Proteus mirabilis from different clinical samples", Journal of biotechnology research center, 7(2), 24 (2013). [18] T. H. Ali and H. M. Jasim, "Detection of virulence factors of local isolates of Proteus mirabilis, Journal of AlNahrain university Science, 17(4), 137 (2014). الطائي و ىادي الع ازوي اب ارىيم الرجب " د ارسة بكتيرولوجية لبكتريا Proteus mirabilis المعزولة من ]91[ عدنان.)8104( اصابات سريرية مختمف" مجمة ديالى لمعموم الصرفة 00)8( 48 [20] D. A. Ahmed, "Prevalence of Proteus spp. in some hospitals in Baghdad city", Iraqi Journal of Science, 65(1), 665 (2015). [21] M. J. AlDawah, A. H. AlHamadany and E. M. AlJarallah, " Study of Some Virulence Factors of Proteus mirabilis Isolated from Urinary Stones Patients", Journal of biology, agriculture and healthcare, 5(23), 85 (2015). [22] C. J. Ingham and E. B. Jacob, "Swarming and complex pattern formation in Paenibacillus vortex studied by imaging and tracking cells", BMC microbiology, 8(36), 1 (2008). [23] N. S. Subburaju, " In vitro biofilm formation and antimicrobial Susceptibility pattren of Uropathogens in Patients with catheter associated urinary tract infections (CAUTIS) ", University Journal of Pre and Para Clinical Sciences, 2(3), (2016). 850

15 ايمان محمود خضر ""التحري عن قدرة بعض األنواع البكتيرية عمى إنتاج المادة المخاطية "Slime layer ]24[ مجمة عموم ال ارفدين 24)1( 36 )2013(. لمياء سعود خضر ""تحديد بعض عوامل الض اروة لبكتريا Proteus mirabilis المعزولة من االشخاص ]25[ المصابين بالتهاب االذن الوسطى" مجمة تكريت لمعموم الصرفة 22)8( 27 )2017(. Proteus mirabilis عمي سعد كاظم حسين ""د ارسة بكتيريولوجية وجزيئية لمنوع المعزولة من مصادر ]26[ سريرية وحيوانية" رسالة ماجستير كمية التربية لمعمتوم الصرفة / ابن الييثتتتتم جامعة بغداد الع ارق )2016(. [27] L. S. B. Upadhyay,"Urease inhibitors : A review",indian journal of biotechnology, 11, 381 (2012). [28] SJ. Liaw, HC. Lai, S.W. Ho, K.T. Luh and WB. Wang, "Inhibition of virulence factor expression and swarming differentiation in Proteus mirabilis by p nitrophenylglycerol ", Journal of medical microbiology, 49(8), 725 (2000). [29] M.G. Kociolek,"QuorumSensing inhibitors and biofilms", Antiinfective agents in medicinal chemistry, 8, 315 (2009). [30] M. Ghaidaa, W. Yanchang and H. Abdallah,"The effect of pnitrophenylglycerol on swarming and the production of some virulence factors in Proteus vulgaris", New York Science Journal, 6(9), 08 (2013). 858