عزل وتشخيص أنواع من البكتريا اللاشائعة من أخماج مختلفة والتحري عن بعض عوامل ضراوتها

النسخ

1 مجمة عموم ال ارفدين المجمد 72 العدد 4 /عدد خاص بالمؤتمر العممي الثالث لعموم الحياة ص عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج مختمفة والتحري عن بعض عوامل ض اروتها لؤي مناع اب ارهيم الدوري الجامعة التقنية الشمالية محمد نظير معروف قسم عموم الحياة/ كمية التربية لمعموم الصرفة/ جامعة تكريت )ا ستمم 732/9/ ق بل 732/33( 3/ الممخص ج مع )220( عينة من مصادر أخماج مختمفة من مرضى مستشفى تكريت التعميمي ومستشفى سام ارء التعميمي والذين ظيرت عمييم أع ارض األصابة ومن كال الجنسين وبفئات عمرية مختمفة لمفترة مابين شير نيسان 207 الى كانون الثاني 208. أظيرت نتائج العزل أن عدد العينات التي ظير فييا نمو بكتيري موجب عمى األوساط المستخدمة ىي 35 )%6.4( وبواقع في حين أن 85 عينة بنسبة )%38.6( من مجموع العينات الكمية لم تعطي نمو بكتيري يذكر عينة بنسبة احتمت العزالت الشائعة في د ارستنا العدد االكبر من العزل النوعي بمجموع عينة وبنسبة )%82.2( أما بالنسبة لمعزالت الالشائعة أظيرت 24 عينة نمو بكتيري )%7.8( بينت النتائج ان بكتريا Morganella morganii شكمت النسبة األكبر من العزالت الالشائعة 3 عزالت Micrococcus luteus Pseudomonas stutzeri )%2.5( تمتيا Aerococcus urinae )%8.2( أما بقية األنواع فقد تم الحصول عمى عزلة واحدة فقط بنسبة) % ( بعزلتين أوضحت النتائج إن جميع العزالت أظيرت حساسية مطمقة بمغت) %00 ( للمضبد Imipenem ومقاومة مطمقة )%00( تجاه 0 مضادات أظيرت النتائج إمتالك كل من بكتريا Ochrobactrum anthropi Kocuria kristinae لثالثة عوامل ض اروة وىي β Urease Protease lactamase في حين إشتركت األنواع البكتيرية Gemella sanguinis Sphingomonas paucimobilis Pseudomonas fluorescens Pseudomonas stutzeri Aerococcus urinae ألختباري إنتاج Hemolysin βlactamase بينما امتمكت في إنيا أعطت نتيجة موجبة Alloiococcus Otitis Morganella morganii Kocuria rosea Pantoea agglomerans أما بالنسبة لمعزلتين βlactamase Urease إنتاج نوع واحد فقط من.βlactamase عاممين فقد أظيرت قدرتيا عمى الكممات الدالة:عزل اخماج بكتريا. Isolation and Identification of Uncommon Bacteria from Different Infections with Detection some Virulence Factors Luai M.I. AlDouri Northen Technical University Mohammed N. Maaroof Department of Biology/ College of Education for Pure Science University of Tikrit ABSTRACT A total of 220 samples were collected from different sources of infection from the patients of Tikrit Hospital and Samarra Teaching Hospital who showed symptoms of infection, both sexes and different age groups for the period from April 207 to January 208. The results of the isolating showed that the number of samples that showed positive bacterial growth on the used media was 35 samples (6.4%),while 85 samples (38.6%) of total samples did not produce significant 73

2 لؤي مناع اب ارىيم الدوري و محمد نظير معروف 77 bacterial growth, The common bacteria isolates in our study were the highest number of isolates with a total of samples and 82.2%, the uncommon bacterial isolates showed in 24 growth samples (7.8%). The results showed that Morganella morganii had the highest percentage of isolates by 3 isolates (2.5%), followed by Aerococcus urinae, Pseudomonas stutzeri, Micrococcus luteus with isolates (8.2%), for other species, only one isolate (%) was obtained, All isolates showed an absolute sensitivity of 00% for Imipenem and 00% absolute resistance to 0 antibiotics,the results showed that both bacteria Kocuria kristinae, O. anthropi, have three virulence factors, Protease, Urease, βlactamase, While the bacterial species Sphingomonas paucimobilis, Gemella sanguinis, Aerococcus urinae, Pseudomonas stutzeri, Pseudomonas fluorescens, gave a positive test result for the production of βlactamase, Hemolysin, while Morganella morganii, Alloiococcus Otitis have two factor, Urease, Βlactamase. As for the isolates Pantoea agglomerans, Kocuria rosea has shown its ability to produce only one type of βlactamase. Keywords: Isolation, Infections, Bacteria. المقدمة تعرف األخماج ب نيا دخول وتضاعف الكائن الحي المجيري داخل جسم المضيف والذي يولد تفاعل معين في جسم المضيف إن أىم األخماج المرضية المكتسبة لألنسان داخل المستشفيات ىي أخماج الجروح Wound infection وأخماج الجياز التنفسي تعد )UTI( Urinary Tract Infection كما و ت عذ االصببة ببلتهبببت المسبلك البىلية Respiratory tract infection مه اكثر االصبببت البكتيرية في االوسبن ولكبفة الفئبت العمرية المختلفة )2007 al.,.)godaly et al., ;205 Mahon et البكتريا من المسببات الرئيسية والميمة ليذه األخماج وتتنوع البكتريا المسببة لمخمج بين البكتريا واسعة األنتشار )الشائعة( االكثر شيوعا Staphylococcus aureus Escherichia coli Klebsiella Pseudomonas.aeruginosa 2004( al.,.)tortora et al., 2004 ; Haghi et والبكتريا ذات التواجد الضئيل Proteus mirabilis pneumonia )الالشائعة( مثل أنواع الجنس Acinetobacter Micrcoccus Aeromonas (Janda and Abbott, 200) Kocuria Citrobacter والتي تمتاز ب متالكيا عوامل الض اروة المتنوعة من خالل انتاجيا لمذيفانات وانزيم ال Urease أنزيم والقدرة عمى تحمل كريات الدم من خالل إنتاج إنزيم ال.)Tortora et al., )2004 Hemolysin Protease عرفت المضادات الحيوية ب نيا مركبات عضوية تنتج بواسطة أنواع معينة من ابحياء المجيرية بصورة طبيعية أو مصنعة وتستطيع ىذه المواد وبت اركيز ضئيمة قتل أو تثبيط أحياء مجيرية إخرن من خالل ا ليتين األولى اعاقة التكامل البنائي حيث يمنع بناء الغشاء البالزمي والجدار الخموي والثانية البناء األيضي مثل بناء األحماض النووية وصناعة البروتينات المختمفة والتي تمعب دو ار رئيسا في حياة الخمية البكتيرية) 2003 Hill,.)Balat and تضم المضادات الحيوية مجاميع كبيرة من المضادات ومنيا البيتاالكتام وتشترك ىذه المجاميع ب حتوائيا عمى حمقة البيتاالكتام تتفرع الى أربع مجاميع رئيسة ىي ال Haghi ( Monobactams Carbapenems Cephalosporins Penicillin al., 2004(. et اذ تعد األكثر استعماال وشيوعا بسبب ت ثيرىا العالي بالقضاء عمى البكتريا وقمة الت ثي ارت الجانبية وسميتيا المنخفضة عمى خاليا األنسان مقارنة مع المجاميع األخرن) al.,2005.)helio et تعد مقاومة البكتريا لممضادات الحيوية ب نتاجيا ألنزيمات البيتاالكتام وانتاجيا لعوامل الض اروة من السموم وانزيمات Protease Urease وتحميميا لكريات الدم واحدة من المشاكل الصحية الرئيسة ومن أخطر الظواىر الوبائية عمى المجتمع البشري والتي تسبب انتشار واسع لمبكتريا لذا ىدفت د ارستنا عزل األنواع البكترية الالشائعة والكشف عن قدرتيا عمى انتاج عوامل الضرواة ومقاومتيا لممضادات الحيوية لمحد منيا والسيطرة عمييا. المواد وطرائق العمل

3 7 عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج... جمع العينات جمعت )220( عينة من Specimens Collection 207/4/ الى مصادر مختمفة المصابين بال) UTI ( والجروح والتياب األنف واألذن والحنجرة لمفترة مابين 208// ومن كال الجنسين بفئات عمرية مختمفة من ال ارقدين والم ارجعين لمستشفى سام ارء ومستشفى تكريت التعميمي والذين يعانون من اع ارض االخماج المختمفة. سجمت المعمومات المتعمقة بالعمر والجنس ووجود إصابات سابقة وتناول المضادات الحيوية تشخيص العزالت البكتيرية لكل مريض عمى حدة. Bacterial identification الفحص المجهري Microscopic examination أخذت وصبغت بصبغة مسحة من مستعم ارت كل مزرعة بكتيرية ومزجت مع قطرة من الماء ك ارم Gram stain استجابة الخاليا لمصبغة وشكميا وترتيبيا. المقطر الموضوعو ثم ف ح ص ت بالمجير الضوئي باستخدام العدسة الزيتية بقوة تكبير نيائي بالخمج عمى شريحة زجاجية X00 األختبا ارت الكيموحيوية:( 997 al.,.(forbes et al., 2002; Koneman et مجموعة اختبا ارت ال. IMViC أ.اختبار إنتاج االندول. Indole Production Test ب اختبار المثيل االحمر (M.R.).Methyl Red Test ج اختبار فوكس بروسكور (V.P.).VogesProskaur Test د اختبار استهالك الست ارت.Citrate Utilization Test 2 اختبار الكاتاليز.Catalase test. Oxidase test.mannitol fermentation test 3 اختبار االوكسيديز 4 اختبار تخمر المانيتول تأكيد التشخيص بأستخدام جهاز Vitek 2 compact system استخدم ىذا الجياز في تشخيص العزالت ت كيد البكتريا من خالل عدد تشخيصية خاصة بالجياز بعد تشخيصيا في الطرق االعتيادية تحتوي عده التشخيص عمى 47 ويحضن لمدة 24 ساعة ويسجل الجياز التغي ارت المونية الحاصمة نتيجة لنمو البكتريا. فحص الحساسية لممضادات الحيوية Antibiotic sensitivity test حفرة لمالحظة إذ يستخدم لتشخيص اغمب انواع تمقح بمعمق بكتيري بعمر 24 اجري اختبار الحساسية باستعمال )20( نوعا من المضادات الحيوية عمى العزالت البكتيرية الموجبة والسالبة لصبغة ك ارم ساعة قيد الد ارسة بطريقة االنتشار بابق ارص عمى وسط مولرىنتون وبحسب طريقة method( )Kirbybauer, المعدلة والموصوفة من قبل منظمة الصحة العالمية al.,2003(.)vandepitte et التحري عن انتاج عوامل الض اروة أختبرت قدرة العزالت الالشائعة عمى تحميل كريات الدم الحم ارء واليوريا وتحميل البروتينات والمقاومة لممضادات الحيوية ب ستخدام األختبا ارت) 2000, Macfaddin :)Atlas and Synder, 203 & اختبار إنتاج إنزيم اليوريز. Urease test 2 اختبار انتاج انزيم البيتاالكتاميز.β Lactamase production test 3 اختبار إنتاج الهيمواليسين.Hemolysin production test

4 Simmons Citrate Methyl Red Voges Proskaur Indole Lactose fermentation Oxidase Catalase لؤي مناع اب ارىيم الدوري و محمد نظير معروف 74 اختبار انتاج البروتيز.Alkaline protease test 4 العزل والتشخيص Isolation and Identification أظيرت النتائج ب ن عدد العينات التي ظير فييا نمو بكتيري موجب عمى األوساط المستخدمة ىي 35 عينة أي بنسبة )%6.4( من مجموع العينات لممرضى المصابين باألخماج المختمفة في حين أن 85 عينة بنسبة )%38.6( من مجموع العينات الكمية لم تعطي نمو بكتيري يذكر ىذه النتيجة مقاربة مع النتائج التي حصل عمييا )205( Jomard Al في د ارستو ألخماج الجروح والجياز التنفسي والمسالك البولية في كركوك الذي وجد أن النتيجة الموجبة لمنمو ىي )%62.22( وعدم وجود نمو ل 68 عزلة بنسبة )%37.77(. وقد احتمت العزالت الشائعة في د ارستنا العدد االكبر من العزل النوعي بمجموع عينة وبنسبة ) 82.2 %( أما بالنسبة لمعزالت الالشائعة أظيرت 24 عينة نمو بكتيري )%7.8( وىي تتطابق مع ماتوصل اليو الباحث )207( Faraj بحصولو عمى 7 عزلة من البكتريا الالشائعة المشابيو ألنواع عزالت د ارستنا من بين 722 عزلة. شخصت العزالت النامية باالعتماد عمى الفحوصات المجيرية والمظيرية واألختبا ارت الكيموحيوية )الجدول ( وجياز ال Vitek2 حيث اظيرت نتائج التشخيص األختالف في أنواع البكتريا المعزولة وأعدادىا ونسبيا وكما مبين في )الجدول 2(. الجدول :االختبا ارت الكيموحيوية لمبكتريا الالشائعة المعزولة من عينات سريرية مختمفة. األختبارات الكيموحيوية البكتريا الالشائعة Citrobacter freundii Citrobacter koseri Acinatobacter calcoaceticus Acinatobacter baumanii Sphingomonas paucimobilis Morganella morganii Enterobacter ludwigii Pseudomonas fluorescens Aeromonas salmonicida Pantoea agglomerans Ochrobactrum anthropi Pseudomonas stutzeri Kocuria rosea Kocuria kristinae Micrococcus luteus Alloiococcus otitis Gemella sanguinis Streptococcus sobrinus Aerococcus urinae

5 73 عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج... الجدول 2: األنواع البكتيرية الالشائعة المعزولة ونسبها المئوية. عزالت البكتريا مصدر عدد النسبة المئوية النسبة المئوية الالشائعة العزل العزالت لمعزل اإلجمالي* لمعزل النوعي** الجروح Citrobacter freundii Citrobacter koseri Acinatobacter calcoaceticus Acinatobacter baumanii Sphingomonas paucimobilis Morganella morganii الجروح القشع Enterobacter ludwigii Pseudomonas fluorescens Aerococcus urinae Pantoea agglomerans Ochrobactrum anthropi Pseudomonas stutzeri 8.2 % والجروح الجروح الجروح Kocuria rosea Kocuria kristinae Micrococcus luteus Aeromonas salmonicida Alloiococcus otitis Gemella sanguinis Streptococcus sobrinus المجموع أظيرت النتائج أن بكتريا Morganella morganii شكمت النسبة األكبر من العزالت المتحصل عمييا وبواقع 3 عزالت )%2.5( عند الفحص المجيري وجدت بشكل عصيات قصيرة مائمة الى الشكل الكروي سالبة لصبغة ك ارم ان ىذه النتائج جاءت متقاربة لنتائج ماتوصل اليو الباحثان )2009( AlGrawi Auda and بحصوليم عمى عزلتين من بين 220 عزلة في د ارستيم المحمية في مدينة بغداد في حين إختمفت النتائج بشكل كبير مع الد ارسة العالمية التي قام بيا الباحث Chen وا خرون )202( بحصولو عمى 3739 عزلة من النوع البكتيري Morganella morganii من أخماج الجروح والمسالك البولية في

6 لؤي مناع اب ارىيم الدوري و محمد نظير معروف 72 مستشفيات تايمند ولمفترة من إن سبب ىذا االختالف قد يعزن لمموقع الجغ ارفي لمنطقة العزل أو اختالف الظروف البيئية. كما وجدت عزلة واحدة لبكتريا Citrobacter koseri وبنسبة) % ( من أحد المصابين بالتياب المسالك البولية وانيا مخمرة لالكتوز عمى الوسط الزرعي سالبة لك ارم عند الفحص المجيري كما يوضح )الجدول 2( ظيور عزلة وحيده وبنسبة )%( تابعة لمنوع Citrobacter frendii مخمرة لالكتوز عمى وسط الماكونكي MacConkey agar ذات مستعم ارت صغيرة ومشابيو في نتائج االختبا ارت الكيموحيوية لمنوع Citrobacter koseri ماعدا انيا سالبة ألختبار األندول. تقاربت ىذه النتائج مع د ارسة الباحث al. )202) Baral et في النيبال بحصوليم عمى 5 عزالت تتبع الجنس Citrobacter spp اثنان تعود لمنوع من مجموع 29 عزلة لممصابين بالUTI. Citrobacter frendii و 3 عزالت عائدة لمنوع Citrobacter koseri كما يشير )الجدول 2( الى أعداد ونسب عزالت بكتريا Pseudo.stutzeri وبواقع عزلتين وبنسبة) %8.2 ( من مجموع العزالت الالشائعة ظيرت بشكل عصيات سالبة لك ارم تحت المجير وغير مخمرة لسكر الالكتوز عمى ال MacConkey agar أما عمى وسط ال Nutrient agar فكانت مستعم ارتيا صغيرة ومت ارصة مع بعضيا البعض بشكل كبير خشنة جافة غير منتجة لمصبغات تكون ذات لون أبيض شفاف لكال العزلتين موجبة ألختباري الكاتميز واألوكسيديز وعند تشخيصيا بجياز ال Vitek وجد عدم إمتالكيا لم βgalactosidase واحتمالية التشخيص كانت %98 و %99 عمى التوالي لمعزلتين. إقتربت الد ارسة الحالية مع الباحثPark وا خرون )203( عند د ارستيم لتموث القثاطر والمسالك البولية حيث تحصموا عمى 9 عزلة تتبع الجنس.Pseudo.stutzeri وكانت نسبة %8 من نصيب النوع Pseudomonas كما أظيرت النتائج وجود عزلة واحدة بنسبة ) %( تعود الى النوع Pseudo.fluorescens تم عزليا من القشع كانت سالبة لك ارم عند فحصيا مجيريا وبشكل عصيات واضحة وغير مخمرة لالكتوز موجبة لألوكسيديز والكاتميز أن الد ارسات العديدة المحمية والعالمية التي قام بيا الباحثين بينت إختالف مع د ارستنا من ناحية مصدر العزل الخمجي حيث أشارت الد ارسة المحمية في محافظة ذي قار لمباحث) 204 ( Abas and Salih الجروح وكذلك الد ارسة التي قام بيا كل من) 204 ( الجمد الخارجي ألحد المرضى ال ارقدين في مستشفيات إي ارن. كما أشارت النتائج وجود عزلة وحيدة لمنوع الى حصوليم عمى عزلة واحده من Pseudo.fluorescens Ghane and Azimi معزولة من بحصوليم عمى عزلة واحدة لنفس النوع عزلت من Ochrobactrum anthropi بواقع )%( من العزل النوعي وجدت بشكل عصيات سالبة عند التصبيغ والفحص تحت المجير الضوئي ذات تحدب منخفض ممساء مستعم ارتيا دائرية صغيرة الحجم عمى الوسط المغذي وغير منتجة لمصبغات تقاربت ىذه النتائج نسبيا مع الد ارسة المحمية التي قامت بيا الباحثة العبيدي )732( في محافظة صالح الدين بد ارستيا لمسببات التياب المسالك البولية لدن الحوامل بحصوليا عمى نسبة )%6.5(. كما تم الحصول عمى عزلتين تابعة لمجنس Acinetobacter لنوعين من ىذا الجنس وىما عزلة لمنوع Acinetobacter baumanii بنسبة )%( عزلت من الجروح وعزلة إخرن تابعة لمنوع Acinetobacter calcoaceticus بنفس نسبة العزل عزلت من األد ارر حيث أظيرت ىذه العزلتان تشابو كمي بالصفات التي تحمميا من ناحية ظيورىا بشكل عصوي مائل لمكروي سالبة لصبغة ك ارم تحت المجير إن تشابو الصفات بين النوعين يصعب عمى الباحث تشخيصيا بدقة ولكن يمكن تشخيصيا بواسطة الVitek أو باألعتماد عمى التشخيص الو ارثي الجزيئي. أظيرت النتائج الحصول عمى عزلة واحدة من عصيات وعند التصبيغ كانت سالبة لك ارم الد ارسة العالمية لمباحث) 20 ( بكتريا Sphingomonas paucimobilis وبنسبة )%( et al. ظيرت بشكل موجبة ألختبار الكاتميز وسالبة لألوكسيديز ولألختبا ارت الكيموحيوية توافقت د ارستنا مع Krishna في اليند والذي حصل عمى عزلة واحدة من Sphingomonas

7 72 عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج... paucimobilis من أحد المرضى الذي قام بزرع الكمية. في حين إختمفت مع الباحث )205( Kumar, بحصولو عمى نسبة فاقت ال) %20 ( لعزل ىذا النوع من التياب المسالك البولية. كذلك تم الحصول عمى عزلة واحدة بواقع نسبة عزل )%( تابعة لبكتريا Enterobacter ludwigii ماذكره الباحث )2006( Tuama, وىذا يتطابق مع في د ارستو المحمية التي أج ارىا في كربالء عمى األطفال حيث حصل عمى عزلة واحدة من ىذا النوع قام بعزليا من التياب المسالك البولية كما أظيرت نتائج العزل من المصابين بالتياب الجروح Wound infection الحصول عمى عزلة تابعة لمنوع Aeromonas salmonicida بنسبة )%( والتي تشير البحوث ب نيا غير ممرضة لألنسان أظيرت تشابيو في قدرتيا عمى النمو بدرجة ح اررة محصورة بين 3722 م ولم تكون الصبغات حتى بعد نموىا عمى األكار لمدة 72 ساعة وأكثر كما أظيرت األختبا ارت الكيموحيوية موجبة ألختبار األندول والمثيل األحمر وموجبة ألختباري األوكسيديز والكتاليز وىذا ماتم ت كيده عند إعادة تشخيص العزلة بجياز الVitek. تطابقت النتيجة المتحصل عمييا مع د ارسة الباحثان سممان وحسين )733( عند حصوليم عمى 7 عزلة تتبع الجنس Aeromonas واحدة فقط من ىذه العزالت تابعة لمنوع Aeromonas salmonicida عزلت من الجروح في د ارستيم ألخماج مختمفة في مستشفيات مدينة الديوانية وب ستخدام جياز الVitek فيما أشارت د ارسة إخرن قامت بيا الباحثة العبيدي )732( الى إمكانية عزليا من مصدر أخر غير الجروح حيث حصمت عمى 3 عزالت مصدرىا التياب عنق الرحم. كما تم الحصول عمى عزلة واحدة وبواقع )%( من بكتريا المصابين بالتياب المسالك البولية األختبا ارت Pantoea agglomerans (UTI) كانت موجبة ألختبار ال Catalase الكيميوحيوية ايجابية لمست ارت والفوكس بروسكر وكما جاء في تقرير جياز وسالبة لألوكسيديز الVitek تابعة ألحد المرضى األطفال Oxidase وأظيرت عند ت كيد تشخيصيا وبنسبة تشخيص بمغت %99. أشارت د ارسة قام بيا الباحث al. )2007) Cruz et في مستشفى Houston لألطفال في والية تكساس األمريكية من خالل م ارجعة سجالت تشخيص البكتريا وب ستخدام جياز الVitek من يناير لمعام 2000 الى ديسمبر 2006 وجدوا تشخيص 88 طفل مصاب بالagglomerans Pa. في د ارستنا في حين إختمفت مع الباحث مستشفى األطفال بماليزيا. من مصادر مختمفة عزلتين مصدرىا خمج المسمك البولي وىو مقارب لما وجد Habsah et al. )2005( بحصولو عمى 8 عزلة من األطفال الرضع ال ارقدين في كما أظير )الجدول 2( الخاص بالبكتريا الالشائعة ظيور عزلتين من بكتريا Aerococcus urinae عزلت من األد ارر بنسبة عزل بمغت )%8.2( التصبيغ والفحص المجيري أثبت إيجابيتيا لصبغة ك ارم وظيرت بعده أشكال كروية مفردة وبشكل ازواج كروية وسالسل قصيرة سالبة لألختبار الكتاليز واألوكسيدز جاءت ىذه النسبة مقاربة لما توصل اليو الباحث )732( Faraj في د ارستو المحمية بحصولو عمى عزلة وحيدة من األد ارر لمurinae Aerococcus من بين 286 عزلة وب ستخدام جياز الVitek في التشخيص بدقة %89. تميزت د ارستنا بالحصول عمى عزلتين من الجنس البكتيري kocuria غير الممرضة لألنسان اال في حاالت ضعف المناعة اذ عزل من األد ارر نوعين ىما عزلة لمنوع K.rosea وعزلة لمنوع K.kristinae بنسبة عزل بمغت )%( لكل عزلة إن العديد من البحوث التي إجريت ألنواع الجنس kocuria بينت إمكانية عزل أنواع ىذا الجنس من أخماج مختمفة عن التياب المسمك البولي. منيا د ارسة) 20 ( al. Lai et حيث قام بعزليا من تجرثم الدم والد ارسة التي قام بيا al.)73( et حصل عمى النوع K.rosea Rushani من أحد األطفال المصابين بالتياب شغاف القمب في حين بينت د ارسة حديثة قام بيا )206( والذي et Venkataramana al. حصولو ألول مرة عمى عزلة من النوع K.rosea معزولة من إد ارر أحد المرضى البالغ من العمر 65 عام في اليند وب ستخدام تقنية الVitek بالتشخيص كما أشار الباحث al.)203( et Tewari لحصولو ألول مرة عمى بكتريا

8 لؤي مناع اب ارىيم الدوري و محمد نظير معروف 72 K.kristinae من إد ارر أحد المرضى المصابين بخمج المسالك البولية والذي يبمغ من العمر 20 عام وىذا ما يتطابق مع د ارستنا بحصولنا عمى عزلتين من المصابين بالتياب المسالك البولية بواقع عزلة لكل نوع. كما أشار)الجدول 2( الى أعداد ونسب عزالت بكتريا Micrococcus luteus وبواقع عزلتين من األد ارر وبنسبة) %8.2 ( من مجموع العزالت الالشائعة تقاربت الد ارسة الحالية مع د ارسة عالمية لمباحث al.)733( et Ayoade عند حصوليم عمى عزلتين تابعة لمنوع Micrococcus luteus من بين 55 عزلة معزولة من إد ارر المرضى المصابين بخمج المسمك البولي في إحدن مستشفيات نيجيري وأوجدت النتائج وجود عزلة واحدة بنسبة ) %( تتبع النوع Gemella sanguinis أظيرت نمو بشكل مستعم ارت صغيرة جدا بعد 24 ساعة من التحضين بدرجة 37 c عمى وسط الagar Nutrient واكمل نموىا بعد 48 ساعة من التحضين وكانت مستعم ارتيا بشكل دائري ممساء لونيا أبيض مائل الى شفاف ولم تفرز أي صبغات تذكر. كما تم الحصول عمى عزلة )%( من بكتريا Alliococcus otitis ظيرت موجبة لصبغة ك ارم كروية الشكل مترتبة بشكل أزواج ورباعيات tetrads وعند ز ارعتيا عمى الوسط المغذي إستغرقت أكثر من 72 ساعة لظيور النمو سالبة لمOxidase موجبة ألختبار الCatalase ومن خاللو تم تفريقيا عن النوع Streptococcus sobrinus لمتشابو الكبير بينيما عند الفحص المجيري والمظيري لكال النوعين وتم ت كيد تشخيصيا بالVitek وبدقة بمغت %89. تقاربت ىذه النتيجة مع النتيجة المتحصل عمييا في الد ارسة العالمية في جنوب أفريقيا من قبل الباحث )7) al. Frank et عند حصولو عمى عزلتين من من المرضى المصابين بجروح قريبة من األذن وتم تشخيصيا و ارثيا ب ستخدام الPCR. Alliococcus otitis وأخي ار تم الحصول عمى عزلو واحدة من البكتريا الالشائعة بنسبة )%( من بكتريا Streptococcus sobrinus كانت موجبة لصبغة ك ارم كروية الشكل مترتبة بشكل أزواج وسالسل وعند ز ارعتيا عمى الوسط المغذي لوحظت مستعم ارت صغيرة الحجم ممساء ذات لون أبيض شفاف وسالبة ألختباري الOxidase والCatalase وتم ت كيد تشخيصيا بجياز ال Vitek وبدقة بمغت %93. وىذا ماجاء متوافق مع د ارسة) 732 ( Faraj عند تشخيصو لمعزالت الموجبة لصبغة ك ارم بجياز الVitek حيث إستطاع من الحصول عمى عزلة واحدة من Streptococcus sobrinus عزلت من عينو إد ارر أحد المرضى ال ارقدين في مستشفى مدينة السميمانية وبدقة %89. الحساسية لممضادات الحيوية أظيرت نتائج أختبار الحساسية ان جميع العزالت الالشائعة المدروسة السالبة والموجبة لصبغة ك ارم مقاومة بصورة مطمقة بمغت) %00 ( تجاه 0 مضادات من المضادات المستخدمة وىي Cephalothin Neomycin Ampicillin/Cloxacillicn Carbenicillin Aztreonam Ceftazidime Piperacillin Metronidazole Oxacillicn Rifampin العزالت السالبة والموجبة. البكتيرية وحساسية تامة )%00( بالنسبة لمضاد واحد فقط لممضاد Imipenem كما موضح في الصورة ولجميع )( أن العزالت المدروسة أظيرت تباينا ممحوظا في مدن الحساسية والمقاومة لممضادات الحيوية حيث أظيرت عزالت األنواع Acinatobacter Citrobacter freundii Enterobacter ludwigii Acinatobacter calcoaceticus Aeromonas salmonicida baumanii مقاومة مطمقة ل 9 مضاد) %95 ( بينما كانت حساسة لمضاد واحد ىو ال.Imipenem إن جنس ال Kocuria المعزول بنوعين من األد ارر أظير تقارب كبير في مقاومة المضادات الحيوية حيث أظير النوع Ofloxacin Norfloxacin Levofloxacin مقاومة إتجاه 4(%70) مضاد وحساسة لكل من Kocuria kristinae rosea بينما لوحظ مقاومة النوع Meropenem Doxycycline المضادات الحيوية لمنوع Kocuria kristinae باألضافة لحساسيتيا لممضاد.Oxytetracycline Kocuria إتجاه 3)%65( وحساس بالنسبة لنفس

9 79 عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج... الصورة : حساسية بكتريا E.ludwigii لممضادImipenem ومقاومتها لممضادات االخرى. أظيرت عزالت أنواع الجنس Pseudomonas تشابيو اتجاه مقاومة المضادات حيث اظير النوع Pseudo. fluorescens المعزول من القشع والنوع Pseudo. stutzeri المعزول من المرضى المصابين بالتياب الجروح والتياب المسالك البولية مقاومة عالية إتجاه 32 مضاد بمغت )%85( وحساسة لممضادين. Doxycycline Azithromycin عمى الرغم من عزل النوع البكتيري Morganella morganii من مصدرين مختمفين من األخماج األد ارر والجروح اال إن نتيجة فحص الحساسية لممضادات الحيوية لمعزالت الثالثة أثبت مقاومتيا لنفس المضادات وبواقع 5)%75( وحساسة إتجاه المضادات.Doxycycline Ofloxacin Norfloxacin Levofloxacin كما أظيرت عزلتا بكتريا Micrococcus luteus المعزولتين من إد ارر المصابين بالمسالك البولية تشابيا ممحوظا حيث وجدت مقاومة ل 6)%80( نوع من المضادات وحساسة إتجاه كل من Doxycycline Ofloxacin Aerococcus urinae بينما لوحظ مقاومة ل 2 مضاد حيوي فقط بنسبة )%60( من قبل عزلتي النوع.Levofloxacin المعزولة من األد ارر أيضا بينما أظيرت ت ثرىا بالمضادات Doxycycline Ofloxacin Norfloxacin Levofloxacin بابضافة الى.Oxytetracycline Lincomycin Meropenem بينما أظيرت العزالت األخرن من البكتريا الالشائعة والمعزولة بواقع عزلة مفردة تباين في مقاومتيا لممضادات المدروسة حيث كان النصيب األكبر لبكتريا Sphingomonas paucimobilis بمقاومتيا 32)%90( مضاد حيوي وحساسة لممضاد Meropenem باألضافة الى ال Imipenem الذي وجدت لو حساسية تامة من جميع العزالت الالشائعة المعزولة كما ذكر سابقا. تمتيا بكتريا Pantoea agglomerans بنسبة مقاومة )%85( إتجاه 32 مضاد وحساسة لألنواع Levofloxacin.Ofloxacin كما وجدت مقاومة ل 32 مضاد من قبل بكتريا C.koseri بنسبة )%80( حيث أظيرت بكتريا C.koseri ت ثرىا بالمضادات. Doxycycline Meropenem Ofloxacin Lincomycin Levofloxacin في حين وجد تطابق في نسبة المقاومة لممضادات والتي بمغت )%75( إتجاه 33 مضاد من قبل األنواع البكتيرية المعزولة من األد ارر وىي Gemella sanguinis Streptococcus sobrinus لكنيا إختمفت في نوع المضاد الحيوي الحساسو لو حيث أظيرت G.sanguinis حساسية إتجاه Netilmicin Levofloxacin Oxytetracycline

10 لؤي مناع اب ارىيم الدوري و محمد نظير معروف Azithromycin Ofloxacin ت ثرىا بالمضادات Strp.sobrinus بينما أظيرت بكتريا.Doxycycline.Doxycycline Oxytetracycline كما وجد عزلة واحدة تتبع النوع Ochrobactrum anthropi وعزلة واحدة لمنوع Alloiococcus otitis ليما نفس شدة المقاومة بنسبة )%70( 34 لممضادات حيث كان النوع O.anthropi حساس إتجاه كل من Doxycycline.Levofloxacin Ofloxacin Azithromycin Oxytetracycline وعدم قدرة بكتريا Alloiococcus otitis عمى مقاومة المضادات Ofloxacin.Meropenem Doxycycline Netilmicin Levofloxacin إن الد ارسات البحثية التي تضمنت حساسية البكتريا الالشائعة لممضادات الحيوية قميمة نسبيا نذكر منيا د ارسة الباحث )733( Kumar في اليند الذي إستخدم 3 مضادات لفحص مقاومة وحساسية بكتريا Sphingomonas paucimobilis حيث وجد نسبة مقاومة إتجاه 9 مضادات بمغت )%90( وحساسية إتجاه مضاد واحد ىو Cotrimoxazole ولكنيا إختمفت بكونو وجد مقاومة إتجاه المضاد Imipenem وىذا ما يتضاد مع د ارستنا بحصولنا عمى حساسية مطمقة لنفس المضاد كما أشار الباحثان Azimi,)204( Ghane and في د ارستيم 23 عزلة من أنواع الجنس Pseudomonas في شمال إي ارن الى وجود مقاومة لممضاد Imipenem بنسبة )%3( ومقاومة لممضادات األخرن بنسب مختمفة Doxycycline )%22( Oxytetracycline )%2( فيما توصل الباحث al.,)73( Park et في العاصمة الكورية سيولSeoul الى إمكانية عالج النوع البكتيري Levofloxacin Imipenem من خالل ظيور حساسية مطمقة) %3 ( لممضادات المستخدمة وىي Pseudo. stutzeri Pantoea agglomerans في د ارستيم لبكتريا Cruz et أشار) al.,)72 Aztreonam Piperacillin Meropenem ampicillin الى وجود حساسية ليذه البكتريا بنسبة )%97.3( إتجاه المضادات Trimethoprim Meropenem.Ofloxacin انتاج عوامل الض اروة اختبرت قدرة عزلة من البكتريا الالشائعة والمعزولة من أخماج مختمفة عمى إنتاج 4 عوامل ض اروة وىي: تحميل كريات الدم الحم ارء من خالل أنتاج إنزيم الييموالسين Hemolysin enzyme إنزيم اليوريا Urease تحميل البروتينات بواسطة إف ارزىا ألنزيم الProtease ومقاومتيا لممضادات الحيوية من خالل تشفيرىا ألنزيم البيتاالكتاميز β Lactamase كسر حمقة البيتاالكتام في المضاد الحيوي وتثبيط فاعميتو وكما ىو موضح ب)الجدول 3(. الجدول 3: عوامل الض اروة لمعزالت البكتيرية الالشائعة. الذي يعمل عمى األنواع البكتيرية عوامل الض اروة βlactamase Hemolysin Protease Urease Morganella morganii Kocuria kristinae Ochrobactrum anthropi Alloiococcus Otitis Sphingomonas paucimobilis Gemella sanguinis Pseudomonas Fluorescens Aerococcus urinae

11 3 عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج... Pseudomonas stutzeri Pantoea agglomerans Kocuria rosea بينت النتائج لمكشف عن عوامل الض اروة إمتالك كل من بكتريا Ochrobactrum anthropi Kocuria kristinae لثالثة عوامل ض اروة وىي Urease βlactamase Protease وعدم قدرة ىاتين العزلتين عمى إنتاج ال Hemolysin بينما أظير العدد األكبر من البكتريا الالشائعة وبواقع 2 عزالت إيجابية لعاممين فقط من عوامل الض اروة حيث أظيرت كل من بكتريا Alloiococcus Otitis Morganella morganii قابيمتيا عمى إنتاج ال Urease وال βlactamase وكما ىو موضح في الصورة )7( وسالبة ألنتاج Protease وتحميل الدم بواسطة ال Hemolysin وقد إشتركت األنواع البكتيرية Sphingomonas Pseudomonas Pseudomonas stutzeri Aerococcus urinae Gemella sanguinis paucimobilis β من نوع التحمل الكامل بيتا Hemolysin وال βlactamase في إنيا أعطت نتيجة موجبة ألختباري إنتاج ال fluorescens Protease Urease وكانت سالبة ألنتاج hemolysin أما بالنسبة لمعزلتين األخيرتين Pantoea agglomerans Kocuria rosea فقد أظيرت قدرتيا عمى إنتاج نوع واحد فقط من عوامل الض اروة المدروسة ب يجابية لم βlactamase ولم تبدي أي تفاعل إتجاه Protease Urease ولم تظير أي نوع من أنواع التحمل عند ز ارعتيا عمى وسط ال Blood agar لعدم إحتواءىا عمى انزيم.Hemolysin.βlactamase الصورة :2 عوامل ض اروة بكتريا (B).Urease (A). Morganella morganii إن الكشف عن إنتاج عوامل الض اروة في البكتريا الالشائعة قد بين إختالف في قدرة البكتريا عمى إنتاج ىذه األنزيمات ب ختالف البكتريا المعزولة حيث كانت بنسب مختمفة فقد أظيرت جميع العزالت القدرة عمى إنتاج انزيم βlactamase بنسبة )%00( بينما كانت 5 عزالت ليا القدرة عمى إنتاج إنزيم Hemolysin وبنسبة بمغت )%45.5( من مجموع العزالت التي درست تمتيا 4 عزالت تمكنت من إنتاج إنزيم Urease بواقع )%36.4( في حين إن عزلتين فقط أثبتت قدرتيا عمى إنتاج ال

12 لؤي مناع اب ارىيم الدوري و محمد نظير معروف 7 Protease وبنسبة قد بمغت )%8.2( من العزالت المدروسة في قدرتيا عمى إنتاج عوامل الض اروة وكما ىو موضح في الشكل.)( المصادر العربية سممان صفاء منعم حسين أزىار نوري )205(. د ارسة جزيئية ألنواع جرثومة Aeromonas المعزولة من عينات سريرية وبيئية. مجمة جامعة القادسية لمعموم الصرفة 22)2(. العبيدي إيمان موفق عزيز )207(. عزل وتشخيص بعض أنواع الج ارثيم من النساء المصابات بالتيابات المسالك البولية وعنق الرحم في محافظة صالح الدين. رسالة ماجستير كمية التربية لمعموم الصرفة جامعة تكريت. المصادر األجنبية Abas Y.A.; Khudaier ; Salih, Y.A. (204). Detection of Multidrug Resistant Pseudomonas spp. in Clinical Cases and Hospital Environments at ThiQar Province. J. Edu. P. Sci. 4. Al Jomard, M.M.K.(205). Possible association between Quorum sensing Genes and Antibiotics Resistance among Isolates from different Clinical Sources master Thesis College of Science. Tikrit University. Andrea, T.C.; Andreea, C.C.; Coburn, H.A. (2007). Pantoea agglomerans, a Plant Pathogen Causing Human Disease. J. C.Microbiology,. 45 (6), Atlas, R.M.; Snyder, J.W.(203). "Handbook of Media for Clinical and Public Health Microbiology". New York, CRC Press. 578 p. Auda, J.Gh.; AlGrawi, I.Gh. (2009). Isolation, identification, and antimicrobial susceptibility of uropathogenic Morganella Morganii Al Kindy Col Med. J., 5 (),3235. Ayoade, F.; Osho, A.; Fayemi, S.O.; Oyejide, N.E.; Ibikunle, A.A.(203). Unusually high prevalence of asymptomatic bacteria among male university students on redemption. Ogun State, Nigeria. AFR. J. Clin. Microbial. 4(),922. Balat, A.; Hill, L.(2003). Genitourinary abnormalities is children with urinary tract infection. J. Med. Sci. 29, Baral, S.N.; Bishnu, P.M.; Kashi, R.; Binod Le, G.; Basudha, S. (202). High prevalence of multidrug resistance in Bacterial uropathogens from Kathmandu, Nepal. BMC Research Notes /5/38. Chen, Y.T.; Peng, H.L.; Shia, W.C.; Hsu, F.R.; Ken, C.F.; Tsao, Y.M.(202). Wholegenome sequencing and identification of Morganella morganii KT pathogenicityrelated genes. BMC Genomics.3 (7).

13 عزل وتشخيص أنواع من البكتريا الالشائعة من أخماج... Faraj, R.K.(207) Isolation and identification of uncommon bacterial species in different clinical sample by new automated system and PCR technique using specific primers designed for their virulence factor. PhD Thesis, College of Education for Pure Sciences, Tikrit University. Forbes, B.A.; Sahm, D.F.; Weissfeld, A.S. (2002)."Bailey and Scott`s, Diagnostic Microbiology". th ed. Mosby, Inc.St. Louis. USA. Frank, D.; Spiegelman, G.; Davis, W.; Wagner, E.; Lyons, E.; Pace, N. (2003). Cultureindependent molecular analysis of microbial constituents of the healthy human outer ear. J. Clin Microbiol. 4, Godaly, G.; Ines, A.; Catharina, S.(205). Innate immunity and genetic determinants of urinary tract infection susceptibility. J. Wal. K. Health. 28 (). Habsah, H.; Zeehaida, M.H.; Van Rostenberghe, R.; Noraida, W.I.; Wan Pauzi, I.; Fatimah, A.R. Rosliza, N.Y. Nik Sharimah, ; H. Maimunah(2005). An outbreak of Pantoea spp. in a neonatal intensive care unit secondary to contaminated parenteral nutrition. J. Hosp. Infect. 6, HaghiAshteiani, M.; Sadeghifard, N.; Abedini, M.; Soroush, S.; TaheriKalani, M. (2007) Etiology and antibacterial resistance of bacterial urinary tract infections in children s medical center, Tehran, Iran., Acta. Medica. Iranica.,45(2),5357. Helio, S.; Sadera, B.; Ronald, N.; Jonesa, C. (2005). Review; Antimicrobial susceptibility of uncommonly isolated nonenteric Gram negative bacilli. Intern. J. Anti. Agents. 25, Janda, J.M.; Abbott, S.L. (200).The genus Aeromonas taxonomy, pathogenicity and infection. Clin. Microbiol.Rev., 3 (23), Koneman, E.W.; Allen, S.D.; Janda, W.M.; Schreckenberg, P.C.; Winn, W.C. (997). "Color Atlas and Text Book of Diagnostic Microbiology". 5 th ed., J. B. Lippincott Com., Philadelphia. New York. Krishna, S.; Ciraj, A.; Bairy, I.; Shobha, K. (20). Sphingomonas paucimobilis urinary tract infection in a renal transplant recipient: A rare case. Int. J. Med. Publi.c Health.,479. Lai, C.; Wang, J.; Lin, S. (20). Catheterrelated bacteraemia and infective endocarditis caused by Kocuria species. Clin. Microbiol. Infect. 7,90 2. Macfaddin, J.F. (2000). Biochemical test for identification of medical bacteria. 3 rd ed. The Williams and WilkinsBaltimor USA. pp Mahon, C.R.; Lehman, D.C.; Manuselis, G.(2007)."Textbook of Diagnostic Microbiology".3 rd ed. U.S.A. Ghane, M.; Azimi, Z. (204). Isolation, Identification and Antimicrobial Susceptibility of Pseudomonas spp. Isolated from Hospital Environment in Tonekabon, North of Iran, J. Envi. Microbiology. 2(4), 970. Kumar, M. (205). Sphingomonas paucimobilis urinary tract Infection in an immunecompetent patient. Inter. J. Medi. P. Health, 5(2), DOI: 0.403/ Rushani, D.; Kaufman, J.S.; IonescuIttu, R.(203). Infective endocarditis in children with congenital heart disease:cumulative incidence and predictors. Circulation. 28,42 9. Park, S.W.; Seoung, Ji.H.; Joon, W.L.; Chun, S.; Gyung, H.; MoonJackie, E. (203). Successful antibiotic treatment of Pseudomonas stutzeriinduced peritonitis without periton ealdialysis catheterre movalin continuous ambulatory peritoneal dialysis. Kidney Res. Clin. Pract. 32, Tewari, R.; Dudeja, M.; Das, A.K.; Nandy, S. (203). Kucuriae kristinae in catheter asociated urinary tract infection: a case report. J. Clin. Diag. Res. 7(8), Tortora, G.J.; Funke, B.R.; Case, C.L.(2004). "Microbiology an Infection". 8 th ed.; pearsom Benjamin Cummings, sanfrancisco, boston, New York, Sanfrancisco. Tuama, M.A. (2006). Urinary tract infection in children in pediatric under five years hospital of karblla. Thesis Ph D. University of Babylon. Vandepitte, J.; Verhaegen, J.; Engbaek, K.; Rohner, P.; Piot, P.; Heuck, C. (2003)." Basic laboratory Prodceduresin Clinical Bacteriology ". 2 nd ed.who. Geneva. Venkataramana, K.; Padmawali, P.; Ritu, V.; Vinod, K.; Maheshwar, R.; Ki, Mohan, R.B.(206). A case of urinary tract infection caused by Kocuria species and identified by conventional methods. Perspectives in Medical Research. 4(2).